一種角蛋白酶制劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及酶制劑應用領域，具體涉及一種角蛋白酶制劑及其在飼料中的應用。
【背景技術】
[0002] 蛋白質是動物必不可少的營養因子，大多數牲畜從植物或動物蛋白質來源，如魚 粉、豆類和玉米、小麥等谷類中攝取必需的蛋白質。而單胃動物，如豬和家禽等，并不能完全 消化飼料中的蛋白質原料。尤其是小豬和處于生長期的豬，對蛋白質消化能力僅為80%左 右。因此，目前飼料中蛋白原料的利用率較低，存在很大程度的浪費。
[0003] 另一方面，國際上飼用蛋白原料日益短缺，價格不斷走高。據悉我國大豆進口從 2000年的1042萬噸十年間增加到2010年的5480萬噸，增加了 5倍，價格由1700元/噸增 加到3500元/噸，飼料成本也因此增加了 10-15%。因此，現在的當務之急是提高飼料中蛋 白原料的利用率和擴大蛋白原料資源。
【發明內容】
[0004] 本發明為解決現有技術問題提供了一種新型的角蛋白酶制劑，并提供了其在飼料 中的應用。本發明通過對多種來源的蛋白酶進行篩選，找到了一種能顯著提高飼料中蛋白 利用率的復合酶制劑，從而彌補現有技術的不足。
[0005] 本發明一方面涉及一種角蛋白酶制劑，其組分及其含量分別為： 中性蛋白酶85-91份 磷酸氫鹽 7-10份 氯化鋅 2-5份 所述角蛋白酶制劑的組分及其含量分別優選為： 中性蛋白酶 88份 磷酸氫鹽 9份 氯化鋅 3份 所述中性蛋白酶來源于枯草芽孢桿菌GfeciWiAS1 。
[0006] 所述磷酸氫鹽為磷酸氫二鈉。
[0007] 所述角蛋白酶制劑的劑型為液體、粉末狀固體或者顆粒狀固體。
[0008] 本發明另一方面提供了上述角蛋白酶制劑在飼料中的應用。
[0009] 所述角蛋白酶制劑通過中性蛋白酶和氯化鋅的協同作用，能顯著提高其對飼用蛋 白原料的消化率，取得了意料不到的技術效果。該酶制劑可廣泛應用于飼料中，用于提高蛋 白的消化利用率，從而有效減少飼料中蛋白原料的添加量，降低生產成本，增加養殖戶的經 濟效益。
【具體實施方式】
[0010] 下面結合具體的實施方案對本發明進行更詳細的描述。但本發明并不受所述實施 例的限制。提供實施方案的目的是為了使說明書全面而透徹，并向本領域的技術人員全面 傳達發明的范圍。除另定義外，本發明所使用的所有技術和科學術語均具有作為本發明所 屬技術領域中普通技術人員通常理解的同樣的含義。
[0011] 本發明所用儀器設備為行業內常用設備，所用原料和試劑可選自市售任意一 種，例如：中性蛋白酶可購自科納提克(瑞士）有限公司，來源于枯草芽孢桿菌OfeciWM 酶活水平9000 U/g ;磷酸氫鹽和氯化鋅可選購自國藥集團。
[0012] 實施例1 一種角蛋白酶制劑，包括如下組分： 中性蛋白酶 85份 磷酸氫二鉀 1〇份 氯化鋅 5份 實施例2 一種角蛋白酶制劑，包括如下組分： 中性蛋白酶 88份 磷酸氫二鈉 9份 氯化鋅 3份 實施例3 一種角蛋白酶制劑，包括如下組分及其含量： 中性蛋白酶 91份 磷酸氫二鉀 7份 氯化鋅 2份 實施例4角蛋白酶制劑對豆柏的體外酶解試驗 豆柏現在是飼料中應用最為廣泛的蛋白原料之一，本試驗通過體外模擬單胃動物胃和 小腸的消化過程檢測上述角蛋白酶制劑對豆柏中蛋白消化率的影響。
[0013] 試駘樣品： (1) 空白：不額外添加酶制劑； (2) 實施例1樣品 (3) 實施例2樣品 (4) 實施例3樣品 底物： 豆柏：粗蛋白含量48% 消化酶： 胃蛋白酶（sigma p-7000 1:10000);胰蛋白酶（sigma p-7545)。
[0014] 體外酶解試駘概況: CN 105010763 A 說明書 3/6 頁
耜蛋白含量測定： 參照《GBT6432-1994飼料中粗蛋白的測定方法》。
[0015] 兩步法體外酶解試駘方法: (1)稱取3g底物置于IOOmL具塞三角瓶中，加入IOmL蒸餾水，充分溶解。
[0016] (2)于Omin，加入IOmL 0· IM ρΗ4· 6檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液，將pH調至4. 6， 加入0.1 g上述試驗樣品（空白對照組不加)。
[0017] (3)于12011^11，加入0.邡鹽酸，調節？!1至2.5-3.0，加511110.邡？!12.8緩沖液 (含胃蛋白酶）。
[0018] (4)于 140min，加入 0· 2M NaOH 調節 pH 至 6. 2,加入 5ml 0· 2M ρΗ6· 2 磷酸氫二 鈉-檸檬酸緩沖液(含胰蛋白酶)。
[0019] (5)于320min，加入5mL 20%磺基水楊酸，4°C沉淀30min (沉淀未消化蛋白）。 [0020] (6)于350min，抽濾方法過濾獲得未消化殘渣，具體為：用1 %磺基水楊酸將食糜 轉移至過濾器內，用2X IOml的乙醇和丙酮沖洗殘渣。
[0021] (7) 80°C干燥過夜，獲得干燥殘渣。
[0022] (8)測定干燥殘渣的重量。
[0023] (9)計算干燥殘渣的蛋白消化率。
[0024] 結果: 表1不同角蛋白酶制劑對豆柏中蛋白消化率的影響
從表1可以看出，本發明所述角蛋白酶制劑能有效提高豆柏中蛋白的消化率，其中實 施例2所述角蛋白酶制劑對蛋白消化率的影響最大，使豆柏中蛋白的消化率提高了 4. 26%， 更有利于養殖動物對蛋白的吸收，從而能減少飼料中蛋白原料的添加量，降低生產成本。
[0025] 實施例5角蛋白酶制劑對花生柏、玉米、小麥、魚粉、DDGS蛋白原料的體外酶解試 驗 試駘樣品 (1) 空白：不額外添加酶制劑； (2) 實施例2樣品 (3) 對比產品：蛋白酶，購自DSM公司，Ronozyme? ProAct 底物： 花生柏：粗蛋白含量44. 34% ; 玉米：粗蛋白含量9. 25% ; 小麥：粗蛋白含量13. 37%; 魚粉：粗蛋白含量69.87%; DDGS :粗蛋白含量30% 消化酶： 同實施例4。
[0026] 體外酶解試駘概況: 同實施例4。
[0027] 耜蛋白含量測定： 同實施例4。
[0028] 兩步法體外酶解試駘方法: 同實施例4。
[0029] 結果: 表2角蛋白酶制劑對不同蛋白原料消化率的影響
從表2的結果可以看出，與空白對照組相比，本發明實施例2所述角蛋白酶制劑能 明顯提高對花生柏、玉米、小麥、魚粉、DDGS中蛋白的消化率，且效果優于市售蛋白酶產品 Ronozyme? ProAct0
[0030] 實施例6氯化鋅對角蛋白酶制劑酶解效果的影響 試騎樣品： (1) 空白：不額外添加酶制劑； (2) 樣品1 :中性蛋白酶88份，磷酸氫二鈉9份； (3) 樣品2 :氯化鋅； (4) 樣品3:中性蛋白酶88份，磷酸氫二鈉9份，氯化鋅3份；（實施例2樣品） 底物： 豆柏：粗蛋白含量48% 消化酶： 同實施例4。
[0031] 體外酶解試駘概況: 同實施例4。
[0032] 耜蛋白含量測定： 同實施例4。
[0033] 兩步法體外酶解試駘方法: 同實施例4。
[0034]結果: 表3氯化鋅對角蛋白酶制布IBS解效里的
影口向 從表3的結果可以看出，與空白對照組相比，單獨添加氯化鋅(樣品2)，對豆柏中蛋白 的消化率沒有影響；但通過在樣品1中添加氯化鋅，得到的樣品3,卻能顯著提高蛋白的消 化率，比未加氯化鋅的樣品1提高了約0. 7%，從而說明氯化鋅能有效促進本發明所述角蛋 白酶制劑中中性蛋白酶對蛋白原料的酶解效果，氯化鋅和中性蛋白酶之間的協同促進作用 取得了意料不到的技術效果。
【主權項】
1. 一種角蛋白酶制劑，包括中性蛋白酶、磷酸氫鹽和氯化鋅。2. 如權利要求1所述角蛋白酶制劑，其特征在于，其各組分及其含量分別為： 中性蛋白酶 85-91份 磷酸氫鹽 7-10份 氯化鋅 2-5份。3. 如權利要求2所述角蛋白酶制劑，其特征在于，其各組分及其含量分別為： 中性蛋白酶 88份 磷酸氫鹽 9份 氯化鋅 3份。4. 如權利要求1或2所述角蛋白酶制劑，其特征在于，所述中性蛋白酶來源于枯草芽孢 V^^XBacillus subtilis.、。5. 如權利要求1或2所述角蛋白酶制劑，其特征在于，所述磷酸氫鹽為磷酸氫二鈉。6. 如權利要求1或2所述角蛋白酶制劑，其特征在于，所述角蛋白酶制劑的劑型為液 體、粉末狀固體或者顆粒狀固體。7. 如權利要求1或2所述角蛋白酶制劑在飼料中的應用。
【專利摘要】本發明涉及酶制劑應用技術領域，具體提供了一種角蛋白酶制劑，包括中性蛋白酶、磷酸氫鹽和氯化鋅。所述角蛋白酶制劑通過中性蛋白酶和氯化鋅的協同作用，能顯著提高其對飼用蛋白原料的消化率，取得了意料不到的技術效果。該酶制劑可廣泛應用于飼料中，能有效減少飼料中蛋白原料的添加量，降低生產成本，增加養殖戶的經濟效益。
【IPC分類】A23K1/175, A23K1/165
【公開號】CN105010763
【申請號】CN201410148157
【發明人】邵靜, 王玲玲, 馬向東, 劉魯民
【申請人】青島蔚藍生物集團有限公司
【公開日】2015年11月4日
【申請日】2014年4月15日