一種糖苷化合物及其制備方法
【專利摘要】本發明涉及一種糖苷化合物及其制備方法，屬于天然化合物技術領域。本發明通過云芝栓孔菌和靈芝屬真菌發酵共培養，得到具有式I所示結構的糖苷化合物。本發明獲得的糖苷化合物在制備提高呼吸道上皮細胞Beas?2B細胞活性的藥物、抑制革蘭氏陽性菌的藥物和抑制人類致病菌藥物中有很好的應用，本發明為充分開發利用云芝栓孔菌合成天然產物的潛力提供了一條新途徑。CGMCC No.19
【專利說明】
一種糖苷化合物及其制備方法
技術領域
[0001] 本發明涉及天然化合物技術領域，具體涉及一種糖苷化合物及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 云芝栓孔菌屬擔子菌門木腐真菌，又稱雜色云芝、彩絨革蓋菌、雜色云芝、云芝蘑 等。研究發現其含留體類、三萜類、有機酸類、生物堿類、葡糖醇類、蛋白質類、糖類、糖肽類 等化合物，還含胞外黏性物質、胃蛋白酶抑制劑、18種人體所需的氨基酸和維生素 及銅、鐵、鉀、鋅等10多種人體所需的活性微量元素等其他類化合物。云芝栓孔菌具有去濕、 化痰、療肺疾等功效，可以治療慢性支氣管炎、迀延性肝炎、白血病、小兒痙支炎等疾病;該 菌也可作為肝癌免疫治療的藥物，其菌絲體提取的多糖和從發酵液中提取的多糖均具有強 烈地抑癌性。
[0003]目前云芝栓孔菌的培養通常采用傳統培養方法，食藥用真菌的研究主要針對其單 培養菌絲體，子實體或發酵液，從中提取純化出多種活性天然產物，有很高的食藥用價值， 但往往缺乏結構新穎性的化合物，且有效藥用組分種類較少。

【發明內容】

[0004] 本發明的目的在于提供一種糖苷化合物及其制備方法，該糖苷化合物在制備提高 呼吸道上皮細胞Beas_2B細胞活性的藥物、抑制革蘭氏陽性菌的藥物和抑制人類致病菌藥 物中有很好的應用，本發明為充分開發利用云芝栓孔菌合成天然產物的潛力提供了一條新 途徑。
[0005] 本發明提供了具有式I所示結構的糖苷化合物，
[0007] 本發明還提供了上述糖苷化合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0008] 以云芝栓孔菌和靈芝屬真菌發酵共培養，得到具有式I所示結構的糖苷化合物。
[0009] 優選的是，所述靈芝屬真菌為樹舌靈芝或木靈芝。
[0010]優選的是，所述共培養具體為：
[0011] 將靈芝屬真菌接種后進行發酵培養；
[0012] 在所述靈芝屬真菌接種1~2天后，將云芝栓孔菌接種進行發酵培養；
[0013] 待云芝栓孔菌培養3~4天后，將所述靈芝屬真菌的發酵液接種于云芝栓孔菌發酵 液中進行發酵共培養18~23天，得到糖苷化合物。
[0014] 優選的是，所述靈芝屬真菌的發酵液在云芝栓孔菌發酵液中的接種量40~60%。
[0015] 優選的是，所述發酵共培養的培養溫度為26~28°C，所述發酵共培養在搖床上進 行，搖床的轉速為160~180rpm。
[0016] 優選的是，所述發酵共培養的培養基包括以下質量含量的組分:葡萄糖8~12g/L， 磷酸二氫鉀〇. 8~1.4g/L，硫酸鎂0.3~0.5g/L，蛋白胨1.5~3g/L，余量的水。
[0017] 本發明還提供了上述技術方案所述的糖苷化合物或上述技術方案所述制備方法 制備得到的糖苷化合物在制備提高呼吸道上皮細胞Beas_2B細胞活性的藥物中的應用。
[0018] 本發明還提供了上述技術方案所述的糖苷化合物或上述技術方案所述制備方法 制備得到的糖苷化合物在制備抑制革蘭氏陽性菌的藥物中的應用。
[0019] 本發明還提供了上述技術方案所述的糖苷化合物或上述技術方案所述制備方法 制備得到的糖苷化合物在制備抑制人類致病菌藥物中的應用。
[0020] 本發明提供的具有式I所示結構的糖苷化合物具有提高呼吸道上皮細胞Beas-2B 細胞活性，抑制人類致病菌和革蘭氏陽性菌的功能，能夠應用在提高呼吸道上皮細胞Beas-2B細胞活性、抑制革蘭氏陽性菌和抑制人類致病菌的藥物的制備中，為充分開發利用云芝 栓孔菌合成天然產物的潛力提供了一條新途徑。
【附圖說明】
[0021] 圖1本發明實施例1式I所示糖苷化合物的一維質子核磁共振圖譜；
[0022] 圖2本發明實施例1式I所示糖苷化合物的一維13C核磁共振圖譜；
[0023] 圖3本發明實施例1式I所示糖苷化合物的二維異核多鍵相關核磁共振圖譜；
[0024] 圖4本發明實施例1式I所示糖苷化合物的相關譜二維核磁共振圖譜；
[0025] 圖5本發明實施例1式I所示糖苷化合物的二維異核單量子相關核磁共振圖譜； [0026]圖6本發明實施例1式I所示糖苷化合物的碳譜DEPT90°譜；
[0027]圖7本發明實施例1式I所示糖苷化合物的碳譜DEPT135°譜；
[0028]圖8本發明實施例2不同濃度式I所示糖苷化合物處理后的BEAS-2B細胞活性；
[0029] 圖9本發明比較例1式I所示糖苷化合物抑制枯草芽孢桿菌的抑菌圈圖譜；
[0030] 圖10本發明比較例1式I所示糖苷化合物抑制鏈球菌的抑菌圈圖譜；
[0031] 圖11本發明比較例2式I所示糖苷化合物抑制新型隱球菌的抑菌圈圖譜。
[0032]生物保藏說明
[0033] 云芝栓孔菌(Trametes versicolor)。本菌種保藏在中國微生物菌種保藏管理委 員會普通微生物中心，地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所， 保藏編號為CGMCC No. 12241，保藏時間為2016年4月19日。
【具體實施方式】
[0034] 本發明提供了一種具有式I所示結構的糖苷化合物，
[0036]本發明的化合物為
[0037] N-(4_甲氧基苯基）甲酰胺2-氧-β-D-木糖苷。
[0038]本發明還提供了上述糖苷化合物的制備方法，包括以下步驟：
[0039]以云芝栓孔菌和靈芝屬真菌發酵共培養，得到具有式I所示結構的糖苷化合物。
[0040]在本發明中，所述靈芝屬真菌優選為樹舌靈芝或木靈芝，本發明對所述樹舌靈芝 和木靈芝的來源沒有特殊的限定，采用本領域技術人員熟知的樹舌靈芝和木靈芝的市售商 品即可。
[0041 ]在本發明中，所述共培養優選具體為：
[0042]將靈芝屬真菌接種后進行發酵培養；
[0043]在所述靈芝屬真菌接種1~2天后，將云芝栓孔菌接種進行發酵培養；
[0044]待云芝栓孔菌培養3~4天后，將所述靈芝屬真菌的發酵液接種于云芝栓孔菌發酵 液中進行發酵共培養18~23天，得到具有式I所示結構的糖苷化合物。
[0045] 本發明中，在所述靈芝屬真菌和云芝栓孔菌分別進行發酵培養過程中，本發明先 進行靈芝屬真菌的發酵培養，在所述靈芝屬真菌的發酵培養開始1~2天后，再進行云芝栓 孔菌的發酵培養。設置時間差的目的是為獲得較高的起始菌體密度，以保證有相對充足的 菌體量，從而獲得更多的目標產物。在本發明中，所述靈芝屬真菌的接種量優選為40~ 60%，所述云芝栓孔菌的接種量30~50%，所述靈芝屬真菌和云芝栓孔菌的接種量優選相 同。
[0046] 本發明中，待云芝栓孔菌培養3~4天，菌絲體均有綠豆粒大小時，將所述靈芝屬真 菌的發酵液接種于云芝栓孔菌發酵液中進行發酵共培養。在本發明中，所述靈芝屬真菌的 發酵液在云芝栓孔菌發酵液中的接種量優選為40~60 %，更優選為50 %。
[0047]在本發明中，所述發酵共培養的時間優選為18~23天，更優選為20天，得到糖苷化 合物。
[0048]在本發明中，所述發酵共培養的培養溫度優選為26~28°C，更優選為28°C，所述發 酵共培養優選在搖床上進行，搖床的轉速為160~180rpm，更優選為160rpm。
[0049] 當將靈芝屬真菌發酵液接種到云芝栓孔菌發酵液中時，優選在混合后的發酵液中 添加總培養體積30~60%的新鮮培養基，更優選為50%。
[0050] 在本發明中，所述發酵共培養的培養基優選包括8~12g/L的葡萄糖，更優選為 l〇g/L；
[0051] 所述發酵共培養的培養基優選包括0.8~1.4g/L的磷酸二氫鉀，更優選為1.2g/L;
[0052] 所述發酵共培養的培養基優選包括0.3~0.5g/L的硫酸鎂，更優選為0.35g/L;
[0053] 所述發酵共培養的培養基優選包括1.5~3g/L的蛋白胨，更優選為2g/L;
[0054] 所述發酵共培養的培養基包括余量的水。
[0055] 在本發明中，所述靈芝屬真菌和云芝栓孔菌分別進行培養時，所用培養基、培養溫 度和搖床培養條件與發酵共培養過程中的條件相同。
[0056] 本發明發酵共培養得到的發酵液優選先采用常規的萃取方法進行式I所示糖苷化 合物的分離純化;然后經由不同形式的純化方法，分離萃取得到的混合物，所述純化方法包 括硅膠柱層析或Flash中壓制備，純化過程中使用的不同極性的溶劑包括石油醚、乙酸乙 酯、二氯甲烷及甲醇。
[0057]糖苷化合物是許多大型真菌和植物的次級代謝產物，一般具有抗腫瘤、抗炎、抗過 敏、抗氧化、抗病毒、降血糖、治療白血病、防治心腦血管疾病等多種生物活性。在本發明中， 式I所示糖苷化合物能夠提高呼吸道上皮細胞Beas_2B細胞活性，抑制人類致病菌和革蘭氏 陽性菌。
[0058] 本發明還提供了上述技術方案所述的糖苷化合物或上述技術方案所述制備方法 制備得到的糖苷化合物在制備提高呼吸道上皮細胞Beas_2B細胞活性的藥物中的應用。所 述糖苷化合物的有效劑量范圍為1~5μΜ，更優選為3μΜ。
[0059] 本發明還提供了上述技術方案所述的糖苷化合物或上述技術方案所述制備方法 制備得到的糖苷化合物在制備抑制革蘭氏陽性菌的藥物中的應用。在本發明中，所述革蘭 氏陽性菌優選為枯草芽孢桿菌和/或鏈球菌。所述糖苷化合物產生50%抑制所需的濃度 (IC50)為 30 ~40yg/mL，更優選為 35yg/mL。
[0060] 本發明還提供了上述技術方案所述的糖苷化合物或上述技術方案所述制備方法 制備得到的糖苷化合物在制備抑制人類致病菌藥物中的應用。在本發明中，所述人類致病 菌優選為新型隱球菌。所述糖苷化合物產生50 %抑制所需的濃度（IC50)為40~50yg/mL，更 優選為45yg/mL。
[0061] 下面結合具體實施例對本發明所述的糖苷化合物及其制備方法做進一步詳細的 介紹，本發明的技術方案包括但不限于以下實施例。
[0062] 實施例1
[0063]以50 %的接種量將樹舌靈芝和云芝栓孔菌接種于500mL規格的三角瓶(含100mL培 養基）中，其中云芝栓孔菌接種時間比樹舌靈芝要延遲2天。待云芝栓孔菌培養3天后，待兩 菌株菌絲體長到綠豆粒大小時，以50 %的接種量(50mL，棄去部分培養基)將樹舌靈芝菌絲 體連同發酵液接種到云芝栓孔菌發酵液中，并添加50mL新鮮培養基，28°C下，160rpm水平搖 床上培養20天。
[0064]培養基含有葡萄糖10g/L，磷酸二氫鉀1.2g/L，硫酸鎂0.35g/L和蛋白胨2g/L。共培 養20天，收集發酵液。
[0065]取30L樹舌靈芝和云芝栓孔菌共培養得到的發酵液，按體積比1:1加入乙酸乙酯連 續萃取3次;合并萃取液，減壓旋蒸得浸膏l.lg。在硅膠柱（26 X457mm，青島海洋化工廠， 200-300目）上，使用石油醚-乙酸乙酯（20:1,10:1,5:1,1:1)，二氯甲烷-甲醇（20:1，10:1， 5:1，1:1，0:1)體系作為洗脫液，對浸膏進行層析，得到9個組分，質譜檢測發現，其中組分6 (二氯甲烷:水=10:1)和7(二氯甲烷:水= 5:1)中均含有本申請式I所示糖苷化合物(m/z+ 300.1075)，合并組分6和7，得到糖苷化合物粗組分60mg。接著對糖苷化合物粗組分進行中 壓分離（艾杰爾Flash分離柱：C0140080-0)，以甲醇-水體系進行洗脫(MeOH%，10-90%， 60min;流速30mL/min)，質譜檢測合并含式I所示糖苷化合物的餾分，共30mg。然后在硅膠柱 上進一步分離純化，以二氯甲燒-甲醇(體積比40:1,20:1,10:1,8:1,5:1,1:1，0:1)體系，每 一比例洗脫液三倍柱體積洗脫，質譜檢測發現式I所示糖苷化合物存在于8:1和5:1洗脫比 例的洗脫液中。合并含式I所示糖苷化合物的餾分，然后在高壓制備(HPLC)上進行進一步純 化，HPLC參數如下：制備柱:Venusi 1 XBP Cl8(2) (21 · 2x250mm)，流速:8mL/min;流動相A:超 純水;流動相B:甲醇；梯度：10%，5min; 10-90%，40min;接樣體積:8mL。合并含m/z 300組 分，質譜檢測，得式I所示糖苷化合物的單體9mg。
[0066] 實施例2
[0067]以40%的接種量將木靈芝和云芝栓孔菌接種于1000mL規格的三角瓶(含200mL培 養基）中，其中云芝栓孔菌接種時間比木靈芝要延遲1天。待云芝栓孔菌培養4天后，待兩菌 株菌絲體均有綠豆粒大小時，以40%的接種量(50mL)將木靈芝菌絲體連同發酵液接種到云 芝栓孔菌發酵液中，并添加 lOOmL新鮮培養基，26°C下，180rpm水平搖床上培養18天。
[0068]培養基含有葡萄糖10g/L，磷酸二氫鉀lg/L，硫酸鎂0.5g/L和蛋白胨2g/L。共培養 18天，收集發酵液。
[0069]取20L木靈芝和云芝栓孔菌共培養得到的發酵液，減壓旋蒸濃縮至100mL，然后以 80%乙醇靜置沉淀多糖。離心取上清，濃縮至200mL，以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁 醇等體積分別萃取3次，質譜檢測發現本申請式I所示糖苷化合物(m/z+300.1075)主要集中 在二氯甲烷和乙酸乙酯萃取層。合并兩萃取相，濃縮得浸膏300mg。在艾杰爾中壓分離系統 上對浸膏進行中壓分離(Flash分離柱:C0140080-0)，以甲醇-水體系進行洗脫(1 6〇!1%，1〇-90%，60min;30mL/min)，質譜檢測合并含式I所示糖苷化合物的餾分，共50mg。然后在高壓 制備(HPLC)上進行純化，HPLC參數如下：制備柱:Venusil XBP C18(2)(21.2x250mm)，流速： 8mL/min;流動相A:超純水;流動相B:甲醇;梯度：10%B，5min; 10-90，40min。質譜檢測， 合并含m/z 300組分共10mg。為進一步純化粗餾分，在高壓制備(HPLC)上以Agilent Z0RBAX SB-C18(9.4x150mm)半制備柱進行分離，流速:5mL/min;流動相A:超純水;流動相B:甲醇;梯 度：10-25 ，60min。質譜檢測，得式I所示糖苷化合物的單體6.7mg。
[0070] 實施例3
[0071] 化合物的分離及定性
[0072]以45%的接種量將樹舌靈芝和云芝栓孔菌接種于500mL三角瓶(含100mL培養基） 中，其中云芝栓孔菌接種時間比樹舌靈芝要延遲2天。待云芝栓孔菌培養4天后，待兩菌株菌 絲體均有綠豆粒大小時，以45%的接種量將樹舌靈芝菌絲體連同發酵液接種到云芝栓孔菌 培養的發酵罐中，28 °C下，160rpm轉速下培養23天。
[0073]培養基含有葡萄糖9g/L，磷酸二氫鉀1.2g/L，硫酸鎂0.35g//L和蛋白胨2g/L。共培 養23天，收集發酵液。
[0074] 取10L樹舌靈芝和云芝栓孔菌共培養得到的發酵液，凍干得干粉900mg。以石油醚、 二氯甲烷、乙酸乙酯和甲醇超聲提取，分別萃取3次，質譜檢測發現本申請式I所示糖苷化合 物(m/z+300.1075)主要集中在二氯甲烷和乙酸乙酯萃取層。合并兩萃取相，濃縮得浸膏 200mg。在硅膠柱（26 X457mm，青島海洋化工廠，200-300目）上，使用二氯甲烷-甲醇（40:1， 20:1，10:1，5:1，1:1，0:1)體系作為洗脫液，對浸膏進行層析，得到6個組分，質譜檢測發現 本申請式I所示糖苷化合物主要集中在10:1和5:1的洗脫液中，減壓旋干得60mg粗組分。在 艾杰爾中壓分離系統上對浸膏進行中壓分離(Flash分離柱C0140080-0)，以甲醇-水體系進 行洗脫(MeOH%，20-60%，50min，30mL/min)，質譜檢測合并含式I所示糖苷化合物的餾分， 共20mg。然后在高壓制備（HPLC)上進行純化，HPLC參數如下：制備柱：Venusil HILIC (21.2x250mm)，流速:8mL/min;流動相A:超純水;流動相B:甲醇;梯度:80_20%B，60min。質 譜檢測，合并含m/z 300組分共9mg。為進一步純化粗餾分，在高壓制備(HPLC)上以Agilent ZORBAX SB_C18(9.4x150mm)半制備柱進行分離，流速:5mL/min;流動相A:超純水;流動相B: 甲醇;梯度：10%，5min; 10-30%，40min。質譜檢測，得式I所示糖苷化合物的單體3.7mg。
[0075]式I所示糖苷化合物為：
[0076] N-(4_甲氧基苯基）甲酰胺2-氧-β-D-木糖苷。
[0077]通過以下步驟鑒別式I所示糖苷化合物的化學結構：
[0078]分離糖苷化合物的[M+H]+分子量為300.1075。該分子量由高分辨率電噴霧電離質 譜儀（high-resolution electron spray ionization mass spectrometer，HRESIMS)在正 離子模式下采集得到的。分離糖苷化合物的分子式為C13H 17N〇7,且不飽和度為6。
[0079] 利用以下方法評估分離化合物的結構：使用6 0 0 Μ Η z核磁共振光譜（NM R spectrometer)測定質子核磁共振GH-NMR)、13C核磁共振(13C-NMR)、異核多鍵相關核磁共振 光譜（HMBC NMR spectrum)、相關譜（COSY)、異核單量子相關核磁共振光譜（HSQC匪R spectrum)、碳譜DEPT90。譜和碳譜DEPT135°譜。氘溶劑為CD 30D。
[0080]糖苷化合物的一維質子核磁共振（proton nuclear magnetic resonance，1H-NMR)圖譜如圖 1所示。匪R(600MHz，Me0D):SH 8.27(^,1^ 8),8.04(^,(1),6.76(^,(1), 6.62(^^),4.81(^,(1),3.95(^,111), 3.77(3H,brs) ,3.58(^,111) ,3.50(^,(1) ,3.44(^,8), 3.36(1!1，8)。匪1?圖譜的質子信號顯示出，三個芳香烴質子、一個與苯環連接的甲氧基、一個 醛基質子以及六元糖環質子。
[0081 ] 糖苷化合物的一維13C核磁共振(One-dimensional 13C NMR)圖譜如圖2所示，其中 芳環的化學位移在SC 159.0、149.0、123.9、122.4、108.4、104.5,甲氧基的碳信號位于 56.9，醛基碳信號位于6(：161.4。六元糖環的碳信號位于6(：104.4、77.5、74.9、71.3、67.4。 根據HRESIMS分析，分離化合物的不飽和度如下:芳環具有4個不飽和度，醛基和六元糖環各 具有1個不飽和度。
[0082]糖苷化合物的二維異核多鍵相關（Heteronuclear Multiple Bond Coherence， HMBC)核磁共振圖譜如圖3所示。在δΗ 3.77處和碳化學位移為δ(： 159.0處、δΗ4.81處和碳化 學位移為SC 149.0處均具有遠程偶合。
[0083] 糖苷化合物的相關譜（correlation spectroscopy，COSY)二維核磁共振圖譜如圖 4所示。δΗ 3.77與δΗ 6.76、6.62相關。亦即證實，甲氧基與苯環直接連接。
[0084] 糖苷化合物的二維異核單量子相關（Heteronuclear Singular Quantum Coherence，HSQC)核磁共振圖譜如圖5所示。碳化學位移（δ〇與質子化學位移有關，并位于 以下10個位置：161.4、123.9、108.4、104.5、104.4、77.5、74.9、71.3、67.4和56.9。
[0085] 糖苷化合物的碳譜DEPT90。譜如圖6所示。CH信號SC123.9、108.4和104.5亦顯示有 苯環存在。
[0086] 糖苷化合物的碳譜DEPT135。譜如圖7所示。SC67.4顯示存在CH2，SC56.9亦顯示甲 氧基的存在。
[0087] 糖苷化合物的咕匪1?數據（6001!^，于0)300中）和13(：匪1?數據（15010^，于0)300 中）統計見表1，由表1可得:糖苷化合物的結構為:N-(4-甲氧基苯基）甲酰胺2-氧-β-D-木糖 苷，即式I所示的糖苷化合物。
[0088] 表1糖苷化合物的咕M1R數據（600MHz，于CD30D中）和13C匪R數據（150MHz，于 CD30D 中）
[0090] 實施例2
[0091 ]式I所示糖苷化合物的提高呼吸道上皮細胞BEAS-2B細胞活性作用 [0092] BEAS-2B細胞系（人永生化支氣管上皮細胞系）菌種來源于American Type Culture Col lection (Manassas，VA, USA)。所用培養基為DMEM(HyClone)含 10 % FBS( fetal bovine serum,Gibco)，培養條件為37°C，5%C〇2的潮濕環境。通過CellTiter96、i〇 \Queous One Solution(Promega,Madison，WI，USA)對細胞活性進行測定。細胞以3000細胞每孔的濃 度接種于96孔板進行過夜培養，并給以不同濃度式I所示糖苷化合物處理24h。依據使用手 冊，CellTiter9.6..?AQueous One Solution反應試劑添加到每個孔中，繼續培養4h。然后在 微孔板分光光度計(Multiskan FC,Thermo scientific)490nm波長下測定吸光值。每一濃 度6組生物平行。
[0093] 表2不同濃度式I所示糖苷化合物處理后的BEAS-2B細胞活性
[0095] *p<0.05;與對照組(無式I所示糖苷化合物處理)的差異顯著性 [0096] 不同濃度式I所示糖苷化合物處理后BEAS-2B細胞活性變化如表2和圖8所示，式I 所示糖苷化合物能顯著提高BEAS-2B細胞的細胞活性，相對于對照組，活性提高最高達1.6 倍，由此顯示此化合物具有活化BEAS-2B細胞的潛力。在0到2μΜ的濃度范圍內，式I所示糖苷 化合物提高細胞活性的能力隨劑量增加而增強，在2μΜ時具有最高的提高活性能力;濃度繼 續增加則活性降低，推測是由于濃度過高，引起滲透壓增加，不利于細胞生長。
[0097] 比較例1
[0098]式I所示糖苷化合物的抗革蘭氏陽性菌的作用
[00"] 取相同培養時間的云芝栓孔菌和樹舌靈芝單培養發酵液150mL，分別濃縮至5mL， 過濾除菌，備用。供試菌株(枯草芽孢桿菌，鏈球菌)在試管內活化后，分別取200yL均勻涂布 于固體培養上，每個菌三組平行。然后每個平板成三角形打孔，其中兩個孔內分別添加200μ L濃縮后菌液，剩下一孔添加純化的0.17mM式I所示糖苷化合物。于28°C條件下培養12h后觀 察。
[0100]如圖9和圖10所示，式I所示糖苷化合物具有一定的抑制枯草芽孢桿菌和鏈球菌的 作用，抑菌圈的直徑均在lcm以上，而云芝栓孔菌和樹舌靈芝的單培養發酵液均未見到有明 顯的抑制作用。
[0101] 比較例2
[0102] 式I所示糖苷化合物的抗人類致病菌的作用
[0103]取相同培養時間的云芝栓孔菌和樹舌靈芝單培養發酵液150mL，分別濃縮至5mL， 過濾除菌，備用。供試菌株新型隱球菌在試管內活化后，分別取200yL均勻涂布于固體培養 上，每個菌三組平行。然后每個平板成三角形打孔，其中兩個孔內分別添加200yL濃縮后菌 液，剩下一孔添加純化的0.17mM單式I所示糖苷化合物。于28 °C條件下培養12h后觀察。
[0104]如圖11所示，式I所示糖苷化合物具有一定的抑制新型隱球菌的作用，抑菌圈的直 徑均在lcm以上，而云芝栓孔菌和樹舌靈芝的單培養發酵液均未見到有明顯的抑制作用。
[0105]以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人 員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應 視為本發明的保護范圍。
【主權項】
1. 具有式I所示結構的糖苷化合物，2. 權利要求1所述的糖苷化合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： 以云芝栓孔菌和靈芝屬真菌發酵共培養，得到具有式I所示結構的糖苷化合物。3. 根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述靈芝屬真菌為樹舌靈芝或木靈 芝。4. 根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述共培養具體為： 將靈芝屬真菌接種后進行發酵培養； 在所述靈芝屬真菌接種1~2天后，將云芝栓孔菌接種進行發酵培養； 待云芝栓孔菌培養3~4天后，將所述靈芝屬真菌的發酵液接種于云芝栓孔菌發酵液中 進行發酵共培養18~23天，得到糖苷化合物。5. 根據權利要求4的制備方法，其特征在于，所述靈芝屬真菌的發酵液在云芝栓孔菌發 酵液中的接種量40~60 %。6. 根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述發酵共培養的培養溫度為26~28 °C； 所述發酵共培養在搖床上進行，搖床的轉速為160~180rpm。7. 根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述發酵共培養的培養基包括以下質 量含量的組分:葡萄糖8~12g/L，磷酸二氫鉀0.8~1.4g/L，硫酸鎂0.3~0.5g/L，蛋白胨1.5 ~3g/L，余量的水。8. 權利要求1所述的糖苷化合物或權利要求2~7任意一項所述制備方法制備得到的糖 苷化合物在制備提高呼吸道上皮細胞Beas_2B細胞活性的藥物中的應用。9. 權利要求1所述的糖苷化合物或權利要求2~7任意一項所述制備方法制備得到的糖 苷化合物在制備抑制革蘭氏陽性菌的藥物中的應用。10. 權利要求1所述的糖苷化合物或權利要求2~7任意一項所述制備方法制備得到的 糖苷化合物在制備抑制人類致病菌藥物中的應用。
【文檔編號】C07H15/203GK105949254SQ201610394615
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年6月6日
【發明人】楊松, 姚陸, 徐曉燕, 申曉婷
【申請人】青島農業大學