專利名稱：治療劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及新型查耳酮類化合物，以及利用該化合物生理作用的醫藥品、飲食品等。
背景技術：
查耳酮類化合物為具有下述式(化1)的查耳酮骨架的化合物的總稱，作為這些化合物，已知通過從天然物中提取或合成得到的各種各樣的化合物。
對于這些化合物的生理活性，根據化合物不同呈現各自多種多樣的活性，例如，已知細胞毒性、抗癌活性、化學防御、抗變異原性、抗菌活性、抗病毒性、抗原蟲性、殺蟲作用等(例如非專利文獻1)。本發明人等發現這些查耳酮類化合物具有神經成長因子(NGF)產生增強作用(例如專利文獻1)。
專利文獻1國際公開第01/54682號小冊子非專利文獻1J.R.Dimmock等4人，Current MedicinalChemistry，(荷蘭)，1999年，Vol.6，p.1125～1149發明內容發明所要解決的問題
本發明的目的在于提供新型查耳酮類化合物及利用其生理作用的醫藥品、或者飲食品等。
用于解決問題的方法概述本發明，即，本發明第1發明涉及用下述式(1)～(9)中的任一種化學結構式表示的查耳酮類化合物、其衍生物或它們的鹽。
[化3] [化4] [化6] [化7] [化9] [化10] 本發明的第2發明涉及對該化合物顯示敏感性的疾病的治療劑或預防劑，其特征在于，含有本發明第1發明的化合物、其衍生物或者它們的鹽作為有效成分。在本發明的第2發明中，作為對該化合物顯示敏感性的疾病，可列舉出在治療或預防中需要抑制一氧化氮(NO)產生或阻斷醛糖還原酶的疾病。
本發明的第3發明涉及NO產生抑制劑或醛糖還原酶阻斷劑，其特征在于，含有本發明第1發明的化合物、其衍生物或者它們的鹽作為有效成分。
本發明的第4發明涉及食品、飲料或飼料，其特征在于，含有本發明第1發明的化合物、其衍生物或者它們的鹽。本發明第4發明的食品、飲料或飼料，在對該化合物顯示敏感性的疾病的治療或預防中有用。而且，在此，作為對該化合物顯示敏感性的疾病，例如，可列舉出需要NO產生抑制或糖醛還原酶阻斷的疾病。
發明效果通過本發明，提供新型查耳酮類化合物、其衍生物或者它們的鹽。由于該化合物具有NO產生抑制作用或糖醛還原酶阻斷作用，因此該化合物、其衍生物或者它們的鹽作為利用該生理活性的醫藥品、食品、飲料或飼料的有效成分而有用。另外，由本發明提供的醫藥品等對于例如需要NO產生抑制或糖醛還原酶阻斷的疾病等的對該化合物顯示敏感性的疾病具有治療或預防效果。


為表示TB3的1H-NMR譜的圖。
為表示TB3的13C-NMR譜的圖。
為表示TB4的1H-NMR譜的圖。
為表示TB4的13C-NMR譜的圖。
為表示TB5的1H-NMR譜的圖。
為表示TB5的13C-NMR譜的圖。
為表示TB6的1H-NMR譜的圖。
為表示TB6的13C-NMR譜的圖。
為表示TB7的1H-NMR譜的圖。
為表示TB7的13C-NMR譜的圖。
為表示TB8的1H-NMR譜的圖。
為表示TB8的13C-NMR譜的圖。
為表示TB9的1H-NMR譜的圖。
為表示TB9的13C-NMR譜的圖。
為表示化合物(C081)的1H-NMR譜的圖。
為表示化合物(C081)的13C-NMR譜的圖。
為表示化合物(C042)的1H-NMR譜的圖。
具體實施例方式
本發明人等發現了用上述式(1)～(9)中的任一種化學結構式表示的新型查耳酮類化合物、其衍生物或者它們的鹽(在本說明書中，有時稱為本發明的化合物)，以及該合物具有的NO產生抑制作用或糖醛還原酶阻斷作用，從而能夠提供以該化合物作為有效成分的醫藥品、飲食品、飼料。另外，本發明的化合物與其衍生物或者它們的鹽可以具有同等的作用。上述式(1)～(7)表示的化合物是從作為食用植物傘形科的明日葉中分離出來的新型查耳酮類化合物。
本發明的化合物可以源自天然物，也可以是合成品、半合成品。作為天然物，優選源自食用植物，作為食用植物，可列舉出傘形科植物的明日葉。另外，本發明的化合物中存在各種異構體時，任何一種都可以在本發明中任意使用。本發明的化合物可以單獨使用，或者將2種以上混合使用。
例如，從天然物制造本發明的化合物，可以組合公知的制造方法進行。例如，從天然物中的制備本發明的化合物，可以從本發明的化合物含有物、如明日葉等植物中精制該化合物。作為精制方法，可以使用化學方法、物理方法等公知的精制方法，也可以將凝膠過濾法，用分子量膜分離的分離法，溶劑提取法，使用離子交換樹脂、硅膠、反相樹脂等的各種色譜法等以往公知的精制方法組合來精制本發明的化合物。例如，為本發明的化合物的上述式(1)～(7)的制造可以參考下述實施例1～7進行。
另外，通過合成進行的本發明的化合物的制造可以組合公知的制造方法來進行。例如，合成方法可以參照Alessandra Lattanzi et al.，Synlett.2002，No.6，p942-946；L.Claisen A.et al.，Ber.1881，No.14，p2460等。例如，制造為本發明的化合物的上述式(9)所示化合物，可以參考下述實施例9通過進行化學合成而得到。
另外，通過半合成進行的本發明的化合物的制造，例如，可以通過以源自天然物的查耳酮類化合物為原料進行有機合成而得到。例如，為本發明的化合物的上述式(8)所示化合物，可以參考下述實施例8通過對上述式(6)所示化合物進行還原處理而得到。對于還原處理以外的有機合成方法，沒有特別的限定，例如，可以參照AlessandraLattanzi et al.，Synlett.2002，No.6，p942-946；L.Claisen A.et al.，Ber.1881，No.14，p2460等。
在本說明書中，上述式(1)～(9)所示化合物的衍生物是指將該化合物作為原始化合物進行合成得到的化合物，具有與上述式(1)～(9)所示化合物的同等作用，即，具有NO產生抑制作用或糖醛還原酶阻斷作用。作為所述的衍生物，例如，可以舉出上述式(1)～(9)所示化合物的酯、醚、糖苷等，在體內容易發生水解、能夠發揮所需效果的化合物(前體藥物)。所述前體藥物的制備可以依照公知的方法進行。另外，所述衍生物也可以是它們的鹽。
在本發明的化合物中，優選可藥用的鹽作為其鹽。作為本發明中使用的鹽，例如，可列舉出堿金屬鹽、堿土類金屬鹽、與有機堿的鹽等。作為所述的鹽，優選可藥用的鹽。另外，本發明中使用的可藥用的鹽是指相對于生物基本無毒的鹽。作為該鹽，例如，可以舉出與如下物質的鹽鈉、鉀、鈣、鎂、銨、或者質子化的芐星(N，N′-二芐基乙二胺)、膽堿、乙醇胺、二乙醇胺、乙二胺、甲基葡胺(N-甲基葡萄糖胺)、苯明(N-芐基苯乙胺)、哌嗪或氨基丁三醇(2-氨基-2-羥甲基-1，3-丙二醇)。
通過本發明，提供了含有本發明的化合物作為有效成分、對該化合物顯示敏感性的疾病的治療劑或預防劑(在本說明書中，有時也稱為本發明的治療劑或預防劑)。在此，對該化合物顯示敏感性的疾病是指通過該化合物能夠獲得治療效果或預防效果的疾病，作為該疾病，例如，可以舉出需要NO產生抑制或醛糖還原酶阻斷的疾病。
實體癌的增大必須血管新生，血管內皮增殖因子/血管透過性亢進因子(VEFG)在該過程中發揮重要作用。在各種腫瘤細胞中，VEFG均被NO所誘導。即，通過抑制腫瘤細胞的NO產生，就可抑制VEFG產生，其結果可以阻斷腫瘤組織周邊的血管新生，可以使腫瘤脫落。
另外，NO在pH為中性的生理條件下與胺反應，生成亞硝胺。已知這種亞硝胺由于給DNA帶來損傷而顯示出致癌性。另外，對于在免疫學上與癌緊密關連的肝吸蟲感染患者或肝硬化患者而言，NO產生亢進。因此，可以通過抑制NO產生來預防高危人群的致癌。
NO誘發被認為是炎癥性病變特征的浮腫、即血管透過性亢進作用[Japanese Journal of Cancer Research，第85卷，P331～334(1994)]，或者使為炎癥性介體的前列腺素類的生合成亢進[Proceedings of theNational Academy of Sciences of the USA，第90卷，P7240～7244(1933)]。另一方面還認為NO與過氧化物自由基迅速反應，生成過氧亞硝酸離子，過氧亞硝酸離子引起炎癥性的細胞、組織障礙。
另外，在慢性風濕性關節炎、類風濕性關節炎、痛風性關節炎、貝切特氏病等關節炎患者的病變部位的關節液中含有濃度高于同患者的正常關節或健康人關節的關節液的NO。
本發明的化合物如實施例11所述，由于具有NO產生抑制作用，因此是對于上述癌性疾病和炎癥性疾病有用的化合物。作為需要本發明的化合物有效的NO產生抑制的疾病，例如，可以舉出癌性疾病、炎癥性疾病、慢性風濕性關節炎、類風濕性關節炎、痛風性關節炎、貝切特氏病等疾病。
醛糖還原酶(Aldose reductase以下有時稱為AR。)是與生物體內作為葡萄糖代謝途徑之一的多元醇途徑相關的酶。該途徑包括AR相關的從葡萄糖到山梨糖醇類的還原途徑，以及山梨糖醇脫氫酶(以下有時稱為SDH。)相關的從山梨糖醇到D-果糖的脫氫反應途徑。如果流入細胞內的葡萄糖量增大，則無法用糖酵解途徑處理的葡萄糖使多元醇途徑亢進。然而，由于SDH活性低于AR活性，所以如果葡萄糖不斷流入，則中間代謝物的山梨糖醇被大量產生。作為這種以山梨糖醇的蓄積為起因而引起的各種疾病，即作為糖尿病合并癥引起的疾病，例如，已知白內障、末梢神經疾病、腎疾病、以白血球吞噬作用降低為起因的感染病癥、糖尿病性昏迷、因大血管壁中的動脈粥樣化變性導致的動脈硬化等疾病。
本發明的化合物如實施例10所述，由于具有AR阻斷作用，因此是對于上述糖尿病合并癥有用的化合物。作為需要本發明的化合物有效的AR阻斷作用的疾病，例如，可列舉出作為糖尿病合并癥引起的疾病，例如，可列舉出白內障、末梢神經疾病、腎疾病、以白血球吞噬作用降低為起因的感染病癥、糖尿病性昏迷、因大血管壁中的動脈粥樣化變性導致的動脈硬化等疾病。另外，本發明的化合物也可以與其他糖尿病治療劑并用。
上述本發明的治療劑或預防劑，可以通過將本發明的化合物作為有效成分，使其與公知的醫藥用載體組合而形成制劑來制造。一般而言，把這些化合物與可藥用的液狀或固體狀的載體配合，而且可以根據要求添加溶劑、分散劑、乳化劑、緩沖劑、穩定劑、賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑等，制成片劑、顆粒劑、散劑、粉末劑、膠囊劑等固形劑，普通液劑、懸浮劑、乳劑等液劑。還可以制成通過在使用前添加適當的載體能夠形成液狀的干燥品。
醫藥用載體，可以根據治療劑或預防劑的給藥方式和劑型來選擇。制成由固體組合物形成的口服制劑時，可以制成片劑、丸劑、膠囊劑、散劑、細粒劑、顆粒劑等，例如，利用淀粉、乳糖、白糖、甘露醇、羧甲基纖維素、玉米淀粉、無機鹽等。另外，制備口服制劑時，還可以配合粘合劑、崩解劑、表面活性劑、潤滑劑、流動性促進劑、調味劑、著色劑、香料等。例如，制成片劑或丸劑時，也可以根據要求用蔗糖、明膠、羥丙基纖維素等糖衣或者胃溶性或腸溶性物質的薄膜進行被覆。制成由液體組合物構成的口服制劑時，可以制成可藥用的乳濁劑、溶液劑、懸浮劑、糖漿劑等，例如，將精制水、乙醇等作為載體利用。而且，還可以根據要求，添加濕潤劑、懸浮劑之類的輔助劑，甜味劑，風味劑，防腐劑等。
另一方面，制作非口服制劑時，可以依照常法，使本發明的上述有效成分溶解或懸浮于作為稀釋劑的注射用蒸餾水、生理鹽水、葡萄糖水溶液、注射用植物油、芝麻油、花生油、大豆油、玉米油、丙二醇、聚乙二醇等中，根據需要添加殺菌劑、穩定劑、等滲劑、無痛化劑等進而制備。另外，可以制成固體組合物，在使用前溶解于無菌水或無菌注射用溶劑中來使用。
另外，本發明的預防劑或治療劑可以制成外用制劑。作為外用制劑，包括經皮給藥用或經粘膜(口腔內、鼻腔內)給藥用的固體狀、半固體狀或者液狀的制劑。還包括栓劑等。作為這樣的外用制劑，例如，可以舉出乳劑、洗劑等的乳濁劑，外用酊劑、經粘膜給藥用液劑等液狀制劑，油性軟膏、親水性軟膏等軟膏劑，薄膜劑、膠帶劑、泥敷劑等經皮給藥用或者經粘膜給藥用的貼附劑等。
上述各種制劑形態的治療劑或預防劑，可以分別利用公知的醫藥用載體等、通過適宜的常法來制造。另外，所述的治療劑或預防劑中的有效成分含量，考慮到其給藥方式、給藥方法等，只要是在后述的優選給藥量范圍內能夠投予該有效成分的量，則沒有特別的限定。
本發明治療劑或預防劑中上述有效成分的含量沒有特別的限定，例如，通常優選0.001～80重量％，更優選0.01～50重量％，特別優選0.1～20重量％。
本發明的治療劑或預防劑的給藥量，根據其制劑形態、給藥方法、使用目的和其適用的患者的年齡、體重、癥狀等適當設定，雖然不是一定的，但一般對于在制劑中所含有效成分的量而言，人(例如成人)每日優選為10μg～1g/kg體重，更優選為50μg～500mg/kg體重，進一步優選為100μg～100mg/kg體重。當然，由于給藥量根據各種條件變化，因此有以少于上述給藥量的量進行給藥就足夠的情況，或者也有必需超過上述范圍的情況。另外，本發明的治療劑或預防劑的給藥方法沒有特別的限定，可以根據使用目的和患者的年齡、癥狀等適當設定。例如，可以舉出口服給藥、靜脈內給藥、經皮給藥等。口服給藥時，本發明的治療劑或預防劑除了保持原樣口服給藥之外，還可以添加到任意飲食品中進行日常攝取。
另外，在本說明書中，醫藥品不僅是簡單地指上述本發明的治療劑或預防劑，有時也可以指以下所述的本發明的NO產生抑制劑或醛糖還原酶阻斷劑。
另外，可以提供含有本發明的化合物作為有效成分的NO產生抑制劑或醛糖還原酶阻斷劑。作為本發明的NO產生抑制劑或醛糖還原酶阻斷劑，可以是上述有效成分本身，也可以是含有上述有效成分的組合物。在本發明的方式中，作為有效成分的鹽優選可藥用的鹽。本發明的NO產生抑制劑或醛糖還原酶阻斷劑，例如，可以將上述有效成分與能夠用于與該有效成分相同用途的其他成分等配合，以上述治療劑或預防劑的制造方法為基準，制造成為通常使用的試劑形態。本發明的NO產生抑制劑或醛糖還原酶阻斷劑中上述有效成分的含量，考慮到這些制劑的給藥方法、使用目的等，只要是能夠獲得表現本發明所需效果的量即可，沒有特別的限定，例如，通常優選為0.001～100重量％，更優選為0.01～80重量％，特別優選為0.1～80重量％。另外，使用量只要是能夠獲得表現本發明所需效果的量就沒有特別的限定。特別是對生物給藥進行使用時，優選以能夠在上述治療劑或預防劑中的有效成分的給藥量范圍內投予有效成分的量來使用。對于給藥方法也沒有特別的限定，可以與上述治療劑或預防劑相同地適當設定。本發明的NO產生抑制劑或醛糖還原酶阻斷劑在必需NO產生抑制或醛糖還原酶阻斷的疾病中有用。而且，本發明的NO產生抑制劑或醛糖還原酶阻斷劑在對于這些疾病的藥物篩選中也有用。本發明的NO產生抑制劑或醛糖還原酶阻斷劑在與這些疾病的物理變化有關的功能研究中也有用。
另外，通過本發明，提供了含有本發明的化合物而成的食品、飲料或飼料(在本說明書中，有時稱為本發明的食品、飲料或飼料。另外，也可以簡單地稱為本發明的飲食品等。)。本發明的食品、飲料或飼料作為對該化合物顯示敏感性的疾病治療用或預防用的食品、飲料或飼料而有用。另外，本發明的食品、飲料或飼料包括附有以治療或預防該疾病為目的的功能性食品(特定保健用食品)。作為對該化合物顯示敏感性的疾病，例如，可列舉出上述本發明的治療劑或預防劑所適用的疾病。例如，含有、添加和/或稀釋本發明的化合物而成的食品、飲料或飼料，通過其NO產生抑制作用或醛糖還原酶阻斷作用，在需要NO產生抑制或醛糖還原酶阻斷的疾病的癥狀改善、預防中極為有用。因此，本發明的食品或飲料，適于擔心血糖值的人，手腳·關節處有疼痛·不適感的人，視力降低、身體浮腫、感到麻痹的人攝取。
另外，在本說明書中，上述“含有”是指在食品、飲料或飼料中含有本發明所用有效成分的形式，上述“添加”是指在食品、飲料或飼料的原料中添加本發明所用有效成分的形式，上述“稀釋”是指在本發明所使用的有效成分中添加食品、飲料或飼料的原料的形式。
本發明的食品、飲料或飼料的制造方法，沒有特別的限定，可以采用一般使用的食品、飲料或飼料的制造方法，在制成的食品、飲料或飼料中，可以含有本發明的化合物作為有效成分，優選列舉出高濃度含有本發明的有效成分的食品、飲料或飼料。另外，在本說明書中，高濃度含有是指，相對于原料、如明日葉的單位重量的本發明的化合物重量，本發明的食品、飲料或飼料的單位重量的本發明的化合物重量更多。
本發明的食品或飲料沒有特別的限定，例如，可以舉出谷物加工品、油脂加工品、大豆加工品、肉食加工品、水產制品、乳制品、蔬菜·果實加工品、點心類、醇類、嗜好飲料、調味料、罐裝·瓶裝·袋裝食品、半干燥或濃縮食品、干燥食品、冷凍食品、固體形狀食品、液體食品、香辣料類等農產·林產加工品、畜產加工品、水產加工品等。
在本發明的食品或飲料中只要含有、添加和/或稀釋上述有效成分，其形狀就沒有特別的限定，包括片狀、顆粒狀、膠囊狀等形狀的易于口服攝取的形狀物。
本發明的食品或飲料中的上述有效成分的含量沒有特別的限定，可以從其功能和活性表現的觀點適當選擇，例如，在100重量％食品中，為0.00001重量％以上，優選為0.0001～10重量％，進一步優選為0.0006～6重量％；例如，在100重量％飲料中，為0.00001重量％以上，優選為0.0001～10重量％，進一步優選為0.0006～6重量％。為高濃度含有本發明的有效成分的食品或飲料時，例如，在100重量％食品中，上述有效成分的含量為0.0001重量％以上，優選為0.0005～10重量％，進一步優選為0.001～10重量％；例如，100重量％在飲料中，上述有效成分的含量為0.0001重量％以上，優選為0.0005～10重量％，進一步優選為0.001～10重量％。另外，本發明的食品或飲料可以按如下方式攝取即按照包含在它們中的有效成分達到人(例如成人)每日10μg～1g/kg體重，優選50μg～500mg/kg體重，進一步優選100μg～100mg/kg體重。
另外，本發明提供含有上述有效成分而成的生物用的飼料，進而，作為一種其他方式，還提供以把上述有效成分投予給生物作為特征的生物的飼養方法。另外，作為本發明的一種其他方式，提供以含有上述有效成分為特征的生物飼養用劑。在此，“含有”一詞具有含有、添加和/或稀釋的意思，含有、添加及稀釋具有如上述的意思。
在本說明書中，作為生物沒有限定，例如，可以舉出養殖動物、寵物等。作為養殖動物，可列舉出馬、牛、豬、羊、山羊、駱駝、美洲駝等家畜，小鼠、大鼠、豚鼠、兔子等實驗動物，雞、鴨、火雞、鴕鳥等家禽，魚類，甲殼類或貝類。作為寵物，可列舉出狗、貓等。另外，作為飼料，可列舉出健康狀況的維持和/或改善用飼料。作為生物飼養用劑，可列舉出浸漬用劑、飼料添加劑、飲料用添加劑。
通過這些發明，在適用這些的上述示例的生物中，根據本發明中所用上述有效成分的NO產生抑制作用或醛糖還原酶阻斷作用，可以期待能夠表現與本發明上述治療劑或預防劑所帶來的相同效果。即，本發明的飼料、生物用飼養用劑對于這些物質適用的生物中的需要NO產生抑制或醛糖還原酶阻斷的疾病具有治療或預防效果。
本發明中使用的上述有效成分通常按如下劑量給藥對于對象生物，每日為10μg～1g/kg體重，優選為50μg～500mg/kg體重，更優選為100μg～100mg/kg體重。給藥，例如，可以將該有效成分添加混合于供給對象生物的人工配合飼料的原料中，或者可以在與人工配合飼料的粉末原料混合之后，進一步添加混合于其他原料中來進行。另外，上述有效成分在飼料中的含量沒有特別的限定，根據目的可以適當選擇，例如在100重量％飼料中，為0.00001重量％以上，優選為0.0001～30重量％，進一步優選為0.001～15重量％的比例。為高濃度含有本發明的有效成分的飼料時，例如，在100重量％飼料中，上述有效成分的含量為0.0001重量％以上，優選為0.0005～30重量％，進一步優選為0.001～30重量％。
本發明的飼料的制造方法沒有特別的限定，而且配合只要按照一般飼料為基準即可，在制成的飼料中只要含有本發明的上述有效成分即可。生物飼養用劑，可以將上述飼料的情況為基準，進行制造、使用等即可。
通過攝取含有具有NO產生抑制作用或醛糖還原酶阻斷作用的本發明中使用的上述有效成分而成的飼料，或者在具有NO產生抑制作用或醛糖還原酶阻斷作用的本發明所用上述有效成分的含有液中浸泡對象生物，可以良好地維持家畜、實驗動物、家禽、寵物等健康狀況，或者可以使其改善。另外，在此示例的方式，成為由本發明提供的生物飼養方法的一種方式。
在本發明中，醫藥品、飲食品、飼料中的本發明的化合物含量根據其給藥、攝取等，只要是在生物體內能夠得到所需效果的濃度即可，優選高于相應公知飲食品等地含有。
在本發明中使用的上述有效成分，即使給予表現其作用的有效量，也未見毒性。例如，口服給藥時，將上述式(1)～(9)所示化合物、或者這些化合物的光學活性體或它們的鹽中的任意一種分別按照1g/kg體重的劑量單次投予給小鼠，也未見死亡例。而且，上述有效成分，在對大鼠的口服給藥中，即使按照1g/kg體重的劑量經口單次給藥，也未見死亡例。
實施例下面舉出實施例，更詳細地說明本發明，但本發明并不限于這些實施例。另外，實施例中的％只要沒有特別說明就都是指體積％。另外，在本說明書中，有時把上述式(1)所示化合物稱為TB3，把上述式(2)所示化合物稱為TB4，把上述式(3)所示化合物稱為TB5，把上述式(4)所示化合物稱為TB6，把上述式(5)所示化合物稱為TB7，把上述式(6)所示化合物稱為TB8，把上述式(7)所示化合物稱為TB9，把上述式(8)所示化合物稱為化合物(C081)，把上述式(9)所示化合物稱為化合物(C042)。
實施例1TB3的制備(1)向5kg明日葉根部的干燥粉末中加入15L的乙醇，在室溫下提取30分鐘，抽濾后分成乙醇提取液和殘渣。對殘渣進行2次相同的提取之后，將乙醇提取液合并，減壓濃縮，即得乙醇提取濃縮液。
(2)把在實施例1-(1)中得到的乙醇提取濃縮液溶解于2L的25％乙醇水溶液中，接著用反相色譜法進行分離。樹脂使用コスモシ一ル140C18-OPN(ナカライテスク公司制造400mL)，按如下順序進行洗脫1L的30％乙醇水溶液，5L的40％乙醇水溶液，4L的75％乙醇水溶液，3L的100％乙醇水溶液。
(3)把在實施例1-(2)中得到的75％乙醇水溶液洗脫餾分減壓濃縮，使其吸附到硅膠(BW-300SP富士シリシア化學公司制造，350mL)上。洗脫按如下順序階段進行將氯仿∶己烷的溶劑比設為2∶1(800mL)、10∶4(1800mL)，以及乙酸乙酯(1400mL)。洗脫液按如下順序進行分離餾分1～5為每200mL作為一個餾分，餾分6為150mL，餾分7～10為每100mL作為一個餾分，餾分11～16為每200mL作為一個餾分，餾分17為1000mL。
(4)把在實施例1-(3)中得到的餾分17號減壓濃縮，使其吸附到硅膠(350mL)上。洗脫按如下順序階段進行將氯仿∶己烷的溶劑比設為10∶3(1000mL)、10∶1(2100mL)、20∶1(1000mL)、乙酸乙酯(500mL)。洗脫最初的2300mL之后，每100mL洗脫液作為一個餾分。
(5)把在實施例1-(4)中得到的餾分23、24號減壓濃縮，然后溶解于氯仿中，用己烷進行重結晶，即得黃色物質。
(6)對在實施例1-(5)中得到的黃色物質，用核磁共振(NMR)波譜裝置(AVANCE600型ブルカ·バイオスピン公司制造)，測定各種NMR譜，進行結構解析。以下表示NMR的歸屬信號。另外，峰的編號如下述式(化11)所示。
1H-NMR(氘代氯仿)δ1.34(3H，s，CH3-3”)，1.57(2H，m，H-4”)，1.65(3H，s，CH3-7”)，1.71(3H，s，CH3-7”)，1.79(1H，s，OH-3”)，2.11(1H，m，H-5”)，2.19(1H，m，H-5”)，3.19(2H，d，J＝8.7Hz，H-1”)，4.82(1H，t，J＝8.7Hz，H-2”)，5.15(1H，t，J＝6.7Hz，H-6”)，5.21(1H，s，OH-4)，6.44(1H，d，J＝8.4Hz，H-5’)，6.89(2H，d，J＝7.2Hz，H-3和H-5)，7.46(1H，d，J＝15.0Hz，H-α)，7.58(2H，d，J＝7.2Hz，H-2和H-6)，7.80(1H，d，J＝8.4Hz，H-6’)，7.84(1H，d，J＝15.0Hz，H-β)，13.51(1H，s，OH-2’)圖1表示1H-NMR譜。
13C-NMR(氘代氯仿)δ18.1(CH3-7”)，22.4(C-5”)，23.2(CH3-3”)，26.1(CH3-7”)，27.3(C-1”)，37.1(C-4”)，74.2(C-3”)，91.6(C-2”)，102.1(C-5’)，114.2(C-3’)，115.4(C-1’)，116.4(C-3和C-5)，118.6(C-α)，124.4(C-6”)，128.2(C-1)，130.9(C-2和C-6)，132.1(C-6’)，132.7(C-7”)，144.3(C-β)，158.3(C-4)，161.9(C-2’)，167.0(C-4’)，192.5(C＝O)圖2表示13C-NMR譜。
接著，采用質量分析計(DX302日本電子公司制造)，用FAB-MS方法測定在實施例1-(5)中得到的黃色物質的質譜(MS)。
FAB-MSm/z 407(M-H)-，將間硝基芐醇用作基質。
根據以上NMR譜、質譜解析的結果確認在實施例1-(5)中得到的黃色物質是1-[2，3-二氫-4-羥基-2-(1-羥基-1，5-二甲基-4-己烯基)-苯并呋喃-5-基]-3-(4-羥基苯基)-2-丙烯-1-酮(分子量408，TB3)。
實施例2TB4的制備(1)把在實施例1-(2)中得到的40％乙醇水溶液洗脫餾分減壓濃縮，使其吸附到硅膠(350mL)上。洗脫按如下順序階段進行將氯仿∶甲醇的溶劑比設為50∶1(960mL)、40∶1(520mL)、20∶1(1000mL)、10∶1(840mL)、5∶1(520mL)，每8mL洗脫液作為一個餾分。
(2)合并在實施例2-(1)中得到的硅膠餾分118～132號，濃縮干燥，即得黃色物質。
(3)用與實施例1-(6)相同的方法測定在實施例2-(2)中得到的黃色物質的NMR譜和質譜。以下表示NMR的歸屬信號。另外，峰的歸屬編號如下述式(化12)所示。
1H-NMR(氘代二甲亞砜)δ1.18(3H，s，CH3-3”)，1.28(3H，s，CH3-3”)，3.07(2H，m，H-1”)，3.87(3H，s，OCH3-4’)，4.72(1H，s，OH-3”)，4.78(1H，t，J＝8.7Hz，H-2”)，6.65(1H，d，J＝9.0Hz，H-5’)，6.82(2H，d，J＝8.4Hz，H-3和H-5)，7.57(2H，d，J＝8.4Hz，H-2和H-6)，7.59(1H，d，J＝15.6Hz，H-β)，7.69(1H，d，J＝9.0Hz，H-6’)，7.81(1H，d，J＝15.6Hz，H-α)，10.02(1H，s，OH-4)圖3表示1H-NMR譜。
13C-NMR(氘代二甲亞砜)δ26.2(CH3-3”)，26.8(CH3-3”)，27.6(C-1”)，56.5(OCH3-4’)，70.9(C-3”)，91.5(C-2”)，105.2(C-5’)，115.7(C-3’)，116.0(C-1’)，116.7(C-3和C-5)，123.8(C-α)，127.0(C-1)，131.0(C-2和C-6)，131.3(C-6’)，142.7(C-β)，160.5(C-4’)，160.6(C-4)，161.8(C-2’)，186.5(C＝O)圖4表示13C-NMR譜。
FAB-MSm/z 353(M-H)-，將間硝基芐醇用作基質。
根據以上NMR譜、質譜解析的結果確認在實施例2-(2)中得到的黃色物質是1-[2，3-二氫-2-(1-羥基-1-甲基乙基)-4-甲氧基苯并呋喃-7-基]-3-(4-羥基苯基)-2-丙烯-1-酮(分子量354，TB4)。
實施例3TB5的制備(1)合并在實施例2-(1)中得到的硅膠餾分335～349號，減壓濃縮后，用反相色譜法進行分離。樹脂使用コスモシ一ル140C18-OPN(30mL)。按如下順序進行洗脫10％乙醇水溶液、15％乙醇水溶液、20％乙醇水溶液、25％乙醇水溶液、30％乙醇水溶液各200mL，500mL的35％乙醇水溶液，200mL的75％乙醇水溶液。每100mL洗脫液作為一個餾分。
(2)合并在實施例3-(1)中得到的餾分6、7號，濃縮干燥后，即得黃色物質。
(3)用與實施例1-(6)相同的方法測定在實施例3-(2)中得到的黃色物質的NMR譜和質譜。以下表示NMR的歸屬信號。另外，峰的歸屬編號如下述式(化13)所示。
1H-NMR(氘代二甲亞砜)δ0.96(3H，s，CH3-7”)，1.02(3H，s，CH3-7”)，1.16(1H，m，H-5”)，1.61(1H，m，H-5”)，1.73(3H，s，CH3-3”)，1.85(1H，m，H-4”)，2.15(1H，m，H-4”)，3.01(1H，m，H-6”)，3.24(1H，m，H-1”)，3.31(1H，m，H-1”)，4.00(1H，s，OH-7”)，4.23(1H，d，J＝6.0Hz，OH-6”)，5.19(1H，t，J＝7.2Hz，H-2”)，6.47(1H，d，J＝8.4Hz，H-5’)，6.84(2H，d，J＝8.4Hz，H-3和H-5)，7.75(1H，d，J＝5.4Hz，H-α)，7.75(1H，d，J＝5.4Hz，H-β)，7.75(2H，d，J＝8.4Hz，H-2和H-6)，8.03(1H，d，J＝8.4Hz，H-6’)，10.11(1H，s，OH-4)，10.55(1H，s，OH-4’)，14.00(1H，s，OH-2’)
圖5表示1H-NMR譜。
13C-NMR(氘代二甲亞砜)δ17.0(CH3-3”)，22.1(C-1”)，25.4(CH3-7”)，27.2(CH3-7”)，30.3(C-5”)，37.5(C-4”)，72.4(C-7”)，78.0(C-6”)，108.2(C-5’)，113.6(C-1’)，115.4(C-3’)，116.7(C-3和C-5)，118.3(C-α)，122.4(C-2”)，126.7(C-1)，130.7(C-6’)，132.0(C-2和C-6)，135.7(C-3”)，145.0(C-β)，161.1(C-4)，163.2(C-4’)，164.4(C-2’)，192.6(C＝O)圖6表示13C-NMR譜。
FAB-MSm/z 425(M-H)-，將間硝基芐醇用作基質。
根據以上NMR譜、質譜解析的結果確定在實施例3-(2)中得到的黃色物質是1-[2，4-二羥基-3-(6，7-二羥基-3，7-二甲基-2-辛烯基)苯基]-3-(4-羥基苯基)-2-丙烯-1-酮(分子量426，TB5)。
實施例4TB6的制備(1)合并在實施例2-(1)中得到的硅膠餾分142～164號，減壓濃縮后，溶解于乙酸乙酯中。接著用己烷進行重結晶，把生成的沉淀和上清分離。
(2)使在實施例4-(1)中所得上清的濃縮物吸附于硅膠(100mL)上。洗脫液使用己烷∶乙酸乙酯＝7∶5，以每8mL洗脫液作為一個餾分進行分離。
(3)合并在實施例4-(2)中得到的硅膠餾分41～51號，進行濃縮干燥后即得黃色物質。
(4)用與實施例1-(6)相同的方法測定在實施例4-(3)中得到的黃色物質的NMR譜和質譜。以下表示NMR的歸屬信號。另外，峰的歸屬編號如下述式(化14)所示。
1H-NMR(氘代二甲亞砜)δ0.96(3H，s，CH3-7”)，0.99(3H，t，J＝6.9Hz，-O-CH2-CH3)，1.04(3H，s，CH3-7”)，1.15(1H，m，H-5”)，1.60(1H，m，H-5”)，1.72(3H，s，CH3-3”)，1.89(1H，m，H-4”)，2.13(1H，m，H-4”)，3.18(1H，m，H-6”)，3.24(2H，m，H-1”)，3.29(2H，m，-O-CH2-CH3)，4.27(1H，d，J＝6.0Hz，OH-6”)，5.20(1H，t，J＝6.9Hz，H-2”)，6.47(1H，d，J＝9.0Hz，H-5’)，6.84(2H，d，J＝8.4Hz，H-3和H-5)，7.75(1H，d，J＝4.8Hz，H-α)，7.75(1H，d，J＝4.8Hz，H-β)，7.75(2H，d，J＝8.4Hz，H-2和H-6)，8.31(1H，d，J＝9.0Hz，H-6’)，10.11(1H，s，OH-4)，10.55(1H，s，OH-4’)，14.00(1H，s，OH-2’)圖7表示1H-NMR譜。
13C-NMR(氘代二甲亞砜)δ17.0(CH3-3”)，17.0(-O-CH2-CH3)，21.1(CH3-7”)，22.1(C-1”)，23.3(CH3-7”)，29.9(C-5”)，37.2(C-4”)，56.6(-O-CH2-CH3)，75.1(C-6”)，77.5(C-7”)，108.2(C-5’)，113.6(C-1’)，115.4(C-3’)，116.7(C-3和C-5)，118.3(C-α)，122.7(C-2”)，126.7(C-1)，130.6(C-6’)，132.0(C-2和C-6)，135.5(C-3”)，145.0(C-β)，161.1(C-4)，163.1(C-4’)，164.4(C-2’)，192.6(C＝O)
圖8表示13C-NMR譜。
FAB-MSm/z 453(M-H)-，將間硝基芐醇用作基質。
根據以上NMR譜、質譜解析的結果確定在實施例4-(3)中得到的黃色物質是1-[3-(7-乙氧基-6-羥基-3，7-二甲基-2-辛烯基)-2，4-二羥基苯基]-3-(4-羥基苯基)-2-丙烯-1-酮(分子量454，TB6)。
實施例5TB7的制備(1)把在實施例1-(4)中得到的餾分4～22號減壓濃縮后，溶解于氯仿中。接著用己烷進行重結晶，把生成的沉淀和上清分離。
(2)使在實施例5-(1)中所得上清的濃縮物吸附于硅膠(350mL)上。洗脫按如下順序階段進行把氯仿∶己烷的溶劑比設為100∶1(1500mL)、50∶1(2600mL)、20∶1(2600mL)、乙酸乙酯(300mL)，以每8mL洗脫液作為一個餾分進行分離。
(3)合并在實施例5-(2)中得到的餾分21～30，進行濃縮干燥后即得黃色物質。
(4)用與實施例1-(6)相同的方法測定在實施例5-(3)中得到的黃色物質的NMR譜和質譜。以下表示NMR的歸屬信號。另外，峰的歸屬編號如下述式(化15)所示。
1H-NMR(氘代二甲亞砜)δ0.91(3H，s，CH3-7”)，0.96(3H，s，CH3-7”)，1.21(3H，s，CH3-3”)，1.26(1H，m，H-4”)，1.43(1H，m，H-4”)，1.53(1H，m，H-5”)，1.85(1H，m，H-5”)，2.12(1H，t，J＝7.2Hz，H-2”)，2.52(1H，m，H-1”)，2.56(1H，m，H-1”)，3.62(1H，d，J＝5.4Hz，H-6”)，3.91(3H，s，OCH3-4’)，6.67(1H，d，J＝9.0Hz，H-5’)，6.85(2H，d，J＝8.4Hz，H-3和H-5)，7.78(1H，d，J＝15.6Hz，H-β)，7.78(2H，d，J＝8.4Hz，H-2和H-6)，7.83(1H，d，J＝15.6Hz，H-α)，8.23(1H，d，J＝9.0Hz，H-6’)，10.15(1H，s，OH-4)，13.99(1H，s，OH-2’)圖9表示1H-NMR譜。
13C-NMR(氘代二甲亞砜)δ19.0(CH3-3”)，21.3(C-1”)，24.5(CH3-7”)，26.0(CH3-7”)，26.4(C-5”)，39.9(C-4”)，46.3(C-7”)，53.5(C-2”)，56.8(OCH3-4’)，85.8(C-6”)，86.9(C-3”)，103.7(C-5’)，114.8(C-1’)，116.7(C-3和C-5)，117.4(C-3’)，118.2(C-α)，126.6(C-1)，131.3(C-6’)，132.2(C-2和C-6)，145.7(C-β)，161.3(C-4)，163.5(C-2’)，164.1(C-4’)，193.4(C＝O)圖10表示13C-NMR譜。
FAB-MSm/z 421(M-H)-，將間硝基芐醇用作基質。
根據以上NMR譜、質譜解析的結果確定在實施例5-(3)中得到的黃色物質是1-[3-(2，5-環氧基-2，6，6-三甲基-環己基甲基)-2-羥基-4-甲氧基苯基]-3-(4-羥基苯基)-2-丙烯-1-酮(分子量422，TB7)。
實施例6TB8的制備(1)合并在實施例1-(3)中得到的硅膠餾分10～15號，減壓濃縮后，溶解于氯仿中。接著用己烷進行重結晶，把生成的沉淀和上清分離。
(2)把在實施例6-(1)中得到的上清減壓濃縮后，用反相色譜法進行分離。色譜柱使用TSK gel ODS-80Ts(21.5mm×30cm東曹公司制造)。溶劑為蒸餾水∶乙腈＝15∶85，洗脫速度為5mL/分鐘，檢測波長為215nm。以洗脫液的紫外線吸收為指標分離洗脫液。
(3)把在實施例6-(2)中得到的反相色譜洗脫餾分2(含有保留時間為57.6分鐘的檢出峰的餾分)濃縮干燥后即得黃色物質。
(4)用與實施例1-(6)相同的方法測定在實施例6-(3)中得到的黃色物質的NMR譜和質譜。以下表示NMR的歸屬信號。另外，峰的歸屬編號如下述式(化16)所示。
1H-NMR(氘代二甲亞砜)δ1.19(3H，s，CH3-7”)，1.19(3H，s，CH3-7”)，1.70(3H，s，CH3-3”)，2.62(2H，d，J＝6.6Hz，H-4”)，3.29(1H，m，H-1”)，3.31(1H，m，H-1”)，3.91(3H，s，OCH3-4’)，5.19(1H，t，J＝6.9Hz，H-2”)，5.47(1H，m，H-5”)，5.55(1H，d，J＝15.6Hz，H-6”)，6.68(1H，d，J＝9.0Hz，H-5’)，6.85(2H，d，J＝8.4Hz，H-3和H-5)，7.78(2H，d，J＝8.4Hz，H-2和H-6)，7.79(1H，d，J＝13.2Hz，H-β)，7.83(1H，d，J＝13.2Hz，H-α)，8.23(1H，d，J＝9.0Hz，H-6’)，10.14(1H，s，OH-4)，10.81(1H，s，OOH-7”)，13.81(1H，s，OH-2’)圖11表示1H-NMR譜。
13C-NMR(氘代二甲亞砜)δ16.8(CH3-3”)，22.1(C-1)，25.5(CH3-7”)，25.5(CH3-7”)，43.0(C-4”)，56.9(OCH3-4’)，81.1(C-7”)，103.7(C-5’)，114.9(C-1’)，116.6(C-3’)，116.7(C-3和C-5)，118.1(C-α)，123.5(C-2”)，126.5(C-1)，127.9(C-5”)，131.4(C-6’)，132.3(C-2和C-6)，134.3(C-3”)，137.0(C-6”)，145.7(C-β)，161.3(C-4)，163.0(C-2’)，163.9(C-4’)，193.3(C＝O)圖12表示13C-NMR譜。
FAB-MSm/z 437(M-H)-，將間硝基芐醇用作基質。
根據以上NMR譜、質譜解析的結果確定在實施例6-(3)中得到的黃色物質是1-[2-羥基-3-(7-氫過氧化-3，7-二甲基-2，5-辛二烯基)-4-甲氧基苯基]-3-(4-羥基苯基)-2-丙烯-1-酮(分子量438，TB8)。
實施例7TB9的制備(1)把在實施例6-(2)中得到的反相色譜洗脫餾分3(含有保留時間為61.2分鐘的檢出峰的餾分)濃縮干燥后即得黃色物質。
(2)用與實施例1-(6)相同的方法測定在實施例7-(1)中得到的黃色物質的NMR譜和質譜。以下表示NMR的歸屬信號。另外，峰的歸屬編號如下述式(化17)所示。
1H-NMR(氘代二甲亞砜)δ1.40(1H，m，H-5”)，1.56(1H，m，H-5”)，1.62(3H，s，CH3-7”)，1.72(3H，s，CH3-3”)，1.89(2H，m，H-4”)，3.27(1H，m，H-1”)，3.31(1H，m，H-1”)，3.91(3H，s，OCH3-4’)，4.07(1H，t，J＝6.9Hz，H-6”)，4.79(1H，s，H-8”)，4.84(1H，s，H-8”)，5.14(1H，t，J＝6.6Hz，H-2”)，6.68(1H，d，J＝9.0Hz，H-5’)，6.85(2H，d，J＝8.4Hz，H-3和H-5)，7.78(2H，d，J＝8.4Hz，H-2和H-6)，7.78(1H，d，J＝15.0Hz，H-β)，7.83(1H，d，J＝15.0Hz，H-α)，8.24(1H，d，J＝9.0Hz，H-6’)，10.15(1H，s，OH-4)，11.25(1H，s，OOH-6”)，13.81(1H，s，OH-2’)圖13表示1H-NMR譜。
13C-NMR(氘代二甲亞砜)δ16.7(CH3-3”)，17.7(CH3-7”)，22.0(C-1”)，29.5(C-5”)，36.0(C-4”)，56.9(OCH3-4’)，88.2(C-6”)，103.6(C-5’)，114.0(C-8”)，114.9(C-1’)，116.7(C-3’)，116.7(C-3和C-5)，118.1(C-α)，122.9(C-2”)，126.5(C-1)，131.3(C-6’)，132.3(C-2和C-6)，134.9(C-3”)，145.3(C-7”)，145.7(C-β)，161.3(C-4)，163.0(C-2’)，163.8(C-4’)，193.3(C＝O)圖14表示13C-NMR譜。
FAB-MSm/z 437(M-H)-，將間硝基芐醇用作基質。
根據以上NMR譜、質譜解析的結果確定在實施例7-(1)中得到的黃色物質是1-[2-羥基-3-(6-氫過氧化-3，7-二甲基-2，7-辛二烯基)-4-甲氧基苯基]-3-(4-羥基苯基)-2-丙烯-1-酮(分子量438，TB9)。
實施例8化合物(C081)的制備(1)把100mg在實施例6-(3)中得到的TB8溶解于50mL甲醇中，加入三苯膦(東京化成工業公司生產60mg)于室溫下反應1小時。把反應液濃縮干燥，供于以氯仿∶甲醇＝10∶1為展開溶劑的薄層色譜。接著，刮下紫外線吸收部分，用展開溶劑提取后，濃縮干燥，由此得到黃色物質57.2mg。
(2)用與實施例1-(6)相同的方法測定在實施例8-(1)中得到的黃色物質的NMR譜和質譜。以下表示NMR的歸屬信號。另外，峰的歸屬編號如下述式(化18)所示。
1H-NMR(氘代二甲亞砜)δ1.13(3H，s，CH3-7”)，1.13(3H，s，CH3-7”)，1.70(3H，s，CH3-3”)，2.59(2H，d，J＝7.2Hz，H-4”)，3.28(2H，d，J＝7.2Hz，H-1”)，3.91(3H，s，OCH3-4’)，4.42(1H，s，OH-7”)，5.17(1H，t，J＝7.2Hz，H-2”)，5.42(1H，m，H-5”)，5.52(1H，d，J＝15.0Hz，H-6”)，6.68(1H，d，J＝9.0Hz，H-5’)，6.85(2H，d，J＝9.0Hz，H-3和H-5)，7.77(1H，d，J＝15.0Hz，H-β)，7.78(2H，d，J＝9.0Hz，H-2和H-6)，7.83(1H，d，J＝15.0Hz，H-α)，8.24(1H，d，J＝9.0Hz，H-6’)，10.17(1H，s，OH-4)，13.80(1H，s，OH-2’)圖15表示1H-NMR譜。
13C-NMR(氘代二甲亞砜)δ16.8(CH3-3”)，22.1(C-1”)，31.0(CH3-7”)，31.0(CH3-7”)，42.7(C-4”)，56.9(OCH3-4’)，69.7(C-7”)，103.6(C-5’)，114.9(C-1’)，116.7(C-3’)，116.7(C-3和C-5)，118.1(C-α)，123.2(C-2”)，123.9(C-5”)，126.6(C-1)，131.3(C-6’)，132.3(C-2和C-6)，134.6(C-3”)，141.5(C-6”)，145.7(C-β)，161.3(C-4)，163.0(C-2’)，163.8(C-4’)，193.3(C＝O)
圖16表示13C-NMR譜。
FAB-MSm/z 421(M-H)-，將間硝基芐醇用作基質。
根據以上NMR譜、質譜解析的結果確定在實施例8-(1)中得到的黃色物質是1-[2-羥基-3-(7-羥基-3，7-二甲基-2，7-辛二烯基)-4-甲氧基苯基]-3-(4-羥基苯基)-2-丙烯-1-酮(分子量422，化合物(C081))。
實施例9化合物(C042)的制備(1)把2’，4’-二羥基苯乙酮(和光純藥公司制造)在2M氫氧化鉀甲醇溶液中、在冰冷卻的條件下用1-溴-2-甲基-2-丁烯(アルドリツチ公司制造)處理之后，在鈀黑(ナカライテスク公司制造)存在的條件下，于甲醇中進行氫還原，即得2’，4’-二羥基-3’-(3-甲基丁基)苯乙酮。接著，通過2’，4’-二羥基-3’-(3-甲基丁基)苯乙酮和4-羥基苯甲醛(アルドリツチ公司制造)進行克萊森縮合，即得黃色物質。
(2)用與實施例1-(6)相同的方法測定在實施例9-(1)中得到的黃色物質的NMR譜和質譜。以下表示NMR的歸屬信號。另外，峰的歸屬編號如下述式(化19)所示。
1H-NMR(氘代二甲亞砜)δ0.91(3H，s，CH3-3”)，0.92(3H，s，CH3-3”)，1.34(2H，m，H-2”)，1.54(1H，m，H-3”)，2.55(2H，m，H-1”)，6.47(1H，d，J＝9.0Hz，H-5’)，6.84(2H，d，J＝9.0Hz，H-3和H-5)，7.74(2H，d，J＝9.0Hz，H-2和H-6)，7.74(2H，s，H-α，H-β)，8.02(1H，d，J＝9.0Hz，H-6’)，10.10(1H，s，OH-4)，10.46(1H，s，OH-4’)13.98(1H，s，OH-2’)
圖17表示1H-NMR譜。
FAB-MSm/z 327(M+H)+，將間硝基芐醇用作基質。
根據以上NMR譜、質譜解析的結果確定在實施例9-(1)中得到的黃色物質是1-[2，4-二羥基-3-(3-甲基丁基)苯基]-3-(4-羥基苯基)-2-丙烯-1-酮(分子量326，化合物(C042))。
實施例10醛糖還原酶阻斷活性用下述方法測定在實施例1～9中制成的化合物(TB3、TB4、TB5、TB6、TB7、TB8、TB9、化合物(C081)、化合物(C042))的醛糖還原酶阻斷活性。在樣品(將各化合物溶解于50％二甲亞砜水溶液之后得到的物質)10μL、0.2M磷酸緩沖液(pH6.2)100μL、1mM的NADPH(磷酸緩沖液)20μL、源自人肌肉細胞的醛糖還原酶溶液(0.1U/mL，和光純藥工業公司制造，磷酸緩沖液)10μL中加入100mM甲基乙二醛20μL，從經過30秒之后開始，在180秒內測定NADPH在340nm波長處的吸光度變化。使用50％二甲亞砜水溶液代替樣品作為陰性對照樣品。而且，使用蒸餾水代替甲基乙二醛溶液作為各樣品的空白來測定吸光度。測定值用2次實驗值的平均值表示。醛糖還原酶阻斷率(％)用下述式算出。
阻斷率(％)＝[1-(ΔAs-ΔAsb)/(ΔAc-ΔAcb)]×100在此，ΔAs和ΔAc分別表示樣品溶液、陰性對照溶液每1分鐘的吸光度變化，ΔAsb和ΔAcb分別表示樣品溶液、陰性對照溶液的空白溶液每1分鐘的吸光度變化。
樣品添加量設為如表1所示的各化合物的最終濃度。其結果表明TB3、TB4、TB5、TB6、TB7、TB8、TB9、化合物(C081)及化合物(C042)具有濃度依存性的醛糖還原酶阻斷活性。在表1中示出其結果。


N.T.未進行實驗實施例11NO產生抑制活性用下述方法測定在實施例1～9中制成的化合物(TB3、TB4、TB5、TB6、TB7、TB8、TB9、化合物(C081)及化合物(C042))的NO產生抑制活性。在含有10％胚牛血清(バイオウイタカ一公司制造，14-506F)的杜爾貝科改良的伊格爾培養基(SIGMA公司制造，D5796)中懸浮RAW264.7細胞(ATCC TIB 71)，使得濃度達到4×105個/mL，在48微孔板的每孔中加入上述所得溶液500μL，在5％二氧化碳氣體存在的條件下，在37℃下進行培養。24小時后，換為含有10％胎牛血清(バイオウイタカ一公司制造)、不含酚紅、含有2mM的L-谷酰胺(ライフテツクオリエンタル公司制造，25030-149)的杜爾貝科改良的伊格爾培養基(バイオウイタカ一公司制造，12-917F)，在各孔中分別添加1μL的10mM、5mM、2.5mM的TB3、TB4、TB5、TB6、TB7、TB8、TB9、化合物(C081)或化合物(C042)(均用二甲亞砜溶液溶解)。接著培養1小時之后，在各孔中添加5μL的100μg/mL脂多糖(LPS，SIGMA公司制造，L-2010)水溶液，培養16小時之后，NO在培養基中被氧化，由此測定生成的NO2-濃度。另外，將添加有二甲亞砜的部分代替各化合物設為對照。進行上述培養后，在100μL的培養上清中加入100μL的4％格里斯試劑(SIGMA公司制造，G4410)，在室溫下放置15分鐘之后，測定在540nm處的吸光度。由用已知濃度的NaNO2(SIGMA公司制造，S2252)制作的標準曲線計算培養基中的NO2-濃度。測定全部連續進行2次。各化合物的NO產生抑制能依照下式算出。
X各化合物存在下的NO2-量Y對照中的NO2-量NO產生抑制能力(％)＝[1-X/Y]×100其結果為TB3、TB4、TB5、TB6、TB7、TB8、TB9、化合物(C081)及化合物(C042)濃度依存性地抑制因LPS導致的NO產生誘導。將其結果示于表2中。


N.T.未進行試驗產業實用性通過本發明，提供了新型查耳酮類化合物。該化合物具有NO產生抑制作用或醛糖還原酶阻斷作用，作為利用該生理活性的醫藥品、食品、飲料或飼料的有效成分而有用。
權利要求
1.查耳酮類化合物、其衍生物或者它們的鹽，其是用下述式(1)～(9)表示的。[化1] [化2] [化3] [化4] [化5] [化6] [化7] [化8] [化9]
2.對該化合物顯示敏感性的疾病的治療劑或預防劑，其特征在于，含有權利要求1所述的化合物、其衍生物或者它們的鹽作為有效成分。
3.如權利要求2所述的治療劑或預防劑，其中，對該化合物顯示敏感性的疾病是在治療或預防中需要抑制一氧化氮產生或阻斷醛糖還原酶的疾病。
4.一氧化氮產生抑制劑或醛糖還原酶阻斷劑，其特征在于，含有權利要求1所述的化合物、其衍生物或它們的鹽作為有效成分。
5.食品、飲料或飼料，其特征在于，含有權利要求1所述的化合物、其衍生物或它們的鹽。
6.如權利要求5所述的食品、飲料或飼料，其是用于治療或預防對該化合物顯示敏感性的疾病。
7.如權利要求6所述的食品、飲料或飼料，其中，對該化合物顯示敏感性的疾病是在治療或預防中需要抑制一氧化氮產生或阻斷醛糖還原酶的疾病。
全文摘要
本發明提供具有一氧化氮抑制作用或醛糖還原酶阻斷作用的新型查耳酮類化合物、其衍生物或它們的鹽。本發明還提供利用該化合物生理作用的、對于對該化合物顯示敏感性的疾病具有治療或預防效果的醫藥品、食品、飲料或飼料。
文檔編號C07D307/80GK1890205SQ200480036040
公開日2007年1月3日 申請日期2004年12月1日 優先權日2003年12月5日
發明者大野木宏, 杉山勝美, 榎龍嗣, 小林英二, 佐川裕章, 加藤郁之進 申請人:寶生物工程株式會社