一株解淀粉芽孢桿菌cd5bc及其應用
【專利摘要】本發明提供了一株解淀粉芽孢桿菌cd5bc，該解淀粉芽孢桿菌cd5bc的分類命名為Bacillus amyloliquefaciens cd5bc，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCC NO:M 2016232，保藏時間為2016年4月28日。本發明還提供了所述菌株在防治作物病害方面的應用以及由該菌株制備得到的生防藥劑。本發明菌株對于辣椒疫病具有十分顯著的防治效果，接種15天后生防效果高達100％，接種60天后生防效果高達82.36％；本發明對多種作物病害均有優秀的抗病害效果，對辣椒菌核病、苦瓜枯萎病、黃瓜枯萎病、黃黑星病、水稻稻瘟病、水稻紋枯病、蠶豆赤斑病、蠶豆褐斑病的病原菌的抑菌率均高達70％以上，對蠶豆赤斑病、蠶豆褐斑病病原菌的抑菌率高達100％。CCTCC NO:M 2028
【專利說明】
一株解淀粉芽孢桿菌cd5bc及其應用
技術領域
[0001] 本發明屬于生物防治領域，涉及一株解淀粉芽孢桿菌Cd5bc及其應用，具體涉及一 株對于辣椒疫病具有顯著防治效果且同時對多種作物病害也具有高效防治效果的解淀粉 芽孢桿菌、基于其得到的生防藥劑及其應用。
【背景技術】
[0002] 近些年來，利用化學藥劑防治作物病害的弊端逐漸顯現出來，主要表現為損傷土 質、造成土壤污染以及農藥殘留等。在此背景下，生物防治技術，特別是利用微生物防治作 物病害技術，越來越受到重視。
[0003] 然而，目前用于防治作物病害的微生物面臨著數量過少、效果較低的情況，限制了 其實際的應用。
[0004] 辣椒疫病、辣椒菌核病、苦瓜枯萎病、黃瓜枯萎病、黃黑星病、水稻稻瘟病、水稻紋 枯病、蠶豆赤斑病和蠶豆褐斑病使常見的作物病害，一直以來對農業的生產造成了較大的 影響。
[0005] 現有技術中，雖然零星有可以防治某種作物病害的菌株的報道，如《內生解淀粉芽 孢桿菌TB2菌株活性物質誘導辣椒果抗疫病的生化機理》，然而其防治效果卻不盡人意，且 還需進行繁復的活性物質的提取操作。在研究可同時高效防治多種作物病害菌株方面，現 有技術也尚未得到令人滿意的效果，主要表現在對各種作物的防治效果差異過大，不利于 推廣使用。
【發明內容】
[0006] 針對現有技術的缺點，本發明的目的之一在于提供一株解淀粉芽孢桿菌Cd5bc，該 解淀粉芽孢桿菌cd5bc的分類命名為Bacillus amyloliquefaciens cd5bc，保藏于中國典 型培養物保藏中心（武漢市武昌珞珈山中國典型培養物保藏中心（武漢大學），郵編： 430072)，保藏號為CCTCC Ν0:Μ 2016232,保藏時間為2016年4月28日。
[0007] 本發明的發明人長期從事利用微生物防治作物病害方面的工作，經過大量的實驗 摸索，發明人從蠶豆葉片上分離得到了解淀粉芽孢桿菌cd5bc。如本發明的實施例所示，本 發明的解淀粉芽孢桿菌cd5bc對于多種作物病原菌均有高效的抑菌效果和生防效果。
[0008] 本領域技術人員容易理解，本發明對現有技術貢獻之一在于找到了一種對辣椒疫 病的防治效果高達80%以上（優于化學農藥50%烯酰嗎啉WG)，且還能對其它多種（至少8 種)作物病害具有高效的防治效果的微生物菌株。
[0009] 本發明的另一個目的在于提供上述解淀粉芽孢桿菌cd5bc在防治辣椒疫病、辣椒 菌核病、苦瓜枯萎病、黃瓜枯萎病、黃黑星病、水稻稻瘟病、水稻紋枯病、蠶豆赤斑病、蠶豆褐 斑病中任一種上的應用。
[0010]本發明的另一個目的在于提供由上述解淀粉芽孢桿菌cd5bc制備得到的生防藥 劑。所述生防藥劑包括細菌發酵液、細菌凍干粉劑中的一種。
[0011] 所述細菌發酵液中，細菌的菌體濃度為109cfu/mL~101Qcfu/mL。
[0012] 所述細菌發酵液的制備方法為：活化生防細菌cd5bc后，用200yL的滅菌槍頭蘸取 菌液，然后連槍頭一起至于NB培養液中搖培，150r/min，30°C下振蕩培養24h，即得生防菌的 發酵液。
[0013] 在防治辣椒疫病時，所述應用的方法包括如下步驟：
[0014] 在辣椒苗長出4葉時，在距根際1~2cm的土壤扎一個小洞，將解淀粉芽孢桿菌 cd5bc的發酵液接種注入于辣椒根部，每株5mL。
[0015] 在防治黃瓜枯萎病時，所述應用的方法包括如下步驟：
[0016] 在黃瓜長出兩片真葉時，用解淀粉芽孢桿菌cd5bc的發酵液灌根，每株25mL。
[0017] 優選的，在上述應用過程中，所述解淀粉芽孢桿菌cd5bc的發酵液中菌體濃度為 109cfu/mL ~101()cfu/mL。
[0018] 本發明的有益效果：
[0019] 1、本發明菌株對于辣椒疫病具有十分顯著的防治效果，接種15天后生防效果高達 100 %，接種60天后生防效果高達82.36 % ;
[0020] 2、本發明對多種作物病害均有優秀的抗病害效果，對辣椒菌核病、苦瓜枯萎病、黃 瓜枯萎病、黃黑星病、水稻稻瘟病、水稻紋枯病、蠶豆赤斑病、蠶豆褐斑病的病原菌的抑菌率 均高達70%以上，對蠶豆赤斑病、蠶豆褐斑病病原菌的抑菌率高達100%。
【附圖說明】
[0021] 圖1為本發明菌株的培養性狀圖；
[0022] 圖2為本發明菌株的顯微鏡鏡檢結果圖；
[0023]圖3為本發明系統發育分析圖。
【具體實施方式】
[0024]下面通過實施例對本發明進行具體描述，有必要在此指出的是以下實施例只是用 于對本發明進行進一步的說明，不能理解為對本發明保護范圍的限制，該領域的技術熟練 人員根據上述
【發明內容】
所做出的一些非本質的改進和調整，仍屬于本發明的保護范圍。 [0025] 實施例1
[0026]本發明菌株解淀粉芽孢桿菌cd5bc(下簡稱cd5bc)的形態、培養特征：
[0027] cd5bc在NA基上呈淡黃色菌落，菌落扁平、圓形或近圓形，浸潤帶光澤，邊緣不整 齊。革蘭氏染色呈陽性，桿狀，兩端鈍圓，有芽孢，芽孢囊不膨大，芽孢橢圓形（圖1)。根據形 態特征初步判斷菌cd5bc屬于芽孢桿菌屬(Bacillus sp.)。顯微鏡鏡檢，如圖2。
[0028] 實施例2
[0029] 16S rDNA序列分析：
[0030] 經測序拼接后，菌株cd5bc擴增的16S rDNA序列長為1466bp，通過NCBI網站中的 BLASTN對菌株cd5bc的16SrDNA序列與基因庫中已知菌株的16S rDNA序列進行了同源性比 較，并下載序列，利用MEGA建立系統發育樹。結果顯示與生防菌cd5bc與Bacillus amyloliquefaciens的親緣關系最近。根據形態特征及16S rDNA序列系統發育分析結果，判 定cd5bc為解淀粉芽抱桿菌Bacillus amyloliquefaciens。
[0031] 實施例3
[0032] cd5bc生防效果檢測 [0033] 1.平板抑菌效果
[0034]將病原物菌辣椒疫霉菌、辣椒菌核病菌、苦瓜枯萎病接于TOA平板上培養5天，用直 徑為5mm的打孔器從菌落邊緣打菌餅，置于空白PDA平板中央，等距離分兩邊接入生防菌株 的發酵液(劃線），26.5 °C恒溫培養，待對照皿中病原物菌菌絲即將長滿全皿時，測量菌體的 生長半徑，并計算抑制率，每株供試菌設4次重復。根據抑菌圈大小計算抑菌率。
[0035] 結果見表1.
[0036] 表lcd5bc對不同病原菌的生防效果 [0037]
[0038] 2. cd5bc對辣椒疫病的盆栽生防效果
[0039]在辣椒苗長出4葉時，將生防菌cd5bc的發酵液接種于辣椒根部；每株5mL，在距根 際1~2cm的土壤扎一個小洞，將發酵液注入；以化學農藥50%烯酰嗎啉WG 1000倍液為平行 對照，并設置空白對照;每個處理接種30株，3次重復。
[0040] 生防菌接種2d后，在接種生防菌相同的位置接種辣椒疫霉菌，接種濃度為104游動 孢子/mL，接種量為3mL。接種辣椒疫霉菌15、30d和60d后，調查辣椒疫病的病情指數，并計算 生防菌的生防效果。
[0043] 結果表明：接種60d后cd5bc對辣椒疫病的防治效果達到82.36%，顯著高于50%烯
[0041]
[0042] 酰嗎啉WG的防治效果。
[0044] 表2cd5bc對辣椒疫病的盆栽生防效果
[0045]
[0046] 3.cd5bc對黃瓜枯萎病的盆栽生防效果
[0047]黃瓜長出兩片真葉時，用cd5bc的發酵濾液灌根25mL;24h后采用根部切傷接種法 接種黃瓜枯萎病病原菌，于灌藥后7、14和28d調查發病情況，并調查防治效果。結果如表3所 不。
[0048] 表3cd5bc對黃瓜枯萎病的生防效果
[0049]
【主權項】
1. 一株解淀粉芽孢桿菌Cd5bc，其特征在于，所述解淀粉芽孢桿菌cd5bc的分類命名為 Bacillus amyloliquefaciens cd5bc，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCC NO:M 2016232,保藏時間為2016年4月28日。2. 權利要求1所述解淀粉芽孢桿菌cd5bc在防治辣椒疫病、辣椒菌核病、苦瓜枯萎病、黃 瓜枯萎病、黃黑星病、水稻稻瘟病、水稻紋枯病、蠶豆赤斑病、蠶豆褐斑病中任一種上的應 用。3. 由權利要求1所述解淀粉芽孢桿菌cd5bc制備得到的生防藥劑。4. 根據權利要求3所述的生防藥劑，其特征在于，所述生防藥劑包括細菌發酵液、細菌 凍干粉劑中的一種。5. 根據權利要求4所述的生防藥劑，其特征在于，所述細菌發酵液中，細菌的菌體濃度 為 109cfu/mL~101Qcfu/mL。6. 根據權利要求4所述的生防藥劑，其特征在于，所述細菌發酵液的制備方法為:將所 述細菌活化后，接種入NB培養液中，于150r/min，30°C下振蕩培養24h，即得所述細菌發酵 液。7. 根據權利要求2所述的應用，其特征在于，在防治辣椒疫病時，所述應用的方法包括 如下步驟： 在辣椒苗長出4葉時，在距根際1~2cm的土壤扎一個小洞，將解淀粉芽孢桿菌cd5bc的 發酵液接種注入于辣椒根部，每株5mL。8. 根據權利要求2所述的應用，其特征在于，在防治黃瓜枯萎病時，所述應用的方法包 括如下步驟： 在黃瓜長出兩片真葉時，用解淀粉芽孢桿菌cd5bc的發酵液灌根，每株25mL。9. 根據權利要求7或8所述的應用，其特征在于，所述解淀粉芽孢桿菌cd5bc的發酵液中 菌體濃度為 109cfu/mL~101Qcfu/mL。
【文檔編號】A01N63/02GK105907683SQ201610390489
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年6月2日
【發明人】席亞東, 韓帥, 張河慶, 吳婕, 李洪浩
【申請人】四川省農業科學院植物保護研究所