本發明(ming)涉及一種大蒜素(su)緩解蘋果連作障礙的方(fang)法，屬于果樹栽培學領(ling)域。

(二)

背景技術：

連(lian)(lian)(lian)作(zuo)(zuo)障礙(ai)是(shi)指同一作(zuo)(zuo)物(wu)(wu)或近緣作(zuo)(zuo)物(wu)(wu)連(lian)(lian)(lian)續種植(zhi)以后，即使在正(zheng)常管(guan)理的(de)情況下(xia)，也會產(chan)(chan)生(sheng)(sheng)產(chan)(chan)量降低、品(pin)質變(bian)(bian)劣、生(sheng)(sheng)育狀況變(bian)(bian)差的(de)現象(xiang)。蘋果連(lian)(lian)(lian)作(zuo)(zuo)障礙(ai)具有普遍性(xing)，是(shi)生(sheng)(sheng)產(chan)(chan)中(zhong)的(de)一大難題，給果農造成巨大的(de)經濟損失，嚴重(zhong)制約(yue)了果樹(shu)生(sheng)(sheng)產(chan)(chan)的(de)可持續發(fa)展。研究表明，在多數地區，與土傳真菌有關的(de)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)因(yin)(yin)素是(shi)造成連(lian)(lian)(lian)作(zuo)(zuo)障礙(ai)的(de)主要(yao)原因(yin)(yin)。化學殺菌劑熏蒸(zheng)土壤一直以來都是(shi)防(fang)治連(lian)(lian)(lian)作(zuo)(zuo)障礙(ai)最有效的(de)措施，但(dan)是(shi)因(yin)(yin)其污染環(huan)境，逐漸被禁止使用。因(yin)(yin)此研制環(huan)境友好型植(zhi)物(wu)(wu)源熏蒸(zheng)劑來防(fang)控蘋果連(lian)(lian)(lian)作(zuo)(zuo)障礙(ai)具有重(zhong)要(yao)意義。

生物熏蒸劑既能有效的抑制和殺滅土壤中的有害病原菌，又能在土壤中快速降解。因此用生物熏蒸劑進行土壤消毒和生長期防治，沒有任何農藥殘留和污染，可以替代很多種化學農藥，從源頭上確保質量安全。大蒜是百合科蔥屬植物，研究表明大蒜素對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門菌、鏈球菌、克雷白桿菌、植物炭疽病和疫病病菌等均有明顯抑制作用，因此我們考慮將其作為一種生物熏蒸劑，探索其在蘋果連作障礙中的應用效果。目前對大蒜素的提取方法主要有：超聲波提取、溶劑振蕩萃取法、水蒸氣蒸餾法、超臨界CO₂萃取(qu)法、真空(kong)微波輔助萃取(qu)法等。但(dan)這些提(ti)(ti)取(qu)大蒜素(su)的(de)方法有(you)(you)的(de)耗時長(chang)，有(you)(you)的(de)操作(zuo)(zuo)復雜，并且都存(cun)在提(ti)(ti)取(qu)效率低的(de)問(wen)題。因(yin)此，研究(jiu)簡易快捷、高(gao)效環保的(de)提(ti)(ti)取(qu)大蒜素(su)的(de)工藝并將(jiang)所得大蒜素(su)用于(yu)減輕蘋(pin)果連作(zuo)(zuo)障(zhang)礙，可有(you)(you)利于(yu)推動(dong)蘋(pin)果產業的(de)發展(zhan)，對有(you)(you)效防控蘋(pin)果連作(zuo)(zuo)障(zhang)礙具有(you)(you)實踐(jian)意義。

(三)

技術實現要素：

針對(dui)上(shang)述(shu)現象，本發明提供(gong)了一(yi)種大蒜素緩(huan)解(jie)蘋(pin)果(guo)連(lian)作障礙的方(fang)法(fa)；具體涉(she)及一(yi)種高(gao)效、快捷(jie)、簡單(dan)易行的提取大蒜素的方(fang)法(fa)，并將所得(de)大蒜素應用于緩(huan)解(jie)蘋(pin)果(guo)連(lian)作障礙。

本發明技(ji)術方案如下：

一(yi)種大蒜素緩解(jie)蘋(pin)(pin)(pin)果(guo)(guo)(guo)連(lian)作障礙的(de)方法，是(shi)在每(mei)年蘋(pin)(pin)(pin)果(guo)(guo)(guo)連(lian)作建園時(shi)，春季(ji)栽(zai)植(zhi)(zhi)蘋(pin)(pin)(pin)果(guo)(guo)(guo)幼(you)(you)(you)樹(shu)時(shi)，向(xiang)每(mei)棵(ke)蘋(pin)(pin)(pin)果(guo)(guo)(guo)幼(you)(you)(you)樹(shu)的(de)定(ding)(ding)植(zhi)(zhi)穴內施(shi)(shi)(shi)(shi)用(yong)濃度為(wei)(wei)(wei)(wei)25mg/mL的(de)大蒜素提取液；每(mei)棵(ke)幼(you)(you)(you)樹(shu)的(de)施(shi)(shi)(shi)(shi)用(yong)量(liang)為(wei)(wei)(wei)(wei)其定(ding)(ding)植(zhi)(zhi)穴內土壤體積(ji)比(bi)的(de)1/8，分三(san)次(ci)(ci)施(shi)(shi)(shi)(shi)加(jia)：第一(yi)次(ci)(ci)為(wei)(wei)(wei)(wei)春季(ji)栽(zai)植(zhi)(zhi)蘋(pin)(pin)(pin)果(guo)(guo)(guo)幼(you)(you)(you)苗前兩周施(shi)(shi)(shi)(shi)加(jia)(3月上(shang)旬(xun))，施(shi)(shi)(shi)(shi)用(yong)量(liang)為(wei)(wei)(wei)(wei)每(mei)棵(ke)幼(you)(you)(you)樹(shu)的(de)定(ding)(ding)植(zhi)(zhi)穴內土壤體積(ji)比(bi)的(de)1/16；第二次(ci)(ci)為(wei)(wei)(wei)(wei)蘋(pin)(pin)(pin)果(guo)(guo)(guo)幼(you)(you)(you)樹(shu)生長初期(qi)(6月上(shang)旬(xun))，施(shi)(shi)(shi)(shi)用(yong)量(liang)為(wei)(wei)(wei)(wei)每(mei)棵(ke)幼(you)(you)(you)樹(shu)的(de)定(ding)(ding)植(zhi)(zhi)穴內土壤體積(ji)比(bi)的(de)1/32；第三(san)次(ci)(ci)為(wei)(wei)(wei)(wei)蘋(pin)(pin)(pin)果(guo)(guo)(guo)幼(you)(you)(you)樹(shu)生長中期(qi)(7月下旬(xun))，施(shi)(shi)(shi)(shi)用(yong)量(liang)為(wei)(wei)(wei)(wei)每(mei)棵(ke)幼(you)(you)(you)樹(shu)的(de)定(ding)(ding)植(zhi)(zhi)穴內土壤體積(ji)比(bi)的(de)1/32。

所述大蒜提取液制備步驟(zou)如下：

1)大蒜去皮(pi)清(qing)洗(xi)，切成0.1～0.4cm的碎丁，室(shi)溫下放置5～15min進行酶(mei)解(jie)，使蒜氨酸向大蒜素轉化；

2)將切(qie)碎酶解好(hao)的大(da)蒜放入快速(su)溶劑(ji)萃(cui)取(qu)儀(ASE)中進行萃(cui)取(qu)得到萃(cui)取(qu)液；

萃取(qu)條件為(wei)：萃取(qu)溶劑為(wei)無水乙醇(chun)，壓力9.80～11.20Mpa，萃取(qu)溫度40～50℃，靜態萃取(qu)時間4～10min，循環萃取(qu)次(ci)(ci)數2～4次(ci)(ci)，沖洗(xi)體積50～70％，吹掃時間150～200s；

3)旋蒸濃縮：將(jiang)步驟2)中得到(dao)的萃(cui)取液(ye)采用旋轉(zhuan)蒸發儀，在45℃條件(jian)下蒸發濃縮至萃(cui)取液(ye)體積比的1/20～1/10，然(ran)后以12000g速度(du)離心，取上清液(ye)得到(dao)大蒜素提取母液(ye)，按照(zhao)公式(1)計算母液(ye)濃度(du)(單位g/mL)，4℃保(bao)存；

4)大蒜素提取(qu)母(mu)液(ye)中按體積比加入去(qu)離子水稀(xi)釋大蒜素提取(qu)母(mu)液(ye)，得到濃度為25mg/mL的大蒜素提取(qu)液(ye)。

本發明的特點及(ji)有(you)益(yi)效果：

本發明有兩個明顯(xian)的優勢：一是(shi)短(duan)時間內極大(da)的提(ti)(ti)高(gao)(gao)了大(da)蒜(suan)素萃(cui)取(qu)液的提(ti)(ti)取(qu)效(xiao)率；二是(shi)大(da)蒜(suan)素提(ti)(ti)取(qu)液可(ke)顯(xian)著提(ti)(ti)高(gao)(gao)連(lian)作(zuo)條件下蘋(pin)(pin)(pin)果(guo)幼苗(miao)生長發育(yu)，最終(zhong)起到(dao)減輕(qing)蘋(pin)(pin)(pin)果(guo)連(lian)作(zuo)障礙的效(xiao)果(guo)。利(li)用(yong)本發明提(ti)(ti)取(qu)的大(da)蒜(suan)提(ti)(ti)取(qu)液和施用(yong)方法，經驗證(zheng)，能有效(xiao)提(ti)(ti)高(gao)(gao)連(lian)作(zuo)條件下蘋(pin)(pin)(pin)果(guo)幼苗(miao)生長發育(yu)，降低(di)蘋(pin)(pin)(pin)果(guo)連(lian)作(zuo)土壤中尖孢鐮刀菌的數量，明顯(xian)減輕(qing)蘋(pin)(pin)(pin)果(guo)連(lian)作(zuo)障礙現象(xiang)。

(四)附圖說明

圖(tu)1為本(ben)發明高效快(kuai)速制備大蒜素提取液及其(qi)在(zai)蘋果連作障礙中的使用方法流程(cheng)圖(tu)。

圖(tu)2為實施例1中不同提取方法(fa)對大蒜素(su)提取效率(lv)的(de)影響。

圖2說明本發明方法(fa)即快速溶劑萃取儀ASE法(fa)制備(bei)的大蒜素提取液(ye)抑(yi)菌效果最好。

圖3為(wei)實施例2中不同提取溶(rong)劑對大蒜(suan)素提取效(xiao)率的影響。

圖3說(shuo)明本發明選用乙醇作為萃取溶劑，制備(bei)的大(da)蒜素提取液抑菌效(xiao)果最好。

圖4為實施例3中不同提(ti)取(qu)溫度對大(da)蒜素提(ti)取(qu)效率的影響。

圖4說明萃(cui)取溫度為(wei)50℃時，制備的大(da)蒜素提取液抑菌效果最(zui)好(hao)。

圖(tu)5為實施例4中不(bu)同提(ti)取時間對大蒜(suan)素提(ti)取效率的影響。

圖5說明(ming)萃取(qu)時間5min時，所得大蒜素(su)提取(qu)液抑(yi)菌效果最好。

(五)具體實施方式

實施例1：

大(da)(da)(da)蒜(suan)(suan)去皮清洗(xi)，切成(cheng)0.2cm的(de)(de)碎丁，室溫下放置10min進行酶解，酶解好的(de)(de)大(da)(da)(da)蒜(suan)(suan)分別用(yong)本(ben)發(fa)明(ming)的(de)(de)快速溶(rong)劑(ji)(ji)萃(cui)取(qu)儀法(fa)(fa)(fa)、超聲波萃(cui)取(qu)法(fa)(fa)(fa)和(he)溶(rong)劑(ji)(ji)震(zhen)蕩萃(cui)取(qu)法(fa)(fa)(fa)進行大(da)(da)(da)蒜(suan)(suan)素(su)的(de)(de)提取(qu)測定(ding)，每種(zhong)測定(ding)方(fang)法(fa)(fa)(fa)平行提取(qu)測定(ding)3次。由圖(tu)2可以看出，本(ben)發(fa)明(ming)方(fang)法(fa)(fa)(fa)對大(da)(da)(da)蒜(suan)(suan)素(su)的(de)(de)提取(qu)效(xiao)率(lv)顯(xian)著(zhu)高于超聲波萃(cui)取(qu)法(fa)(fa)(fa)和(he)溶(rong)劑(ji)(ji)震(zhen)蕩萃(cui)取(qu)法(fa)(fa)(fa)，本(ben)方(fang)法(fa)(fa)(fa)的(de)(de)提取(qu)效(xiao)率(lv)是超聲波萃(cui)取(qu)法(fa)(fa)(fa)的(de)(de)1.29倍，是溶(rong)劑(ji)(ji)震(zhen)蕩萃(cui)取(qu)法(fa)(fa)(fa)的(de)(de)1.63倍。而(er)且，用(yong)不同方(fang)法(fa)(fa)(fa)的(de)(de)提取(qu)液做抑菌試驗，發(fa)現，本(ben)發(fa)明(ming)方(fang)法(fa)(fa)(fa)制備(bei)的(de)(de)大(da)(da)(da)蒜(suan)(suan)素(su)提取(qu)液抑菌效(xiao)果最好。

使(shi)用時將(jiang)本實施例所得的大蒜素提(ti)取母(mu)液按體積比加(jia)入去離子水，獲得濃度為100mg/mL、50mg/mL、25mg/mL、10mg/mL的大蒜素提(ti)取液，備用。

然(ran)后(hou)稱(cheng)取馬鈴薯(shu)葡(pu)萄糖(tang)瓊脂(zhi)46.0g，加入1000mL蒸(zheng)餾水中，121℃高壓滅(mie)菌(jun)(jun)20min，培(pei)(pei)養(yang)基冷至45℃左右加入濃度(du)為100mg/mL、50mg/mL、25mg/mL、10mg/mL的(de)大蒜素提取液中，制(zhi)得含(han)有不(bu)同濃度(du)的(de)大蒜素提取液培(pei)(pei)養(yang)皿，然(ran)后(hou)放上直徑為8mm的(de)供試病原真菌(jun)(jun)尖(jian)孢鐮刀菌(jun)(jun)菌(jun)(jun)種，以不(bu)加大蒜提取液的(de)為對(dui)照，倒(dao)扣培(pei)(pei)養(yang)皿，封口膜密封，置于28℃恒(heng)溫培(pei)(pei)養(yang)箱(xiang)中黑暗(an)培(pei)(pei)養(yang)，10天(tian)后(hou)測量菌(jun)(jun)落(luo)擴展直徑，稱(cheng)取菌(jun)(jun)絲(si)鮮重，并計(ji)算提取物對(dui)菌(jun)(jun)絲(si)生長的(de)抑制(zhi)率，結(jie)果見(jian)表(biao)1：

表1 大蒜(suan)提(ti)取液對菌絲生(sheng)物量(liang)影響

抑(yi)菌率(％)＝(對(dui)照皿菌落直(zhi)徑(jing)(jing)一處(chu)理(li)皿菌落直(zhi)徑(jing)(jing))/對(dui)照皿菌落直(zhi)徑(jing)(jing)×100％結(jie)果發(fa)現，培(pei)養10天后測(ce)量菌落直(zhi)徑(jing)(jing)和(he)鮮重，可以看出，大(da)蒜(suan)素提(ti)取(qu)液能明顯抑(yi)制(zhi)(zhi)尖孢鐮(lian)刀(dao)菌菌落生(sheng)長，當大(da)蒜(suan)提(ti)取(qu)液使用濃度(du)為(wei)100mg/mL時，抑(yi)制(zhi)(zhi)率達(da)到了100％。這(zhe)個抑(yi)菌試驗證明本發(fa)明方法制(zhi)(zhi)得的(de)大(da)蒜(suan)素提(ti)取(qu)液具有抑(yi)制(zhi)(zhi)引起蘋果連作障(zhang)礙病原(yuan)菌的(de)功效。

實施例2

大(da)(da)蒜去皮清洗(xi)，切成0.2cm的(de)碎丁，室(shi)溫(wen)下(xia)放置10min進(jin)行酶解(jie)，酶解(jie)好的(de)大(da)(da)蒜放入快速溶劑萃(cui)取(qu)(qu)儀ASE中，分(fen)別(bie)用無(wu)水(shui)(shui)(shui)乙(yi)醇、甲(jia)醇和水(shui)(shui)(shui)作(zuo)為(wei)萃(cui)取(qu)(qu)劑，在壓力為(wei)10.1Mpa，萃(cui)取(qu)(qu)溫(wen)度(du)為(wei)50℃，靜態萃(cui)取(qu)(qu)時間(jian)為(wei)5min，循環萃(cui)取(qu)(qu)3次，沖(chong)洗(xi)體積為(wei)65％，吹掃時間(jian)為(wei)180s的(de)條件下(xia)進(jin)行萃(cui)取(qu)(qu)。由圖3可(ke)以(yi)看(kan)出，無(wu)水(shui)(shui)(shui)乙(yi)醇對大(da)(da)蒜素的(de)提(ti)取(qu)(qu)效(xiao)率(lv)顯(xian)著高于甲(jia)醇和水(shui)(shui)(shui)，分(fen)別(bie)是甲(jia)醇、水(shui)(shui)(shui)提(ti)取(qu)(qu)效(xiao)率(lv)的(de)1.9倍和6.4倍。因(yin)此，本(ben)發明方法(fa)選無(wu)水(shui)(shui)(shui)乙(yi)醇作(zuo)為(wei)溶劑。

使用時將本實施例所得的大蒜(suan)素(su)提取(qu)母液按(an)體積比加入去離子水，獲得濃(nong)度(du)為50mg/mL、25mg/mL、10mg/mL的大蒜(suan)素(su)提取(qu)液，備(bei)用。

2015年12月1日，將經過層積、催芽的(de)(de)(de)蘋果(guo)砧木—平(ping)邑(yi)甜茶(cha)種(zhong)子播種(zhong)于育苗(miao)盤育苗(miao)，至幼(you)苗(miao)長(chang)至第2片真(zhen)葉時，取(qu)(qu)長(chang)勢基本(ben)一致的(de)(de)(de)幼(you)苗(miao)移栽，進(jin)行(xing)溫室試驗。試驗設4個處(chu)(chu)理(li)(li)，每處(chu)(chu)理(li)(li)10盆(pen)，每盆(pen)內裝連作(zuo)土(tu)(tu)壤(rang)(rang)1kg，并定植2株幼(you)苗(miao)。盆(pen)中(zhong)連作(zuo)土(tu)(tu)壤(rang)(rang)分(fen)別作(zuo)如(ru)下處(chu)(chu)理(li)(li)：以未處(chu)(chu)理(li)(li)的(de)(de)(de)連作(zuo)土(tu)(tu)為對照(zhao)(CK)；10mg/L的(de)(de)(de)大(da)蒜(suan)提(ti)(ti)取(qu)(qu)液處(chu)(chu)理(li)(li)的(de)(de)(de)土(tu)(tu)壤(rang)(rang)(T1)；25mg/L的(de)(de)(de)大(da)蒜(suan)提(ti)(ti)取(qu)(qu)液處(chu)(chu)理(li)(li)的(de)(de)(de)土(tu)(tu)壤(rang)(rang)(T2)；50mg/L的(de)(de)(de)大(da)蒜(suan)提(ti)(ti)取(qu)(qu)液處(chu)(chu)理(li)(li)的(de)(de)(de)土(tu)(tu)壤(rang)(rang)(T3)。移栽幼(you)苗(miao)前1周，每1kg連作(zuo)土(tu)(tu)壤(rang)(rang)，澆灌50mL不同(tong)濃度的(de)(de)(de)大(da)蒜(suan)提(ti)(ti)取(qu)(qu)液，連作(zuo)土(tu)(tu)壤(rang)(rang)對照(zhao)用50mL去離子水(shui)替(ti)代(dai)。生(sheng)長(chang)30天，再次各處(chu)(chu)理(li)(li)澆灌50mL不同(tong)濃度的(de)(de)(de)大(da)蒜(suan)素(su)提(ti)(ti)取(qu)(qu)液，連作(zuo)土(tu)(tu)壤(rang)(rang)對照(zhao)用50mL去離子水(shui)替(ti)代(dai)。生(sheng)長(chang)60天后，對盆(pen)栽平(ping)邑(yi)甜茶(cha)幼(you)苗(miao)生(sheng)物量及土(tu)(tu)壤(rang)(rang)中(zhong)尖(jian)孢鐮刀菌(jun)數(shu)量進(jin)行(xing)了測(ce)定，結果(guo)如(ru)表2。

表2 大蒜提取液對蘋果幼苗(miao)生長及土壤中尖(jian)孢鐮刀菌數量的影響

從表(biao)2可以看(kan)出，連作(zuo)土壤(rang)中添(tian)加(jia)25mg/mL的(de)(de)大(da)蒜提(ti)取液(ye)(ye)(ye)，則蘋(pin)果(guo)幼(you)苗(miao)的(de)(de)株高和鮮重(zhong)分別提(ti)高47％和48％，土壤(rang)中的(de)(de)有害真菌，尖孢鐮刀菌的(de)(de)數量則降低(di)了65％，施加(jia)高濃度的(de)(de)大(da)蒜素提(ti)取液(ye)(ye)(ye)雖然對(dui)土壤(rang)中的(de)(de)病原(yuan)菌滅殺效果(guo)好，但是(shi)對(dui)蘋(pin)果(guo)幼(you)苗(miao)的(de)(de)生(sheng)長也有抑制作(zuo)用(yong)，綜(zong)合來看(kan)，連作(zuo)土壤(rang)中添(tian)加(jia)25mg/mL的(de)(de)大(da)蒜素提(ti)取液(ye)(ye)(ye)，效果(guo)最佳。

實施例3

大蒜(suan)去皮清洗，切成0.2cm的碎丁，室溫(wen)(wen)下(xia)放(fang)置10min進(jin)行(xing)酶解，使蒜(suan)氨酸向大蒜(suan)素轉化。將切碎酶解好的大蒜(suan)放(fang)入快速(su)溶劑萃(cui)(cui)取(qu)(qu)(qu)(qu)儀(ASE)中，萃(cui)(cui)取(qu)(qu)(qu)(qu)溫(wen)(wen)度(du)(du)分(fen)別為(wei)30、40、50、60、70、80℃，用無水乙醇作為(wei)萃(cui)(cui)取(qu)(qu)(qu)(qu)劑，在壓力為(wei)10.1Mpa，靜態萃(cui)(cui)取(qu)(qu)(qu)(qu)時(shi)間為(wei)5min，循環萃(cui)(cui)取(qu)(qu)(qu)(qu)3次(ci)，沖(chong)洗體積(ji)為(wei)65％，吹掃時(shi)間為(wei)180s的條件下(xia)進(jin)行(xing)萃(cui)(cui)取(qu)(qu)(qu)(qu)，每個溫(wen)(wen)度(du)(du)平行(xing)提取(qu)(qu)(qu)(qu)測定3次(ci)。由圖4可(ke)以看(kan)出，萃(cui)(cui)取(qu)(qu)(qu)(qu)溫(wen)(wen)度(du)(du)為(wei)50℃時(shi)候，大蒜(suan)素的提取(qu)(qu)(qu)(qu)效率(lv)最(zui)高。而且，用不同溫(wen)(wen)度(du)(du)下(xia)的提取(qu)(qu)(qu)(qu)液(ye)做抑菌試驗，發現萃(cui)(cui)取(qu)(qu)(qu)(qu)溫(wen)(wen)度(du)(du)50℃所得大蒜(suan)素提取(qu)(qu)(qu)(qu)液(ye)抑菌效果最(zui)好。

使(shi)用時將本實(shi)施例所得的大蒜(suan)素(su)提取(qu)母(mu)液(ye)按體積比加入去離(li)子水，獲(huo)得濃度(du)為(wei)50mg/mL、25mg/mL、10mg/mL的大蒜(suan)素(su)提取(qu)液(ye)，備用。

2016年3月4日，將經過層積、催芽的(de)(de)(de)蘋果(guo)砧木(mu)—平(ping)邑甜(tian)茶(cha)種子(zi)(zi)播(bo)種于(yu)育(yu)苗(miao)(miao)盤育(yu)苗(miao)(miao)，至(zhi)幼(you)苗(miao)(miao)長(chang)至(zhi)第6片真葉(xie)時，取(qu)(qu)長(chang)勢基(ji)本一(yi)致的(de)(de)(de)幼(you)苗(miao)(miao)移栽(zai)，于(yu)山東農(nong)業大學(xue)南校區(qu)蘋果(guo)中心試驗(yan)站進行(xing)盆(pen)栽(zai)試驗(yan)。試驗(yan)設三個處(chu)理(li)(li)(li)(li)，每處(chu)理(li)(li)(li)(li)10盆(pen)，每盆(pen)內裝連(lian)(lian)(lian)作(zuo)土(tu)壤6kg，并(bing)定植(zhi)2株幼(you)苗(miao)(miao)。盆(pen)中連(lian)(lian)(lian)作(zuo)土(tu)壤分(fen)別作(zuo)如下處(chu)理(li)(li)(li)(li)：以未(wei)處(chu)理(li)(li)(li)(li)的(de)(de)(de)連(lian)(lian)(lian)作(zuo)土(tu)為對(dui)照(zhao)(zhao)(CK)；10mg/L的(de)(de)(de)大蒜(suan)提(ti)(ti)取(qu)(qu)液處(chu)理(li)(li)(li)(li)的(de)(de)(de)土(tu)壤(T1)；25mg/L的(de)(de)(de)大蒜(suan)提(ti)(ti)取(qu)(qu)液處(chu)理(li)(li)(li)(li)的(de)(de)(de)土(tu)壤(T2)；50mg/L的(de)(de)(de)大蒜(suan)提(ti)(ti)取(qu)(qu)液處(chu)理(li)(li)(li)(li)的(de)(de)(de)土(tu)壤(T3)。移栽(zai)幼(you)苗(miao)(miao)前一(yi)周，每1kg連(lian)(lian)(lian)作(zuo)土(tu)壤，澆(jiao)灌(guan)50mL不同(tong)濃(nong)度的(de)(de)(de)大蒜(suan)提(ti)(ti)取(qu)(qu)液，連(lian)(lian)(lian)作(zuo)土(tu)壤對(dui)照(zhao)(zhao)用50mL去離子(zi)(zi)水替代；生(sheng)長(chang)一(yi)個月后(hou)，再次不同(tong)處(chu)理(li)(li)(li)(li)再次澆(jiao)灌(guan)50mL處(chu)理(li)(li)(li)(li)液。正常(chang)水肥管理(li)(li)(li)(li)，生(sheng)長(chang)120天后(hou)，對(dui)盆(pen)栽(zai)平(ping)邑甜(tian)茶(cha)幼(you)苗(miao)(miao)生(sheng)物量及土(tu)壤中尖孢鐮(lian)刀(dao)菌數量進行(xing)了測定，結果(guo)如表3。

表3 大蒜提取液對(dui)蘋果幼苗生(sheng)長及土壤中尖孢鐮刀菌數量的影響

從表3可以看(kan)出(chu)，連作土壤(rang)中添加(jia)25mg/mL的(de)大蒜(suan)素(su)(su)提取(qu)(qu)液，則(ze)蘋果幼苗的(de)株高和鮮(xian)重分別(bie)提高51％和108％，而(er)土壤(rang)中的(de)有(you)害真菌(jun)，尖孢鐮刀菌(jun)的(de)數量則(ze)降低了42％。施加(jia)高濃度(du)50mg/mL的(de)大蒜(suan)素(su)(su)提取(qu)(qu)液雖然對土壤(rang)中的(de)病(bing)原菌(jun)滅殺效果好，但是對蘋果幼苗的(de)生(sheng)長也有(you)抑制作用(yong)，綜合來(lai)看(kan)，連作土壤(rang)中添加(jia)25mg/mL的(de)大蒜(suan)素(su)(su)提取(qu)(qu)液，效果最佳。

實施例4

大蒜去皮清洗(xi)，切成0.2cm的(de)碎丁，室溫下(xia)(xia)放置10min進行酶解(jie)，使蒜氨酸向大蒜素(su)轉化。將切碎酶解(jie)好(hao)的(de)大蒜放入快(kuai)速溶劑(ji)萃(cui)取(qu)儀(ASE)中，萃(cui)取(qu)溫度分別(bie)為(wei)30、40、50、60、70、80℃，用(yong)無水乙醇作為(wei)萃(cui)取(qu)劑(ji)，在壓力(li)為(wei)10.1Mpa，靜態萃(cui)取(qu)時(shi)(shi)間(jian)從1min到15min，循環萃(cui)取(qu)3次，沖洗(xi)體積(ji)為(wei)65％，吹掃時(shi)(shi)間(jian)為(wei)180s的(de)條(tiao)件下(xia)(xia)進行萃(cui)取(qu)，每個時(shi)(shi)間(jian)平行提取(qu)測定(ding)3次。由圖(tu)5可(ke)以看出，時(shi)(shi)間(jian)為(wei)5min時(shi)(shi)候，大蒜素(su)的(de)提取(qu)效率最高。而且，用(yong)不同(tong)時(shi)(shi)間(jian)的(de)提取(qu)液做抑菌試(shi)驗(yan)，發現，本發明方法(fa)選定(ding)的(de)時(shi)(shi)間(jian)5min所得大蒜素(su)提取(qu)液抑菌效果最好(hao)。

使用(yong)時將本實施例所得的大(da)蒜(suan)(suan)素(su)提(ti)取(qu)母液(ye)(ye)按體積比加(jia)入(ru)去離子水，獲得濃度為25mg/mL的大(da)蒜(suan)(suan)素(su)提(ti)取(qu)液(ye)(ye)，備(bei)用(yong)。

山東省(sheng)蒙陰南麻村(cun)兩畝(mu)老(lao)齡蘋果(guo)(guo)連(lian)(lian)作(zuo)(zuo)連(lian)(lian)作(zuo)(zuo)建園(yuan)時(shi)，先去掉(diao)老(lao)齡樹(shu)，每畝(mu)撒施7500-8500kg充分(fen)發(fa)酵(jiao)的(de)(de)(de)農家肥、深(shen)翻果(guo)(guo)園(yuan)，深(shen)度(du)為(wei)40cm，撿出殘根。試驗設為(wei)2個(ge)處(chu)(chu)理(li)(li)，一(yi)畝(mu)地(di)土(tu)壤(rang)(rang)(rang)使(shi)用(yong)本發(fa)明方(fang)法獲得的(de)(de)(de)大(da)(da)蒜素(su)提取液處(chu)(chu)理(li)(li)(T)；一(yi)畝(mu)地(di)不做處(chu)(chu)理(li)(li)按常(chang)規種植蘋果(guo)(guo)幼(you)苗作(zuo)(zuo)為(wei)對照(CK)；處(chu)(chu)理(li)(li)(T)操作(zuo)(zuo)如下(xia)：春季(ji)栽植蘋果(guo)(guo)幼(you)苗時(shi)，挖出的(de)(de)(de)每個(ge)定(ding)植穴(xue)(xue)連(lian)(lian)作(zuo)(zuo)土(tu)壤(rang)(rang)(rang)正(zheng)常(chang)回填，幼(you)樹(shu)定(ding)植前2周，在(zai)定(ding)植穴(xue)(xue)內澆灌穴(xue)(xue)內土(tu)壤(rang)(rang)(rang)體(ti)(ti)積1/16、濃度(du)為(wei)25mg/mL的(de)(de)(de)大(da)(da)蒜素(su)提取液。幼(you)樹(shu)生(sheng)(sheng)長(chang)(chang)初期(qi)(qi)，6月上旬，第(di)二次施加(jia)(jia)濃度(du)為(wei)25mg/mL的(de)(de)(de)大(da)(da)蒜素(su)提取液，施加(jia)(jia)量為(wei)定(ding)植穴(xue)(xue)內土(tu)壤(rang)(rang)(rang)體(ti)(ti)積的(de)(de)(de)1/32；幼(you)樹(shu)生(sheng)(sheng)長(chang)(chang)中期(qi)(qi)，7月下(xia)旬，第(di)三次施加(jia)(jia)濃度(du)為(wei)25mg/mL的(de)(de)(de)大(da)(da)蒜素(su)提取液，施加(jia)(jia)量為(wei)定(ding)植穴(xue)(xue)內土(tu)壤(rang)(rang)(rang)體(ti)(ti)積的(de)(de)(de)1/32；幼(you)樹(shu)生(sheng)(sheng)長(chang)(chang)期(qi)(qi)間，正(zheng)常(chang)水(shui)肥管理(li)(li)。結果(guo)(guo)發(fa)現，用(yong)本發(fa)明方(fang)法處(chu)(chu)理(li)(li)土(tu)壤(rang)(rang)(rang)后，幼(you)樹(shu)生(sheng)(sheng)長(chang)(chang)量比不作(zuo)(zuo)處(chu)(chu)理(li)(li)的(de)(de)(de)連(lian)(lian)作(zuo)(zuo)土(tu)壤(rang)(rang)(rang)(對照)中幼(you)樹(shu)增加(jia)(jia)67％。