專利名稱：：制備A_2A-腺苷受體激動劑及其多晶型物的方法
技術領域：
：本發明涉及用于大規模制備A2A-腺苷受體激動劑的方法，還涉及該化合物的多晶型物，以及涉及分離具體多晶型物的方法。
背景技術：
：l泉苷是天然存在的核普，其通過與一個家力矣的稱為ApA2A、Am和A3的A,苷受體的相互作用而發一軍其生物作用，而這一家力臭的所有腺苷受體都調節著重要的生理過程。腺苷的生物作用之一是起到冠狀血管擴張藥的作用；該結果是通過與A2A腺苷受體相互作用產生的。^i苷的這種作用已經發現可以用于心臟造影的助劑，其中冠狀動月永在鄉合予造影劑(例如鉈201)之前進4亍擴張，因而通過^見察由此形成的造影圖像，就能夠檢測冠狀動脈存在或不存在疾病。這種4支術的優點是其避免了通過在跑步機(或腳，備車)上鍛練而誘使冠狀血管擴張的更傳統的方法，這些傳統方法^艮顯然對于具有冠心病的患者是不合乎要求的。然而，給予腺苦具有幾個在A點。腺苷在人體中半衰期纟艮短(小于10s),而與ApA2A、A犯和A3所有的受體;敫動都具有相關的作用。因此，使用選擇性的A2A腺苷受體激動劑將會^是供產生冠狀血管擴張的上好方法，尤其是半衰期更長且4艮少或沒有副作用的腺苷更是如此。一類具有這些所需功步文的4匕合物7>開于美國專利USNo.6,403,567,將其全部/>開內容結合于此作為參考。具體而言，在該專利中所公開的一種化合物，(1-{9-[(48,211,311,511)-3,4-二羥基-5-(羥曱基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基}吡唑-4-基)-N-甲基羧酰胺，已經顯示出對于A2A-腺香受體激動劑具有高度的選擇性，目前正用于心臟造影中所用的冠狀血管擴張劑的臨床試驗。人們對這種和類似的化合物給予了高度關注，對于提供這些物質的高產高純度的大規3莫制備的方^f更方法的合成新方法已經變成所需要的乂仝開所關注的〗t合物的專利(美國專利USNo.6,403,567)4是供了用于制備該化合物的幾種方法。然而，盡管這些方法適于小規才莫合成，但是在該專利中公開的所有合成方法都采用了保護基團，這對于大規模合成是不希望的。另外，人們已經發現，所需要的產物(即(H9畫[(4S^R,3R，5R)畫3,4-二羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基}吡唑-4-基)-N-曱基羧酰胺)能夠至少以三種不同的晶形存在，最穩定的是單7jc合物。這種多晶型物在相對濕度的應力條件下直至其熔點的溫度是穩定的。因此，在新的合成中生成的最終產物作為穩定的單水合物而獲得是合乎需要的。8
發明內容因此，本發明的一個目的是提供一種用于大規才莫制備(l-(9-[(4S,2R,3R，5R)-3,4-二羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基}吡唑-4-基)-N-曱基羧酰胺及其多晶型物優選作為其單水合物的^更利的合成方法。因此，在第一方面，本發明涉及結構式I的化合物的制備與曱胺4妻觸。在一種實施方式中，反應在曱胺的水溶液中最初在溫度約05。C下4妄著通過溫熱到約5070。C而進行。可替代地，反應如上^旦在密封的壓力反應器中進行。在第二實施方式中，通過將產物溶于溶劑例如二甲亞砜中，加入純水，對由此形成的漿^牛進4亍過濾，用水4妻著用乙醇沖洗過濾器中的內容物，并在不超過40。C的溫度下真空干燥剩余的固體，作為純凈的單水合物而分離出產品。在第二方面，本發明涉及結構式(3)的化合物的制備，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>包括:將結構式(2)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>與2-曱酰基-3-氧代丙酸乙酯接觸。在一種實施方式中，反應在乙醇中于約80。C的溫度下與約1.1摩爾當量的2-曱酰基-3-氧代丙酸乙酯進行反應。在第三方面，本發明涉及結構式(2)的化合物的制備，(2)包括將結構式(1)的化合物(1)與肼4妄觸。所7吏用的肼可以以摩爾計過量14.316.74咅，反應可以在約6065。C的溫度下進行。在一種實施方式中，肼首先凈皮加熱到約6065°C,接著加入結構式(1)的化合物。結構式(2)的化合物可以通過以下步-驟進4亍分離(a)將反應混合物冷卻到約4CTC，(b)加入4.24.9質量當量的水同時將溫度維持在約40。C,(c)將混合物冷卻至約10°C，并維持該溫度至少約1h，(d)過濾，(e)用水再用乙醇沖洗該過濾器的內容物，以及(f)在不超過3CTC的溫度下真空干燥所剩余的固體至少12h。以上描述的合成方法適用于所需產品的大規模合成，盡管能夠在最終產品中看到一種次要(少量)雜質，但是該方法能夠才是供高產。該雜質已經i正明是未變4b的結構式(2)的中間體；即，以下結構式的化合物盡管該雜質能夠通過結晶的方法從最終產品中除去，但是仍然決定尋求具有以上合成方法的所有優點而沒有》會出結構式(2)的化合物作為最終產品中的雜質的替代合成方法。因此，在第四方面，本發明涉及一種合成(1-{9-[(48,211,311，511)-3,4-二羥基-5-(羥曱基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基}吡唑-4-基)-N-甲基羧酰胺的方法，(4)通過將結構式(4)的化合物與曱胺接觸而合成。在一種實施方式中，反應在曱胺的水溶液中最初在約05匸的溫度下接著在溫熱到約5070。C的溫度下而進行。優選反應在密封的壓力反應器中進4亍。在另一實施方式中，反應在約2.57.5。C的溫度下進4亍。在還有的另一實施方式中，通過將產物溶于溶劑例如二甲亞砜中，加入純水，過濾由此形成的漿沖十，用水4妄著用乙醇沖洗過濾器的內容物，并在不超過40。C的溫度下真空干燥所剩余的固體，而產品作為純凈的單7K合物被分離出來。在一些其它的實施方式中，通過(a)在不超過35。C的溫度下真空脫氣而除去過量的曱胺，(b)釋》丈真空并冷卻至05。C約15minlh，(c)過濾由此形成的漿^K(d)先用水接著用乙醇沖洗過濾器的內容物，和(e)在不超過40。C的溫度下真空干燥所剩余的固體，作為純凈的單水合物而分離出產品o在一些實施方式中，(l-《9-[(4S,2R,3R，5R)-3，4-二羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基}吡唑-4-基)~^-曱基羧酰胺通過以13約7888。C的純水中加入溶液而由此形成漿料，(v)攪拌漿料，(vi)冷卻漿料，(vii)過濾，(viii)用水接著用乙醇沖洗過濾器的內容物，以及(ix)在不超過40。C的溫度下真空干燥所剩余的固體。在第五方面，本發明涉及合成結構式(4)的化合物(4)的方法，包才舌將結構式(2)的化合物(2)與過量的2-甲酰基-3-氧丙酸乙酯，優選以摩爾計過量約210倍，更優選過量約510倍，進4亍4妄觸。在一種實施方式中，反應在乙醇中于約80。C的溫度下進行。2-曱酰基-3-氧代丙酸乙酯以510倍過量而存在。在另一種實施方式中，還才是出了合成結構式(4)的化合物的其它方法，包括在g吏存在下將結構式(2)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>與過量的2-曱酰基-3-氧代丙酸乙酯接觸。反應在回流下一般在乙醇中進行。使用HC1作催化劑或不使用HC1作催化劑反應都能發生。所使用的HC1高達0.1摩爾當量，優選過量約0.05摩爾，而所4吏用的2-甲酰基-3-氧4、丙酸乙酯以摩爾計過量約510倍，優選以摩爾計過量約6.87.5倍。該反應的產物可以通過以下步驟進行分離(a)將全部的反應混合物冷卻至約10°C，(b)過濾，(c)用乙醇沖洗過濾器的內容物，以及(d)在不超過40。C的溫度下真空干燥所剩余的固體。圖1是l-{9-[(4S,2R，3R,5R)-3,4-二羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃畫2-基]-6-氨基嘌呤-2-基}吡唑-4-基)-N-曱基羧酰胺單水合物(晶形A)的iHNMR^普圖。圖2顯示了(l-《9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-二羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基噪呤-2-基}吡唑-4-基)-:^-曱基羧酰胺單水合物的熱分析。圖3顯示了(l-《9-[(4S,2R,3R，5R)-3,4-二羥基-5-(羥曱基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基}吡唑-4畫基)"^-曱基羧酰胺單水合物的X畫射線衍射圖樣。圖4顯示了(l-《9-[(4S，2R，3R,5R)-3,4-二羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基》吡唑-4-基)-N-曱基羧酰胺晶形B的X-射線衍射圖樣。圖5顯示了(l-(9-[(4S，2R,3R，5R)-3,4-二羥基-5-(羥曱基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基》吡唑-4-基)-N-曱基羧酰胺晶形C與晶形A對比的X-射線衍射圖樣。具體實施例方式定義和一^L參凄t正如在本i兌明書中所^吏用的，除非在上下文的范圍內另外指出，以下詞語一4殳意指具有以下所給出的含義。"可選的，，或"可選地"是指隨后描述的事件或情況(環境條件)可以發生或者可以不發生，并且這些描述包4舌其中所述事件或情況(環境條件)發生的實例和其中不發生的實例。術語"治療有效劑量"是指，當向需要這種治療的哺乳動物給藥時，正如以下所定義的，結構式I的化合物的量足以發揮治療作用。這種治療有效劑量將會一艮據受試者和所治療的疾病狀況、受試16者的體重和年齡、疾病狀況的嚴重程度、纟會藥的方式等而變化，這對于本領域的普通技術人員而言4艮容易確定。術語"治療"或"處治"是指對哺乳動物的疾病進行的任何治療，包4舌(i)預防疾病，即至丈4吏該疾病臨床癥一大不再發展；(ii)抑制疾病，即4空制臨床癥狀的發展；和/或(iii)緩解疾病，即促使臨床癥狀的消退。如本文中所使用的，"藥用載體"包括任何和所有的溶劑、分散介質、涂層、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。這種用于藥物活性物質的介質和試劑的4吏用在本領域是眾所周知的。除非任何慣常的介質或試劑與活性成分不相容，其在治療組合物中的使用都可以設想到。輔助活性成分也能夠引入到組合物中。術語"多晶型物"意指包括(l-(9-[(4S,2R,3R，5R)-3,4-二羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基}吡唑-4-基)-:^-甲基羧酰胺的無定形物和溶劑化物。已經發現這種化合物能夠以至少三種不同的晶形存在，在本文中稱之為晶形A、晶形B、晶形C和無定形產物。晶形A:這種多晶形物能夠通過l-(9-[(4S，2R,3R，5R)-3,4-二羥基-5-(羥曱基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基》吡唑-4-基)-N-甲基羧酰胺A人質子-溶劑例如乙Sl或乙醇/水混合物，或,人才及性溶劑例如二甲亞石風/水中結晶而形成。晶形A已經顯示是單水合物，是在室溫下各種多晶型物中最穩定的。其在相對濕度應力條件下高至其熔點都是穩定的。晶形B:這種多晶型物是通過l-(9-[(4S，2R,3R,5R)-3，4-二羥基-5-(羥曱基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基)吡唑-4-基)-N-曱基羧酰胺在三氟乙醇中的溶液在室溫下真空蒸發而形成。這種晶體的X-射線分析明顯不同于其它任何多晶型物(參見圖4),但是很難確定其結構構造(或構型)，因為X射線分析給出的是無序寬峰，且這種多晶型物含有不同含量的水分。已經發現4艮難可靠地再現這種多晶型物的制備。晶形C:這種多晶型物通過在60。C下在乙腈中用l誦(9-[(4S,2R,3R，5R)-3，4-二羥基-5-(羥曱基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基}吡唑-4-基)-N-曱基羧酰胺長時間地調漿而形成。這種晶體的X-射線分析明顯不同于其它任何多晶型物(參見圖5)。多晶型物C已經顯示是易變水合物，在升高溫度時就會發生去溶劑化作用而形成不穩、定形式。無定形物質:這種多晶型物通過在溫度高達200。C時加熱晶形A多晶型物而產生。這種多晶型物在大氣濕度存在下是不穩定的，形成易變7K合物。A、B、C和無定形物質的分4斤才支術X-射線粉末衍射X-射線粉末衍射(XRPD)分析采用CuKa輻射在ShimadzuXRD-6000X-射線4分末書f射4義上進^f于。這種4義器裝配有4青細聚焦X-射線管，而管電壓和電流分別i殳定為40kV和40mA。分散和書f射狹縫設定為1"，而接受狹縫設為0.15mm。4汙射輻射通過Nal閃爍才全測器4企測。采用人人2.5-40°29以3。/min(0.4s/0.02。步長)6-26連續掃描。硅標準用于檢查儀器的校準。數據收集和分析采用XRD-6000v.4.1軟件。X-射線粉末衍射(XRPD)分析也采用配備有120°的28范圍的CPS(彎曲定位靈敏性)檢測器的InelXRG-3000衍射儀。儀器才交正采用石圭參照標準進4亍。管壓和電流分別i殳定為40kV和30mA。單色器狹纟套i殳定為5mmx80nm。將才羊品;改置于具有石圭插件的鋁才羊品固定器上或玻璃XRPD-質量的毛細管中。每一毛細管都安裝到測角器頭上，測角器頭由馬達驅動而允許毛細管在數據獲取期間旋轉。實時數據采用Cu-Ka輻射以0.03°20的解析度(分辨率)來收集。一詢殳而言，凄t據在300s的時間內收集。<又<又在2.5-40。29范圍內的凄t據點顯示于標《會的XRPD圖上。熱分析熱重(TG)分析在TA4義2050或2950熱重分析4義上實施。才交準標準是4臬和AlumelTM。樣品;故置于鋁樣品盤上，插入到TG爐中，精確稱重。將樣品在氮氣氛下以10。C/min的速率加熱到300。C或350°C。除非另外指出，沖羊品重量在分碎斤前于TGA爐中在25。C下平^f。示差掃描量熱4義(DSC)分析在TA儀示差掃描量熱4義2920上進行。將精確稱重的樣品放置于巻邊的樣品盤(crimpedpan)或含4十孔允i午壓力釋力文的氣密盤中。每一4羊品在氮氣氛下以10°C/min的速率加熱到30(TC或350°C。將銦金屬用作校正標準。在躍遷最大值時報告溫度。紅夕卜光錯19紅外光語在配備有Ever-Glo中/遠IR源、擴展范圍的溴化鉀分光4竟和氖代好L酸三甘肽(DTGS)4全測器的Magna860傅里葉變才奐紅夕卜(FT-IR)光i普4義(NicoletInstrumentCorp.)上獲才尋。除非另外指出，將Spectra畫Tech，Inc.的漫反射附件(theCollector)用于耳又樣。每一光i普表示在4cm"的光譜解析度下的256共附加掃描(co-addedscans)。對于化合物的樣品制備包括將樣品放入樣吏皿池中并用毛玻璃片壓平物質。背景數據設置用適當位置的校準鏡獲取。光譜表示樣品單光束數據^交正對背景單光束數據4交正的比率。儀器的波長^^交準采用聚苯乙烯進行。NMR譜4匕合物的溶液相NMRi普在室溫下于BrukermodelAM-250光i普4義上以5.87T(Larmor頻率ill=250MHz)進4亍工作而獲取。時-域凄t據釆用5000Hz光i普窗口的7.5ps脈沖寬度和1.6834s獲取時間而獲得。收集總計16，384個凄t據點。在瞬態(或過渡，transient)之間采用5s的弛豫延遲時間。每個數據校正一般包含128個共平均過渡。光i瞽采用GRAMS132Alv6.00版本的軟件處理。自由i秀導衰減(FID)為零填充到4倍數據點的數量，并在傅里葉變換前以指數乘以線擴因子0.61Hz。譜內參比于加入作為內標的四甲基珪烷(0ppm)。可3辜代地，NMR分析4姿照實施例4中的描述進4亍。水分吸收/解析分析水分吸收/解吸分析數據在VTISGA-100蒸氣吸收分析儀(VaporSorptionAnalyzer)上收集。吸收和解吸凄t據在氮氣流下以10%的RH間隔在5%95%相對濕度(RK)的范圍內收集。氯化鈉說明書第15/34頁(NaCl)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)用作4交準標準。如果重量標準不滿足，用于分析的平衡標準是在5min內小于0.0100%重量變化，具有最大平衡時間180min。標繪的數據沒有對初始水分含量進行才交正。命名化合物(1-{9-[(48，211，3尺,510-3,4-二羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基》吡唑-4-基)-N-曱基羧酰胺的結構如下NH.(1-{9-「(45,211,311,510-3,4-二羥基-5-(羥曱基)四氫呋喃-2-基1誦6-氨基嘌呤-2-基p比唑-4-基)-N-曱基羧酰胺的合成一種用于大規模合成(l-《9-[(4S，2R,3R,5R)-3,4-二羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基}吡唑-4-基)-1^-甲基羧酰胺的方法如在反應流程I中所示。所有反應一般在氮氣氛下進行。反應流禾呈I歩-驟1—結構式(2)化合物的制備結構式(2)的化合物由結構式(1)的化合物通過與肼單水合物在沒有溶劑存在下反應而制備。反應在約4555。C的溫度下進行。當反應完成時，結構式(2)的產物通過用在其中結構式(2)的化合物具有有限溶解度的質子溶劑例如乙醇或異丙醇攪拌而分離。混合物攪拌約15h,然后過濾。固體通過用水攪拌、過濾并用7jc接著用異丙醇沖洗后真空干燥而進行純化，其無需純化就能用于下一步驟中。歩驟2—結構式(3)化合物的制備結構式(2)的化合物然后通過與約1~1.2摩爾當量的2-甲酰基_3-氧代丙酸乙酯反應而轉化成結構式(3)的化合物。反應在約22回流溫度下于質子溶劑優選乙醇中進行約24h。在冷卻至約0。C之后，濾出固體，用冷乙醇沖洗，并減壓干燥。結構式(3)的產品無需純化就可以直接用于下一步驟。歩驟3—最終產品的制備最終產品由結構式(3)的化合物與曱胺，優選甲胺水溶液進行反應而制備。反應在室溫下進4于約4h。結構式I的產品通過'貫常方式例如過濾、用冷乙醇沖洗固體并在減壓下干燥而分離。原料的制備(4S,2R,3R,5R)-2-(6-氨基-2-氯嘌呤-9-基)-5-(羥曱基)四氫呋喃—3,4-二醇用作步驟1的原料。這種化合物可商購獲得。2-曱酰基-3-氧代丙酸乙酯用作步驟2中的原料。其可以商購獲得，或可以如下反應流程II中所示來制備。反應流程II其中Et是乙基3,3-二乙氧基丙酸乙酯在強石咸，優選氫化鈉存在下與甲酸乙酯反應。反應在約05。C下進^f亍約24h。通過慣常方法例如通過加入水并用慣常溶劑例如叔丁基曱基醚萃取雜質、用例如鹽酸酸化水相并在減壓下乂人干燥的萃耳又物中除去;容劑而分離產物。通過減壓蒸餾而純化2-甲酰基-3-氧代丙酸乙酯。用于大規模合成(H9-[(4S，2R,3R,5R)-3,4-二羥基-5-(羥曱基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基噤呤-2-基》吡唑-4-基)-N-曱基羧酰胺的優選方法如在反應流程III中所示。反應流禾呈III步驟l一結構式(2)化合物的制備如前所述，結構式(2)的化合物由結構式(1)的化合物通過與肼單水合物在沒有溶劑存在下反應來制備。但是，在這種方法中，將以摩爾計過量14.3-16.7倍的肼單水合物首先加熱到約60~65°C，才妄著加入結構式(1)的化合物。在反應期間將溫度維持在約606524°C,而反應進行約l3h完成。當混合物中殘余的結構式(1)的化合物含量不超過約0.10%時，然后將反應混合物冷卻至約40°C。在維持溫度的同時IC慢加入水。一旦加入約4.24.9質量當量的水之后，#尤一奪混合物卩令卻至約10°C,并^f呆持該溫度不少于lh。然后通過過濾、用水沖洗并隨后用無水乙醇沖洗而分離出產品。固體在高達30。C的溫度下真空干;^喿不少于12h,然后無需進一步純化直"^妻用于下一步^^。步驟2—結構式(4)化合物的制備結構式(2)的化合物然后通過與過量的2-甲酰基-3-氧代丙酸乙酯，例如過量2~104咅，優選約5104咅，理想;也約6.87.54咅，進行反應而轉化成結構式(4)的化合物。反應可以在如反應流程I中的結構式(3)化合物的制備所描述的相同條件下進行。可替代地，也可以將約0.05摩爾當量的酸如HC1加入反應混合物中。反應允許在回流溫度下進行約24h，直至殘余的結構式(2)化合物的含量不超過0.50%，可形成的任何結構式(3)的化合物的量不超過2.5%。在冷卻到約l(TC后，濾出固體，用無水乙醇沖洗并在高達40。C下真空干燥以除去殘余乙醇。結構式(4)的產品無需純^ft就可以直4妻用于下一步-驟。將結構式(4)的化合物畫成(2E)烯經彩f生物，因為這是在該反應中形成的主要異構體。然而，應該注意到，在該反應中也可以形成大量的(2Z)烯烴異構體；即25<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>命名為(2Z)-3-(《9-[(4S,2R,3R,5R)-3，4-二羥基-5-(羥甲基)-四氫呋喃-2-基]-2-[4-(乙氧羰基)吡唑基]嘌呤-6-基}氨基)-2-甲酰基-丙-2-歸酸乙酯。因此，盡管結構式(4)的化合物僅表示成(2E)烯烴衍生物，但是術語"結構式(4)的化合物"意指包括其中單獨是(2E)異構體的情況，和其中主要產物部分是(2E)異構體而次要產物部分(2Z)異構體也存在的情況。無^r結構式(4)的化合物是作為(2E)異構體存在還是作為(2E)異構體和(2Z)異構體的混合物存在，結構式(4)的化合物通過按照在步驟3中所描述的與甲胺反應而以相同的方式4爭4b成最鄉冬產物。歩驟3—聶終產物的制備最終產物由結構式(4)的化合物通過與甲胺優選甲胺水溶液反應而制備。反應最初在約05。C下進行8h，優選在壓力反應器中進行，接著在約lh內升溫到5060°C，并維持該溫度1520min。可替代地，將曱胺首先放入壓力容器中并冷卻至約2.57.5°C，然后加入結構式(4)的化合物，同時維持該溫度不變。反應進行到直至殘余的結構式(3)的4b合物含量^氏于約0.10%。一旦反應完成，通過慣常方法例如在不超過約35。C的溫度下真空脫氣以除去過量的曱胺而分離出產品。然后釋放真空并將混合物冷卻至05。C，并在該溫度下〗呆溫約15minlh，4妾著過濾。由此獲得的固體用水4妄著用乙醇沖洗，并在不超過約40。C的溫度下減壓干燥。該方法是作為其單水合物來沖是供(l-《9-[(4S,2R,3R，5R)-3,4-二羥基-5-(羥曱基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基噤呤-2-基}吡唑-4-基)"^曱基羧酰胺的。這種多晶形物能夠進一步通過溶解于二曱亞砜中，從溶液中濾出任何固體雜質，用另外的DMSO沖洗，并通過加水而從溶液中沉淀出單水合物而進一步進4亍純4b。該方法在將DMSO;容液和水加熱到約7888。C并保持在該溫度下攪拌約lh時尤其有效。才覺拌后，將漿料緩慢冷卻至約20°C。然后通過過濾、用水接著用乙醇沖洗、并4姿先前的描述干燥而分離出最終產品。將裝配有磁力攪拌棒、熱電偶、數字溫度計、進氣口和出氣口以及滴液漏斗的三口或四口圓底*克弁瓦用氬氣p欠掃。向滴液漏斗中力口入3,3-二乙氧基丙酸乙酯(64.5g)的四氫呋喃溶液。將氫化鈉(21.2g實施例12-甲酰基-3-氧代丙酸乙酯的制備27燒并瓦內容物在冰浴中冷卻至05°C，并加入曱酸乙酯(257g)。將混合物冷卻至05。C，逐滴滴加滴'液漏斗中的內容物，維持內部溫度4氐于5°C。除去水浴，并將內容物溫熱到室溫。通過TLC分析監測3，3-二乙氧基丙酸乙酯的消耗。反應通過加入水水(10.6體積)淬滅(中止)，并用曱基^f又丁基醚(每次5.4體積)萃取3次，去掉有機層。水相用濃鹽酸酸化至pH11.5。酸化的水層用二氯曱烷萃耳又3次，合并的有機層用石克酸鈉干燥。減壓除去溶劑，將殘余物真空蒸餾而獲得2-曱酰基-3-氧代丙酸乙酯，27.92g，產率70%。將裝配有機械攪拌、進氣口、出氣口和熱電偶的燒并瓦用氬氣吹掃。加入2-氯腺苷半水合物(53.1g)，接著加入肼單水合物(134g)。混合物攪拌的同時加熱至4045。C持續2h。反應進程通過TLC分析跟蹤。當反應完成時，除去熱源并加入乙醇(800mL)。將混合物在室溫下攪拌2h，然后通過過濾收集沉淀。濾餅用乙醇沖洗，并在減壓下干燥30min。將固體轉移至裝配有機械攪拌的干凈燒瓶中，并加入水(300mL)。將懸浮液在室溫下攪拌18h,通過過濾分離固實施例2A.2-肼基腺香(2)的制備體。將濾餅用冰冷的水(300mL)沖洗，4妄著用冰冷的乙醇(300mL)沖洗。將固體在減壓下干燥而提供2-肼基腺苷(4L38g，產率81.4%,純度99.3%)。B.2-肼基腺苷(2)的可替代制備法將裝有水合肼(258g，250mL)的反應容器加熱到4050°C.向溫熱的混合物中分份加入2-氯腺苷半水合物(100g),維持溫度在4555。C之間。在該溫度下寸呆溫2h，然后在30min的時間內力口入去離子水(500mL)，維持溫度在4555"C之間。然后將混合物在3h內逐沐斤降溫至05。C,然后在該溫度下再攪4半30min。隨后濾出固體，用冷的(25。C)去離子水(200mL)沖洗，4妻著用乙醇(400mL)沖洗。將固體在真空下干燥12h，而獲得2-肼基腺苷。C.2-肼基腺苷(2)的可替代制備法反應容器充入水合肼U285g)。將溶液加熱至約62。C，并加入2-氯l^苷(500g),同時維持約62。C的溫度。將混合物維持在目標溫度62。C至少2h,直至混合物中的殘余2-氯腺苷不超過0.10%。將混合物冷卻至約40°C，并4企查混合物確證固體的存在。-爰慢加入水(2275g),同時維持溫度為約40°C。將混合物冷卻至約10°C，并維持該溫度不少于lh。通過過濾，用7K(1195mL)然后用無7jc乙醇(1885g)沖洗而分離出產品。產品在高達3CTC下真空干火喿不少于12h,而獲得2-肼基腺苷。實施例3l-(9-IY4S,2R,3R,5RV3,4-二羥基-5-(羥曱基)四氫呋喃-2-基l-6-氨基嘌呤-2-基}吡唑-4-曱酸乙西旨(3)的制備29<formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula>將2-曱酰基-3-氧代丙酸乙酯(23.93g，0.17mol)裝入帶有機械攪拌、進氣口、出氣口和回流冷凝器的燒瓶中。向燒瓶中加入2-丙醇，接著加入2-肼基腺苷(44.45g，0.15mol)。將混合物在攪拌下加熱回流24h,反應進程用TLC分碎斤^艮蹤。當判斷反應完成時，去除熱源，并將混合物冷卻至室溫。將懸浮液在攪拌下于水浴中冷卻約1.52h。將固體通過真空過濾分離，并用冰冷的2-丙醇沖洗。將產品，l-(9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-二羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2國基]-6-氨基嘌呤-2-基}吡唑-4-甲酸乙酯，在減壓下干燥至恒重。實施例4(l-(9-r(4S,2R,3R,5R)-3,4-二羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基1-6-氨基嘌呤-2-基l吡唑-4-基)-N-曱基羧酰胺的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula>將l-(9-[(4S，2R，3R,5R)-3，4-二羥基-5-(羥曱基)四氫呋喃-2-基]-6畫氨基噤呤-2-基}吡唑-4-甲酸乙酯(46.4g)和甲胺(40y。水溶液，600ml)的混合物在室溫下攪拌約4h，反應進程通過HPLC分析跟蹤。在減壓下除去大部分過量的甲胺，將剩余混合物在0t:下冷卻2h。濾出固體物質，用冰冷的200標準度數的乙醇(定強酒4青，proofethanol)沖洗，并在減壓下干燥，而#是供作為單合物的(1-{9-[(48,211，311,510-3,4-二羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基》吡唑-4-基)-N-曱基羧酰胺。該物質的結構通過111NMR確認(參見圖1和以下內容)。熱分析(參見圖2)提供的結果證實存在1分子的水。還獲得了X-射線衍射圖(圖3)力和^CNMR按照相同的方式獲得。將以上獲得的物質的兩個沖羊品稱重并;容解于d6-DMSO—5.3mg用于！11譜，而20.8mg用于13Ci普。所有語圖在室溫下于JEOLEclipse+400光"i普4義上在400MHz下獲得^i普而在100MHz下獲得13C譜。<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>實施例A.(2EV3-((9-r(4S,2R,3R,5RV3,4-二羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基卜2-「4-(乙氧羰基V比唑基l嘌呤-6-基i氨基V2-曱酰基丙-2-烯酸乙酯(4)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula>將2-肼基腺苦(100g,0.34mol)、2-曱酰基-3-氧代丙酸乙酉旨(242g，1.7mol)和無水乙醇的混合物裝入反應器中，將混合物加熱回流2h。當判斷反應完成時，去除熱源，并將反應混合物在3小時的時間內逐漸冷卻至510°C。^1夸漿津牛在該溫度下4覺4半30min，并過濾混合物。將固體物質用冷的(510°C)無水乙醇沖洗，然后在不超過40°C的溫度下真空干燥，而獲得(2E)-3-({9-[(4S，2R,3R,5R)-3,4-二羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基]-2-[4-(乙氧羰基)吡唑基]嘌呤-6-基}氨基)-2-曱酰基丙-2-晞酸乙酯。B.(2E)-3-K9-「(4S,2R,3R,5R)-3,4-二羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基1-2-「4-(乙氣羰基V比唑基1嘌呤-6-基}氨基V2-曱酰基丙-2-烯酸乙酯(4)的^^^制法將反應容器充入2-肼基腺苷(450g)和無t)c乙醇(11376g)。力口入HC1(7.47g)和2-甲酰基-3-氧代丙酸乙S旨(1557g)。將混合物加熱回流，取樣分析直至殘余的2-肼基腺苷在混合物中的含量不超過2.5%。將混合物緩慢冷卻至約l(TC。將產品，結構式(4)的化合物通過過濾分離并用無水乙醇(5121g)沖洗。產品在高達40°C下真空干燥直至殘余的乙醇不超過5000ppm,而獲得(2E)-3-({9-[(4S，2R,3R,5R)-3，4-二羥基-5國(羥曱基)四氬p夫喃-2-基]-2-[4-(乙氧羰基)他唑基]嘌呤-6-基}氨基)-2-曱酰基丙-2-烯酸乙酯。實施例5A的產品的元素分析結果如下C，48.75%;H,4.86%;N，18.05%;O,27.57。理論值C，49.72%;H,4.74%;N，18.45%;O，27.09%。分析對應于所需產品半水合物的實-瞼誤差限(C，48.89°/0;H,4.81%;N,18.1%;O，28.12)。^和13CNMR譜按以下方式獲得。將20.2mg結構式(4)的化合物溶解于約0.75mL的DMSO-d6中，并在室溫下于JEOLECX-400NMR光謹^義上在400MHz下獲得譜而在100MHz下獲得^C譜。化學位移參比于DMSO溶劑，對于&為2.50ppm而對于13C為39.5ppm。結果^和13C化學位移列于表1中。兩種異構體在^和13C譜中觀察到比率為約60/30,在表中標記為"主"和"次"。<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>19(主)147.59.26d，12.4,d,3.68(主)144.98.87s8沐)144,78.85s12143.18.20-8.23m14沐)132.89.20d,~0.714(主)132.69.12d,~0.75(主)120.7--5(次)120.6--13116.7--20(次)107.2--20(主)106.1--l'(主)87.96.07d,5.3l'(次)87.96.06d，5.34'85.84.02q,3.92'沐)74.14.62q,~5.42'(勾74.14.61q，~5.43,70.14.22q,4.25，61.03.62,3.73m23,1660.3-60.84.25-4.39m17,2414.1-14.21.28~1.38m1S(主)-12.51d,12.418(次)-11.47d,13.02'-OH(主)-5.63d,6.12'-OH(次)-5.62d，6.13'-OH-5.30d,5.15'-OH-5.08t,5,5結構式(4)的化合物經確認為以下兩種異構體的混合物:35主次實施例6A.由化合物(4)制備(1-(9-「(48,21,311.510-3.4-二羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基l-6-氨基嘌呤-2-基！吡唑-4-基VN-甲基羧酰胺NH.將40%甲胺水溶液(1300mL)置于壓力反應器中，冷卻到0~5。C,力口入實施例5A的產品((2E)-3-({9-[(4S，2R，3R，5R)-3，4畫二羥基-5-(羥曱基)四氫呋喃-2-基]-2-[4-(乙氧羰基)吡唑基]嘌呤-6-基}氨基)-2-曱酰基丙-2-烯酸乙酯)(100g)。將混合物在05。C下攪拌至少8h,監測反應是否完全。當反應完全時，將混合物溫熱，而36維持溫度在506(TC之間lh,然后在1小時的時間內冷卻至低于30°C。當溫度4氐于30。C時，混合物采用100500mmHg的壓力脫氣，而使溫度降低至05°C。將混合物在05。C下攪拌至少lh，維持壓力100500mmHg。然后中斷真空，并用氮氣置換，將溫度維持在05。C下不少于30min。然后濾出固體產物，用水(3x500mL)沖洗，隨后用無水乙醇(625mL)沖洗。產品在真空下干火喿，不要〗吏溫度超過40°C,而獲得作為單水合物的(l-《9-[(4S，2R,3R，5R)-3，4-二羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基}吡唑-4-基)-^[-曱基羧酰胺。B.由化合物(4)制備n-(9-IY4S,2R,3R,5R)-3，4-二羥基-5-(羥曱基)四氫呋喃-2-基l-6-氨基嘌呤-2-基P比唑-4-基)-N-曱基羧酰胺的替代制法壓力容器中充入47%曱胺溶液(10080g)。將溶液冷卻并加入以上實施例5B中制備的結構式(4)的4匕合物(600g),同時維持目標溫度5。C。將混合物在目標溫度5。C下攪拌，直至殘余的結構式(3)化合物的含量在混合物中低于0.10%。將反應混合物在真空下不超過35。C的溫度下脫氣而除去過量的甲胺。釋放真空，將混合物冷卻至2.5。C,并維持至少30min。然后通過過濾分離產品，用水(不少于9000g)然后用無水乙醇(不少于2964g)沖洗。在高達40。C的真空下干燥產品直至殘余的乙醇不超過5000ppm而獲得粗的(l-《9-[(4S，2R,3R,5R)-3，4-二羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基噪呤_2_基}吡唑4-基)-N.甲基羧酰胺單水合物。^和^CNMR譜按照以下方式獲得。將實施例6A中獲得的物質的兩個才羊品稱重并溶角罕于d6-DMSO中——5.3mg用于&鐠，而20.8mg用于13Ci普。戶斤有i普圖在室;顯下于JEOLEclipse+400光"i普4義上獲得，在400MHz下獲得i普而在100MHz下獲得13Ci普。<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>元素分析得到以下結果C，43.96%;H，4.94%;N,27.94。理論值C,44.12%;H,4.94%;N，27.44%;O，27.09%。分析對應于單水合物的實—驗誤差限中。實施例7A.(1-{9-「(4S,2R,3R,5R)-3,4-二羥基-5-(羥曱基)四氫呋喃-2-基1-6-氨基嘌呤-2-基}吡唑-4-基VN-甲基羧酰胺單水合物的純化將如在實施例4中制備的(l-《9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-二羥基-5-(羥曱基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基}吡唑-4-基)-N-曱基羧酰胺單水合物(100g)在二甲亞石風(300mL)中的溶液通過0.60.8nm的預過濾器和0.2jam的過濾器過濾而除去任何固體雜質。然后，攪拌下在lh的時間內將濾液緩慢加入去離子水(1L)中，攪拌由此形成的漿^)"不少于lh。濾出固體，用去離子水(2xlL)沖洗，并在真空下干燥不少于lh。干燥的產品然后再次用去離子水(1.5L)制成漿料不少于2h,過濾，并用去離子水(1L)4妻著用無水乙醇(750mL)沖洗。經純化的產品在不超過40。C的溫度下真空干燥不少于12h,而獲4尋無4壬何2-肼基腺苷雜質的(l-《9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-二羥基-5-(羥曱基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基噪呤-2-基》吡唑-4-基)-N-曱基羧酰胺單水合物。B.a-(9-IY4S,2R,3R,5RV3,4-二羥基-5-(羥曱基)四氫呋喃-2-基l-6-氨基嘌呤-2-基}吡唑-4-基)-N-曱基羧酰胺單水合物的可替代純化法將(1_{9-[(4S，2R，3R，5R)-3,4-二羥基-5國(羥甲基)四氫吹喃-2-基]-6-氨基嘌呤-^基》吡唑4-基)-N-曱基羧酰胺單水合物的纟容液(400g)溶于DMSO(1320g)中，溶液通過0.60.8,和0.2,的成線形串聯的過濾器過濾。用另外的DMSO(880g)沖洗過濾器系統。將溶液緩慢加入純水(5000g)中，同時維持目標溫度83。C。產品在加入期間開始結晶，將漿料在目標溫度83。C下攪拌約lh。將混合物緩慢冷卻至20°C。將產品通過過濾并用純水(8000g)沖;先而分離。將固體裝入容器中，加入純水(6000g)。將漿料混合約lh。產品通過過濾并用純水(4000g)接著用無水乙醇(3160g)沖洗而分離。產品在高達40。C下真空干燥直至殘余的水含量不超過5.5%，而殘余的乙醇不超過2000ppm,從而獲得(1-{9-[(48,211,311，511)-3,4-二羥基-5-(羥曱基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基}吡唑-4-基)-N-曱基羧酰胺單水合物。權利要求1.一種合成(1-{9-[(4S，2R，3R，5R)-3，4-二羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基}吡唑-4-基)-N-甲基羧酰胺的方法，通過將結構式(4)的化合物與含水的甲胺在約2.5～7.5℃的溫度下接觸而合成。2.根據4又利要求1所述的方法，其中所述反應在密封壓力反應器中進行。3.根據權利要求2所述的方法，其中所述產物通過以下步驟進行分離(a)在不超過35。C的溫度下真空脫氣而除去過量的甲胺，(b)釋放真空并冷卻至05。C約15分鐘1小時，(c)過濾由此形成的漿料，(d)用水接著用乙醇沖洗所述過濾器的內容物，以及(e)在不超過40。C的溫度下真空干燥所剩余的固體。4.根據權利要求3所述的方法，其中所述(1-《9-[(4S,2R,3R,5R)-3,4-二羥基-5-(羥曱基)四氫呋喃-2-基]-6-氨基。票呤—2-基》吡唑-4-基)-N-甲基羧酰胺終產物進一步通過以下步-驟純4匕(i)在溶劑中溶解才艮據^L利要求3的步驟(e)的所述干燥固體，(ii)/人溶液中濾出4壬4可固體雜質，(iii)用另外的溶劑清洗，(iv)向維持溫度為約78~88。C的純7jc中力口入溶、液而由A匕形成漿料，(v)攪拌所述漿料，(vi)冷卻所述漿料，(vii)過濾，(viii)用水4妄著用乙醇沖洗所述過濾器的內容物，以及(ix)在不超過40°C的溫度下真空干燥所剩余的固體。5.根據權利要求4所述的方法，其中在步驟(i)和步驟(iii)中所使用的溶劑是二曱亞石風。6.才艮據權利要求5所述的方法，其中在最后產物中殘余的水含量不超過5.5%,而殘余的乙醇不超過2000ppm。7.—種合成結構式(4)的化合物(4)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>的方、;條，包招r將結構式(2)的化合物(2)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>與過量的2-曱酰基-3-氧代丙酸乙酯可選地在酸存在下接觸。8.根據權利要求6所述的方法，其中所述反應在乙醇中進行。9.根據權利要求6所述的方法，其中使用的所述酸是高達O.l摩爾當量的HC1。10.才艮據權利要求9所述的方法，其中所述反應在回流下發生。11.根據權利要求6所述的方法，其中使用的2-曱酰基-3-氧代丙酉臾乙酯以摩爾計過量約51(H咅。12.根據權利要求11所述的方法，其中使用的2-曱酰基-3-氧代丙酸乙酯以摩爾計過量約6.87.5倍。13.才艮據4又利要求12所述的方法，其中所述產物通過以下步-驟分離(a)將所述全部的反應混合物冷卻至約10。C，(b)過濾，(c)用乙醇沖洗所述過濾器的內容物，以及(d)在不超過40。C的溫度下真空干燥所剩余的固體。14.一種用于制備結構式(2)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>的方法，包括將結構式(1)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(1)與以摩爾計過量14.316.74咅的肼在約6065。C的溫度下進行反應。15.根據權利要求14所述的方法，其中所述肼先加熱到約6065。C,4妻著加入結構式(1)的所述化合物。16.根據權利要求14所述的方法，其中所述結構式(2)的化合物通過以下步-驟進4亍分離(a)將所述反應混合物冷卻到約40°C,(b)加入4.2~4.9質量當量的水同時將溫度維持在約40°C,(c)將所述混合物冷卻至約10°C，并維持該溫度至少約1小時，(d)過濾，(e)用水再用乙醇沖洗所述過濾器的內容物，以及(f)在不超過30°C的溫度下真空干燥所剩余的固體至少12小時。全文摘要本發明公開了一種適用于大規模生產A_2A-腺苷受體激動劑的方法，本發明還涉及該化合物的多晶型物、以及分離具體的多晶型物的方法。文檔編號C07H19/00GK101668768SQ200780052926公開日2010年3月10日申請日期2007年5月17日優先權日2007年5月17日發明者埃爾法蒂赫·埃爾扎困,杰夫·扎布沃茨基申請人:Cv醫藥有限公司