一種核酸分離凈化溶液的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物學應用領域，更具體地說涉及一種核酸分離凈化溶液。
【背景技術】
[0002] 在現有技術中已知用于分離核酸如DNA和RNA的大量方法，這些方法允許從各種來 源的樣品材料中分離。這些包括天然來源的樣品材料，例如能夠從人、動物、植物和環境中 得到的復雜樣品，以及來自實驗室培養的樣品材料，如微生物和細胞培養材料。
[0003]在經典的方法中，通常首先向樣品材料加入含有離液劑的水性緩沖液用于各細胞 的裂解、樣品的消化，所述緩沖液通常含有胍鹽。這之后通常是污染蛋白質的變性和通過與 有機提取劑混合來提取核酸，該提取劑通常含有苯酚和/或氯仿。在分離含有核酸的水相與 有機相之后，進行例如醇沉淀以從水溶性污染物和苯酚/氯仿組分中純化核酸。
[0004]這些方法有重大的缺點：第一，它用有機物質、化學物來提取核酸，對許多酶而言， 這些物質通常是強烈的抑制劑;第二，它需要用有機溶劑多次提取，使核酸從其他生物成分 例如蛋白、油脂、細胞的細胞器等中分離;第三，這些使用的有機溶劑是有毒的，例如苯酚、 氯仿，并且苯酚是一種強氧化劑，它能氧化核酸從而導致核酸被破壞。另一方面，傳統的核 酸凈化溶液會含有一些高離液鹽的試劑，成本比較高，純化效率比較低。

【發明內容】

[0005]為了彌補現有技術的不足，本發明目的是提供一種核酸分離凈化溶液，該溶液主 要是使用含有鈉鹽和/或鉀鹽的有機水溶液，對核酸進行可逆結合，再使用磁珠吸附核酸， 最后洗脫液洗脫得到核酸。
[0006]本發明解決技術問題所采用的技術方案是:一種核酸分離凈化溶液，所述溶液主 要包括鈉鹽和/或鉀鹽、水溶性有機溶劑和水;所述溶液的PH值范圍為2.0~5.0;所述鈉鹽 和/或鉀鹽中的鈉離子和/或鉀離子的濃度為1.0M~3.0M;所述核酸分離凈化溶液與核酸之 間進行可逆結合，從而對核酸進行分離沉淀，磁珠吸附。
[0007]進一步地，所述的鈉鹽為任何形式的鈉離子鹽，包括醋酸鈉、氯化鈉、檸檬酸鈉及 磷酸鈉;所述的鉀鹽為任何形式的鉀離子鹽，包括醋酸鉀、氯化鉀、檸檬酸鉀及磷酸鉀。
[0008] 進一步地，所述的水溶性有機溶劑為乙醇，所述乙醇的濃度為20%~30%。
[0009]進一步地，所述溶液的PH值范圍為4.0~4.8;所述鈉離子和/或鉀離子的濃度為 2.0M~2.5M。
[0010] 進一步地，所述的核酸分離凈化溶液可用于結合不同的核酸樣本，包括質粒DNA、 RNA或混合DNA和RNA分子。
[0011] 更進一步地，所述核酸樣本的來源包括動物或人類的體液、組織、器官、細胞、細胞 培養及PCR產品。
[0012] 本發明的有益效果是：與現有技術相比，本發明提供的核酸分離凈化溶液不含離 液鹽，也不添加任何有毒的試劑，成本較低，分離效率高;本發明的核酸分離溶液中也無變 性劑，很環保，甚至在野外操作時，廢液不需經過任何特殊處理，可直接排放;最后通過磁珠 吸附，可以得到更多量的核酸。通過本發明的溶液純化得到的核酸，純度高，對下游的實驗 酶切、PCR和測序等毫無影響;可廣泛應用基因治療、基因疫苗接種、酶反應限制消化、標簽、 測序等。
【附圖說明】
[0013] 圖1為不同濃度的NaAc對核酸綁定的影響結果的電泳圖片。
[0014] 圖2為不同PH值的S1溶液對核酸綁定的影響結果的電泳圖片。
[0015] 圖3為結合液S1與無水乙醇的混合液對綁定核酸的影響結果的電泳圖片。
[0016] 圖4為質粒DNA分離純化使用緩沖溶液N1和20%-30%(V/V)無水乙醇的電泳結果。
【具體實施方式】
[0017]下面結合附圖和【具體實施方式】，進一步闡明本發明，應理解下述【具體實施方式】僅 用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。
[0018] -種核酸分離凈化溶液，所述溶液主要包括鈉鹽和/或鉀鹽、水溶性有機溶劑和 水。所述溶液的PH值范圍為2.0~5.0;所述鈉鹽和/或鉀鹽中的鈉離子和/或鉀離子的濃度 為1.0M~3.0M;所述溶液的PH值范圍優選為4.0~4.8;所述鈉離子和/或鉀離子的濃度優選 為2.0M~2.5M。所述核酸分離凈化溶液與核酸之間進行可逆結合，從而對核酸進行分離沉 淀。
[0019] 所述的鈉鹽為任何形式的鈉離子鹽，包括醋酸鈉、氯化鈉、檸檬酸鈉及磷酸鈉;所 述的鉀鹽為任何形式的鉀離子鹽，包括醋酸鉀、氯化鉀、檸檬酸鉀及磷酸鉀。
[0020] 所述的水溶性有機溶劑優選為乙醇，所述乙醇的濃度為20%~30%。
[0021] 所述的核酸分離凈化溶液可用于結合不同的核酸樣本，包括質粒DNA、RNA或混合 DNA和RNA分子。所述核酸樣本的來源包括動物或人類的體液(全血、血清、尿、糞便、精子、唾 液）、組織、器官、細胞、細胞培養及PCR產品。
[0022] 通過上述溶液純化得到的核酸，純度高，對下游的實驗酶切、PCR和測序等毫無影 響;且可廣泛應用基因治療、基因疫苗接種、酶反應限制消化、標簽、測序等。
[0023] 表1:不同濃度的NaAc對核酸綁定的影響
核酸分離凈化溶液S1的組成包括:濃度為2.0M~2.5M的醋酸鈉(PH約為4.0~4.8)，濃 度為20%~30%的乙醇，水。上表1中，PBT具有綁定DNA作用，包含有高離液鹽，TE是緩沖溶液， 具有稀釋溶解DNA的作用。
[0024] 上述表1試驗了不同濃度的NaAc對核酸綁定的影響，用洗脫下來的1yLDNA加1yL 的ΙΟχ上樣溶液，8yL的超純水混合，點樣到1%的瓊脂糖凝膠中，通過紫外線照射溴化乙錠染 色，呈現圖片。圖1中的泳道1~6對應上表1中的數據。上述試驗結果說明NaAc的濃度優選為 2.0M~2.5M之間，此時DNA的回收率可達90%左右。
[0025]表2:不同PH值的S1溶液對核酸綁定的影響
上述表2試驗了不同PH值的S1溶液對核酸綁定的影響，用洗脫下來的lyLDNA加lyL的l〇x上樣溶液，8yL的超純水混合，點樣到1%的瓊脂糖凝膠中，通過紫外線照射溴化乙錠染 色，呈現圖片。圖2中的泳道1~6分別對應表2中的數據。上述試驗結果說明上述溶液S1的PH 值的優選范圍為4.8以下，此時DNA的得率在88%~98%之間。
[0026] 表3:溶液S1與無水乙醇的混合液對核酸綁定的影響
上述表3試驗了結合液S1與無水乙醇的混合液對核酸的綁定情況，結合液S1與無水乙 醇等體積混合后，顯著增加了綁定核酸的能力。用洗脫下來的lyLDNA加lyL的10x上樣溶 液，8yL的超純水混合，點樣到1%的瓊脂糖凝膠中，通過紫外線照射溴化乙錠染色，呈現圖 片。圖3中的泳道1~6分別對應表3中的數據。上述試驗結果說明結合液選擇用一定量溶液 S1或者等體積的溶液S1和無水乙醇混合綁定核酸的效率比用鹽酸胍和Qiagen的PBT溶液的 都尚。
[0027]表4:比較結合溶液C1和N1對質粒DNA的分離、純化效果
上述表4為使用緩沖溶液N1和20%~30%(V/V)無水乙醇對質粒DNA的分離、純化結果。用 洗脫下來的lyLDNA加lyL的ΙΟχ上樣溶液，8yL的超純水混合，點樣到1%的瓊脂糖凝膠中，通 過紫外線照射溴化乙錠染色，呈現圖片。圖4中的泳道1~6分別對應表4中的數據。上述試驗 結果說明了PH值為4.8的N1溶液與一定量的無水乙醇混合后可以更有效的綁定DNA。
[0028]以上實施方式僅用于說明本發明，而并非對本發明的限制，有關技術領域的普通 技術人員，在不脫離本發明的精神和范圍的情況下，還可以做出各種變化和變型，因此所有 等同的技術方案也屬于本發明的范疇，本發明的專利保護范圍應由權利要求限定。
【主權項】
1. 一種核酸分離凈化溶液，其特征在于:所述溶液主要包括鈉鹽和/或鉀鹽、水溶性有 機溶劑和水;所述溶液的PH值范圍為2.0~5.0;所述鈉鹽和/或鉀鹽中的鈉離子和/或鉀離 子的濃度為1.0M~3.0M;所述核酸分離凈化溶液與核酸之間進行可逆結合，之后再使用磁 珠吸附核酸，最后用洗脫液從磁珠上將核酸洗脫下來，從而對核酸進行分離。2. 根據權利要求1所述的一種核酸分離凈化溶液，其特征在于:所述的鈉鹽為任何形式 的鈉離子鹽，包括醋酸鈉、氯化鈉、檸檬酸鈉及磷酸鈉;所述的鉀鹽為任何形式的鉀離子鹽， 包括醋酸鉀、氯化鉀、檸檬酸鉀及磷酸鉀。3. 根據權利要求1所述的一種核酸分離凈化溶液，其特征在于:所述的水溶性有機溶劑 為乙醇，所述乙醇的濃度為20%~30%。4. 根據權利要求1或2所述的一種核酸分離凈化溶液，其特征在于:所述溶液的PH值范 圍為4.0~4.8;所述鈉離子和/或鉀離子的濃度為2.0M~2.5M。5. 根據權利要求1所述的一種核酸分離凈化溶液，其特征在于:所述的核酸分離凈化溶 液可用于結合不同的核酸樣本，包括質粒DNA、RNA或混合DNA和RNA分子。6. 根據權利要求5所述的一種核酸分離凈化溶液，其特征在于:所述核酸樣本的來源包 括動物或人類的體液、組織、器官、細胞、細胞培養及PCR產品。
【專利摘要】本發明公開了一種核酸分離凈化溶液，所述溶液主要包括鈉鹽和/或鉀鹽、水溶性有機溶劑和水；所述溶液的PH值范圍為2.0～5.0；所述鈉鹽和/或鉀鹽中的鈉離子和/或鉀離子的濃度為1.0M～3.0M；所述核酸分離凈化溶液與核酸之間進行可逆結合，從而對核酸進行分離沉淀。本發明提供的核酸分離凈化溶液不含離液鹽，也不添加任何有毒的試劑，成本較低，分離效率高；本發明的核酸分離溶液中也無變性劑，很環保，甚至在野外操作時，廢液不需經過任何特殊處理，可直接排放；通過本發明的溶液純化得到的核酸，純度高，對下游的實驗酶切、PCR和測序等毫無影響；可廣泛應用基因治療、基因疫苗接種、酶反應限制消化、標簽、測序等。
【IPC分類】C12N15/10
【公開號】CN105462959
【申請號】CN201510875201
【發明人】史鏡宇, 史維多利亞, 劉艷紅, 言國英, 馬小偉
【申請人】史鏡宇
【公開日】2016年4月6日
【申請日】2015年12月3日