本發明屬于農業生物，涉(she)及(ji)基于rnai技術(shu)防治農業害(hai)螨(man)，具(ju)體為一種防治山楂(zha)葉螨(man)的 avprosbeta5靶基因及(ji)其應(ying)用、由其合成的dsrna及(ji)dsrna的應(ying)用。

背景技術：

1、山楂葉(xie)螨(man)(man)，屬于葉(xie)螨(man)(man)科(ke)(ke)葉(xie)螨(man)(man)屬，廣泛分布于我國(guo)各(ge)地及亞(ya)洲、歐洲等其(qi)他國(guo)家，是世(shi)界性(xing)(xing)害螨(man)(man)，主要危害薔薇科(ke)(ke)果樹。體(ti)型(xing)小、繁殖能(neng)力強、擴散(san)速度快。長期(qi)使用(yong)化學農藥防控，導致其(qi)產生(sheng)較強的(de)抗(kang)性(xing)(xing)。

2、rna干擾（rna?interference，rnai）又稱rna沉默（rna?silencing），是(shi)真核(he)生(sheng)物(wu)(wu)中一種(zhong)由雙鏈(lian)rna（double-stranded?rna，dsrna）或(huo)者sirna（小(xiao)(xiao)干擾rna）、mirna（微小(xiao)(xiao)rna）誘發(fa)，使同源mrna高效特異性的(de)(de)降解(jie)或(huo)表(biao)達受到(dao)抑制，從而(er)阻(zu)止靶基因蛋(dan)白翻譯(yi)的(de)(de)生(sheng)物(wu)(wu)學現象。利用rnai，可(ke)干擾靶標害(hai)(hai)蟲的(de)(de)正常生(sheng)長(chang)，減(jian)輕對寄主植物(wu)(wu)的(de)(de)為害(hai)(hai)，最終達到(dao)防治有害(hai)(hai)生(sheng)物(wu)(wu)與(yu)保護(hu)植物(wu)(wu)的(de)(de)目(mu)的(de)(de)。

3、rnai技術在農(nong)業害蟲(chong)治(zhi)(zhi)理中(zhong)具(ju)有極大潛力(li)。目(mu)前(qian)，拜耳、先正達(da)等公司已開(kai)發出多(duo)個基于rnai防治(zhi)(zhi)害蟲(chong)的(de)產(chan)品，mon87411在2021年(nian)也獲(huo)得中(zhong)華人民(min)共和(he)國(guo)農(nong)業農(nong)村部頒發的(de)轉基因生物(wu)安全證書（進口和(he)食品/飼料用(yong)途(tu)）。特別是(shi)2023年(nian)12月，全球第1個rna殺(sha)蟲(chong)劑ledprona在美國(guo)登記，是(shi)噴灑式rnai生物(wu)殺(sha)蟲(chong)劑邁向生產(chan)應用(yong)的(de)里程(cheng)碑。rnai技術用(yong)于防治(zhi)(zhi)葉(xie)螨具(ju)有巨大潛力(li)，但(dan)是(shi)目(mu)前(qian)國(guo)內外(wai)對山(shan)楂(zha)葉(xie)螨基因功能的(de)研究及其殺(sha)蟲(chong)活(huo)性靶標基因的(de)報(bao)道并(bing)不多(duo)。

4、經(jing)前期試(shi)驗表明利用(yong)合適(shi)的(de)(de)(de)外源dsrna溶液(ye)通(tong)過浸泡(pao)卵的(de)(de)(de)方(fang)式即可實現對(dui)山(shan)楂(zha)葉螨的(de)(de)(de)毒性(xing)，因(yin)此從基因(yin)層面開發適(shi)用(yong)于防治(zhi)山(shan)楂(zha)葉螨的(de)(de)(de)外源dsrna產(chan)品，使用(yong)方(fang)便、成本低，更由(you)于基因(yin)的(de)(de)(de)特異性(xing)，可實現精確(que)、優異的(de)(de)(de)防治(zhi)效(xiao)果，對(dui)環境友好，在山(shan)楂(zha)葉螨的(de)(de)(de)防治(zhi)方(fang)面具有很大的(de)(de)(de)應用(yong)前景。然(ran)而，相關靶標基因(yin)的(de)(de)(de)篩選，以(yi)及(ji)防治(zhi)效(xiao)果好、特異、穩定的(de)(de)(de)dsrna設計是最大的(de)(de)(de)難題(ti)和關鍵(jian)問題(ti)。

技術實現思路

1、本發明克服現(xian)有山楂葉螨防治技術的(de)缺陷和(he)不足(zu)，提(ti)供一(yi)種防治山楂葉螨的(de) avprosbeta5靶基因及其(qi)應(ying)用(yong)、由其(qi)合(he)成的(de)dsrna及dsrna的(de)應(ying)用(yong)。

2、為了達(da)到上(shang)述(shu)目(mu)的(de)，本(ben)發明是通過如下技術方案實現的(de)。

3、一(yi)種防(fang)治山楂葉螨的  avprosbeta5靶基(ji)因(yin)，所述 avprosbeta5靶基(ji)因(yin)的核苷酸序列如seq?id?no.1所示(shi)。 

4、一種防治(zhi)山楂葉螨的dsrna，采用所(suo)述的 avprosbeta5靶基因合成dsrna，所(suo)述dsrna的核苷酸(suan)序列如seq?id?no.2所(suo)示。

5、所述dsrna的(de)制備包(bao)括以下(xia)步(bu)驟：

6、s1、以山楂葉螨的cdna序列為模板，合成 avprosbeta5基因片段；

7、s2、以 avprosbeta5基(ji)因片段(duan)作為模板，設計(ji)含有t7啟動子序列的引物(wu)序列對；

8、s3、通過pcr擴增得(de)到dsrna合成模板；

9、s4、體外合成dsrna。

10、所述s1具體為：根(gen)據  avprosbeta5基因(yin)的dna序(xu)列(lie)設計引物對，以山楂葉螨的cdna序(xu)列(lie)為模(mo)板，進行(xing)pcr擴(kuo)增，得到 avprosbeta5基因(yin)片段(duan)。

11、一(yi)種所(suo)述的(de) avprosbeta5靶基(ji)因或(huo)所(suo)述的(de)dsrna的(de)應(ying)用，所(suo)述應(ying)用包括(kuo)下列任一(yi)項：

12、1）所述(shu)的 avprosbeta5靶(ba)基因或所述(shu)的dsrna在防治山楂葉螨中的應(ying)用；

13、2）所述的 avprosbeta5靶基因或所述的dsrna在預防(fang)山楂葉螨(man)蟲(chong)害和/或制備防(fang)治山楂葉螨(man)的產品(pin)中的應用；

14、3）所述的(de)(de)(de) avprosbeta5靶基因(yin)或(huo)(huo)所述的(de)(de)(de)dsrna在(zai)促進山楂葉(xie)螨(man)死(si)亡和/或(huo)(huo)制(zhi)備促進山楂葉(xie)螨(man)死(si)亡的(de)(de)(de)產(chan)品中的(de)(de)(de)應用。

15、一種防(fang)治山楂葉(xie)螨(man)的方法(fa)，所述(shu)方法(fa)是將(jiang)所述(shu)的dsrna導入山楂葉(xie)螨(man)體內。

16、本發(fa)明相(xiang)對于現(xian)有技術所產(chan)生的有益效果(guo)為：

17、本(ben)發明利用(yong) avprosbeta5基因(yin)(yin)防治山(shan)(shan)(shan)楂葉(xie)(xie)螨(man)，通過 avprosbeta5基因(yin)(yin)合成(cheng)用(yong)于防治山(shan)(shan)(shan)楂葉(xie)(xie)螨(man)的dsrna，該dsrna可靶向沉(chen)默(mo)上述 avprosbeta5基因(yin)(yin)。利用(yong)dsrna溶液浸泡卵，使得dsavprosbeta5進入山(shan)(shan)(shan)楂葉(xie)(xie)螨(man)體內，該dsrna可沉(chen)默(mo)/抑制山(shan)(shan)(shan)楂葉(xie)(xie)螨(man)的 avprosbeta5基因(yin)(yin)表達，促進山(shan)(shan)(shan)楂葉(xie)(xie)螨(man)死亡，從而達到防治山(shan)(shan)(shan)楂葉(xie)(xie)螨(man)的目的。

18、本(ben)發明篩選得到一(yi)種山(shan)楂(zha)葉(xie)螨(man)(man)的(de)(de)致死基因（ avprosbeta5），并開發了其(qi)高效(xiao)沉默的(de)(de)dsrna，能夠實現對(dui)山(shan)楂(zha)葉(xie)螨(man)(man)的(de)(de)高效(xiao)防治(zhi)，利用dsrna對(dui)山(shan)楂(zha)葉(xie)螨(man)(man)的(de)(de)致死效(xiao)應(ying)達到防治(zhi)目(mu)的(de)(de)。該方法操作方便、有效(xiao)性和(he)靈敏性好(hao)、殺蟲(chong)效(xiao)率高，且具有環境友好(hao)等諸多優點，有很好(hao)的(de)(de)應(ying)用前景。

技術特征：

1.一種防治山楂葉螨的avprosbeta5靶基因，其特征(zheng)在于，所(suo)述(shu)avprosbeta5靶基因的核苷(gan)酸序(xu)列如seq?id?no.1所(suo)示。

2.一種(zhong)防(fang)治(zhi)山楂葉螨的(de)dsrna，其特(te)征在于，采用如權利要求(qiu)1所述的(de)avprosbeta5靶基因合成dsrna，所述dsrna的(de)核苷(gan)酸序列如seq?id?no.2所示。

3.一種如權利要求1所述(shu)的avprosbeta5靶基因(yin)或(huo)權利要求2所述(shu)的dsrna的應用(yong)(yong)，其特(te)征在于，所述(shu)應用(yong)(yong)包(bao)括下列任一項：

4.一(yi)種防(fang)治山楂葉螨的方法，其特征在于(yu)，所述(shu)方法是將權利要(yao)求2所述(shu)的dsrna導入山楂葉螨體內。

技術總結
本發明公開了一種防治山楂葉螨的AvProsbeta5靶基因及其應用、由其合成的dsRNA及dsRNA的應用；AvProsbeta5靶基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，dsRNA的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示；利用靶標基因為AvProsbeta5的dsRNA溶液浸泡山楂葉螨的卵，利用dsAvProsbeta5對山楂葉螨的存活率影響達到防治目的；該方法操作方便、有效性和靈敏性好、殺蟲效率高，且具有環境友好等諸多優點，有很好的應用前景。

技術研發人員：范仁俊,楊靜,高越,劉中芳,張鵬九,禾麗菲
受保護的技術使用者：山西農業大學
技術研發日：
技術公布日：2024/9/19