專利名稱:苷的制備方法
本發明涉及具有優良免疫活性的苷及其制備方法，特別是關于含在苷中的N-乙酰神經氨酸衍生物及其制備方法。
到目前為止，據已所知的文獻中，關于N-取代的乙酰神經氨酸如N-乙酰神經氨酸類物質存在于許多動物體內和一些細菌的細胞表面，它是以如糖蛋白類、糖脂類、寡糖類、或多糖類那樣的唾液酸的復合物存在的。近來，在關于神經功能、癌癥、炎癥、免疫力、病毒傳染、病癥的鑒別、激素受體等方面，N-取代的神經氨酸類物質已成為一種醫藥方面的重要物質，與此同時，這類物質已被認為是位于細胞表面上的獨特的活性分子，但是在唾液酸的復合體中，N-取代神經氨酸類物質的作用尚未搞清楚。
再者，已經有很多有機化學家對N-取代神經氨酸進行了研究，而且已得到多種簡單衍生物，可是具有優良免疫作用的衍生物尚未得到。
一方面由于科學界對如人血器官惡性腫瘤、多種癌癥和膠原疾病等的醫療的進展，使人類壽命的平均年齡大大提高，但另一方面，由于藥物使用的大大增加，例如使用腎上腺皮質激素或者免疫抑制劑的藥物，使用中產生某些不希望的副作用，同時還降低和減少了免疫力。
在上述情況下，本發明人對生物固有的成分一唾液酸予以特別重視，進行了一系列的研究，研究的目標是通過化學方法改性找到副作用小的調節劑，和搞清免疫監督上的調節作用。研究結果表明，本發明人已成功地找到了具有免疫調節作用的新型化合物，它能使抑制劑T細胞受到激活，而B細胞的免疫球蛋白的產生受到抑制。
本發明的主要目的是提供具有優良免疫活性，特別具有免疫調節作用的新型化合物。本發明的另一個目的是提供制備新型化合物的有效方法。
下面就本發明的上述兩方面目的及其它目的作說明按照本發明，新型苷類化合物具有如下通式(Ⅰ)
式中R1是從
基烷氧羰基，羧基，羧酸鹽類中選取，當R1是
基時，R2是烷氧基羰基、羧基、或羧酸鹽類。當R1選的是烷氧基羰基、羧基、和羧酸鹽類時，R2為
基R3是氫原子或乙酰基。
本發明的烷氧基羰基可用甲氧基羰基，乙氧基羰基等來舉例。羰基鹽可用金屬鹽或堿土金屬鹽，如羰基的鈉鹽，鉀鹽，鈣鹽等來舉例。
本發明的化合物(Ⅰ)包括β構型衍生物(β-衍生物)，R1是
和α構型衍生物(α-衍生物)其中R2是
本發明通式(Ⅰ)表示的化合物可用下列連續的化學式從甲基-2-氯-4，7，8，9-四-O-乙酰基-β-D-N-乙酰神經氨酸酯(下文為化合物(Ⅱ)和5氟-1-[(2-羥乙氧基)甲基]尿嘧啶(下文為化合物(Ⅲ)來制備，制得化合物(Ⅳ)到(Ⅺ)。
化合物(Ⅳ)到(Ⅺ)的命名如下。
化合物(Ⅳ)1-0-[甲基(5-N-乙酰基-3，5-二脫氧-4，7，8，9-四-O-乙酰基-β-D丙三基-D-半乳糖基-2-無癍吡喃糖基)酸酯]-2-0-[(2，4-二氧-5-氟-1，2，3，4-四氫嘧啶-1-基)甲基]-乙二醇。
化合物(Ⅴ)1-0-[甲基(5-N-乙酰基-3，5-二脫氧-4，7，8，9-四-0-乙酰基-α-D-丙三基-D-半乳糖-2-無癍吡喃糖基)酸酯]-2-0-[(2，4-二氧-5-氟-1，2，3，4四氫嘧啶-1-基)甲基乙二醇。
化合物(Ⅵ)1-0-[甲基(5-N-乙酰基-3，5，-二脫氧-β-D-丙三基-D-半乳糖基-無斑吡喃糖基)酸酯]-2-0-[(2，4-二氧-5-氟-1，2，3，4-四氫嘧啶-1-基)甲基]-乙二醇。
化合物(Ⅶ)1-0-[甲基(5-N-乙酰基-3，5-二脫氧-α-D-丙三基-D-半乳糖基-2-無癍吡喃糖基)酸酯]-2-0-[(2，4-二氧-5-氟-1，2，3，4-四氫嘧啶-1-基)甲基]-乙二醇。
化合物(Ⅷ)1-0-[鈉(5-N-乙酰基-3，5-二脫氧-β-D-丙三基-D-半乳糖基-2-無斑吡喃糖基)酸鹽]-2-0-[(2，4-二氧-5-氟-1，2，3，4四氫嘧啶-1-基)甲基]-乙二醇。
化合物(Ⅳ)1-0-[鈉(5-N-乙酰基-3，5-二脫氧-α-D-丙三基-D-半乳糖基-2-無斑吡喃糖基酸鹽)]-2-0-[(2，4-二氧-5-氟-1，2，3，4，-四氫嘧啶-1-基)甲基]乙二醇。
化合物(Ⅹ)1-0-[(5-N-乙酰基-3，5-二脫氧-β-D-丙三基-D-半乳糖-2-無斑吡喃糖基)酸]-2-0-[(2，4-二氧-5-氟-1，2，3，4-四氫嘧啶-1-基)甲基]乙二醇。
化合物(Ⅺ)1-0-[5-N-乙酰基-3，5-二脫氧-α-D-丙三基-D-半乳糖-2-無斑吡喃糖基)酸]-2-0-[(2，4-二氧-5-氟-1，2，3，4-四氫嘧啶-1-基)甲基]乙二醇。
上面提到的化合物(Ⅱ)和(Ⅲ)是已知的化合物，化合物(Ⅱ)的合成方法例如有Kuhu發表于chem Ber，99.611(1966年)的方法。另一方面化合物(Ⅲ)的制備，例如見Morris.J.Robins Can.J.Chem.，60，547(1982)。
新化合物(Ⅳ)(β-衍生物)和(Ⅴ)(α-衍生物)的混合物可由化合物(Ⅱ)和(Ⅲ)進行Koenigs Knorr(即柯尼希-諾爾)反應制得。
進行柯尼希-諾爾反應能在Hg Br2，Hg(CN)2或其混合物，或在CF3SO3Ag(三氟甲烷磺酸銀)存在下進行。最好在CF3SO3Ag存在下進行，因為CF3SO3Ag比HgBr2等制取化合物(Ⅳ)和(Ⅴ)的總收率更高，另外，除有CF3SO3Ag存在外，還最好在溶劑中進行，溶劑有四氫呋喃、乙腈、二氯甲烷等。反應溫度可以在室溫和-50℃之間。反應時間為5到60分鐘。最常用的反應時間約為20分，溶劑為四氫呋喃。
本發明的化合物(Ⅳ)和(Ⅴ)可用硅膠柱色譜法從上述產物中進行分離和提純。
新型化合物(Ⅵ)(β-衍生物)還可將化合物(Ⅳ)用甲醇鈉的甲醇溶液使其酯基轉移而制得。
相仿的，本發明的新型化合物(Ⅶ)(α-衍生物)也可由化合物(Ⅴ)制得。
進而，可將化合物(Ⅵ)和(Ⅶ)在氫氧化鈉溶液中水解而制得化合物(Ⅷ)(β-衍生物)和(Ⅸ)(α-衍生物)。游離酸型的化合物(Ⅹ)(β)衍生物)和(Ⅺ)(α-衍生物)的制備，可由化合物(Ⅷ)和(Ⅸ)的水溶液進行酸化處理制得，也可將化合物(Ⅵ)和(Ⅶ)溶于氫氧化鈉溶液中接著再酸化來制取。
用所有這些連續的化學式表示的化合物，其制備方法，將在下面的實施例中具體說明。
按照本發明，通式(Ⅰ)的化合物，具有優良的調節免疫系統強度的活性，這種活性通過下面的方法得以確證。
ConA抗鼠脾淋巴細胞激活的功能由于T細胞不被ConA特異性激活，所以將本發明的苷加入到反應中，研究其功能。將ConA和通式(Ⅰ)的化合物(通式(Ⅰ)化合物將在下文說明)分別地加入到從BALB/C鼠取得的脾臟淋巴細胞(SPC)中，混合物培養20小時左右。并在小平皿上于37℃混入5%CO2，接著用以氚示蹤標記的胸苷加入所得混合物中。進一步將混合物于37℃培養10小時左右。用閃爍計數器測定吸收在SPC中的3H-胸苷量。
結論是，對于具有通式(Ⅰ)的化合物，觀察到它促進和增強了3H-胸苷的吸收，同時也觀察到Con-A對阻止T-細胞的活化功能。
阻止鼠脾臟淋巴細胞的免疫球蛋白生成功能本發明N-取代神經氨酸，在前面的實驗中已經表明能使T-細胞活化。
接下進一步試驗，用測定斑形成細胞(PFC)數目來研究其阻止免疫球蛋白生成的功能。
首先用羊的血紅細胞和化學式(Ⅰ)中的化合物，(例如下文實施例中將說明的化合物)加到SPC中，混合物在37℃培養5天，再加入SRBC和補體到該敏化了的SPC中，該混合物再在坎寧安室中37℃溫度下培養3到12小時后，對PFC進行計數。結果觀察到PFC數目減少，細胞的生存與對照物相同。這樣就確證對免疫球蛋白產生的抑制作用得到增強。
上面這兩種鑒定檢驗中，本發明的化合物顯示出優良的活性。根據這一事實，可以認為免疫球蛋白的產生由于抑制劑T細胞的活化而受到抑制。
到目前為止，已經觀察到象膠原病那樣的自動免疫疾病方面，抑制劑T細胞的功能下降，所以，根據本發明的具有活化抑制劑T細胞功能的N-取代神經氨酸衍生物，可以期望作為調節免疫系統強度的藥劑有效地用于臨床應用。
現在參照如下非限制性例子說明本發明。實施例1，化合物(Ⅳ)和(Ⅴ)的制備方法120毫升含2.54克(12.44毫摩爾)化合物(Ⅲ)的四氫呋喃溶液中，加入50毫升含1.12克(4.40毫摩爾)的氰化汞和2.24克(6.21毫摩爾)溴化汞的無水乙腈溶液，加入7.74克4A分子篩粉末，在室溫條件下攪拌1小時，然后35毫升含4.64克(9.10毫摩爾)化合物(Ⅱ)的無水乙腈溶液加到所得混合物中，在室溫下攪拌46小時。反應懸浮液用陽離子交換樹脂(R)A-21中和后，過濾，所得濾液減壓蒸餾，將殘余液溶解在醋酸乙酯中，用10克硅膠(Wakogel C-300)吸收，再在減壓下蒸出溶劑，接著用柱色譜分離出若干級分[固相∶硅膠(Wakogel C-300)100克，洗脫劑∶甲苯/甲醇＝10/1]。從第一級分回收反應的原料，其它級分中得到了目的產品，它是化合物(Ⅳ)和(Ⅴ)的混合物。此混合物用柱色譜[固相∶硅膠(Wakogel C-300′)，洗脫劑∶甲苯/甲醇＝10/1]分離。將溶劑分別自兩級分中蒸出，殘余物溶于水并進行冷凍干燥。于是分別得到1.82克化合物(Ⅳ)(β-衍生物)(收率29.6%)和1.87克化合物(Ⅴ)(α-衍生物)(收率30.4%)，二者都為純的無色的無定形晶體，化合物(Ⅳ)和(Ⅴ)的總收率為60.0%。化合物(Ⅳ)的物理性質分解點 100-109℃元素分析 C27H36FN3O16·3/5H2O MW＝688.42計算值 C47.11 H5.45 N6.10實測值 C47.15 H5.41 N5.80
IRνKBrmaxcm-13400(-NH-)，1720(-CO-O-)1670(νC＝O 酰胺 Ⅰ)，1550(νC＝O 酰胺 Ⅱ)，1230(C-O-C)1H-NMRppm400MHz(CDCl3)1.894，2.027，2.035，2.063，2.149(15H，all S，CH3CO-X5)2.342(1H，dd，J＝13.1Hz，J＝4.9Hz，3＝Heq)3.802(3H，S，-COOCH3)3.539;3.656(2H，m;m，-OCH2CH2-O-)3.716;3.907(2H，m;m，-OCH2CH2-O-)4.780(1H，d，J＝10.7Hz，
5.603(1H，d，J＝10.7Hz，
5.107-5.174(1H，m，4-H)7.457(1H，d，J＝5.2Hz，嘧啶-6-H)[α]24D-5.75°(C＝1，AcOEt)
化合物(Ⅴ)的物理性質分解點 94-105℃元素分析 C27H36FN3O16·11/10H2O MW＝697.43計算值 C46.50 H5.52 N6.03實測值 C46.51 H5.24 N5.90IRνKBrmaxcm-13350(-NH-)，1720(-CO-O)，1670(νC＝O，酰胺 Ⅰ)，1550(νC＝O，酰胺 Ⅱ)，1220(C-O-C)1H-NMRppm400MHz(CDCl3)1.888，2.040，2.148，2.153(15H，all S，CH3CO-X5)2.578(1H，dd，J＝12.7Hz，J＝4.8Hz，3-Heq)3.808(3H，S，-COOCH3)3.475;3.906(2H，m;m，-OCH2CH2-O-)3.737(2H，m，-OCH2CH2-O-)5.173(1H，d，J＝10.7Hz
)5.210(1H，d，J＝10.7Hz
)4.800-4.903(1H，m，4-H)
7.530(1H，d，J＝5.2Hz，嘧啶-6-H)[α]24D-8.08°(C＝1，AcOEt)實施例2化合物(Ⅳ)和(Ⅴ)的制備方法(2)70毫升含1.54克(7.55毫摩爾)化合物(Ⅲ)和2.96克(5.81毫摩爾)化合物(Ⅱ)的無水四氫呋喃溶液中加入4.61克4A分子篩粉末，室溫下攪拌30分鐘，將此混合溶液冷卻到-15到-20℃，加入8毫升內含2.09克(8.13毫摩爾)三氟甲烷磺酸銀的無水四氫呋喃溶液攪拌20分鐘。接著將所得反應懸浮液過濾，濾液在減壓下蒸出溶劑，殘余物溶介在200毫升醋酸乙酯中，用飽和氯化鈉水和飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌該溶液，然后用Na2SO4干燥，濾去干燥劑，濾液經減壓，蒸餾脫去溶劑，得4.23克殘余物，將該物再次溶介在醋酸乙酯中，用硅膠色譜[固相∶硅膠(Wakogel-C-300)423克，洗脫溶劑∶甲苯/甲醇＝10/1]得到第一級分(原料和化合物(Ⅳ)的混合物)和第二組分(含化合物(Ⅴ))。蒸去溶劑后，第一組分的殘余物用色譜法[固相∶硅膠(Wakogel C-300)，洗脫溶劑∶氯仿/甲醇＝40/1]分離若干級分，含有化合物(Ⅳ)的第一級分脫去溶劑后，將殘余物溶介在水中，使其冷凍干燥，得到純產品0.77克化合物(Ⅳ)(β-衍生物)(收率19.6%)第二級分脫去溶劑后，將殘余物容介在水中，使其冷凍，干燥，得到純產品2.70克化合物(Ⅴ)(α-衍生物)(收率68.7%)化合物(Ⅳ)與(Ⅴ)的總收率為88.3%實施例3.化合物(Ⅵ)的制備由實施例1和實施例2制得的化合物(Ⅳ)420毫克(0.62毫摩爾)溶介在100毫升0.01N的甲醇鈉甲醇溶液;在室溫下攪拌1.5小時，所得溶液加Dowex 50W-X8 H型離子交換樹脂，中和，過濾，然后將所得濾液濃縮和干燥，殘余物在柱色譜[固相∶硅膠(Wakogel C-200)，洗脫溶劑∶氯仿/甲醇＝5/3]處理，將分離的級分經蒸餾脫去溶劑，殘余物溶介在水中，再冷凍干燥，于是就得到270毫克純的無色無定形晶體化合物(Ⅵ)(β-衍生物)產品的物理性質分解點 138-142℃元素分析 C19H28FN3O127/2H2O MW＝572.51計算值 C39.86 H6.16 N7.34實測值 C39.62 H5.90 N7.13IRνKBrmaxcm-13400(-NH-，-OH-)，1710(-CO-O-)，1670(νC＝O 酰胺 Ⅰ)，1560(νC＝O 酰胺 Ⅱ)1H-NMRppm400MHz(CDCl3+D2O)1.758(1H，dd，J＝12.4Hz，J＝11.9Hz，3-Hax)2.035(3H，S，CH3CONH-)2.347(1H，dd，J＝12.4Hz，J＝4.8Hz，3-Heq)3.320-4.080(13H，m，唾液基-H，-CH2CH2-O-)3.823(3H，S，COOCH3)7.940(1H，d，J＝5.4Hz，嘧啶-6-H)[α]19.5D-17.9°(C＝1，DMF)實施例4，化合物(Ⅶ)的制備按實施例3的方法，但是用實施例1和2制得的化合物(Ⅴ)來替代化合物(Ⅳ)得到221毫克化合物(Ⅶ)(α-衍生物)(收率80%)
產品的物理性質分解點 147-150℃元素分析 C19H28FN3O1219/12H2O MW＝543.69計算值 C41.97 H5.90 N7.73實測值 C41.77 H5.72 N7.59IRνKBrmaxcm-13400(-NH-，-OH-)，1710(-CO-O-)，1670(νC＝O，酰胺 Ⅰ)，1560(νC＝O 酰胺 Ⅱ)1H-NMRppm400MHz(CDCl3+D2O)1.758(1H，dd，J＝12.4Hz，J＝11.1Hz，3-Hax)2.010(3H，S，CH3CONH-)2.637(1H，dd，J＝12.4Hz，J＝4.5Hz，3-Heq)3.484-3.972(13H，m，唾液基-H，-CH2CH2-O-)3.836(3H，S，-COOCH3)7.906(1H，d，J＝5.3Hz，嘧啶-6-H)[α]19.5D-33.4°(C＝1，DMF)實施例5，化合物(Ⅷ)的制備由實施例3制得的化合物(Ⅵ)650毫克(1.28毫摩爾)中加入2毫升水，成懸浮液，接著加2毫升1N氫氧化鈉水溶液，在室溫下攪拌20分鐘，將1N氫氧化鈉水溶液試著加入到反應混合物中的PH在10和11之間為止，攪拌5分鐘，加入陽離子交換樹脂(Ambereite
IRC-50)，調整PH到5和6之間，過濾，使所得濾液冷凍干燥，得到無色無定形晶體化合物(Ⅷ)636毫克(收率96.1%)產品的物理性質分解點 196～201℃元素分析 C18H25FN3NaO1214/5H2O MW＝567.86計算值 C38.07 H5.43 N7.40實測值 C37.80 H5.25 N7.20IRνKBrmaxcm-13400(-NH，-OH)，1700，1670(νC＝O 酰胺 Ⅰ)，1610(-COO
)，1560(νC＝O 酰胺 Ⅱ)。
19.5D-15.5°(C＝1，H2O)1H-NMRppm400MHz(DMSO-d6，t-BuOH)1.465(1H，t，J＝11.9Hz，3-Hax)1.871(3H，S，CH3CONH-)2.083(1H，dd，J＝11.9Hz，4.5Hz，3-Heq)3.331-3.669(10H，m，唾液基-H，-O-CH2CH2-O-)3.808(1H，m，4H)5.052(1H，d，J＝10.3Hz)，
)5.090(1H，d，J＝10.3Hz，
)5.276(1H，-OH)8.113(1H，d，J＝6.6Hz，嘧啶-6′H)8.245(1H，d，J＝7.3Hz，CH3CONH-)實施例6化合物(Ⅸ)的制備按照實施例5的方法，但用實施例4制得的化合物(Ⅶ)372毫克(0.73毫摩爾)替代化合物(Ⅵ)，并用1.5毫升1N氫氧化鈉水溶液得到化合物(Ⅸ)373毫克(收率98.6%)產品的物理性質分解點 178-183℃元素分析 C18H25FN3NaO124H2O MW＝589.48計算值 C36.68 H5.64 N7.13實測值 C36 69 H5.51 N6.95IRνKBrmaxcm-13400(-NH，-OH)，1700，1670(νC＝O 酰胺 Ⅰ)1610(-COO
)，1560(νC＝O，酰胺 Ⅱ)[α]19.5D-4.5°(C＝1，H2O)1H-NMRppm400Hz(DMSO-d6，t-BuOH)1.242(1H，t，J＝11.7Hz，3-Hax)1.888(3H，S，CH3CONH)2.650(1H，dd，J＝11.7Hz，4.6Hz，3-Heq)
3.18-3.58(10H，m，唾液基-H，-O-CH2CH2-O-)3.725(1H，m，4-H)4.793(1H，m，-OH)5.035(2H，S，
)5.235(1H，S，-OH)6.338(1H，S，-OH)8.118(2H，d，J＝6.4Hz，嘧啶-6′H)8.439(1H，d，J＝6.1Hz，CH3CONH-)實施例7.化合物(Ⅹ)的制備(1)100毫克(1.28毫摩爾)按實施例5制得的化合物(Ⅷ)和30毫升蒸餾水組成的水溶液中，加入3毫升Dowex 50 W-X8(H型)離子交換樹脂，在室溫下攪拌1小時，所得溶液PH為4。反應混合物經過濾后所得的濾液冷凍干燥，得到84毫克無色無定形晶體化合物(Ⅹ)(收率為89.2%)產品的物理性質分解點 138-148℃元素分析 C18H26FN3O1211/10 H2O MW＝515.25計算值 C41.96 H5.52 N8.16實測值 C41.70 H5.20 N8.08IRνKBrmaxcm-13400(-OH，-NH-)1700(-COOH)，1680(-NHCO-)1H-NMRppm400MHz(DMSO-d6)1.620(1H，t，J＝12.5Hz，3-Hax)，1.961(3H，S，CH3CONH-)
2.257(1H，dd，J＝12.5Hz，4.5Hz，3-Heq)3.90-3.89(1H，m，4-H)，5.136(2H，S，
)7.972(1H，d，J＝6.0Hz，嘧啶-6′H)[α]19.5D-16.8°(C＝1，H2O)實施例8化合物(Ⅺ)的制備(1)按照實施例7的方法，但在此用實施例6制得的化合物(Ⅸ)102毫克(0.20毫摩爾)替代化合物(Ⅶ)，最終得90.4毫克化合物(Ⅺ)(收率92.4%)產品物理性質分解點 123～128℃元素分析 C18H26FN3O12H2O MW＝513.45計算值 C42.11 H3.70 N8.18實測值 C41.8 H3.41 N8.10IRνKBrmaxcm-13400(-OH，-NH-)，1700(-COOH)，1680(-NHCO-)，1H-NMRppm400MHz(DMSO-d6)，1.572(1H，t，J＝12.2Hz，3-Hax)，1.953(3H，S，CH3CONH-)，2.655(1H，dd，J＝12.2Hz，4.5Hz，3-Heq)，3.82-3.90(1H，m，4-H)，5.124(2H，S，
)7.975(1H，d，J＝6.0Hz，吡啶-6′H)[α]19.5D-5.8°(C＝1，H2O)
實施例9化合物(Ⅹ)的制備(2)按實施例3制得的100毫克(0.196毫摩爾)化合物(Ⅵ)溶介在2毫升水中再加入0.2毫升1N氫氧化鈉水溶液，在室溫下攪拌3小時以后，反應混合液內加Dowex 50 W-X8(H型)離子交換樹脂，攪拌約30分鐘過濾，用水洗。使濾液和洗后的溶液冷凍干燥，得到90毫克化合物(Ⅹ)(收率93%)。
實施例10化合物(Ⅺ)的制備(2)按照實施例9的方法，但用實施例4制得的化合物(Ⅶ)替代化合物(Ⅵ)，得到88毫克化合物(Ⅺ)收率(91%)。
權利要求
1.具有下列化學式的苷類的制備方法
式中R4是乙酰基，R5是甲氧基
基和R6是
基，該方法包括將
與
在三氟甲烷磺酸銀存在下反應。
2.根據權利要求
1的方法，其中反應在溶劑中進行。
3.根據權利要求
2的方法，其中的溶劑選自四氫呋喃，乙腈和二氯甲烷。
4.根據權利要求
1的方法，其中反應在溫度為室溫到-50℃之間，時間為5到60分鐘的條件下進行。
專利摘要
本發明提供具有下列化學式的新型化合物，本發明也提供這種化合物的制備方法，新型化合物具有優良的免疫活性。
文檔編號C07H15/04GK86102125SQ86102125
公開日1987年1月7日 申請日期1986年3月5日
發明者柴山莊平, 松崎祐二, 吉村昌治, 伊藤正善, 志烏善保, 小川智也 申請人:美克德株式會社導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan