一種嗜酸乳桿菌培養物飼料添加劑及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種嗜酸乳桿菌（Lactobacillus?acidophilus）菌株YY13002，菌株保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC），保藏編號CGMCC?NO.8043，保藏時間為2013年8月16日。本發明公開了上述菌株在飼料添加劑中的應用。本發明還公開了一種飼料添加劑，包括，發酵菌株YY13002獲得的菌體；發酵菌株YY13002過程中，培養基中添加葡萄糖，全脂奶粉和酸性蛋白酶。在飼料中添加本發明的飼料添加劑，能夠顯著提高仔豬的日采食量，并顯著降低仔豬腹瀉率。
【專利說明】一種嗜酸乳桿菌培養物飼料添加劑及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及飼料領域，尤其涉及一種飼料添加劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002]嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)屬于乳桿菌屬,革蘭氏陽性桿菌,桿的末端呈圓形，主要存在于小腸中，并釋放出乳酸，乙酸和一些對有害菌起作用的抗菌素，但是抑菌作用比較弱。
[0003]嗜酸乳桿菌在動物體內達到一定數量時，有非常明顯的健康促進效果。1.生物屏障作用。嗜酸乳桿菌于腸粘膜上皮細胞相互作用、密切結合構成了生物學屏障；同時，嗜酸乳桿菌能分泌抗生物素類物質(嗜酸乳菌素、嗜酸桿菌素、乳酸菌素等)，對腸道致病菌產生拮抗作用；通過其自身及其代謝物與其它細菌之間的相互作用，調整菌群之間的關系，維持和保證菌群最佳優勢組合以及這種組合的穩定，阻止了致病菌的定植和入侵，拮抗致病菌和有害微生物的生長及其毒素的粘附。2.營養作用。乳酸菌發酵后產生的乳酸，可提高胃內食物的預消化，提高鈣、磷、鐵的利用率和維生素D的吸收；同時，乳酸菌發酵過程中還能產生大量B族維生素。3.增強機體免疫力。嗜酸乳桿菌進入動物體內后，能在腸道內定植，相當于自然免疫，這樣能激活機體巨噬細胞活性，誘發特異性和非特異性的免疫反應，提聞抗感染的能力。
[0004]本領域的技術人員致力于開發能夠促進動物健康的飼料添加劑，開發含有嗜酸乳桿菌的飼料添加劑是一種很 好的技術方案。
【發明內容】
[0005]本發明所要解決的技術問題是提供一種飼料添加劑，能夠顯著促進動物的進食并改善動物的健康狀況。
[0006]為實現上述目的，本發明提供了一株嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)菌株YY13002，菌株保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏編號CGMCC N0.8043，保藏地址為:北京市朝陽區北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所，保藏時間為2013年8月16日。 申請人:意外的發現，本發明所記載的菌株YY13002，對促進動物特別是仔豬進食具有明顯的效果，并能有效改善仔豬的營養性腹瀉狀況。
[0007]進一步地,本發明提供了一種嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)菌株YY13002在飼料添加劑中的應用。
[0008]進一步地，本發明提供了一種飼料添加劑，包括，發酵菌株YY13002獲得的菌體；發酵菌株YY13002過程中，培養基中添加葡萄糖，全脂奶粉和酸性蛋白酶。優選地，所述葡萄糖和全脂奶粉的質量比為2:1~1.5。所述酸性蛋白酶在發酵培養基中的添加量為50~150IU/g物料干重。
[0009]進一步地，本發明提供了一種制備飼料添加劑的方法，包括如下步驟:
[0010]I)、種子活化:[0011]活化培養基為MRS培養基，取菌株YY13002菌種，接種于活化培養中，38°C靜置培養，至0D600值為6.8 ；
[0012]2)、種子一級擴培:
[0013]一級種子培養基:豆柏0.5% (W/V)，麩皮2% (W/V)，全脂奶粉1% (W/V)，葡萄糖3%(w/ν)，水；
[0014]將步驟I)中活化好的嗜酸乳桿菌，按照10%的接種比例，接種到一級種子培養基中，38°C靜置培養，至發酵液pH值達到4.0-4.1之間；
[0015]3)、種子二級擴培:
[0016]二級種子培養基:豆柏0.5% (W/V)，麩皮2% (W/V)，全脂奶粉1% (W/V)，葡萄糖3%(w/ν)，水；
[0017]將步驟2)中活化好的嗜酸乳桿菌，按照10%的接種比例，接種到二級種子培養基中，38°C靜置培養，至發酵液pH值達到4.0-4.1之間。
[0018]4)、發酵嗜酸乳桿菌:
[0019]100重量份底物培養基含:豆柏16重量份,麩皮74重量份,葡萄糖10重量份，全脂奶粉5重量份；
[0020]將水和經二級擴培的種子混合，加入酸性蛋白酶，混合均勻后加入底物培養基中，充分攪拌后，38 °C靜置培養9`6小時；
[0021]5)、干燥粉碎
[0022]步驟4)中發酵產物，經低溫干燥后，粉碎得飼料添加劑成品。
[0023]優選地，上述方法中，選用粗蛋白含量為40~50%的豆柏和粗蛋白含量為10~15%的麩皮。
[0024]優選地，步驟4)中水:底物培養基:二級擴陪的種子液質量比為100:80~120:10 ~20。
[0025]優選地，步驟4)中具體操作為:將100重量份的水和15重量份經過二級擴配的種子加入攪拌混合罐中，再按照100IU/g底物培養基物料比例加入酸性蛋白酶，獲得的混合物經充分混合均勻后，接入上述底物培養基中，充分攪拌均勻后，放入密閉的發酵罐中，38°C靜置培養96小時，至pH值達到4.0，此時物料的菌濃6*108CFU/g物料，物料經真空低溫干燥機40°C干燥后，再經過粉碎，制得飼料添加劑成品。
[0026]成品中水分≤10%,活菌數l*108CFU/g，總有機酸含量≤10%,小分子蛋白含量^ 10% ;該成品含大量的嗜酸乳桿菌及嗜酸乳桿菌的代謝產物。
[0027]本發明中嗜酸乳桿菌培養物必須通過2次擴配，擴培的種子培養基原料組成與底物培養基成份一致，有利于縮短發酵過程中的適應期，同時在培養基中必須加入全脂奶粉和在底物培養基中加入酸性蛋白酶，才能保證添加的10%的葡萄糖被充分轉化成有機酸，使得最終產品的總有機酸含量才能達到10%以上。
[0028]底物培養基的粗蛋白含量配制成與飼料的粗蛋白一致，這樣方便成品在飼料中的應用。
【具體實施方式】
[0029]實施例1[0030]1.種子活化:
[0031]活化培養基:MRS培養基
[0032]具體操作，取出穿刺培養保藏的嗜酸乳桿菌，用穿刺針將嗜酸乳桿菌接種到MRS培養基中，38°C靜置培養，至OD值達到6.8，此時培養基的菌濃為8.2*108CFU/mL，種子活化結束。
[0033]2.種子一級擴培:
[0034]一級種子培養基:豆柏0.5% (W/V)，麩皮2% (W/V)，1%的全脂奶粉，葡萄糖3% (ff/V)；
[0035]將I中活化好的嗜酸乳桿菌，按照10%的接種比例，接種到種子培養基中，38°C靜置培養，至發酵液pH值達到4.0，此時發酵液中的菌濃為3*108CFU/mL。
[0036]3.種子二級擴培:
[0037]二級種子培養基:豆柏0.5% (W/V)，麩皮2% (W/V)，1%的全脂奶粉，葡萄糖3% (ff/V)；
[0038]將2中活化好的嗜酸乳桿菌，按照10%的接種比例，接種到種子培養基中，38°C靜置培養，至發酵液pH值達到4.1，此時發酵液中的菌濃為3*108CFU/mL。
[0039]4.嗜酸乳桿菌培養物的生產:
[0040]為方便最后獲得的嗜酸乳桿菌培養物成品非常容易被使用，按照我們設計的產品最后用在乳仔豬料中，故我們按照乳仔豬對營養的需求蛋白19%來對底物培養基進行配制，配比如下
[0041]底物培養基(IOOkg):豆柏(粗蛋白:43%):16kg，麩皮(粗蛋白:14%):74kg，葡萄糖:IOkg,全脂奶粉:5kg ；
[0042]具體操作:將IOOkg的水和15kg經過二級擴配的種子加入攪拌混合罐中，再按照100IU/g物料比例加入酸性蛋白酶(杰能科，酶活:2*106IU/g)，獲得的混合物經充分混合均勻后，接入上述底物培養基IOOkg中，充分攪拌均勻后，放入密閉的發酵罐中，38°C靜置培養96小時，至pH值達到4.0，此時物料的菌濃6*108CFU/g物料，物料經真空低溫干燥機40°C干燥后，再經過粉碎，成品的指標為水分10%，活菌數l*108CFU/g物料，總有機酸含量13%，小分子蛋白含量15% ;該成品含大量的嗜酸乳桿菌及嗜酸乳桿菌的代謝產物。
[0043]實施例2
[0044]1.種子活化:
[0045]活化培養基:MRS培養基
[0046]具體操作，取出穿刺培養保藏的嗜酸乳桿菌，用穿刺針將嗜酸乳桿菌接種到MRS培養基中，38°C靜置培養，至0D600值達到6.8，此時培養基的菌濃為8.3*108CFU/mL，種子活化結束。
[0047]2.種子一級擴培:
[0048]一級種子培養基:豆柏0.5% (W/V)，麩皮2% (W/V)，1%的全脂奶粉，葡萄糖3% (ff/V)；
[0049]將I中活化好的嗜酸乳桿菌，按照10%的接種比例，接種到種子培養基中，38°C靜置培養，至發酵液pH值達到4.1，此時發酵液中的菌濃為3*108CFU/mL。
[0050]3.種子二級擴培:[0051]二級種子培養基:豆柏0.5% (W/V)，麩皮2% (W/V)，1%的全脂奶粉，葡萄糖3% (ff/V)；
[0052]將2中活化好的嗜酸乳桿菌，按照10%的接種比例，接種到種子培養基中，38°C靜置培養，至發酵液pH值達到4.0，此時發酵液中的菌濃為3*108CFU/mL。
[0053]4.嗜酸乳桿菌培養物的生產:
[0054]為方便最后獲得的嗜酸乳桿菌培養物成品非常容易被使用，按照我們設計的產品最后用在乳仔豬料中，故我們按照乳仔豬對營養的需求蛋白19%來對底物培養基進行配制，配比如下
[0055]底物培養基(IOOkg):豆柏(粗蛋白:43%):16kg，麩皮(粗蛋白:15%):74kg，葡萄糖:IOkg,全脂奶粉:5kg ；
[0056]具體操作:將IOOkg的水和IOkg經過二級擴配的種子加入攪拌混合罐中，再按照150IU/g物料比例加入酸性蛋白酶(杰能科，酶活:2*106IU/g)，獲得的混合物經充分混合均勻后，接入上述底物培養基120kg中，充分攪拌均勻后，放入密閉的發酵罐中，38°C靜置培養96小時，至pH值達到4.1，此時物料的菌濃6*108CFU/g物料，物料經真空低溫干燥機40°C干燥后，再經過粉碎，成品的指標為水分8%，活菌數l*108CFU/g物料，總有機酸含量12%，小分子蛋白含量15% ;該成品含大量的嗜酸乳桿菌及嗜酸乳桿菌的代謝產物。
[0057]實施例3
[0058]1.種子活化:
[0059]活化培養基:MRS培養 基
[0060]具體操作，取出穿刺培養保藏的嗜酸乳桿菌，用穿刺針將嗜酸乳桿菌接種到MRS培養基中，38°C靜置培養，至0D600值達到6.8，此時培養基的菌濃為8.3*108CFU/mL，種子活化結束。
[0061]2.種子一級擴培:
[0062]一級種子培養基:豆柏0.5% (W/V)，麩皮2% (W/V)，1%的全脂奶粉，葡萄糖3% (ff/V)；
[0063]將I中活化好的嗜酸乳桿菌，按照10%的接種比例，接種到種子培養基中，38°C靜置培養，至發酵液pH值達到4.1，此時發酵液中的菌濃為3*108CFU/mL。
[0064]3.種子二級擴培:
[0065]二級種子培養基:豆柏0.5% (W/V)，麩皮2% (W/V)，1%的全脂奶粉，葡萄糖3% (ff/V)；
[0066]將2中活化好的嗜酸乳桿菌，按照10%的接種比例，接種到種子培養基中，38°C靜置培養，至發酵液pH值達到4.0，此時發酵液中的菌濃為3*108CFU/mL。
[0067]4.嗜酸乳桿菌培養物的生產:
[0068]為方便最后獲得的嗜酸乳桿菌培養物成品非常容易被使用，按照我們設計的產品最后用在乳仔豬料中，故我們按照乳仔豬對營養的需求蛋白19%來對底物培養基進行配制，配比如下
[0069]底物培養基(IOOkg):豆柏(粗蛋白:43%):16kg，麩皮(粗蛋白:15%):74kg，葡萄糖:IOkg,全脂奶粉:5kg ；
[0070]具體操作:將IOOkg的水和20kg經過二級擴配的種子加入攪拌混合罐中，再按照50IU/g物料比例加入酸性蛋白酶(杰能科，酶活:2*106IU/g)，獲得的混合物經充分混合均勻后，接入上述底物培養基80kg中，充分攪拌均勻后，放入密閉的發酵罐中，38°C靜置培養96小時，至pH值達到4.1，此時物料的菌濃6*108CFU/g物料，物料經真空低溫干燥機40°C干燥后，再經過粉碎，成品的指標為水分7%，活菌數l*108CFU/g物料，總有機酸含量15%，小分子蛋白含量18% ;該成品含大量的嗜酸乳桿菌及嗜酸乳桿菌的代謝產物。
[0071]實施例4
[0072]選用21日斷奶仔豬(外三元:杜X長X大)，隨機分組，每組25頭，共12組，每個試驗3組平行，以下表為試驗日糧配方進行動物喂養試驗:
[0073]試驗日糧配方
[0074](單位:kg)
[0075]
【權利要求】
1.一種嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)菌株YY13002,菌株保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏編號CGMCC N0.8043，保藏時間為2013年8月16日。
2.如權利要求1所述的嗜酸乳桿菌菌株YY13002，在飼料添加劑中的應用。
3.—種飼料添加劑，其特征在于，包括發酵菌株YY13002獲得的菌體；發酵菌株YY13002過程中，培養基中添加葡萄糖，全脂奶粉和酸性蛋白酶。
4.如權利要求3所述的飼料添加劑，其中，所述葡萄糖和全脂奶粉的質量比為2:1~1.5。
5.如權利要求3所述的飼料添加劑，其中，所述酸性蛋白酶在發酵培養基中的添加量為50~150IU/g物料干重。
6.一種制備飼料添加劑的方法，包括如下步驟: 。1)、種子活化: 活化培養基為MRS培養基，取權利要求1所述菌株YY13002菌種，接種于活化培養中，38°C靜置培養，至0D600值為6.8 ； 。2)、種子一級擴培: 一級種子培養基:豆柏0.5% (W/V)，麩皮2% (W/V)，全脂奶粉1% (W/V)，葡萄糖3% (ff/V)，水； 將步驟I)中活化好的嗜酸乳桿菌，按照10%的接種比例，接種到一級種子培養基中，38°C靜置培養，至發酵液pH值達到4.0-4.1之間； 3)、種子二級擴培: 二級種子培養基:豆柏0.5% (W/V)，麩皮2% (W/V)，全脂奶粉1% (W/V)，葡萄糖3% (ff/V)，水； 將步驟2)中活化好的嗜酸乳桿菌，按照10%的接種比例，接種到二級種子培養基中，38 °C靜置培養，至發酵液pH值達到4.0-4.1之間。 .4)、發酵嗜酸乳桿菌: IOOkg底物培養基含:豆柏16kg,麩皮74kg,葡萄糖IOkg,全脂奶粉5kg ;將水和經二級擴培的種子液混合，加入酸性蛋白酶，混合均勻后加入底物培養基中，充分攪拌后，38°C靜置培養96小時； .5)、干燥粉碎 步驟4)中發酵產物，經低溫干燥后，粉碎得飼料添加劑成品。
7.如權利要求6所述的方法，其中，選用粗蛋白含量為40~50%的豆柏和粗蛋白含量為10~15%的麩皮。
8.如權利要求6所述的方法，其中，步驟4)中水:底物培養基:二級擴陪的種子液質量比為 100:80 ~120:10 ~20。
9.如權利要求6所述的方法，其中，步驟4)中具體操作為:將100重量份的水和15重量份經過二級擴配的種子加入攪拌混合罐中，再按照ιοοιυ/g物料比例加入酸性蛋白酶，獲得的混合物經充分混合均勻后，接入上述底物培養基中，充分攪拌均勻后，放入密閉的發酵罐中，38°C靜置培養96小時，至pH值達到4.0，此時物料的菌濃6*108CFU/g物料，物料經真空低溫干燥機40°C干燥后，再經過粉碎，制得飼料添加劑成品。
10.如權利 要求6所述的方法，其中步驟5)中，干燥溫度低于40°C。
【文檔編號】C12N1/20GK103555611SQ201310450320
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年9月27日 優先權日:2013年9月27日
【發明者】方華, 李旺軍, 季春源 申請人:上海源耀生物股份有限公司