專利名稱:瑞藏芯衍生物的制備方法及其在醫藥上的應用的制作方法
本發明為關于化合物瑞藏芯的一系列的新衍生物。本發明還提供了這類化合物的制備工藝以及為應用這類化合物而作的制劑及其使用方法。
瑞藏芯為一具有如下結構式的已知化合物
瑞藏芯及其醋酸酯曾在抗菌素雜志(J.Antibiotics)37卷354頁(1984)上公布，其抗癌活性曾在日本腫瘤協會第43屆全會文摘上公布(Abstracts of the 43rd GeneraL Meet-ing of the Japanese Cancer Society)，第243頁，標題號1005(1984)。
1984年12月18日于夏威夷州檀香山召開的太平洋區域協會1984年國際化學會議上報告了瑞藏芯-2-烯。
我們現在已經發現了一系列的瑞藏芯的衍生物，它們具有遠離高于瑞藏芯及其醋酸酯的抗癌活性并具有較瑞藏芯本身為低的毒性。
本發明的化合物為具有如結構(Ⅰ)之物
其中R代表一個具有至少2個碳原子的烷烴;而A代表一個額外的碳-碳鍵或一個氧原子，以及合于制藥的鹽類及其閉環內酯。
相應的化合物(Ⅰ)的閉環內酯可以用結構式(Ⅱ)代表
其中R及A如上所述。
式(Ⅱ)化合物可以由一種結構式(Ⅲ)化合物
(其中A如上述)與一種結構式(Ⅳ)的羧酸(其中R如上述)或其活性衍生物反應而制備
式(Ⅰ)化合物的鹽類可以由式(Ⅱ)化合物與一種適當的堿反應而制備。式(Ⅰ)的游離酸可以由其鹽與一種酸反應而制得。
本發明也提供由一種抗腫瘤劑與一種適合制藥的載體式稀釋劑混合組成的藥物組合物，其中抗腫瘤劑至少是一種化合物，它是從式(Ⅰ)化合物，式(Ⅱ)化合物以及該式(Ⅰ)化合物的適合制藥的鹽類這組化合物中挑選出來的。
本發明還提供一種治療方法，用一種有效劑量的抗腫瘤藥對一種患腫瘤的動物給藥，特別是哺乳類動物，包括人類。其中所說的抗腫瘤藥至少為一種化合物，它選自式(Ⅰ)化合物，式(Ⅱ)化合物以及該式(Ⅰ)化合物的鹽類這組化合物。
本發明的化合物中，R代表一個最少有2個碳原子的烷基。這種烷基可以是直鏈的或支鏈的并且原則上其所包含的碳原子數可超過實用的某種可得到的有關的相應酸，而沒有上限。大多數情況下，實用的上限或許約為40碳原子，更為可取的約為30碳原子。這樣的基團的實例包括乙基，丙基，異丙基，丁基，仲丁基，異丁基，叔丁基，戊基，異戊基，新戊基，叔戊基，己基，1-甲基戊基，2-甲基戊基，3-甲基戊基，異己基，庚基，1-甲基己基，2-甲基己基，5-甲基己基，3-乙基戊基，辛基，2-甲基庚基，6-甲基庚基，2-乙基己基，2-乙基-3-甲基戊基，3-乙基-2-甲基戊基，壬基，2-甲基辛基，7-甲基辛基，4-乙基庚基，3-乙基-2-甲基己基，2-乙基-1-甲基己基，癸基，2-甲基壬基，8-甲基壬基，5-乙基辛基，3-乙基-2-甲基庚基，3，3-二乙基己基，十一烷基，2-甲基癸基，9-甲基癸基，4-乙基壬基，3，5-二甲基壬基，3-丙基辛基，5-乙基-4-甲基辛基，十二烷基，1-甲基十一烷基，10-甲基十一烷基，3-乙基癸基，5-丙基壬基，3，5-二乙基辛基，十三烷基，11-甲基十二烷基，7-乙基十一烷基，4-丙基癸基，5-乙基-3-甲基癸基，3-戊基辛基，十四烷基，12-甲基十三烷基，8-乙基十二烷基，6-丙基十一烷基，4-丁基癸基，2-戊基壬基，十五烷基，13-甲基十四烷基，10-乙基十三烷基，7-丙基十二烷基，5-乙基-3-甲基十二烷基，4-戊基癸基，十六烷基，14-甲基十五烷基，6-乙基十四烷基，4-丙基十三烷基，2-丁基十二烷基，十七烷基，15-甲基十六烷基，7-乙基十五烷基，3-丙基十四烷基，5-戊基十二烷基，十八烷基，16-甲基十七烷基，5-丙基十五烷基，十九烷基，17-甲基十八烷基，4-乙基十七烷基，廿烷基18-甲基十九烷基，3-乙基十八烷基，廿一烷基，廿二烷基，廿三烷基，廿四烷基及廿五烷基。在這些基團中，我們認為較好的是C3-C17，更好的是C7-C13烷基基團，無論是直鏈的或是支鏈的。
式(Ⅰ)化合物為游離酸，因此可以與堿生成鹽，倘若生成的鹽是適合制藥的，這在工藝方面眾所周知，它意味著這種鹽要比原來的酸不能減少(或者不超過允許程度地減少)活性或者增加(或者不超過允許程度地增加)毒性，對于生成鹽的正離子的性質也無干擾。適合的鹽類的實例包括金屬鹽與氨基酸生成的鹽及與氨和有機胺生成的鹽。適合的金屬鹽包括與堿金屬，例如鈉或鉀;堿土金屬，例如鈣或鎂;以及其它適于制藥的金屬，例如鋁、鐵、鋅、銅、
及鈷生成的鹽。但是較可取的是那些與堿金屬，堿土金屬及鋁生成的鹽，而最為可取的是鈉、鉀、鈣及鋁鹽。可以與式(Ⅰ)化合物成鹽的氨基酸的實例包括堿性氨基酸如精氨酸，賴氨酸，組氨酸，α，γ-二氨基丁酸及鳥氨酸。可以與式(Ⅰ)化合物生成鹽的胺類的實例包括叔-辛基胺，二芐胺，二環己基胺，嗎啉，D-苯基甘氨酸的烷基酯類及D-葡糖胺。
在本發明化合物命名方面，是按照純化學及應用化學國際聯合會的建議采用半系統(Semi Systematical)命名法依“有機化學命名原則“(Nomencla ture of Organic Chemistry)F節，用rhizoxin作為基本名稱。
如此，式(Ⅱ)化合物其中A代表一個氧原子時就是瑞藏芯與一種結構式為RCOOH的酸所形成的簡單的酯，因而被命名為瑞藏芯-13-基酰化物。瑞藏芯的開環類似物叫作瑞藏芯-5b-酸，因此式(Ⅰ)化合物A代一個氧原子的叫作其13-酰氧基衍生物，例如13-酰氧基-13-去羥瑞藏芯-5b-酸。
A代表一個附加的碳-碳鍵的式(Ⅱ)化合物可被認為是瑞藏芯-2-烯的衍生物，更正規的名稱是2，3-去氧瑞藏芯-2-烯。因此，A代表這樣一種鍵的式(Ⅰ)及(Ⅱ)化合物可分別叫13-酰氧基-13-去羥-2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-5b-酸，以及2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-13-基酰化物。
本發明化合物的實例在下表中給出，并且在下文中用表中的序號來代表這些化合物。
1.13-丁酰氧基-13-去羥瑞藏芯-5b-酸2.瑞藏芯-13-基丁酸酯3.13-戊酰氧基-13-去羥瑞藏芯-5b-酸4.瑞藏芯-13-基戊酸酯5.13-異戊酰氧基-13-去羥瑞藏芯-5b-酸6.瑞藏芯-13-基異戊酸酯7.13-己酰氧基-13-去羥瑞藏芯-5b-酸8.瑞藏芯-13-基己酸酯9.13-(3，3-二甲丁酰氧基)-13-去羥瑞藏芯-5b-酸10.瑞藏芯-13-基3，3-二甲丁酸酯11.13-庚酰氧基-13-去羥瑞藏芯-5b-酸12.瑞藏芯-13-基庚酸酯13.13-(5-甲-己酰氧基)-13-去羥瑞藏芯-5b-酸
14.瑞藏芯-13-基5-甲基己酸酯15.13-(4-甲基己酰氧基)-13-去羥瑞藏芯-5b-酸16.瑞藏芯-13-基4-甲基己酸酯17.13-辛酰氧基-13-去羥瑞藏芯-5b-酸18.瑞藏芯-13-基辛酸酯19.13-(6-甲基庚酰氧基)-13-去羥瑞藏芯-5b-酸20.瑞藏芯-13-基6-甲基庚酸酯21.13-(4-乙基己酰氧基)-13-去羥瑞藏芯-5b-酸22.瑞藏芯-13-基4-乙基己酸酯23.13-壬酰氧基-13-去羥瑞藏芯-5b-酸24.瑞藏芯-13-基壬酸酯25.13-(4-乙基-3-甲基己酰氧基)-13-去羥瑞藏芯-5b-酸26.瑞藏芯-13-基4-乙基-3-甲基己酸酯27.13-(7-甲基辛酰氧基)-13-去羥瑞藏芯-5b-酸28.瑞藏芯-13-基7-甲基辛酸酯29.13-癸酰氧基-13-去羥瑞藏芯-5b-酸30.瑞藏芯-13-基癸酸酯31.13-(8-甲基壬酰氧基)-13-去羥瑞藏芯-5b-酸32.瑞藏芯-13-基8-甲基壬酸酯33.13-(5-乙基辛酰氧基)-13-去羥瑞藏芯-5b-酸34.瑞藏芯-13-基5-乙基辛酸酯35.13-十一酰氧基-13-去羥瑞藏芯-5b-酸36.瑞藏芯-13-基十一酸酯
37.13-(9-甲基癸酰氧基)-13-去羥瑞藏芯-5b-酸38.瑞藏芯-13-基9-甲基癸酸酯39.13-(6-乙基壬酰氧基)-13-去羥瑞藏芯-5b-酸40.瑞藏芯-13-基6-乙基壬酸酯41.13-十二酰氧基-13-去羥瑞藏芯-5b-酸42.瑞藏芯-13-基十二酸酯43.13-(10-甲基十一酰氧基)-13-去羥瑞藏芯-5b-酸44.瑞藏芯-13-基10-甲基十一酸酯45.13-(6-乙基-5-甲基壬酰氧基)-13-去羥瑞藏芯-5b-酸46.瑞藏芯-13-基6-乙基-5-甲基壬酸酯47.13-十三酰氧基-13-去羥瑞藏芯-5b-酸48.瑞藏芯-13-基十三酸酯49.13-(11-甲基十二酰氧基)-13-去羥瑞藏芯-5b-酸50.瑞藏芯-13-基11-甲基十二酸酯51.13-(4，6-二乙基壬酰氧基)-13-去羥瑞藏芯-5b-酸52.瑞藏芯-13-基4，6-二乙基壬酸酯53.13-十四酰氧基-13-去羥瑞藏芯-5b-酸54.瑞藏芯-13-基十四酸酯55.13-(8-乙基十二酰氧基)-13-去羥瑞藏芯-5b-酸56.瑞藏芯-13-基8-乙基十二酸酯57.13-十五酰氧基-13-去羥瑞藏芯-5b-酸58.瑞藏芯-13-基十五酸酯59.13-(9-乙基十三酰氧基)-13-去羥瑞藏芯-5b-酸
60.瑞藏芯-13-基9-乙基十三酸酯61.13-十六酰氧基-13-去羥瑞藏芯-5b-酸62.瑞藏芯-13-基十六酸酯63.13-(8-丙基十三酰氧基)-13-去羥瑞藏芯-5b-酸64.瑞藏芯-13-基8-丙基十三酸酯65.13-十七酰氧基-13-去羥瑞藏芯-5b-酸66.瑞藏芯-13-基十七酸酯67.13-(7-乙基十五酰氧基)-13-去羥瑞藏芯-5b-酸68.瑞藏芯-13-基7-乙基十五酸酯69.13-十八酰氧基-13-去羥瑞藏芯-5b-酸70.瑞藏芯-13-基十八酸酯71.13-(8-乙基十六酰氧基)-13-去羥瑞藏芯-5b-酸72.瑞藏芯-13-基8-乙基十六酸酯73.13-十九酰氧基-13-去羥瑞藏芯-5b-酸74.瑞藏芯-13-基十九酸酯75.13-廿酰氧基-13-去羥瑞藏芯-5b-酸76.瑞藏芯-13-基廿酸酯77.13-庚酰氧基-13-去羥-2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-5b-酸78.2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-13-基庚酸酯79.13-辛酰氧基-13-去羥-2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-5b-酸80.2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-13-基辛酸酯
81.13-壬酰氧基-13-去羥-2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-5b-酸82.2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-13-基壬酸酯83.13-(7-甲基辛酰氧基)-13-去羥-2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-5b-酸84.2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-13-基7-甲基辛酸酯85.13-癸酰氧基-13-去羥-2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-5b-酸86.2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-13-基癸酸酯87.13-(8-甲基壬酰氧基)-13-去羥-2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-5b-酸88.2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-13-基8-甲基壬酸酯89.13-十一酰氧基-13-去羥-2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-5b-酸90.2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-13-基十一酸酯91.13-(9-甲基癸酰氧基)-13-去羥-2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-5b-酸92.2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-13-基9-甲基癸酸酯93.13-十二酰氧基-13-去羥-2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-5b-酸94.2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-13-基十二酸酯95.13-十三酰氧基-13-去羥-2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-5b-酸96.2，3-去氧瑞藏芯-2-烯-13-基十三酸酯在上表列出的化合物中第18號，29號，30號，42號及54號化合物是特別好的。
本發明的化合物由于其各種取代基的構型可有各種形式的幾何異構體，并且也由于有許多不對稱碳原子而有各種形式的光學異構體。這些異構體及其混合物可用一個通式所代表。但本發明既包括各單個的異構體又包括其混合物。通常，我們寧愿要本發明的化合物具有與瑞藏芯相同的構型。
式(Ⅱ)的閉環內酯衍生物可由上述式(Ⅲ)化合物與一個式(Ⅳ)羧酸或其活性衍生物反應而得，此式(Ⅲ)物可以是瑞藏芯(A為一氧原子)或瑞藏芯-2-烯(A為一附加碳-碳鍵)。這種反應為一簡單的和常規的酰化反應并可用眾所周知酰化反應方法來進行。
在使用式(Ⅳ)羧酸本身時，反應最好是在有一種具脫水效能的縮合劑的情況下進行。這種縮合劑以二環己基碳化二亞胺(dicyc-lohexylcarbodiimide)及碳酰二咪唑(Carbonyldiim-idazole)為適宜。反應最好在有溶媒存在情況下進行，倘若這溶媒對反應無不良影響則對其性質并不嚴求。適宜的溶媒實例包括芳香烴，如苯、甲苯或二甲苯;脂肪烴，如己烷，庚烷環己烷或石油醚;鹵代烴，特別是鹵代脂肪烴，如氯仿，四氯化碳或二氯甲烷;以及醚類如四氫呋喃或二噁烷。反應將在很寬的溫度范圍中發生并且不嚴格要求選擇準確的溫度。我們通常發現進行反應的適宜溫度在0～40℃范圍內，而最好是在室溫左右。
適宜的式(Ⅳ)羧酸的活性衍生物包括酰基鹵，酸酐，混合的酸酐，活性酯及活性酰胺，其中較佳的是酰基鹵(如酰基氯或酰基溴)及酸酐(包括混合酸酐)。
使用酰基鹵反應時，最好是在有一種惰性溶媒及一種酸結合劑存在的情況下進行。倘若這種溶媒無不利影響于反應，本發明對所使用的溶媒的性質不嚴格要求。溶媒最好是有機溶媒，例如芳香烴，如苯、甲苯或二甲苯;鹵代脂肪烴，如氯仿，二氯甲烷或1，1，2-三氯乙烷;醚類，如二乙醚，四氫呋喃或二噁烷;脂肪酸的二烷基酰胺類，如二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺;腈類，如乙腈;酮類，如丙酮;二甲基亞砜;以及吡啶。酸結合劑的作用是除去反應中產生的鹵化氫，可以使用任何能與鹵化氫反應并從反應中除去它們的化合物。適宜的酸結合劑的實例包括堿金屬氫氧化物，如氫氧化鈉或氫氧化鉀;堿金屬碳酸鹽類，如碳酸鈉或碳酸鉀;以及有機堿類，如三乙胺，吡啶，4-二甲氨基吡啶或1-甲基咪唑。反應可以在廣泛的溫度范圍進行，但最好是在-10℃～+130℃。
使用式(Ⅳ)化合物酸酐時，反應最好在有附加溶媒存在的情況下進行。但是，若使用足夠過剩的酸酐時，就無需附加溶媒。在使用溶媒的情況下，倘若它對反應無不利影響，對溶媒的性質不嚴格要求。適宜的溶媒實例包括芳香烴，如苯，甲苯或二甲苯;醚類，如二噁烷，四氫呋喃及二甘醇-二甲醚。反應將在廣泛的溫度范圍進行，但更佳的溫度范圍是室溫至160℃之內。
本反應的產物為式(Ⅱ)的內酯。適合制藥的式(Ⅰ)羧酸鹽類可以由式(Ⅱ)內酯與一種堿反應而制備。這是一種從內酯生成鹽的常規反應并且可以使用工藝中眾所周知的技術來進行。
例如，式(Ⅰ)羧酸的金屬鹽可以由式(Ⅱ)內酯與適當的金屬的氫氧化物或碳酸鹽反應而制備，最好在一種含水溶媒中反應。倘若溶媒對反應無不利影響，溶媒的性質不嚴格要求。適宜的溶媒包括水本身及水與一種或更多有機溶媒的混合物，例如一種醇，如甲醇或乙醇;一種醚，如乙二醇二甲醚或二噁烷;一種酮，如丙酮;或其它溶媒如象己烷，乙酸乙酯，二甲基甲酰胺，二甲基亞砜式吡啶。使用一種親水性有機溶媒與水的混合物會是特別好的。反應溫度無嚴格要求，我們通常喜歡在大約室溫進行反應。但如果需要，可以在微熱下進行。
為了避免在15位和1位的碳原子之間形成的內酯開裂，最好是在比較溫和的條件下進行開環反應，例如使用一種比較稀的堿溶液以及/或在比較低的溫度，例如在室溫范圍。
式(Ⅰ)羧酸的胺鹽可以由式(Ⅱ)內酯與一種胺反應而制備。最好在一種含水溶媒中進行。倘若溶媒對反應無不良影響，則對它的選用并不嚴格。適宜的溶媒包括水本身及水與一種或多種有機溶媒的混合物，例如一種醇，如甲醇或乙醇;一種醚，如四氫呋喃;一種腈，如乙腈;或一種酮，如丙酮。更好的溶媒是含水丙酮。反應最好在PH值7～8.5進行，而且，雖對反應溫度無特殊嚴格要求，我們寧愿在相對低的溫度反應以避免副反應。依此，溫度低于室溫更好些，最好是5～10℃。反應迅速完成。胺鹽也可以由一種鹽交換反應來產生，那就是說把一種所需要的胺的無機酸鹽(例如鹽酸)加到一種式(Ⅰ)化合物金屬鹽的水溶液中。
式(Ⅰ)羧酸的氨基酸鹽可以由式(Ⅱ)內酯與一種適當的氨基酸作用而制備，最好在含水溶媒中進行。倘若溶媒對反應無不利影響，對溶媒的選用并不嚴格，適宜的溶媒為含水溶媒，如水本身及水與一種或數種有機溶媒的混合物，例如一種醇，如甲醇或乙醇;或一種醚，如四氫呋喃。反應溫度可不嚴格，但在50℃～60℃將反應物加熱則可得到最好的結果。
式(Ⅰ)的游離酸可以由其鹽與一種酸作用而制備。反應可以用常規的方法進行，這在制備工藝中是眾所周知的。例如，反應最好在有溶媒存在時進行，倘若溶媒對反應無不利影響，對溶媒性質要求不嚴。適宜的溶媒包括，例如，甲醇，丙酮，二甲基甲酰胺及二甲基乙酰胺。將(Ⅰ)羧酸鹽溶于這類溶媒中，然后將化學計算量的或稍稍過剩的一種酸加入。倘若所用的酸對所需要的化合物無任何不利影響。對使用的酸的性質并無特殊規定且可使用任何有機或無機酸。適宜的酸類包括三氟乙酸，鹽酸及硫酸。
另外，式(Ⅰ)化合物可以由相當于式(Ⅲ)化合物的開環內酯與式(Ⅳ)化合物或其活性衍生物反應而得。但是，這不是目前寧愿采用的方法。
用上述任何方法制備所得的本發明的化合物都可以從反應混合物中收得，如需要，可以用任何常規的技術或其聯合技術來進一步純化。例如，一種適宜的收集操作由包括將反應混合物傾入水中;用一種與水不混溶的溶媒提取，溶媒如苯，乙醚或乙酸乙酯;如需要將提取液先干燥之后再蒸除溶媒，收得成品。
如需要，可以用吸附色譜技術精制，使用諸如活性碳或硅膠作為吸附劑，可用離子交換色譜法，可用凝膠過濾法，用一種適宜的吸附劑如Sophadex(商標)，或者用從一種有機溶媒中再結晶的方法，有機溶媒如乙醚，乙酸乙酯或氯仿。自然，如果適當，可以使用這些技術的聯合。
本發明各種工藝過程使用的起始原料為瑞藏芯，它可以由在一種培養基上培養一種產生瑞藏芯的霉菌，例如根霉菌(Rhizopus)屬，然后從培養肉湯中分離瑞藏芯。選用的霉菌比較好的是Rhizopus chinensis種而最好的為Rhizopus chinenis SANK21584。
Rhizopus chinensis SANK21584在20℃至47℃溫度范圍生長。它可以在馬鈴薯-葡萄糖瓊脂介質上在溫度26℃生長極快。毛狀的菌絲體生長很好。隨著孢子囊孢子的形成，菌絲的顏色從米色轉變成暗棕色。大多數的孢子囊孢子是不分枝的，而且一個到幾個孢子囊孢子都垂直地長在單一形狀的假根生長的部位。
孢子囊柄的大小為100-600×7-12微米。孢子囊為球狀至類球狀，其大小為50-120微米;當它們成熟時變成棕色。小柱為類球狀至橢園體，其大小為15-50微米。孢子囊孢子為棕色類球狀至橢園形，其大小為6-10×3-8微米。生成的分枝孢子有各種不同形態。沒有結合孢子形成。
SANK21584菌株已參照下列文獻進行鑒定，經過鑒定它是一種Rhizopus chinensis Saito菌株。
T.Inui等，“關于Rhizopus屬分類學的研究(Taxonom-ical studies on Genus Rhizopus)”，J.Gen.Appl.Microbiol.11卷，1-108頁(1965);
D.H.Ellis，“Rhizopus屬的諸嗜熱種及某些類似屬的孢子囊孢子的修飾(Sporangiospore Ornamentation of Thermophilic Rhizopus Species and Some Allied Genera”，Mycologia，73卷，511-523頁(1981)。
已于1985年2月14日以登記號ferm p-8093將Rhiz-opus chinensis SANK21584委托日本東京發酵研究所保存并且按布達佩斯條約規定的條件于1986年2月15日以登記號BP-989再行保存。
本發明化合物對于被植入了P388白血病細胞的小鼠顯示優越的抗腫瘤活性，因此可用作治療動物的特別是溫血動物如人類的這類腫瘤的抗腫瘤劑。
如象下面將在實例6中生理活性數據所證明的，本發明化合物對于被植入了這類腫瘤的試驗動物顯示一種明顯地延長壽命的能力，用延長壽命指數(ILS)來測量。ILS表示對動物或患者的在藥物的療效及其毒性之間的均衡的效果，因此，在劑量和ILS之間沒有一個簡單的關系。由于小值的ILS表示動物或患者的存活期較短(不管其死因是由于腫瘤或是藥物毒性)，而高值的ILS表示存活期較長，一個潛在的抗腫瘤藥的關鍵性的特征是增加其ILS值到最大，不管在達到最大ILS時劑量是多少;在這方面，評價抗腫瘤藥物的標準與用于大多數其它藥，包括抗菌素、降壓藥等，的標準不同。本發明化合物顯示出的ILS值說明它們具有潛在價值的抗腫瘤活性同時有比較低的毒性并且明顯地較瑞藏芯及其已知衍生物更好。
這些化合物可以任何適宜途徑給藥，例如非腸胃的途徑(例如靜脈、皮下或肌肉注射)或者用栓劑，或者以口服途徑(例如片劑，膠囊，粉劑或顆粒劑)。
當需要時，本發明化合物可以這樣給藥，但最好與一種常規的適于制藥的載體或稀釋劑結合在一起，以合于特定的給藥途徑。
例如，組合物可含有懸浮劑，穩定劑或分散劑，它可以粉劑形式提供而在給藥之前溶于適宜的溶劑中，例如無熱原滅菌的水溶劑。例如，這樣的粉劑可以將一種化合物的丙酮溶液滴注于玻璃小瓶，加入水然后將混合物凍干的方法來制造。口服的各種制劑可以作成片劑，膠囊，粉劑，顆粒或糖漿，其中含有適當量的本發明化合物。
注射制劑最好是作成含一個單位劑量的安瓿瓶或含幾倍劑量的小瓶。
如果需要，本發明化合物可以與其它抗癌藥合并使用，例如亞硝脲類藥，如ACNu或BCNu，順鉑(cisplastin)，5-氟脲嘧啶(5-Fu)，柔毛霉素(daunomycin)，亞德里亞霉素(adrimycin)，絲裂霉素C(mitomycinc)或足葉乙甙(eloposide)。
本發明化合物的劑量將依據病的性質及嚴重程度，也依據給藥途徑，次數及周期而改變。但是，為成人適合的劑量可以在每天1至100毫克，此劑量可以一次或分幾次給藥。
本發明化合物類的制備及其生物活性在下列實例中進一步闡明。
實例1瑞藏芯-13-基癸酸酯(第30號化合物)
在有625毫克(1毫摩爾)瑞藏芯及285毫克(1.5毫摩爾)癸酰氯的10毫升苯的溶液中在冰冷條件下加入250毫克(3.0毫摩爾)吡啶及催化劑量的4-二甲氨基吡啶，混合物在室溫攪拌約30分鐘。然后將反應混合物用稀鹽酸及水依次洗滌。然后用無水硫酸鈉干燥，在減壓下蒸去溶媒。殘留物用硅膠柱色譜法來精制，用95∶5容量比的苯及丙酮混合物洗脫，得到一結晶物，用甲醇再結晶得到500毫克標題化合物，白色結晶，熔點168-169℃。
紫外吸收光譜(CH3OH)λmaxnm(ε)297(43，700)，309(55，800)，323(41，100)。
紅外吸收光譜(CCl4)υmaxcm-12940，2855，1740，1580，1450，1225，1190，1110，1090。
電子碰撞質譜779(M+)，232。
實例2用實例1相同的操作但使用不同的酰氯制備下列各化合物
(1)瑞藏芯-13-基丁酸酯(2號化合物)R＝-CH2CH2CH3白色粉狀物紫外吸收光譜(CH3OH)λmaxnm(ε)297(44，400)，309(56，600)，323(41，700)。
紅外吸收光譜(CCl4)υmaxem-12970，2940，2870，1740，1580，1450，1380，1225，1190，1175，1110，1090。
電子碰撞質譜625(M+)，232(C-17至C-26a碎片)。
(2)瑞藏芯-13-基異戊酸酯(6號化合物)R＝-CH2CH(CH2)2白色粉狀物紫外吸收光譜(CH3OH)λmaxnm(ε)297(42，800)，309(55，200)，323(40，300)。
紅外吸收光譜(CCl4)υmaxcm-1
2970，2940，2870，1740，1580，1460，1225，1190，1110，1090。
電子碰撞質譜751(M+)，232。
(3)瑞藏芯-13-基辛酸酯(18號化合物)R＝-(CH2)6CH3白色粉狀物紫外吸收光譜(CH3OH)λmaxnm(ε)297(43，400)，309(55，200)，323(40，700)。
紅外吸收光譜(CCl4)υmaxcm-12970，2940，2855，1740，1580，1450，1225，1190，1110，1090。
電子碰撞質譜751(M+)，232(4)瑞藏芯-13-基十二酸酯(42號化合物)R＝-(CH2)10CH3白色結晶，熔點141-142℃。
紫外吸收光譜(CH3OH)λmaxnm(ε)296(42，800)，309(54，600)，323(40，300)。
紅外吸收光譜(CCl4)υmaxcm-12940，2855，1740，1580，1455，1225，1190，1110，1090。
電子碰撞質譜807(M+)，232。
(5)瑞藏芯-13-基十八酸酯(70號化合物)R＝-(CH2)16CH3白色結晶，熔點62-64℃。
紫外吸收光譜(CH3OH)λmaxnm(ε)297(40，500)，309(51，500)，323(38，100)。
紅外吸收光譜(CCl4)υmaxcm-1
2940，2855，1740，1580，1455，1225，1190，1110，1090。
電子碰撞質譜891(M+)，232。
(6)瑞藏芯-13-基十四酸酯(54號化合物)R＝-(CH2)12CH3白色結晶，熔點116.5-117.5℃。
紫外吸收光譜(乙醇)λmaxnm(ε)298(41800)，310(53400)，324(39800)。
紅外吸收光譜(KBr)υmaxcm-12925，2853，1736，1231，1187，1109，1084，983。
電子碰撞質譜835(M+)，232。
實例313-癸酰氧基-13-去羥瑞藏芯-56-酸鈉(化合物29號鈉鹽)
將2毫升(0.2毫摩爾)0.1N氫氧化鈉水溶液滴加到一個攪拌著的156毫克(0.2毫摩爾)瑞藏芯-13-基癸酸酯(如上述實例1法制備)溶于8毫升乙二醇二甲醚的溶液中，此混合物在室溫中攪拌10分鐘。然后在室溫減壓蒸除有機溶媒，將殘留的水溶液凍干，得到164毫克標題化合物，白色粉狀，熔點115-120℃。
紫外吸收光譜(CH3OH)λmaxnm(ε)297(40，200)，309(51，500)，323(37，900)。
紅外吸收光譜(CCl4)υmaxcm-13300(寬的)，2940，2855，1740，1575，1450，1410，1190，1110，1090。
電子碰撞質譜780(M+-ONa)，779(M+-HONa)，232(基峰)。
實例413-癸酰氧基-13-去羥瑞藏芯酸-5b(化合物29號)
將13-癸酰氧基-13-去羥瑞藏芯-5b-酸鈉(如上述實例3制備的)的樣品溶于甲醇并向其中加入1.1當量的0.1N鹽酸水溶液。將混合物經薄層色譜法檢查(硅膠60F-254，Merck)，顯示出標題化合物，相應的游離酸的斑點。使用容量比為4∶1的苯與異丙醇的混合物作展開劑，其Rf值為0.40;使用容量比為1∶1的苯與丙酮的混合物作展開劑，其Rf值為0.23。作為對照，瑞藏芯在這些展開劑中的Rf值分別為0.82和0.89。
實例52，3-去氧瑞藏芯-2-烯-13-基癸酸酯(化合物86號)。
將183毫克(0.3毫摩爾)瑞藏芯-2-烯(按后述制備而得)，100毫克(0.99毫摩爾)三乙胺及一個催化量的4-二甲胺基吡啶溶于10毫升干燥苯中，然后將86毫克(0.45毫摩爾)癸酰氯滴加到攪拌并冰冷的上述溶液中。繼續于室溫再攪拌一個小時，然后將反應混合物用水洗滌，以無水硫酸鎂干燥。減壓蒸除有機溶媒。殘留物經硅膠柱色譜法分離，用容量比為95∶5的苯與丙酮混合物洗脫，得到粗結晶，從甲醇重結晶，得165毫克標題化合物，白色結晶，熔點145-146℃。
紫外吸收光譜(CH3OH)λmaxnm(ε)297(44，000)，309(56，900)，323(41，500)。
紅外吸收光譜(CCl4)υmaxcm-12940，2855，1735，1650，1580，1450，1380，1320，1210，1195，1170，1110，1080，1040，980，965，電子碰撞質譜763(M+)，232(基峰)。
制備瑞藏芯-2-烯
從Rhizopus chinensis(FERM-8093)培養物中取一滿斜面的菌絲接種到一支500毫升錐形燒瓶中，瓶中有100毫升含有下列組分的培養基(重量百分數)葡萄糖 1% K2HPO40.75%乳糖 1% MgSO4.7H2O 0.25%多蛋白凍 1% (NH4)2SO40.2%KH2PO40.25%PH(滅菌前)6.8(在此以前培養基已在120℃45分鐘滅菌過)。在28℃震蕩培養24小時。
然后將得到的這種預接種過的液體200毫升轉移到一個500升罐中，內含300升與上述組分相的培養基，將此混合物在28℃培養95小時，培養時以每分鐘15公升的速度通氣，保持內壓1.0公斤/厘米2，攪拌200rpm。
反應終了時，將培養液加Celite(商標)助濾劑過濾，濾液用等容量的乙酸乙酯提取。將溶媒蒸除，殘留物經LH20柱色譜法分離，使用丙酮作洗脫劑，得到含有標題化合物的餾分。然將此餾分徑硅膠柱色譜法分離，使用一種容量比為85∶15的苯與丙酮的混合物洗脫，得到標題化合物與瑞藏芯的混合物。將此混合物使用LH20柱色譜法分離柱及硅膠色譜法分離進一步精制，得到純度約90%的標題化合物15毫克及約相同純度的瑞藏芯670毫克，這是從300升培養液中得到的。標題化合物最后使用ODS柱經高壓液相色譜法精制，得白色粉狀物，熔點125-128℃。
紫外吸收光譜(CH3OH)λmaxnm(ε)297(48，600)，309(64，400)，323(46，300)。
紅外吸收光譜(CCl4)υmaxcm-1
3580，2970，2940，2880，1740，1720，1650，1580，1450，1385，1320，1310，1220，1195，1170，1110，1080，1050，980，965。
電子碰撞質譜609(M+)，232(基峰)。
實例6生物活性試驗用的動物為CDF1種生長8周的雌性小鼠。將小鼠分成組，每組5支，同組內所有的小鼠作相同處理。每支小鼠腹腔內植入1×106小鼠白血病P-388(mouse leukemia P-388)細胞。
將下表中列出的試驗化合物懸浮在滅菌的生理鹽水中，將此懸浮液在植入白血病細胞后的第一，第五和第九天腹腔給藥。測定小鼠存活的期限，對照組除不給活性藥物外其它處理均相同。
抗腫瘤效果在下表中以延命率(ILS%)來表示，按下列等式計算ILS(%)＝(Dt/Dc-1)×100式中Dt＝試驗組生存的平均天數;
Dc＝對照組生存的平均天數;
在本次試驗中，Dc為10.6天本發明化合物在下表中用前表所定的標號標示。化合物A，B及C為瑞藏芯，瑞藏芯-2-稀及瑞藏芯-13-基乙酸酯。
上示的結果表明本發明化合物具有明顯的抗腫瘤活性。所有本發明化合物至少在一種劑量水平具有從98到241范圍的ILS值，這表明其抗腫瘤活性較瑞藏芯，瑞藏芯-2-烯及瑞藏芯-13-基乙酸酯都更高，而后三者的ILS的最高值分別為73(2毫克/公斤/日)，65(8毫克/公斤/日)及38(4毫克/公斤/日)。負的ILS值表明試驗組的平均生存期比對照組為低。這樣，瑞藏芯顯示了在2毫克/公斤/日劑量時其ILS值最高，但在劑量為6毫克/公斤/日時其毒性大于其抗腫瘤活性。另一方面，29號化合物直到一個劑量(那些試驗過的)為64毫克/公斤/日時才達到其最大的ILS值并且大多數本發明化合物在8毫克/公斤/日劑量時顯出它們的最大ILS值。
勘誤表CPCH866093文件名稱 頁 行 補正前 補正后說明書 1 倒2 遠離高 遠高2 4 烷烴 烷基27 2 (毫克/天/日) (毫克/公斤/日)(表)
權利要求
1.一種制備式(Ⅰ)化合物的過程
[其中R代表一個具有至少2個碳原子的烴基；和A代表一個額外的碳--碳鍵或一個氧原子]，及其適合制藥的鹽類及其閉環內酯的工藝過程，該工藝包括這些步驟
(其中A如上述)與-具式(Ⅳ)的羧酸(其中R如上述)或其活性衍生物反應，得式(Ⅱ)化合物
(其中R及A如上述)；(b)所述的式(Ⅱ)化合物與一種堿任意反應，得到一種所述的式(Ⅰ)化合物的鹽；并且(C)所述的鹽與一種酸任意反應，得到所述的式(Ⅰ)化合物。
2.根據權利要求
1的一種工藝過程，其中R在所述的式(Ⅳ)羧酸中代表一個C3-C17烴基團。
3.根據權利要求
1的一種工藝過程，其中R在所述的式(Ⅳ)羧酸中代表一個C7-C13烴基團。
4.根據權利要求
1的一種工藝過程，其中R在所述式(Ⅳ)羧酸中代表一個庚基，壬基，十一基或十三基團。
5.根據上述諸權利要求
中任何一種工藝過程，其中所述的式(Ⅲ)化合物為瑞藏芯本身。
6.根據權利要求
1至5中任何一種工藝過程，其中僅用步驟(a)來制備所述的式(Ⅱ)化合物。
7.根據權利要求
1一種得到瑞藏芯-13-基辛酸酯的工藝，其中所述的式(Ⅲ)化合物為瑞藏芯本身，所述的式(Ⅳ)羧酸為辛酸，且僅用步驟(a)。
8.根據權利要求
1一種得到13-癸酰氧基-13-去羥瑞藏芯-5b-酸或其適合制藥的鹽的工藝，其中所述的式(Ⅲ)化合物為瑞藏芯本身，所述式(Ⅳ)羧酸為癸酸，而且用步驟(a)和(b)以及任選的步驟(c)。
9.根據權利要求
1一種得到瑞藏芯-13-基癸酸酯的工藝，其中所述式(Ⅲ)化合物為瑞藏芯本身，所述的式(Ⅳ)化合物為癸酸，而且僅用步驟(a)。
10.根據權利要求
1一種得到瑞藏芯-13-基十二酸酯的工藝，其中所述式(Ⅲ)化合物為瑞藏芯本身，所述式(Ⅳ)化合物為十二酸，而且僅用步驟(a)。
11.根據權利要求
1一種得到瑞藏芯-13-基十四酸酯的工藝，其中所述式(Ⅲ)化合物為瑞藏芯本身，所述式(Ⅳ)羧酸為十四酸，而且僅用步驟(a)。
專利摘要
瑞藏芯的及瑞藏芯-2-烯的酰化衍生物可以由瑞藏芯或瑞藏芯-2-烯與酸或其活性衍生物反應而制備。它們具有優良的抗腫瘤活性。
文檔編號C07D493/22GK86102020SQ86102020
公開日1986年10月1日 申請日期1986年2月28日
發明者奧田重倍, 巖崎成夫, 浪越通夫, 三共株式會社研究室企畫部內三共株式會社生物研究所內 申請人:三共株式會社導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan