一種植物乳桿菌增菌培養基及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于益生菌制品制備技術領域，涉及一種益生菌培養基，特別涉及一種植物乳桿菌增菌培養基及其制備方法。
【背景技術】
[0002]隨著人們生活水平的提高，益生菌食品的消費量逐年上升，益生菌添加到食品中的主要方式是直接添加菌體或以益生菌制劑的方式添加。越來越多的益生菌被用于替代抗生素的功能。其中乳酸菌(Lactic Acid Bacteria, LAB)是人體重要的的益生菌，具有調節人體胃腸道正常菌群、保持微生態平衡，提高食物消化率和生物價，降低血清膽固醇，抑制腸道內腐敗菌的生長繁殖和腐敗產物的產生等作用。
[0003]植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)是乳酸菌的一種，革蘭氏染色陽性、厭氧或兼性厭氧、無芽孢、耐酸、耐膽鹽，最適生長溫度為30?37°C，常見于乳制品、肉類、蔬菜以及果汁中的乳酸菌，能通過胃腸并定植于腸道發揮有益作用。植物乳桿菌無論是在食品發酵，還是工業乳酸發酵以及醫療保健等領域中均有著廣泛的應用。
[0004]在商業生產中益生菌培養基的生產制備過程中發揮著重要的作用，直接影響到菌體的密度和生產周期及生產成本。要得到高活菌數且高活力的直投式發酵劑，首先必須篩選適合乳酸菌大量生長的增菌培養基。目前，植物乳桿菌大都采用MRS作為基礎培養基，然后配合其他的生長因子來培養植物乳桿菌。李想等以MRS培養基為基本培養基優化碳源、氮源、磷源最佳添加量為蔗糖2%、酵母膏2.5%、磷酸氫二鉀0.2% ;李疆等以MRS為基礎培養基篩選出培養基的最優組合4.30g/L蔗糖，64.8mL/L麥芽汁，7.42g/L乳清粉，培養基初始pH值為6.25 ;熊濤等研究了在MRS基礎培養基中優化培養基的配方，結果表明葡萄糖質量分數5.43%、蛋白胨質量分數0.98%、磷酸氫二鉀質量分數0.59%,pH 6.5，35°C培養18h后，活菌數能達到4.68X 109cfu/mL。但用此MRS培養基價格昂貴，成分復雜，制作繁瑣，不利于工業化生產。因此，選擇價格低廉且活菌數高的適合保加利亞乳桿菌生長的增殖培養基是非常必要的。

【發明內容】

[0005]本發明的目的在于提供一種培養基廉價而且能使保加利亞乳桿菌大量生長，以實現高效濃縮型直投式發酵劑的工業化大規模生產的植物乳桿菌增菌培養基及其制備方法。
[0006]為達到上述目的，本發明的植物乳桿菌增菌培養基按100份質量份數計包括1-3份的葡萄糖，0.5-1.5份的乳糖，1-2.5份的大豆分離蛋白，10-20份的胡蘿卜汁、1_2.5份的酵母浸粉，0.2-0.4份的磷酸氫二鉀，0.004-0.01份的甲硫氨酸，0.004-0.01份的硫酸錳，余量為無菌水，初始pH值為7.0-7.5。
[0007]本發明的制備方法如下:按100份質量份數計取1-3份的葡萄糖，0.5-1.5份的乳糖，1-2.5份的大豆分離蛋白，1-2.5份的酵母浸粉，0.2-0.4份的磷酸氫二鉀，
0.004-0.01份的硫酸錳溶于無菌水中，經121°C，15min滅菌后再加入10-20份的胡蘿卜汁和0.004-0.01份的甲硫氨酸，調節pH值為7.0-7.5。
[0008]所述的大豆分離蛋白制備:將大豆粉經6號抽提溶劑油噴淋脫脂，然后去除6號溶劑油，得到脫脂大豆粉，將脫脂大豆粉與無菌蒸餾水按1:8-1:12的質量比混合，水浴鍋中加熱至40-60°C后添加lmol/L的鹽酸溶液，調節pH值為4.2-5.0，待40-80分鐘后于離心機中3000r/min-6000r/min離心15-20分鐘，去除上清液，對所得沉淀蛋白進行噴霧干燥或真空冷凍干燥得到大豆分離蛋白。
[0009]所述的胡蘿卜汁制備:取新鮮干凈的胡蘿卜用lmol/L NaOH溶液浸泡，加熱煮沸l-3min，清洗、去皮、切塊后水浴中煮沸5-10min，加入胡蘿卜質量2倍的水打漿，打漿后加入漿料質量0.03%的果膠酶在50°C處理45-60min后過濾除雜，用6000r/min離心機離心得到胡蘿卜汁。
[0010]所述的甲硫氨酸以甲硫氨酸溶液的形式加入即將甲硫氨酸制成質量濃度為1%的溶液經0.22微米的過濾膜過濾除菌得到。
[0011]所述的過濾膜經121°C滅菌15min。
[0012]本發明提供的植物乳桿菌增菌培養基，在常用基礎培養基上添加乳糖、大豆分離蛋白、胡蘿卜汁，對植物乳桿菌有很好的增菌效果；且這些物質廉價易得，制作方法簡單易行，利于大規模生產。
[0013]植物乳桿菌經三次活化后，以3%的接種量接入該增菌培養基中，37°C培養18h，活菌數高達(4.2-6.1) X 109cfu/mL以上，與實驗室常用乳桿菌培養的商業培養基MRS，進行相同條件的處理的活菌數(2.9-4.0)X109cfu/mL相比活菌數有了較大的提高，增菌效果非常顯著。
【具體實施方式】
[0014]實施例1:
[0015]本實施例的植物乳桿菌增菌培養基按100份質量份數計包括1份的葡萄糖，1份的乳糖，1.5份的大豆分離蛋白，10份的胡蘿卜汁、1份的酵母浸粉，0.2份的磷酸氫二鉀，0.4份質量濃度為1 %的甲硫氨酸溶液，0.004份的硫酸錳，余量為無菌水，初始pH值為7.0。
[0016]本實施例的制備方法如下:
[0017]首先，將0.22微米的過濾膜在121°C滅菌15min，然后將甲硫氨酸制成質量濃度為1 %的甲硫氨酸溶液后經過濾膜過濾除菌得到甲硫氨酸溶液。
[0018]按100份質量份數計取1份的葡萄糖，1份的乳糖，1.5份的大豆分離蛋白，1份的酵母浸粉，0.2份的磷酸氫二鉀，0.004份的硫酸錳溶于無菌水中，經121°C，15min滅菌后再加入10份的胡蘿卜汁和0.4份甲硫氨酸溶液，調節pH值為7.0。
[0019]植物乳桿菌經三次活化后，以3%的接種量接入本實施例的增菌培養基中，37 °C培養18h，活菌數高達4.2X109cfu/mL以上，與實驗室常用乳桿菌培養的商業MRS培養基，進行相同條件的處理的活菌數3.0X109cfu/mL相比活菌數有了較大的提高，增菌效果非常顯著。
[0020]實施例2:
[0021]本實施例的植物乳桿菌增菌培養基按100份質量份數計包括2.5份的葡萄糖，
0.5份的乳糖，1份的大豆分離蛋白，10份的胡蘿卜汁、2份的酵母浸粉，0.25份的磷酸氫二鉀，0.8份質量濃度為1 %的甲硫氨酸溶液，0.006份的硫酸錳，余量為無菌水，初始pH值為7.1。
[0022]本實施例的制備方法如下:
[0023]首先，將0.22微米的過濾膜在121°C滅菌15min，然后將甲硫氨酸制成質量濃度為1 %的甲硫氨酸溶液后經過濾膜過濾除菌得到甲硫氨酸溶液。
[0024]按100份質量份數計取2.5份的葡萄糖，0.5份的乳糖，1份的大豆分離蛋白，2份的酵母浸粉，0.25份的磷酸氫二鉀，0.006份的硫酸錳溶于無菌水中，經121°C，15min滅菌后再加入10份的胡蘿卜汁和0.8份甲硫氨酸溶液，調節pH值為7.1。
[0025]本實施例的大豆分離蛋白制備如下:將大豆粉經6號抽提溶劑油噴淋脫脂，然后去除6號溶劑油，得到脫脂大豆粉，將脫脂大豆粉與無菌蒸餾水按1:8的質量比混合，水浴鍋中加熱至40°C后添加lmol/L的鹽酸溶液，調節pH值為4.2，待40分鐘后于離心機中3000r/min離心20分鐘，去除上清液，對所得沉淀蛋白進行噴霧干燥或真空冷凍干燥得到大豆分離蛋白。
[0026]本實施例的胡蘿卜汁制備:取新鮮干凈的胡蘿卜用lmol/L NaOH溶液浸泡，加熱煮沸2min，清洗、去皮