一種磁珠分離制備骨多肽的方法
【專利摘要】本發明提供一種骨多肽的制備方法，采用磁珠表面包被殼多糖后，經檸檬酸處理可與樣品中的多肽類物質特異性結合，通過外加磁場，磁珠與多肽被一起吸附而滯留在磁場中，從而達到多肽的快速富集與分離，可以解決其他純化方法所遇到的問題，并且能夠大量快速的從動物骨骼酶解液中選擇性提取多肽，所得產品為白色幾無腥味，含氮量高。
【專利說明】
一種磁珠分窩制備骨多化的方法
技術領域
[0001] 本發明設及保健食品領域，特別設及一種磁珠分離制備骨多膚的方法。
【背景技術】
[0002] 近年來生物活性膚結構和功能研究再現高潮，促進了多膚營養的發展與概念更 新，飲食中的多膚除了作為營養物具有促進機體新陳代謝、生長發育功能外，還賦予調節機 體生理功能和免疫力的雙重功能。因此，多膚產品已經成為人體健康的重要物質，受到廣大 消費者的青睞。
[0003] 現階段開發的產品主要集中在海洋魚低聚膚、雞頭骨多膚等產品，其基本方法是 將動物鮮骨在高溫、高壓下蒸煮脫脂后，加入蛋白酶制劑對骨液酶解，酶解后得小分子多膚 物質。然而，運些多膚產品雖然具有良好的功效，但是，目前制備骨膚產品的工藝主要采用 提取活性成分后加熱酶解后噴霧干燥得到產品，采用的純化手段是色譜法或者有機溶劑萃 取等，缺點是難W大規模制備、環境污染、無法完全避免混入脂肪等雜質影響多膚產品的品 質。

【發明內容】

[0004] 本發明的目的是提供一種得到高純骨多膚的方法，其特征在于使用磁珠分離法， 通過吸附反吸附配合，選擇性提取酶解液中的多膚類物質。解決目前生產骨多膚產品中含 有脂肪等非多膚類雜質缺點。 陽〇化]本發明為實現上述目的所采用的的技術方案為：
[0006] 選擇性分離多膚磁珠的制備：取1單位重量的裸磁珠，加入磁珠重量1-5倍的殼聚 糖醋酸溶液，攬拌10分鐘至60分鐘，去掉上清液，然后加入與磁珠重量1-10倍的巧樣酸鋼 水溶液，劇烈攬拌下室溫反應30分鐘至60分鐘，去掉上清液，用與磁珠重量1-3倍的清水 洗涂磁珠 Ξ次，備用；
[0007] 多膚的吸附：在制備好的骨多膚酶解液中加入步驟（1)中制備好的磁珠，磁珠用 量占骨重量5~10%，攬拌0. 5至2小時，外加磁場將磁珠固定于反應蓋底部，除去上清液， 再用純凈水洗磁珠3次；
[0008] 多膚的反吸附：向反應蓋加入牛骨質量相等的純凈水，煮沸攬拌，然后通過磁場將 磁珠固定于反應蓋底部，吸取上清液，得多膚溶液；
[0009] 噴霧干燥：將所得上清液噴霧干燥，控制進風口溫度150-160°c，出風口 70-80°C， 既得骨多膚粉。
[0010] 本發明步驟似所用骨酶解液按如下操作制備：
[0011] 活性成分的提取：取清洗好的動物骨骼，破碎成1~8cm左右的碎塊，稱取1單位 重量的碎骨加至反應蓋中，加入3-5單位重量的水，控制體系溫度在lore至110°C，壓力為 0. 2MPa至IMPa ;8至12小時后，將固液分離，除去脂肪層，收集水層；
[0012] 酶解：將收集的水層置于反應蓋中，加入酶，控制溫度為35°C至45°C，抑值為 6. ο~7. ο ;6至8小時后加熱至90°C保持15分鐘，停止加熱；將酶解液離屯、取上清液加入 0. 1 %單位的活性炭攬拌15min，超濾除去活性炭，收集酶解液，即得。
[0013] 酶解步驟所用的酶為膜蛋白酶、木瓜蛋白酶、風味蛋白酶、堿性蛋白酶、中性蛋白 酶、彈性蛋白酶中的一種或多種。所述酶的用量為骨骼重量的0. 1~0.5%。優選為木瓜蛋 白酶和風味蛋白酶，所述木瓜蛋白酶的用量為骨骼重量的0. 1~0. 2%，優選0. 15%。所述 風味蛋白酶的用量為骨骼重量的0. 3~0. 5%，優選0. 4%。
[0014] 本發明采用磁珠表面包被殼多糖后，經巧樣酸處理可與樣品中的多膚類物質特異 性結合，通過外加磁場，磁珠與多膚被一起吸附而滯留在磁場中，從而達到多膚的快速富集 與分離，可W解決其他純化方法所遇到的問題。并且能夠大量快速的從動物骨骼酶解液中 選擇性提取多膚，所得產品為白色幾無腥味，含氮量高。
【具體實施方式】 陽〇1引對比實施例1
[0016] 骨多膚酶解液的制備：取清洗好的牛骨骼，破碎成1~8cm左右的碎塊，稱取1單 位重量的碎骨加至反應蓋中，加入3-5單位重量的水，控制體系溫度在lore至110°C，壓力 為0. 2MPa至IMPa ;8至12小時后，將固液分離，除去脂肪層，收集水層；將收集的水層置于 反應蓋中，加入骨骼重量0. 2 %的木瓜蛋白酶，控制溫度為35 °C至45 °C，抑值為6. 0~7. 0 ; 6至8小時后加熱至90°C保持15分鐘，停止加熱；將酶解液離屯、取上清液加入0. 1 %單位 的活性炭攬拌15min，超濾除去活性炭，收集酶解液，即得。
[0017] 色譜法分離：將制備好的牛骨多膚酶解液500mL通過裝有大孔樹脂的色譜柱，收 集濾液；
[0018] 噴霧干燥：將所得上清液噴霧干燥，控制進風口溫度150-160°C，出風口 70-80°C， 既得多膚粉。
[0019] 對比實施例2
[0020] 骨多膚酶解液的制備：取清洗好的牛骨骼，破碎成1~8cm左右的碎塊，稱取1單 位重量的碎骨加至反應蓋中，加入3-5單位重量的水，控制體系溫度在lore至11(TC，壓力 為0. 2MPa至IMPa ;8至12小時后，將固液分離，除去脂肪層，收集水層；將收集的水層置于 反應蓋中，加入骨骼重量0. 5 %的風味蛋白酶，控制溫度為35 °C至45 °C，抑值為6. 0~7. 0 ; 6至8小時后加熱至90°C保持15分鐘，停止加熱；將酶解液離屯、取上清液加入0. 1 %單位 的活性炭攬拌15min，超濾除去活性炭，收集酶解液，即得。
[0021] 有機溶劑提取法脫脂：將取100血酶解液蒸干，加100血正己燒攬拌30分鐘，過濾 收集濾餅；將濾餅烘干，加水溶解，離屯、取上清液；
[0022] 噴霧干燥：將所得上清液噴霧干燥，控制進風口溫度150-160°C，出風口 70-80°C， 既得多膚粉。 陽〇2引實施例1
[0024] (1)選擇性分離多膚磁珠的制備：取1單位重量的裸磁珠，加入與磁珠 3倍質量體 積比的用1 %的醋酸溶解的殼聚糖溶液，攬拌15分鐘，去掉上清液，然后加入與磁珠5倍質 量體積比的10%的巧樣酸鋼水溶液，劇烈攬拌下室溫反應30分鐘，去掉上清液，用與磁珠1 倍質量體積比的清水洗涂磁珠 Ξ次備用；
[0025] 似多膚的吸附：將制備好的牛骨多膚酶解液加入牛骨重量10%按步驟1中制備 好的磁珠，攬拌2小時，通過磁場將磁珠固定于反應蓋底部，除去上清液，再用純凈水洗磁 珠3次；
[00%] (3)多膚的反吸附：向反應蓋加入牛骨質量相等的純凈水，煮沸攬拌，然后通過磁 場將磁珠固定于反應蓋底部，吸取上清液，得多膚溶液；
[0027] (4)噴霧干燥：將所得上清液噴霧干燥，控制進風口溫度150-160°C，出風口 70-80°C，既得多膚粉。
[0028] 步驟（2)骨多膚酶解液的制備：取清洗好的牛骨骼，破碎成1~8cm左右的碎塊， 稱取1單位重量的碎骨加至反應蓋中，加入3-5單位重量的水，控制體系溫度在lore至 ll〇°C，壓力為0. 2MPa至lMPa;8至12小時后，將固液分離，除去脂肪層，收集水層；將收集 的水層置于反應蓋中，加入骨骼重量0. 2 %的木瓜蛋白酶，控制溫度為35°C至45°C，抑值為 6. 0~7. 0 ;6至8小時后加熱至90°C保持15分鐘，停止加熱；將酶解液離屯、取上清液加入 0. 1 %單位的活性炭攬拌15min，超濾除去活性炭，收集酶解液，即得。
[0029] 實施例2
[0030] (1)選擇性分離多膚磁珠的制備：取1單位重量的裸磁珠，加入與磁珠5倍質量體 積比的用3%的醋酸溶解的殼聚糖溶液，攬拌60分鐘，去掉上清液，然后加入與磁珠10倍質 量體積比的8%的巧樣酸鋼水溶液，劇烈攬拌下室溫反應30分鐘，去掉上清，用與磁珠3倍 質量體積比的清水洗涂磁珠 Ξ次備用；
[0031] 似多膚的吸附：將制備好的牛骨多膚酶解液加入牛骨重量7%按步驟1中制備好 的磁珠，攬拌1小時，外加磁場將磁珠固定于反應蓋底部，除去上清液，再用純凈水洗磁珠3 次；
[0032] (3)多膚的反吸附：向反應蓋加入牛骨質量相等的純凈水，煮沸攬拌，然后通過磁 場將磁珠固定于反應蓋底部，吸取上清液，得多膚溶液；
[003引 （4)噴霧干燥：將所得上清液噴霧干燥，控制進風口溫度150-160°C，出風口 70-80°C，既得多膚粉。
[0034] 步驟（2)骨多膚酶解液的制備：取清洗好的牛骨骼，破碎成1~8cm左右的碎塊， 稱取1單位重量的碎骨加至反應蓋中，加入3-5單位重量的水，控制體系溫度在lore至 ll〇°C，壓力為0. 2MPa至lMPa;8至12小時后，將固液分離，除去脂肪層，收集水層；將收集 的水層置于反應蓋中，加入骨骼重量0. 5 %的風味蛋白酶，控制溫度為35 °C至45 °C，抑值為 6. 0~7. 0 ;6至8小時后加熱至90°C保持15分鐘，停止加熱；將酶解液離屯、取上清液加入 0. 1 %單位的活性炭攬拌15min，超濾除去活性炭，收集酶解液，即得。 陽0對 實施例3
[0036] (1)選擇性分離多膚磁珠的制備：取1單位重量的裸磁珠，加入與磁珠5倍質量體 積比的用3 %的醋酸溶解的殼聚糖溶液，攬拌30分鐘，去掉上清，然后加入與磁珠10倍質量 體積比的15%的巧樣酸鋼水溶液，劇烈攬拌下室溫反應30分鐘，去掉上清，用與磁珠3倍質 量體積比的清水洗涂磁珠 Ξ次備用；
[0037] 似多膚的吸附：將制備好的牛骨多膚酶解液加入牛骨重量10%按步驟1中制備 好的磁珠，攬拌1小時，外加磁場將磁珠固定于反應蓋底部，除去上清液，再用純凈水洗磁 珠3次；
[0038] (3)多膚的反吸附：向反應蓋加入牛骨質量相等的純凈水，煮沸攬拌，然后通過磁 場將磁珠固定于反應蓋底部，吸取上清液，得多膚溶液；
[0039] (4)噴霧干燥：將所得上清液噴霧干燥，控制進風口溫度150-160°C，出風口 70-80°C，既得多膚粉。
[0040] 所得產品色澤白色，幾乎無腥味，口感好于實施例1和2。
[0041] 步驟（2)骨多膚酶解液的制備：取清洗好的牛骨骼，破碎成1~8cm左右的碎塊， 稱取1單位重量的碎骨加至反應蓋中，加入3-5單位重量的水，控制體系溫度在lore至 ll〇°C，壓力為0. 2MPa至IMPa ;8至12小時后，將固液分離，除去脂肪層，收集水層；將收 集的水層置于反應蓋中，加入骨骼重量0. 15 %的風味蛋白酶和骨骼重量0. 4%的木瓜蛋白 酶，控制溫度為35°C至45°C，抑值為6. 0~7. 0 ;6至8小時后加熱至90°C保持15分鐘，停 止加熱；將酶解液離屯、取上清液加入0. 1 %單位的活性炭攬拌15min，超濾除去活性炭，收 集酶解液，即得。 陽0創實施例4
[0043] (1)選擇性分離多膚磁珠的制備：取1單位重量的裸磁珠，加入與磁珠5倍質量體 積比的用3%的醋酸溶解的殼聚糖溶液，攬拌30分鐘，去掉上清，然后加入與磁珠10倍質 量體積比的12%的巧樣酸鋼水溶液，劇烈攬拌下室溫反應30分鐘，去掉上清，用與磁珠1-3 倍質量體積比的清水洗涂磁珠 Ξ次備用；
[0044] (2)多膚的吸附：將制備好的豬骨多膚酶解液加入豬骨重量10%按步驟1中制備 好的磁珠，攬拌1小時，外加磁場將磁珠固定于反應蓋底部，除去上清液，再用純凈水洗磁 珠3次；
[0045] (3)多膚的反吸附：向反應蓋加入豬骨質量相等的純凈水，煮沸攬拌，然后通過磁 場將磁珠固定于反應蓋底部，吸取上清液，得多膚溶液；
[0046] (4)噴霧干燥：將所得上清液噴霧干燥，控制進風口溫度150-160°C，出風口 70-80°C，既得多膚粉。
[0047] 步驟似骨多膚酶解液的制備：取清洗好的豬骨，破碎成1~8cm左右的碎塊， 稱取1單位重量的碎骨加至反應蓋中，加入3-5單位重量的水，控制體系溫度在lore至 ll〇°C，壓力為0. 2MPa至IMPa ;8至12小時后，將固液分離，除去脂肪層，收集水層；將收 集的水層置于反應蓋中，加入骨骼重量0. 15 %的風味蛋白酶和骨骼重量0. 4%的木瓜蛋白 酶，控制溫度為35°C至45°C，抑值為6. 0~7. 0 ;6至8小時后加熱至90°C保持15分鐘，停 止加熱；將酶解液離屯、取上清液加入0. 1 %單位的活性炭攬拌15min，超濾除去活性炭，收 集酶解液，即得。
[0048]

【主權項】
1. 一種骨多肽的制備方法，包括以下步驟： (1) 選擇性分離多肽磁珠的制備：取1單位重量的裸磁珠，加入磁珠重量1-5倍的殼聚 糖醋酸溶液，攪拌10分鐘至60分鐘，去掉上清液，然后加入與磁珠重量1-10倍的檸檬酸鈉 水溶液，劇烈攪拌下室溫反應30分鐘至60分鐘，去掉上清液，用與磁珠重量1-3倍的清水 洗滌磁珠三次，備用； (2) 多肽的吸附：在制備好的骨多肽酶解液中加入步驟（1)中制備好的磁珠，磁珠用量 占骨重量5~10%，攪拌〇. 5至2小時，外加磁場將磁珠固定于反應釜底部，除去上清液，再 用純凈水洗磁珠3次； (3) 多肽的反吸附：向反應釜加入牛骨質量相等的純凈水，煮沸攪拌，然后通過磁場將 磁珠固定于反應釜底部，吸取上清液，得多肽溶液； (4) 噴霧干燥：將所得上清液噴霧干燥，得骨多肽。2. 根據權利要求1所述的骨多肽的制備方法，其特征在于，步驟（2)所述的骨多肽酶 解液采用如下方式制備：取清洗好的動物骨骼，破碎成1~8cm左右的碎塊，稱取1單位重 量的碎骨加至反應釜中，加入3-5單位重量的水，控制體系溫度在lore至110°C，壓力為 0. 2MPa至IMPa ;8至12小時后，將固液分離，除去脂肪層，收集水層；將收集的水層置于反 應釜中，加入酶，控制溫度為35°C至45°C，pH值為6. 0~7. 0 ;6至8小時后加熱至90°C保 持15分鐘，停止加熱；將酶解液離心取上清液加入0. 1 %單位的活性炭攪拌15min，超濾除 去活性炭，收集酶解液，即得。3. 根據權利要求2所述的骨多肽的制備方法，其特征在于，所述酶為胰蛋白酶、木瓜蛋 白酶、風味蛋白酶、堿性蛋白酶、中性蛋白酶、彈性蛋白酶中的一種或多種。4. 根據權利要求3所述的骨多肽的制備方法，其特征在于，所述酶的用量為骨骼重量 的 0· 1 ~0· 5%〇5. 根據權利要求3所述的骨多肽的制備方法，其特征在于，所述的酶為木瓜蛋白酶和 風味蛋白酶。6. 根據權利要求5所述的骨多肽的制備方法，其特征在于，所述木瓜蛋白酶的用量為 骨骼重量的〇. 1~〇. 2%，所述風味蛋白酶的用量為骨骼重量的0. 3~0. 5%。7. 根據權利要求6所述的骨多肽的制備方法，其特征在于，所述木瓜蛋白酶的用量為 骨骼重量的〇. 15%，所述風味蛋白酶的用量為骨骼重量的0. 4%。8. -種骨多肽，其特征在于，該骨多肽采用權利要求1至7任一權利要求所述的方法制 備而得。
【文檔編號】A23J3/04GK105876075SQ201410856321
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2014年12月28日
【發明人】林波, 于秀玲, 明躍升, 趙海娜, 韓風雨, 孔新穎, 李洪澤
【申請人】內蒙古天奇生物科技有限公司, 內蒙古天奇中蒙制藥股份有限公司, 赤峰陸爾草中蒙藥科技有限公司