專利名稱：：表面抗原的快速檢測法的制作方法一種表面抗原的檢測方法。它所涉及的是化學試驗的一種檢測方法，也就是如何利用一種較快捷的方法檢測乙型肝炎的表面抗原。目前人們檢測乙型肝炎表面抗原通用的有放射免疫法及傳統的Elisa檢測法，放射免疫法其優點是快捷，靈敏度高。但上述檢查對人體有損害，國際上已限制使用。Elisa檢測法是采用一種叫Elisa試劑盒，內有一塊聚苯乙烯小孔，經抗體包被后，加入檢測標本，置37-40℃水浴中孵育4小時，即可使抗原抗體結合為表面抗原復合物呈桔紅色。用本法反應簡單，準確率也較高。但本方法的不足之處在于費時較長，同時當抗原抗體互相作用生成免疫復合物的同時也有部分免疫復合物在解離成游離的抗原和抗體，因此影響了反應的速度及靈敏度。在檢測乙型肝炎表面抗原的時候，為了節省時間，同時在整個化學反應過程中不使已生成的免疫復合物被解離成抗原及抗體。本發明的目的就是在反應過程中采用了加入一種不帶電荷的直鏈大分子多糖，分子量在6000的聚乙二醇作為反應的促結液及酶稀釋液的方法，從而克服了現有技術的不足之處。本發明的技術特點是通過以下步驟完成的用傳統的Elisa試劑盒的聚苯乙烯板小孔載體經抗體包被后加入檢測標本，再加入6%聚乙二醇促結液，混勻后置37-45℃水浴中孵育15-20分鐘，最佳溫度為43℃標本中的抗原在聚乙二醇的作用下，可迅速與載體的抗體結合成免疫復合物(包被抗HBs+HBsAg(6%聚乙二醇)/()抗HBs·HBsAg)，經洗滌后，再加入4%聚乙二醇促酶稀釋液，置37-45℃，最佳43℃水浴中孵育15-20分鐘，即生成雙抗體夾心的酶聯免疫復合物(抗HBs·HBsAg+(抗HBs-HRP)/(4%聚乙二醇)抗HBs-HBsAg-抗HBs-HRP)。再加入鄰苯二胺為底物即生成桔紅色的表面抗原抗體復合物。整個過程歷時40-60分鐘。為了進一步敘述本發明的技術特征，下面以實施例加以說明操作方法包被用抗HBs0.1毫升/孔，4℃24小時，洗滌三次，在吸水紙上扣干，加樣，每孔0.1毫升，并沒陽性對照孔，陰性對照孔，空白對照孔。每孔加6%促結液，混勻置37-45℃20分鐘，最佳43℃，洗滌三次扣干，加酶標記物及4%酶稀釋液，每孔0.1毫升置37-45℃，最佳43℃20分鐘，洗滌5次，每次加滿洗滌液即停留1分鐘，傾去扣干。最后每孔加底物0.1毫升。結果判斷目測法陰性為無色或極淡粉紅色，陽性為桔紅色。比色法(波長492nm)先用空白校零點，然后讀取各孔光密度值，(樣品OD值)/(陰性平均OD值)≥2.1判斷陽性，否者為陰性。放射免疫、傳統Elisa法、快速檢查法的比較例數放射免疫傳統Elisa法快速法76例40(＋)30(＋)37(＋)陽性率52.6%39.5%48.7%</table></tables>注“+”為乙型肝炎表面抗原陽性的標本。本發明的優點是在傳統的Elisa試劑盒的基礎上，在化學反應的過程中加入了促結液及促酶稀釋液，此兩種液體均為聚乙二醇，它為一種不帶電荷的直鏈大分子多糖，分子量在6000，可促進抗原決定基團與載體抗體的結合點互相結合，并能抑制免疫復合物解離，促進免疫復合物進一步聚合，故反應時間短，又能提高試劑盒的靈敏度等優點。本方法不但能用于檢查乙型肝炎表面抗原，也能用于其它免疫復合物的檢查。權利要求1.一種表面抗原的快速檢測法，它是在已配制好的聚苯乙烯板小孔經抗體包被后，加入檢測標本，放置37-40℃水浴中孵育4-5小時而生成抗原抗體復合物(抗HBs-HRP)呈桔紅色，本發明的特征在于在加入聚乙二醇(PEG)促結液混勻后置37-45℃水浴中孵育15-20分鐘，標本中的抗原在聚乙二醇的作用下，可迅速與載體的抗體結合成免疫復合物(抗HBs+HBsAg(PEG)/()抗HBs·HBsAg)，經洗滌后，再加入促酶稀釋液置37-45℃水浴中孵育15-20分鐘，即生成雙抗體夾心的酶聯免疫復合物(抗HBs·HBsAg+(抗HBs-HRP)/(PEG)抗HBs-HBsAg-抗HBs-HRP)再加入鄰苯二胺底物液即生成桔紅色。整個過程歷時40-60分鐘。2.根據權利要求1所述的表面抗原快速檢測法，其特征在于水浴中的最佳溫度為43℃。3.根據權利要求1所述的表面抗原快速檢查法，其特征在于促結液為6%聚乙二醇，促酶稀釋液為4%聚乙二醇。全文摘要一種表面抗原的快速檢查法，它涉及的是一種化學反應的檢查方法，本發明是在傳統的Elisa檢查方法的基礎上，在反應的過程中加入了促結液及促酶稀釋液，使反應明顯加快，靈敏度提高的一種新的方法。此方法不但用于檢測乙型肝炎表面抗原，也用于其它免疫復合物的檢查，它的優點在于明顯提高了工作效率，同時能控制抗原抗體的解離。文檔編號G01N33/536GK1036080SQ8810166公開日1989年10月4日申請日期1988年3月23日優先權日1988年3月23日發明者冼德漢申請人:廣東省肇慶地區第一人民醫院