重組牛堿性成纖維細胞生長因子滴眼液的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物制品領域。特別是涉及一種重組牛堿性成纖維細胞生長因子滴眼 液及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 堿性成纖維細胞生長因子（bFGF)屬于FGF家族（23個已知成員），是一種肝素 結合生長因子，能夠促進包括間葉細胞、神經外胚層和血管內皮細胞在內的一系列細胞的 增殖。堿性成纖維細胞生長因子在體內還具有潛在的促血管生成活性。bFGF主要分布于 中胚層和神經胚層來源的組織器官，對許多組織細胞有作用，可促進細胞分裂，調節細胞代 謝，影響細胞的形態、浸潤、分化和衰老，對角膜的上皮細胞基質細胞核內皮細胞均可產生 影響，對堿燒傷角膜上皮的再生、角膜基質層和內皮層的修復均有促進作用。
[0003] 重組牛喊性成纖維細胞生長因子（Recombinant bovine basic fibroblast growth factor，簡寫為rb-bFGF)是由含有高效表達牛堿性成纖維細胞生長因子基因的大 腸桿菌，經發酵、分離和高度純化后得到的活性因子。rb-bFGF可治療各種原因引起的角膜 上皮缺損和點狀角膜病變、復發性淺層點狀角膜病變、輕中度干眼癥、大泡性角膜炎、角膜 擦傷、輕中度化學燒傷、角膜手術及術后愈合不良、地圖狀(或營養性）單皰性角膜潰瘍等。
[0004] 中國專利申請20公開了一種重組牛堿性成纖維細胞生長因子滴眼 液，其包含重組牛堿性成纖維細胞生長因子、蛋白保護劑、增稠劑、滲透壓調節劑和磷酸緩 沖液，滴眼液的PH為7. 0。該滴眼液雖然沒有添加抑菌劑，但滴眼液的穩定性有待進一步提 商。
[0005] 因此，仍然有需要開發一種新的重組牛堿性成纖維細胞生長因子滴眼液，其輔料 配伍合理、用量少，并且不含防腐劑，刺激性小且穩定性好。

【發明內容】

[0006] 本發明的目的是提供一種刺激性小且穩定性好的重組牛堿性成纖維細胞生長因 子滴眼液及其制備方法。
[0007] 本發明的目的通過以下的實施方式來實現： 一種重組牛堿性成纖維細胞生長因子滴眼液，所述滴眼液的組分及其用量為： 重組牛堿性成纖維細胞生長因子1500~2500 IU; 人血白蛋白〇. 04~0. 12 mg ; 聚乙烯醇2. 0~6. 0 mg ; 氯化鈉 4· 0~6· 0 mg ; 磷酸氫二鈉 〇· 20~0· 30mg ; 磷酸二氫鈉 〇. 40~0. 50mg ; 注射用水加至〇. 4 ml。
[0008] 作為本發明優選的實施方式，所述滴眼液的組分及其用量為： 重組牛堿性成纖維細胞生長因子1680 IU ; 人血白蛋白〇. 08 mg ; 聚乙烯醇4. 0 mg ; 氯化鈉3. 2 mg ; 磷酸氫二鈉22mg ; 磷酸二氫鈉48mg ; 注射用水加至〇. 4 ml。
[0009] 本發明還提供了所述滴眼液的制備工藝，包括以下步驟： (1) 將聚乙烯醇分散于適量90°C注射用水中，在121 °C熱壓滅菌，冷卻至室溫，備用； (2) 將重組牛堿性成纖維細胞生長因子、人血白蛋白、氯化鈉、磷酸氫二鈉和磷酸二氫 鈉溶于適量注射用水中，用〇. 22 μ m濾膜無菌過濾； (3 )在無菌條件下將步驟（1)所得的溶液和步驟（2 )所得的溶液混合均勻，用無菌注射 用水定容，用0. 22 μ m濾膜過濾；收集濾液； (4)濾液按照規格分裝。
[0010] 本發明通過試驗例1考察了本發明rb-bFGF滴眼液的刺激性試驗，結果表明本發 明rb-bFGF滴眼液無刺激性，對眼睛使用部位無刺激性。
[0011] 本發明還通過試驗例2考察了本發明rb-bFGF滴眼液的穩定性，結果表明本發明 rb-bFGF滴眼液與現有技術相比，其穩定性有進一步的提高，可低溫或常溫下長期保存，使 得本發明rb-bFGF滴眼液的保質期延長，擴大其應用范圍。
[0012] 本發明通過試驗例3考察了本發明rb-bFGF滴眼液對眼角膜炎臨床志愿者的治療 效果，結果顯示，用本發明滴眼液治療100例，其中痊愈90例，顯效8例，無效2例，有效率 98. 0%。
[0013] 因此，本發明與現有技術相比，具有以下的優點和效果： 通過對重組牛堿性成纖維細胞生長因子選擇特定的輔料及用量，減少了滴眼液中輔料 的使用量，同時保證了滴眼液的穩定性，延長滴眼液的保質期，擴大其應用范圍；同時本發 明不添加抑菌劑，避免了抑菌劑引起的潛在危險和對眼睛的毒副作用，減少了滴眼液對眼 部的刺激性，滴眼液的使用更安全，患者依從性更高。
【具體實施方式】
[0014] 以下通過【具體實施方式】進一步描述本發明，但本發明不僅僅限于以下實施例。在 本發明的范圍內或者在不脫離本發明的內容、精神和范圍內，對本發明所述的滴眼液進行 適當改進、替換功效相同的組分，對于本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包 括在本發明的范圍之內。
[0015] 實施例1、rb-bFGF滴眼液及其制備 重組牛堿性成纖維細胞生長因子1680000 IU; 人血白蛋白〇. 08 g ; 聚乙烯醇4.0 g; 氯化鈉3. 2 g ; 磷酸氫二鈉〇. 22g ; 磷酸二氫鈉 0. 48g ; 灃射用水加至400 ml: 共制 1000支 具體制備方法為： (1) 將聚乙烯醇分散于適量90°C注射用水中，在121 °C熱壓滅菌，冷卻至室溫，備用； (2) 將重組牛堿性成纖維細胞生長因子、人血白蛋白、氯化鈉、磷酸氫二鈉和磷酸二氫 鈉溶于適量注射用水中，用〇. 22 μ m濾膜無菌過濾； (3 )在無菌條件下將步驟（1)所得的溶液和步驟（2 )所得的溶液混合均勻，用無菌注射 用水定容，用0. 22 μ m濾膜過濾；收集濾液； (4)濾液按照規格分裝。
[0016] 實施例2、rb_bFGF滴眼液及其制備 重組牛堿性成纖維細胞生長因子2500000 IU ; 人血白蛋白〇. 12 g ; 聚乙烯醇2.0 g; 氯化鈉 4. 0 g ; 磷酸氫二鈉〇. 20g ; 磷酸二氫鈉〇. 40g ; 灃射用水加至400 ml: 共制 1000支 具體制備方法為： (1) 將聚乙烯醇分散于適量90°C注射用水中，在121 °C熱壓滅菌，冷卻至室溫，備用； (2) 將重組牛堿性成纖維細胞生長因子、人血白蛋白、氯化鈉、磷酸氫二鈉和磷酸二氫 鈉溶于適量注射用水中，用〇. 22 μ m濾膜無菌過濾； (3 )在無菌條件下將步驟（1)所得的溶液和步驟（2 )所得的溶液混合均勻，用無菌注射 用水定容，用0. 22 μ m濾膜過濾；收集濾液； (4)濾液按照規格分裝。
[0017] 實施例3、rb-bFGF滴眼液及其制備 重組牛堿性成纖維細胞生長因子2000000 IU ; 人血白蛋白〇. 10 g ; 聚乙烯醇6.0 g; 氯化鈉6. 0 g ; 磷酸氫二鈉〇. 30g ; 磷酸二氫鈉〇. 50g ; 灃射用水加至400 ml: 共制 1000支 具體制備方法為： (1) 將聚乙烯醇分散于適量90°C注射用水中，在121 °C熱壓滅菌，冷卻至室溫，備用； (2) 將重組牛堿性成纖維細胞生長因子、人血白蛋白、氯化鈉、磷酸氫二鈉和磷酸二氫 鈉溶于適量注射用水中，用〇. 22 μ m濾膜無菌過濾； (3 )在無菌條件下將步驟（I)所得的溶液和步驟（2 )所得的溶液混合均勻，用無菌注射 用水定容，用0. 22 μ m濾膜過濾；收集濾液； (4)濾液按照規格分裝。
[0018] 對比例一、選自中國專利CN 102357243 B說明書中實施例1制得的rb-bFGF滴眼 液。
[0019] 試驗例1、刺激性試驗 取本發明實施例1所制備的滴眼液及空白輔料，觀察動物眼睛接觸試驗樣品后對結 膜、角膜和虹膜的刺激反應情況。
[0020] 給藥分組：取眼部檢查無損傷的健康家兔9只（角膜無渾濁，結膜無充血、水腫及 分泌物，瞳孔圓形，兩側等大，對光反射良好），按體重隨機分為3組，3只/組，第1組左右 眼均給生理鹽水，第2組左眼給生理鹽水作自身對照，右眼給空白輔料滴眼液。第3組左眼 也給生理鹽水作自身對照，右眼都分別給實施例1所制備的滴眼液。
[0021] 給藥方法：分別將藥液滴于家兔眼結膜囊內，壓迫鼻淚管，并使眼睛被動閉合約 5?10秒。4次/天，每次1?2滴（約50ul)，連續滴眼14天，于每次給藥前以及最后一 次給藥后1、2、4、24、48和72小時，直接肉眼觀察或用放大鏡觀察角膜、虹膜、結膜是否有 刺激性，并對刺激性進行評分，適時用2%熒光素鈉染色，觀察各部位是否有著色，結果按表 1進行刺激反應評分，將每一個觀察時間每一家兔的眼角膜、虹膜和結膜的刺激反應分值相 加得總積分，將一組的積分總和除以動物數，即得最后平均分值，并與左眼進行比較。然后， 按表2評價標準判斷樣品對眼刺激性。當角膜、虹膜、結膜的刺激強度不一致時，應分別做 出評價。所有的觀察結束后處死家兔，剪取雙眼及上下眼瞼，肉眼觀察有無紅腫等異常變 化，然后在10%甲醛液中固定，石蠟包埋，切片，HE染色，進行組織病理學檢查。刺激性結 果：參見表3。
[0022] 表1眼刺激反應分值標準
【主權項】
1. 一種重組牛堿性成纖維細胞生長因子滴眼液，其特征在于，所述滴眼液的組分及其 用量為： 重組牛堿性成纖維細胞生長因子1500~2500 IU; 人血白蛋白〇. 04~0. 12 mg ; 聚乙烯醇2. 0~6. 0 mg ; 氯化鈉 4· 0~6· 0 mg ; 磷酸氫二鈉 〇· 20~0· 30mg ; 磷酸二氫鈉 〇. 40~0. 50mg ; 注射用水加至〇. 4 ml。
2. 根據權利要求1所述的重組牛堿性成纖維細胞生長因子滴眼液，其特征在于，所述 滴眼液的組分及其用量為： 重組牛堿性成纖維細胞生長因子1680 IU; 人血白蛋白〇. 08 mg ; 聚乙烯醇4. 0 mg ; 氯化鈉3. 2 mg ; 磷酸氫二鈉22mg ; 磷酸二氫鈉48mg ; 注射用水加至〇. 4 ml。
3. 根據權利要求1-2任一所述的重組牛堿性成纖維細胞生長因子滴眼液，其特征在 于，所述滴眼液的制備工藝為： (1) 將聚乙烯醇分散于適量90°C注射用水中，在121 °C熱壓滅菌，冷卻至室溫，備用； (2) 將重組牛堿性成纖維細胞生長因子、人血白蛋白、氯化鈉、磷酸氫二鈉和磷酸二氫 鈉溶于適量注射用水中，用〇. 22 μ m濾膜無菌過濾； (3 )在無菌條件下將步驟（1)所得的溶液和步驟（2 )所得的溶液混合均勻，用無菌注射 用水定容，用0. 22 μ m濾膜過濾；收集濾液； (4)濾液按照規格分裝。
【專利摘要】本發明公開了一種重組牛堿性成纖維細胞生長因子滴眼液及其制備方法。所述滴眼液的組分及其用量為：重組牛堿性成纖維細胞生長因子 1500~2500IU、人血白蛋白0.04~0.12mg、聚乙烯醇2.0~6.0mg、氯化鈉4.0~6.0mg、磷酸氫二鈉 0.20~0.30mg、磷酸二氫鈉0.40~0.50mg和注射用水加至0.4ml，本發明減少了滴眼液中輔料的使用量，同時保證了滴眼液的穩定性，延長滴眼液的保質期，擴大其應用范圍，本發明不添加抑菌劑，避免了抑菌劑引起的潛在危險和對眼睛的毒副作用，減少了滴眼液對眼部的刺激性，滴眼液的使用更安全，患者依從性更高。
【IPC分類】A61K38-18, A61K47-42, A61K9-08, A61P27-02
【公開號】CN104606666
【申請號】CN201510073120
【發明人】方海洲, 曲偉, 鄭贊順, 鄭美群, 姜若峰, 朱愛堂, 藍瑄, 黃賢科, 譚佳佳
【申請人】珠海億勝生物制藥有限公司
【公開日】2015年5月13日
【申請日】2015年2月12日