不含抑菌劑的重組人堿性成纖維細胞生長因子凝膠劑及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于制藥領域，具體涉及不含抑菌劑的重組人堿性成纖維細胞生長因子凝 膠劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 堿性成纖維細胞生長因子（bFGF)是一種與組織創傷的愈合過程密切相關的內源 性活性因子，對組織創傷愈合、神經損傷修復及血管再生有顯著的促進作用。bFGF是由146 個氨基酸組成的單鏈多肽，分子量為17KD。臨床應用表明，rh-bFGF對人體燒傷、創傷、手術 傷等具有顯著的促進愈合作用，且無局部及全身毒副作用。bFGF不僅可以加速創傷愈合，而 且可以減少疤痕的形成，在促進燒傷、創傷和褥瘡等組織損傷的再生和修復方面展示了非 凡和獨到的功效。
[0003] 目前已上市的重組人堿性成纖維細胞生長因子凝膠劑主要為外用凝膠且不可應 用于眼部。其制劑多為多計量包裝，多次重復使用。制劑開封后，很容易在使用和保存過程 中受到微生物污染，進而產生各種安全隱患。為了防止微生物二次污染問題，多劑量制劑中 都添加了各種抑菌劑（preservtive)。抑菌劑雖然在防止微生物污染方面有積極意義，但其 也會導致很多不良反應。據報道抑菌劑的存在對眼部的表面細胞會產生刺激性。滴眼液中 抑菌劑可直接影響淚液的成分，改變眼球表面的微環境，使原本緊密連接的上皮細胞結構 損害，嚴重者出現角膜上皮脫落、缺損、上皮糜爛，進而發生角膜潰瘍，甚至角膜溶解、穿孔、 失明等。近年來，由抑菌劑濫用引發的問題越來越受到關注。此外，對于用于治療創傷、手 術傷、燒傷、燙傷及潰爛等創面損傷等直接與傷口接觸的眼用制劑，抑菌劑對創面的損害也 不可忽略。

【發明內容】

[0004] 本發明所要解決的技術問題在于提供一種不含抑菌劑的不含抑菌劑的重組人堿 性成纖維細胞生長因子凝膠劑。
[0005] 本發明提供一種不含抑菌劑的重組人堿性成纖維細胞生長因子凝膠劑，其特征 在于，包括以下組分：重組人堿性成纖維細胞生長因子IX IO6~9X10 6IU、蛋白穩定劑 0· 01~5. 0g、增稠劑0· 1~20. 0g、pH調節劑0· 1~10. 0g、緩沖劑0· 1~10. 0g、保濕劑 0. 1~50. 0g，加注射用水定容至1000ml。
[0006] 進一步地，所述pH調節劑為三乙醇胺、氫氧化鈉、碳酸氫鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫 二鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硼酸、硼砂、醋酸、醋酸鈉、檸檬酸、檸檬酸鈉、酒石酸、酒石 酸鈉、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸中 的一種或者多種混合。
[0007] PH調節劑的作用是調節滴眼液的酸堿度，使之與淚液的酸堿度相等或相近，以減 少滴眼液的刺激性，并使藥物穩定，提高藥效。
[0008] 進一步地，所述增稠劑為糊精及衍生物、海藻酸鈉及其衍生物、聚乙烯吡咯烷酮、 聚乙烯醇、羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素、阿拉伯膠、西黃 耆膠、瓜爾豆膠、卡波普、植物凝集素、透明質酸、黃原膠、殼聚糖、泰洛沙泊中的一種或多種 混合。
[0009] 進一步地，所述保濕劑為甘油、丙二醇一種或多種混合。
[0010] 保濕劑的作用在于提高凝膠劑的潤滑作用。
[0011] 進一步地，所述蛋白穩定劑為甘露醇、十二烷基硫酸鈉、苷氨酸、吐溫、右旋糖苷、 透明質酸、硫酸軟骨素、肝素中的一種或多種混合。
[0012] 蛋白穩定劑的作用是為了增加滴眼液主藥的穩定性，提高藥效。
[0013] 進一步地，所述緩沖劑為枸櫞酸納/枸櫞酸緩沖對、磷酸鹽緩沖對、tris-鹽酸緩 沖對、甘氨酸-三乙胺緩沖對中的一種或多種混合。
[0014] 進一步地，所述不含抑菌劑的重組人堿性成纖維細胞生長因子凝膠劑采用不含抑 菌劑的獨立包裝，所述不含抑菌劑的獨立包裝的容器的容積范圍為0. 1~0. 5ml/支。
[0015] 本發明還提供不含抑菌劑的重組人堿性成纖維細胞生長因子凝膠劑的制備方法， 包括以下步驟：
[0016] Sl :稱取增稠劑0· 1~20. 0g，pH調節劑0· 1~10.0 g溶于適量注射用水中，滅菌 30min ；
[0017] S2 :稱取重組人堿性成纖維細胞生長因子IX IO6~9 X 10 6IU、蛋白穩定劑0.01~ 5. 〇g、緩沖劑0. 1~10. 〇g、及保濕劑0. 1~50g溶于適量注射用水中；
[0018] S3 :將步驟S2所得的藥液經過0. 01~10. 00 μ m微孔濾膜過濾5次后與步驟Sl 所得藥液混合，并用注射用水定容至1000ml，攪拌均勻；
[0019] S4 :灌裝步驟S3所得藥液至不含抑菌劑的包裝容器中，容器的容積范圍為0. 1~ 0· 5ml 支。
[0020] 本發明提供的不含抑菌劑的重組人堿性成纖維細胞生長因子凝膠劑無抑菌劑，用 完即棄，可避免抑菌劑的存在對眼部產生的刺激，以及使用及儲存過程中可能出現的微生 物污染。
【具體實施方式】
[0021] 實施例1
[0022] 本發明實施例提供一種不含抑菌劑的重組人堿性成纖維細胞生長因子凝膠劑，包 括以下組分：重組人堿性成纖維細胞生長因子IX l〇6IU、甘露醇0.0 lg、聚乙烯醇0. lg、氫 氧化鈉0. lg、磷酸鹽緩沖對0. lg、甘油0. lg，加注射用水定容至1000ml。
[0023] 本發明實施例還提供一種不含抑菌劑的重組人堿性成纖維細胞生長因子凝膠劑 的制備方法，包括以下步驟：
[0024] Sl :稱取聚乙烯醇0. lg，氫氧化鈉0.1 g溶于注射用水中，121°C熱壓滅菌30min ;
[0025] 32:稱取重組人堿性成纖維細胞生長因子1\10611甘露醇0.018、磷酸鹽緩沖 0. lg、甘油0.1 g溶于注射用水中；
[0026] S3 :將步驟S2所得的藥液經過0. 01~10. 00 μ m微孔濾膜過濾5次后與步驟Sl 所得藥液混合，并用注射用水定容至1000ml，攪拌均勻；
[0027] S4 :檢測步驟S3所得藥液，合格后，在百級環境下，灌裝藥液至不含抑菌劑的包裝 容器中，容器的容積范圍為〇. 1~〇.5ml/支。
[0028] 實施例2
[0029] 本發明實施例提供一種不含抑菌劑的重組人堿性成纖維細胞生長因子凝膠劑，包 括以下組分：重組人堿性成纖維細胞生長因子9X 106IU、十二烷基硫酸鈉5. 0g、羧甲基纖維 素20. 0g、碳酸鈉10. 0g、枸櫞酸納/枸櫞酸緩沖對10. 0g、丙二醇50g，加注射用水定容至 1000 ml0
[0030] 本實施例提供的不含抑菌劑的重組人堿性成纖維細胞生長因子凝膠劑的制備方 法與實施例1相同。
[0031] 實施例3
[0032] 本發明實施例提供一種不含抑菌劑的重組人堿性成纖維細胞生長因子凝膠劑，包 括以下組分：重組人堿性成纖維細胞生長因子6X 106IU、透明質酸lg、海藻酸鈉3g、磷酸氫 二鈉2. 5g、磷酸鹽緩沖對I. 5g、甘油30g，加注射用水定容至1000ml。
[0033] 本實施例提供的不含抑菌劑的重組人堿性成纖維細胞生長因子凝膠劑的制備方 法與實施例1相同。
[0034] 實施例4
[0035] 本發明實施例提供一種不含抑菌劑的重組人堿性成纖維細胞生長因子凝膠劑，包 括以下組分：重組人堿性成纖維細胞生長因子4X10 6IU、硫酸軟骨素1.5g、羥丙基甲基纖維 素4. 5g、鹽酸I. 5g、磷酸鹽緩沖對4. 5g、甘油15g，加注射用水定容至1000ml。
[0036] 本實施例提供的不含抑菌劑的重組人堿性成纖維細胞生長因子凝膠劑的制備方 法與實施例1相同。
[0037] 實驗一
[0038] 穩定性實驗
[0039] bFGF生物學活性使用中國藥典2010版第三部附錄XG中記載的方法，采用BalB/c 3T3細胞，MTT法進行測定。穩定性實驗結果顯示，本品在室溫下約可存放3個月無明顯活 性喪失，可滿足正常使用要求。在4~8°C儲存條件下，放置兩年后仍保持原有活性。處活 性外，在穩定性試驗過程中，制劑外觀、PH值、黏度、無菌、活性各項試驗均未發現明顯變化。 綜上所述，在4~8°C存儲條件下，本發明制劑具有良好的穩定性。
[0040] 實驗二
[0041] 皮膚過敏實驗
[0042] 采用實施例3制得的不含抑菌劑的重組人堿性成纖維細胞生長因子凝膠劑，分別 以每克含20^、40^、80^、100^(相當于人臨床用量的1倍、2倍、4倍、5倍）涂于豚 鼠正常及破損皮膚受試區，面積均為2cm 2，結果表明，一次用藥和多次用藥，對照組與給藥 組比較觀察，皮膚刺激反應強度均< 0. 5分，說明不含抑菌劑的重組人堿性成纖維細胞生 長因子凝膠劑一次用藥和多次用藥對豚鼠完整和破損皮膚均無刺激性。
[0043] 實驗三
[0044] 體外釋放試驗
[0045] 參照DiBase MD等的方法進行，體外釋放符合零級動力學模式。
[0046] 本發明臨床應用情況如下：
[0047] 臨床應用本實施例3制得的不含抑菌劑的重組人堿性成纖維細胞生長因子凝膠