一種流感病毒亞單位疫苗保護劑及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種流感病毒亞單位疫苗保護劑及其應用。
【背景技術】
[0002] 流感是由流感病毒引起的，可造成大規模流行的人、禽畜共患的急性呼吸道傳播 疾病。流感病毒具有高度傳染性，通過飛沫經空氣傳播。經短暫潛伏期后，急起高熱寒戰， 1~2日內體溫可高達40°C，伴隨全身乏力、頭痛、肌痛、咽痛等癥狀，可引發肺炎、支氣管 炎、心肌炎、心包炎等并發癥，造成老年人、體弱者等高危人群的大量死亡，給社會帶來巨大 的損失。流行性感冒病毒分甲、乙、丙三型。其中，甲型致病力最強，可感染動物和人類并引 起流行甚至是世界范圍內的大流行；乙型致病力稍弱，可引起局部流行。流感病毒經常發生 抗原漂移和抗原轉移，逃避機體免疫系統的防御，這也是造成大流行的原因。最大規模的流 感大流行發生于1918~1919年，造成2100~4000萬人死亡（其中美國就有50萬人，僅 1918年10月就有19. 6萬人死亡），超過第一次世界大戰的戰爭死亡人數。因此，流感的預 防一直受到世界各國的高度重視。臨床上對流感仍缺乏有效的治療藥物，接種流感疫苗是 唯一有效預防手段。
[0003] 疫苗的應用使流感病毒傳染得到了有效的控制，有效地降低了了這些傳染病的發 病率和死亡率。但是，在疫苗的生產及流通領域中發現，疫苗的儲存、運輸和臨床使用過程 中，存在諸如穩定性差、有效期短等問題。隨著疫苗的廣泛應用和對不良反應誘因的深入研 究，發現很多問題與疫苗的保護劑和佐劑直接相關，尤其是疫苗產品中的保護劑。
[0004] 目前，人血清白蛋白在疫苗領域被廣泛應用于細胞培養和病毒保護劑。常見的人 血清白蛋白大多是從人的血漿中提取，這樣的生產方式不僅受到血漿供應的限制，而且還 可能含有危險的傳染病病原體，如肝炎病毒、HIV病毒等，這使得人們對于使用血漿中提取 的人血清白蛋白存在巨大的擔憂。隨著現代DNA重組和合成技術的發展，人們開始利用DNA 重組技術生產人血清白蛋白替代傳統的生產方式。國際上以重組人血清白蛋白替代血源性 產品的應用已成為趨勢，目前國內已有企業利用水稻胚乳表達技術，研發出重組人清血白 蛋白產品，并成功實現重組人血清白蛋白規模化和產業化，完全擺脫了相關制約，具有純度 更高、無動物組分、安全、高效、綠色環保、廉價、無限量供應等優勢。

【發明內容】

[0005] 針對上述存在的問題，本發明的目的在于，提供了一種流感病毒亞單位疫苗保護 劑及其應用，所收保護劑用于保護流感病毒亞單位疫苗，提高疫苗的穩定性，且簡單、安全。
[0006] 本發明的目的是通過以下技術方案實現的：
[0007] -種流感病毒亞單位疫苗保護劑，所述保護劑的組分包括蔗糖、精氨酸、谷氨酸鈉 和人血白蛋白。
[0008] 進一步的，所述人血白蛋白為基因重組人血白蛋白。
[0009] 進一步的，所述各組分的重量分數比為：
[0010]
[0011] 優選的，所述各組分的重量分數比為：
[0012]
[0013] 進一步的，所述精氨酸的終濃度為15g/L。
[0014]進一步的，所述保護劑適用于流感亞單位疫苗甲1型（H1N1)、甲3型（H3N2)和乙型 (B)單價病毒原液或者由這三種單價病毒原液組成的三價流感的病毒疫苗。
[0015] 本發明的另一目的是通過以下技術方案實現的：
[0016] -種流感病毒亞單位疫苗保護劑的應用，所述保護劑能夠應用于提高各類疫苗的 穩定性。
[0017] 本發明相比現有技術的有益效果是：
[0018] 1、本發明提供的流感病毒亞單位疫苗保護劑的組分簡單，配比合理，使用了基因 重組人血白蛋白，避免了血液制品的含病原體的風險，有效的提高了流感亞單位疫苗的穩 定性；
[0019] 2、本發明提供的流感病毒亞單位疫苗保護劑的應用，不局限于流感亞單位疫苗， 還可適用于其他流感疫苗或者其他正粘病毒科病毒類疫苗。
[0020] 下面結合實施例，對本發明作進一步說明。
【附圖說明】
[0021] 圖1為不同實施例中保護劑組血凝素含量變化；
[0022] 圖2為不同實施例中對照組血凝素含量變化；
[0023] 圖3為半成品原液中保護劑組血凝素含量變化；
[0024] 圖4為半成品原液中對照組血凝素含量變化。
【具體實施方式】
[0025] 實施例1
[0026] -種流感病毒亞單位疫苗保護劑，所述保護劑的組分包括蔗糖、精氨酸、谷氨酸鈉 和人血白蛋白。
[0027] 進一步的，所述人血白蛋白為基因重組人血白蛋白。
[0028] 進一步的，所述各組分的重量分數比為：
[0029]
[0030] 優選的，所述各組分的重量分數比為：
[0031]
[0032] 進一步的，所述精氨酸的終濃度為15g/L。
[0033] 進一步的，所述保護劑適用于流感亞單位疫苗甲1型（H1N1)、甲3型（H3N2)和乙型 (B)單價病毒原液或者由這三種單價病毒原液組成的三價流感的病毒疫苗。
[0034] 所述流感病毒亞單位疫苗保護劑的應用，所述保護劑能夠應用于提高各類疫苗的 穩定性。
[0035] 實施例2
[0036] 本實施例是在實施例1基礎上的優選方案。
[0037] 本實施例所用的疫苗為天士力金納生物技術（天津）有限公司生產的流感亞單位 疫苗甲1型（H1N1)單價病毒原液，按照以下終濃度加入保護劑：蔗糖65g/L、精氨酸15g/L、 谷氨酸鈉〇. 8g/L、基因重組人血白蛋白12g/L。同時以常規稀釋液（0. 01mol/LPB緩沖液） 稀釋單價原液至相同血凝素濃度作為陰性對照。放置2~8°C18個月，每間隔3個月取樣 以單向免疫擴散法測定血凝素含量。
[0038] 實施例3
[0039] 本實施例是在實施例1基礎上的優選方案。
[0040] 本實施例所用的疫苗為天士力金納生物技術（天津）有限公司生產的流感亞單位 疫苗甲3型（H3N2)單價病毒原液，按照以下終濃度加入保護劑：蔗糖65g/L、精氨酸14g/L、 谷氨酸鈉〇. 6g/L、基因重組人血白蛋白13g/L。同時以常規稀釋液液（0. 01mol/LPB緩沖 液）稀釋單價原液至相同血凝素濃度作為陰性對照。放置2~8°C18個月，每間隔3個月 取樣以單向免疫擴散法測定血凝素含量。
[0041] 實施例4
[0042] 本實施例是在實施例1基礎上的優選方案。
[0043] 本實施例所用的疫苗為天士力金納生物技術（天津）有限公司生產的流感亞單位 疫苗乙型（B)單價病毒原液，按照以下終濃度加入保護劑：蔗糖68g/L、精氨酸15g/L、谷氨 酸鈉〇. 7g/L、基因重組人血白蛋白13g/L。同時以常規稀釋液液（0.01m〇l/LPB緩沖液） 稀釋單價原液至相同血凝素濃度作為陰性對照。放置2~8°C18個月，每間隔3個月取樣 以單向免疫擴散法測定血凝素含量。
[0044] 實施例5
[0045] 本實施例是在實施例1基礎上的優選方案。
[0046] 本實施例所用的疫苗為天士力金納生物技術（天津）有限公司生產的流感亞單位 疫苗（浮洛克）半成品原液按照以下終濃度加入保護劑：蔗糖66g/L、精氨酸15g/L、谷氨酸 鈉〇.8g/L、基因重組人血白蛋白12g/L。同時以常規稀釋液液（0.01m〇l/LPB緩沖液）稀 釋半成品原液至相同血凝素濃度作為陰性對照。放置2~8°C18個月，每間隔3個月取樣 以單向免疫擴散法測定血凝素含量。
[0047] 上述實施例僅為本發明較好的實施方式，由于生產用毒株每年都有所改變，本發 明不能一一列舉出全部的實施方式，凡采用上述實施例類似的技術方案，或根據上述實施 例所做的等同變化，均在本發明保護范圍內。
[0048] 為檢測本發明所述保護劑的性能，通過單向免疫擴散法測定血凝素含量，具體步 驟如下：
[0049] 將抗原參考品稀釋至控制濃度，然后以9 : 1的比例分別將抗原參考品和樣品裂 解劑混勻，室溫靜置30分鐘。抗原參考品再進行100%、75%、50%、25%稀釋，樣品稀釋至 抗原參考品范圍內，取對應型別的抗體加入1%瓊脂中制板，打孔，置濕盒20~25°C孵育 18~24小時。用PBS浸泡1小時后，干燥、染色、脫色。準確測量抗原參考品和供試品形成 的沉淀環的直徑，以抗原參考品形成的沉淀環的直徑對其相應抗原濃度作直線回歸，求得 直線回歸方程，代入供試品的沉淀環直徑，即可得到供試品的血凝素含量。
[0050] 試驗結果見以下各表：
[0051] 表1不同實施例及對照品血凝素含量檢查結果
[0052]
[0053] 由上述圖表中的數據可以看出，由于添加了本發明公開的保護劑，有效的提高了 流感病毒亞單位疫苗單價原液和半成品原液的穩定性。
[0054] 根據上述說明，本發明所屬領域的專業技術人員還可以對上述實施方式進行變更 和修改。因此，本發明并不局限于上面揭示和描述的【具體實施方式】，對本發明的一些修改和 變更也應當落入本發明的權利要求的保護范圍內。此外，盡管本說明書中使用了一些特定 的術語，但這些術語只是為了方便說明，并不對本發明構成任何限制，采用與其相似單一或 多種組分組合而得到的流感病毒亞單位疫苗保護劑均在本發明保護范圍內。
【主權項】
1. 一種流感病毒亞單位疫苗保護劑，其特征在于，所述保護劑的組分包括薦糖、精氨 酸、谷氨酸鋼和人血白蛋白。2. 根據權利要求1所述的流感病毒亞單位疫苗保護劑，其特征在于，所述人血白蛋白 為基因重組人血白蛋白。3. 根據權利要求1或2所述的流感病毒亞單位疫苗保護劑，其特征在于，所述各組分的 重量分數比為： 庶糖 60~80 精氨酸 10~20 谷氨酸鋼 0.5~1 基因重姐人血白蛋白 5~20。4. 根據權利要求3所述的流感病毒亞單位疫苗保護劑，其特征在于，所述各組分的重 量分數比為： 庶糖 65~70 精氨酸 12~18 谷氨酸鋼 0.5~1 基因重組人血白蛋白 15~20。5. 根據權利要求1或2所述的流感病毒亞單位疫苗保護劑，其特征在于，所述精氨酸的 終濃度為15g/L。6. 根據權利要求1或2所述的流感病毒亞單位疫苗保護劑，其特征在于，所述保護劑適 用于流感亞單位疫苗甲1型化iNi)、甲3型化Ns)和乙型做單價病毒原液或者由運^種 單價病毒原液組成的立價流感的病毒疫苗。7. -種如權利要求1-6所述的流感病毒亞單位疫苗保護劑的應用，其特征在于，所述 保護劑能夠應用于提高各類疫苗的穩定性。
【專利摘要】本發明公開了一種流感病毒亞單位疫苗保護劑及其應用。所述保護劑的各組分包括蔗糖、精氨酸、谷氨酸鈉和基因重組人血白蛋白；另外，本發明還公開了所述保護劑的組分配比和用途，本發明提供的流感病毒亞單位疫苗保護劑的組分簡單，配比合理，極大地提高了疫苗的安全性和穩定性。本發明的保護劑能有效提高流感病毒亞單位疫苗的穩定性，但不局限于當前的三價流感病毒亞單位疫苗，更可適用于將來的四價流感病毒亞單位疫苗和四價流感病毒裂解疫苗。
【IPC分類】A61K39/145, A61K47/42, A61K39/295, A61P31/16
【公開號】CN105194680
【申請號】CN201510583080
【發明人】孫衛華, 阮承邁, 孟東方, 關瑜
【申請人】天士力金納生物技術（天津）有限公司
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2015年9月15日