] 實施例8
[0051] 本實施例與實施例4的區別點在于濾液與鹽酸溶液的體積比為15 :1. 75。
[0052] 實施例9
[0053] 本實施例與實施例4的區別點在于濾液與鹽酸溶液的體積比為15 :3. 5。
[0054] 實施例10
[0055] 本實施例與實施例4的區別點在于濾液與鹽酸溶液的體積比為15 :14。
[0056] 實施例4和8~10北青龍衣水解前后胡桃酮、胡桃醌的含量如表4所示。
[0057] 表 4 [00581
[0059] 實施例11
[0060] 實施例4獲得的鹽酸水解液采用以下步驟測定胡桃醌與胡桃酮的含量：采用高效 液相梯度檢測，檢測波長為265nm，進樣量為10 μ I，流速為lml/min ;梯度洗脫條件為初始 流動相中甲醇與水的濃度配比為45ml :55ml，第30~35min流動相中甲醇與水的濃度配比 為75ml :25ml，第35min之后流動相中甲醇與水的濃度配比為45ml :55ml。
[0061] 對照品：精密稱取胡桃酮對照品I. 5mg、胡桃醌對照品lmg，置25ml容量瓶中，用甲 醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml含胡桃酮0. 06mg、胡桃醌0. 04mg的溶液。
[0062] 對照品高效液相梯度檢測結果如圖1所示（峰1為胡桃酮對照品；峰2為胡桃醌 對照品）。本實施例水解液高效液相梯度檢測結果如圖2所示。
[0063] 本發明方法胡桃醌與胡桃酮的分離度均大于1. 5,理論塔板數不低于3000。
[0064] 實施例12
[0065] 精密稱取胡桃酮、胡桃醌，置25ml容量瓶中，甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成 含胡桃酮、胡桃醌的混合對照溶液，再依次稀釋為5個不同梯度。分別采用【具體實施方式】 六的方法進行高效液相梯度檢測。
[0066] 胡桃酮的質量濃度分別為 7. 9 μ g/ml、15. 8 μ g/ml、31. 6 μ g/ml、63. 2 μ g/ml 和 126. 4 μ g/ml，胡桃酮峰面積為 238351. 6、466703· 3、973406· 5、1845863. I 和 3713626. 4。以 胡桃酮峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程：y = 29242X+15298, r =0.9994。結果表明，胡桃酮在7. 9 μ g/ml~126. 4 μ g/ml范圍內線性關系良好。
[0067] 胡桃醌的質量濃度分別為 10. 3 μ g/ml、20. 6 μ g/ml、41· 2 μ g/ml、82· 4 μ g/ml 和 164. 8 μ g/ml，胡桃酮峰面積為97. 9、205. 9、415. 7、821. 4和1631. 8。以胡桃醌峰面積為縱 坐標，濃度為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程：y = 9. 905x+l. 966, r = 0. 9995。結果表 明，胡桃醌在10. 3 μ g/ml~164. 8 μ g/ml范圍內線性關系良好。
[0068] 在上述色譜條件下，分別取胡桃酮、胡桃醌混合對照溶液連續進樣5次，5次的檢 測結果如表5所示。
[0069] 表 5
[0070]
[0071] 連續進樣5次的檢測結果說明本發明胡桃醌與胡桃酮的含量測定方法日內精密 度高。
[0072] 實施例13
[0073] 將實施例4獲得的鹽酸水解液放置在室溫環境中，分別選取放置0、0. 5、1、2、3、6、 12、24和48h的水解液采用【具體實施方式】六中的方法進行檢測。放置不同時間的水解液中 胡桃酮、胡桃醌的含量如表6所示。
[0074] 表 6
[0075] CN 105136916 A 1冗 P月卞> 6/8 頁
[0076] 實驗證明實施例4獲得的鹽酸水解液在48h內穩定性好。
[0077] 實施例14
[0078] 同一批次的北青龍衣粉末，分成5份，按照實施例4的方法進行水解，然后采用具 體實施方式六中的方法進行檢測，檢測結果如表7所示。
[0079] 表 7
[0080]
[0082] 實驗結果說明本發明胡桃醌與胡桃酮的含量測定方法重復性好。
[0083] 實施例15
[0084] 按照實施例4的方法進行北青龍衣水解，不同點在于在北青龍衣粉末加入甲醇溶 液的同時，向甲醇溶液中加入純胡桃酮對照品和純胡桃醌對照品，甲醇溶液中純胡桃酮的 加入量為5. 6mg/100ml，甲醇溶液中純胡桃醌的加入量為2. 0mg/100ml。
[0085] 分別檢測胡桃酮、胡桃醌含量，檢測結果如表8和表9所示。
[0086] 表8胡桃酮加樣回收率結果
[0087]
[0088] 表9胡桃醌加樣回收率結果
[0089] CN 105136916 A m ~P 7/8 頁
[0090] 回收率計算公式：回收率％= (C - A)/BX 100%
[0091] 回收率計算公式中A為北青龍衣水解樣品中被測成分含量；B為對照品加入量；C 為實測值。
[0092] 實施例16
[0093] 采用【具體實施方式】六的方法對同年采集的不同產地北青龍衣水解（水解方法采 用實施例4的方法）前后胡桃酮、胡桃醌含量進行檢測。
[0094] 表 10 水解前（η = 3)
[0095]
[0
[0097] 表1l 水解后（η = 3)
[0098]
[0099] 通過表10與表11的對比發現，未經過水解的北青龍衣，因產地的不同，胡桃酮與 胡桃醌的含量總和相差較大；經過本發明方法水解后，不同產地的北青龍衣，其胡桃酮與胡 桃醌的含量總和均在2~2. 5mg/g之間，含量相對穩定。因此，利用本發明方法水解后的北 青龍衣制備抗癌藥物，其產品種抗癌活性成分含量穩定，療效得以保證。
[0100] 分析認為胡桃酮苷、胡桃酮和胡桃醌之間存在某種轉化關系，因此，胡桃酮與胡桃 醌含量之和相對穩定。
【主權項】
1. 一種促使北青龍衣中胡桃酮苷水解為胡桃酮的方法，其特征在于促使北青龍衣中胡 桃酮苷水解為胡桃酮的方法按以下步驟進行： 將青龍衣粉末加入甲醇溶液進行超聲處理，冷卻后濾過，取濾液加入酸性溶液回流水 解，即實現北青龍衣中結合型胡桃酮苷水解為游離型胡桃酮。2. 根據權利要求1所述的一種促使北青龍衣中胡桃酮苷水解為胡桃酮的方法，其特征 在于甲醇溶液的濃度為2〇%~1〇〇%。3. 根據權利要求1所述的一種促使北青龍衣中胡桃酮苷水解為胡桃酮的方法，其特征 在于甲醇溶液的濃度為60%。4. 根據權利要求1所述的一種促使北青龍衣中胡桃酮苷水解為胡桃酮的方法，其特征 在于濾液與酸性溶液的體積比為15 :1. 5~14。5. 根據權利要求4所述的一種促使北青龍衣中胡桃酮苷水解為胡桃酮的方法，其特征 在于酸性溶液的體積濃度為25%。6. 根據權利要求4所述的一種促使北青龍衣中胡桃酮苷水解為胡桃酮的方法，其特征 在于酸性溶液為鹽酸或硫酸。7. 胡桃醌與胡桃酮的含量測定方法，其特征在于按以下步驟測定胡桃醌與胡桃酮的含 量：采用高效液相梯度檢測，檢測波長為265nm，進樣量為10 y 1，流速為lml/min ;梯度洗脫 條件為初始流動相中甲醇與水的濃度配比為45ml :55ml，第30~35min流動相中甲醇與水 的濃度配比為75ml :25ml，第35min之后流動相中甲醇與水的濃度配比為45ml :55ml。
【專利摘要】促使北青龍衣中胡桃酮苷水解為胡桃酮的方法及胡桃醌與胡桃酮的含量測定方法，它涉及一種胡桃酮苷水解為胡桃酮的方法及胡桃醌與胡桃酮的含量測定方法。解決了目前因產地不同北青龍衣中胡桃醌差異性大，導致利用北青龍衣制備的抗癌藥物質量難以掌控的問題。水解方法：將青龍衣粉末加入甲醇溶液進行超聲處理，冷卻后濾過，取濾液加入酸性溶液回流水解，即實現北青龍衣中結合型胡桃酮苷水解為游離型胡桃酮。測定方法：采用高效液相梯度檢測。本發明方法促使北青龍衣中結合型胡桃酮苷水解為游離型胡桃酮，使不同產地北青龍衣的抗腫瘤活性主要成分含量達到穩定，從而保證了北青龍衣抗癌藥物的質量和穩定性。
【IPC分類】C07C46/00, C07C50/32, G01N30/02
【公開號】CN105136916
【申請號】CN201510431095
【發明人】王偉明, 初東君, 霍金海, 張海燕, 任曉蕾, 曹貴陽
【申請人】黑龍江省中醫藥科學院
【公開日】2015年12月9日
【申請日】2015年7月22日