專利名稱：：抗病毒樹枝狀體的制作方法
技術領域：
：本發明涉及抗病毒劑，具體地講，涉及已證實具有針對人免疫缺損病毒(HIV)和其它有包膜病毒的顯著抗病毒活性的樹枝狀體。業已證實，某些磺化多糖化合物具有針對HIV的抗病毒活性，然而，這些化合物穩定性較差，因此，需要大量此類化合物方能獲得有效的抗病毒效果。另外，這類化合物中的許多(例如肝素和葡聚糖硫酸酯)是很強的抗凝劑，由于有這種活性，它們不是特別適合于作為抗病毒劑在臨床上應用。本發明提供了一種以一種在本文中被稱作“樹枝狀體”的特殊類型的聚合物為基礎的新型的抗病毒劑，它具有針對HIV1和HIV2、CMV和HSV的顯著抗病毒活性，而且基本上沒有抗凝劑活性。因此，這類化合物很適合于作為人體的抗病毒劑用于預防和治療目的。因此，本發明提供了一種抗病毒化合物，它包括一種具有多個端基的樹枝狀體，其中，至少所述端基之一上結合著一個帶有陰離子或陽離子的基團。這種樹枝狀體在本文中被稱為”陰離子或陽離子樹枝狀體”，而且，在本申請說明書及權利要求書中所使用的這一術語不僅包括樹枝狀體本身，而且還包括其可以藥用或獸用的鹽，例如，堿金屬或堿土金屬鹽，如鈉鹽、鉀鹽或鈣鹽。樹枝狀體是高度分枝的大分子化合物，該化合物是這樣生成的由一種原始的核心分子開始，通過重復的反應順序以連續的“代”一層層或一步步加上去，形成一種三維、高度有序的聚合物。一種通用的樹枝狀結構如圖1所示。樹枝狀體具有如下特征(i)一個起始核心(I)，它可以有一個或多個反應活性部位，而且為點狀或其大小能有效影響樹枝狀體的最終拓外結構；(ii)接合在所述起始核心上的數層分枝重復單元(iii)接合在該樹枝狀體表面的功能性端基(Z)。本發明將樹枝狀結構用作離子基團接合的構架；本發明并不局限于在本文中詳細介紹的球形樹枝狀體，而可以基于任何樹枝狀結構。無論是樹枝狀體的形狀還是組成的類型都是本領域技術人員所熟知的。樹枝狀體的制備方法廣為人知，舉例來說，在以下美國專利中有所披露在US4,289,872和US4,410,688中披露了以賴氨酸單元層為基礎的樹枝狀體，而在US4,507,466、4,558,120、4,568,737和4,587,329中披露了以其它單元(包括聚酰氨基胺)為單元的樹枝狀體或PAMAM樹枝狀體。在上述美國專利中所披露的樹枝狀體，被介紹運用于以下目的如可用作表面改性劑，金屬螯合劑，破乳劑或油/水乳狀液，用作造紙的濕強劑，用作含水配方，如涂料的粘度改性劑。美國專利US4,289,872和4,410,688還建議以賴氨酸單元為基礎的樹枝狀體，可以用作制備藥劑的基質。國際專利公開號WO88/01178、WO88/01179和WO88/01180披露了綴合物，其中，一種樹枝狀體與另一種材料，如所帶的藥用或農用材料綴合或結合。這些國際專利以及上述美國專利廣泛地披露了各種樹枝狀體及其制備方法，上述專利的內容被收作本申請的參考資料。本文中所說的“樹枝狀體”，是按照其最廣泛的意義理解，披露于國際專利公開號WO88/01178、WO88/01179和WO88/01180中的所有形式和組成的樹枝狀體都包括在范疇之內。這一術語還包括在上述專利公開號中所披露的連接或橋連的樹枝狀體。本發明的優選樹枝狀體包括一個至少同兩個樹枝狀分枝共價連接的多價核心，而且，最好至少延伸兩代。特別優選的樹枝狀體是聚酰氨基胺(PAMAM)樹枝狀體、PAMAM(EDA)樹枝狀體和聚賴氨酸樹枝狀體。根據本發明，樹枝狀體表面的至少一個，最好是多個端基具有一個與其共價結合的帶有陰離子或陽離子的基團。樹枝狀體的分枝可以以氨基或其它官能反應基，如OH、SH等為末端，這些末端基團隨后能夠與陽離子和陰離子基團反應形成樹枝狀體的外層。當所述樹枝狀體的端基為胺基時，含陰離子或陽離子的基團可通過多種包括酰胺和硫脲鍵在內的官能團與樹枝狀體結合。能夠與所述樹枝狀體的端基結合的優選含陰離子或陽離子的基團包括含磺酸的基團、含羧酸的基團、含三甲銨的基團和含聚氨基大環的基團。舉例來說，適于與樹枝狀體的氨基或其它端基結合的含陰離子或陽離子的基團包括如下基團(其中，n為0或正整數，更具體地說，n為0或1～20的整數〕——NH(CH2)nSO3-——(CH2)nSO3-——Ar(SO3-)n——CH2CH(SO3-)COOH——CH(SO3-)CH2COOH——ArX(CH2)nSO3-(X＝O，S，NH)根據本發明，能夠與樹枝狀體的端基結合的具體基團包括烷基磺酸基團；磺基乙酰胺基團；磺基琥珀酰胺酸基團；N-磺烷基琥珀酰胺基團，如N-(2-磺乙基)琥珀酰胺基團；由一個或多個磺酸基團取代過的芳基或雜芳基，如4-磺苯基硫脲基團，3，6-二磺萘基硫脲基團，4-磺萘基硫脲基，3，5-二磺苯基硫脲基團和3，6，8-三磺萘基硫脲基團；用一個或多個磺酸、磺烷基、磺烷氧基、磺烷基氨基或磺烷基硫基基團取代過的芳基酰胺或雜芳基酰胺，如4-(磺甲基)苯甲酰胺基團或4-磺基苯甲酰胺基團；用一個或多個磺酸基團取代過的芳基或雜芳基鏈烷酰胺，如N-(4-磺苯基)丙酰胺基團；用一個或多個磺酸基團取代過的芳基或雜芳基脲，如4-磺苯基脲基團；氨基酸的N，N，N-三甲基衍生物，如N，N，N-三甲基甘氨酰胺基團；用一個或多個三烷基氨基、三烷基氨基烷基、三烷基氨基烷氧基、三烷基氨基烷基氨基或三烷基氨基烷基硫基取代過的芳基或雜芳基酰胺，如4-三甲銨苯甲酰胺或4-(三甲銨甲基)苯甲酰胺基團；N-(2-乙酸基乙基)-N，N-(二甲銨)甲基甲酰胺基團；胍基；4-羧基-3-羥基芐胺基團；或大環聚氨基基團，它具有一個或多個通過一個烷基或芳基間隔基團與所述樹枝狀體連接的大環，如4-([1，4，8，11-四氮雜環十四碳烷]甲基)苯甲酰胺基團。本發明的陰離子或陽離子樹枝狀體可通過本領域技術人員所熟知的化學方法制備。通過舉例的方式在下面的實施例1～20中披露了一些適用的方法。如上文所述，業已發現本發明的陰離子或陽離子樹枝狀體具有顯著的抗病毒活性，特別是抗HIV的活性。因此，可將這種陰離子或陽離子樹枝狀體用于病毒感染的預防和治療，例如，用于HIV1和HIV2及其它有包膜病毒所引起的感染的預防和治療。所述病毒包括諸如乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒之類的黃病毒、牛病毒性腹瀉病毒、甲型和乙型人流感病毒、鼻病毒、人副流感病毒、呼吸道含胞病毒(RSV)，水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)、人巨細胞病毒(CMV)、EB病毒(EBV)、人乳頭瘤病毒(HPV)、腺病毒-8、1型和2型單純皰疹病毒、麻疹病毒和水泡性口炎病毒(VSV)。因此，從另一方面來說，本發明提供了一種用于人或人以外的動物的預防性或治療性抗病毒處理的藥用或獸用組合物，該組合物含有一種上文中廣義的陰離子或陽離子樹枝狀體，所述樹枝狀體至少與一種可以藥用或獸用的載體或稀釋劑結合。上述組合物的配方為本領域技術人員所熟知。合適的可以藥用的載體和/或稀釋劑包括任何、全部常規的溶劑、分散介質、填充劑、固體載體、水溶液、包衣劑、抗菌劑和抗真菌劑、等滲和吸附緩釋劑等。將上述介質和試劑用作藥用活性物質在本領域中是廣為人知的，例如，可參考Remington′sPharmaceuticalScience(18th版，MackPublishingCompany，Pennsylvania，USA)。除非其與所述活性成分不相容，任何常規介質或試劑均可用于本發明的藥用組合物。還可將輔助活性成分摻入本發明組合物中。為了便于服用和劑量的統一，將組合物配制成劑量單元形式特別有利。這里所說的劑量單元形式是指適于用作接受治療的人體使用的單元劑量的物理分立單位；每一單位含有預定數量的活性成分，預計它能與所需的藥用載體和/或稀釋劑一起產生希望的治療效果。本發明的新型劑量單位形式的技術要求服從并直接取決于(a)所用活性成分的特有特性及有待取得的具體治療效果，以及(b)在合成這樣一種用于特殊治療的活性成分的領域中所固有的局限性。另一方面，本發明提供了一種對人或人以外的動物的HIV或其它病毒感染進行預防性或治療性治療的方法，該方法包括給所述人體或動物使用一種預防或治療性抗病毒有效量的，在上文中所泛指的陰離子或陽離子樹枝狀體。再一方面，本發明提供了將預防或治療性抗病毒有效量的上文所泛指的陰離子或陽離子樹枝狀體用于人或人以外的動物的HIV或其它病毒感染的預防性或治療性治療的用途，或將其用于生產用于上述目的的藥物的用途。可使用各種各樣的服用方法。當然，所選用的具體方法取決于所治療的具體病癥和治療效果所需的用量。一般而言，本發明的方法可用任何服用方法來實施，只要該方法在醫學上是可以接受的，也就是說任何能使本發明的活性成分產生治療效果而又不會引起臨床上所不希望的副作用的方法。上述使用方法包括口服，經直腸、局部、經鼻、經皮或腸胃外(例如，皮下、肌肉和靜脈)服用。用于口服的配方包括分立的單元，如膠囊、片劑和錠劑等。其它使用途徑包括直接注入脊髓液的鞘內使用，直接導入方法可使用本領域普通技術人員所熟知的各種導管和氣囊血管成形裝置，以及通過實質內(intraparenchymal)注射注入目標基團。所述組合物便于制成單元劑量形式，可通過藥學領域任何已知方法進行制備。所述方法包括將上述活性成分與一種載體結合在一起的步驟，所述載體構成一種或幾種輔助成分。一般，該組合物是這樣制備的將所述活性成分與一種液體載體、一種細碎的固體載體或同時與這兩種載體均勻而又緊密地結合在一起，然后，如果必要的話，還要使產品成形。適于口服的本發明組合物可被制成分立的單位，如含有脂質體中各自含有預定劑量的活性成分的膠囊、扁囊劑、片劑或錠劑，或水溶液或非水溶液中的懸浮液，如糖漿、酏劑或乳劑。適于腸胃外使用的組合物通常包括所述活性成分的無菌水制劑，該制劑最好與受體的血等滲。這種制劑可按照已知方法，用適當的分散或濕潤劑和懸浮劑配制而成。所述無菌可注射制劑也可以是用無毒的可腸胃外使用的稀釋劑或溶劑配制的無菌注射液或懸浮液。例如，溶于聚乙二醇中的溶液。可以采用的、可接受媒介物和溶劑有水、林格溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，通常還把無菌的固定油用作溶劑或懸浮介質。為此，可采用任何緩和的固定油，包括合成的甘油單脂或甘油二酯。此外，諸如油酸之類的脂肪酸也可用于這種注射用制劑。其它輸送系統包括緩釋輸送系統。優選的緩釋輸送系統包括以緩釋藥丸或膠囊形式釋放本發明的活性成分的系統。有很多類型的緩釋輸送系統可以采用。其中，包括但不局限于(a)侵蝕系統，其中，所述活性成分包含在一種基質里，和(b)擴散系統，其中，所述活性成分以受控的速度通過一種聚合物滲透。另外，還可以采用泵基硬物輸送系統，其中的一些適用于植入。所述活性成分是以預防或治療的有效用量給藥。預防或治療的有效用量是指至少基團取得期望的效果、或延緩被治療的具體病癥的發作、抑制其發展、或同時抑制其發作或發展所需的用量。當然，所述用量取決于被治療的具體病癥、病癥的嚴重程度和每個患者的參數，包括患者的年齡、身體情況、體形、體重和同時采取的治療措施。這些因素為本領域普通技術人員所熟知，而且只需進行一些常規實驗即可確定。通常，以使用最大劑量為宜，就是說使用符合健康醫學標準的最高安全劑量。不過，本領域技術人員可以理解，由于醫學原因、心理原因或任何其它原因可以使用較低的劑量或耐受劑量。一般，活性成分的口服日劑量為每日每公斤約0.01～1000mg。開始可使用小劑量(0.01～1mg)，隨后把劑量加大到每日每公斤約1000mg。當受治對象對上述劑量的反應不明顯時，可采用患者所能耐受的更高劑量(或通過一種不同的、更定位的給藥方式獲得較高的有效劑量)。期望每日多次劑量可取得化合物的合適系統水平。在本說明書以及隨后的權利要求書中，除非本文另有需要，“包括”(“comprise”或其變形“comprises”或“comprising”)一詞應被理解成包括所述的整數或整數群，但不排除任何其它的整數或整數群。從以下實施例中可以看出本發明的其它特征，這些實施例在本文中是為了解釋本發明，而不是要限定本發明的范圍。在下列實施例中，PAMAM樹枝狀體是指以一個氨核心為基礎的聚酰氨基胺樹枝狀體，如在美國專利US4,507,466、4,558,120、4,568,737和4,587,329中所披露的；PAMAM(EDA)樹枝狀體是指以乙二胺核心為基礎的聚酰氨基胺樹枝狀體；而BHAlysxlysylysz樹枝狀體是指以二苯甲基胺核心和賴氨酸分枝單元為基礎的聚賴氨酸不對稱樹枝狀體，如在US4,289,872和4,410,688中所披露的。聚酰氨基胺樹枝狀體PAMAM1.0、PAMAM2.0、PAMAM3.0、PAMAM4.0、PAMAM5.0、或更高代，PAMAM4.0(EDA)，和聚賴氨酸樹枝狀體BHAlyslys2、BHAlyslys2lys4、BHAlyslys2lys4lys8和BHAlyslys2lys4lys8lys16、BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32、BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32lys64或更高代是按照在上文中提及的美國專利US4,289,872、4,410,688、4,507,466、4,558,120、4,568,737和4,587,329和國際專利申請WO88/01178、WO88/01179和WO88/01180中所披露的方法制備的。實施例1聚合物與2-丙烯酰胺基-2-甲基丙烷磺酸反應，得到以磺酸為末端的樹枝狀體。A.PAMAM1.0將固體碳酸鈉(0.13g；1.0mmol)緩慢加入被攪動的溶于水(3ml)中的2-丙烯酰胺基-2-甲基丙烷磺酸(0.41g；2.0mmol)溶液中。在停止放氣以后，該溶液的pH為8.0。然后將PAMAM1.0(0.12g；0.33mmol)水(1ml)溶液加進上述溶液中，接著加入4滴40％芐基三甲銨氫氧化物水溶液。在氮氣中以60℃的溫度將所得溶液加熱3天，然后濃縮。通過凝膠過濾(SephadexG10；水)純化殘余物，再冷凍干燥，得到磺化PAMAM1.0樹枝狀體，為灰白色固體(0.51g)。1H和13Cnmr光譜證實其為一種二烷基化和一烷基化PAMAM1.0樹枝狀體的混合物(大約70∶30)。13Cnmr(D2O)δ31.0，31.1，37.1，37.7，41.3，48.6，51.5，53.1，53.4，55.6，56.2，61.2，61.5，178.3，179.0，179.8。B.PAMAM2.0(化合物20)按上述方法讓PAMAM2.0與2-丙烯酰胺基-2-甲基丙烷磺酸反應。通過凝膠過濾(SephadexG10；水)純化所得粗制品，然后冷凍干燥得到一種灰白色固體物質。1H和13Cnmr光譜證實，其為一種二烷基化和一烷基化PAMAM2.0樹枝狀體的混合物(大約65∶35)。13Cnmr(D2O)δ31.0，31.1，37.1，37.7，41.3，48.7，51.5，53.4，55.6，56.2，61.2，61.5，178.4，179.0，179.1，179.6。當省去所述芐基三甲胺氫氧化物重復上述反應時，得到類似結果。C.PAMAM3.0按上述方法讓PAMAM3.0與2-丙烯酰胺基-2-甲基丙烷磺酸反應，不同的是，使用稍微過量的碳酸鈉，而且不用芐基三甲銨氫化物。1H和13Cnmr光譜證實，其為一種二烷基化和一烷基化PAMAM3.0樹枝狀體的混合物(大約50∶50)。13Cnmr(D2O)δ31.0，31.1，36.9，37.4，41.1，48.6，51.5，53.4，55.7，56.2，61.1，61.5，178.2，178.9，179.0，179.8。D.PAMAM4.0以與PAMAM3.0相同的方法讓PAMAM4.0與2-丙烯酰胺基-2-甲基丙烷磺酸反應。1H和13Cnmr光譜證實，其為一種二烷基化和一烷基化PAMAM4.0樹枝狀體的混合物(約為35∶65)。13Cnmr(D2O)δ31.0，31.1，36.9，37.3，41.1，48.5，51.5，53.5，55.7，56.2，61.1，61.5，178.1，178.9，179.0，179.8。實施例2以磺基乙酰胺鈉為末端的樹枝狀體的制備A.PAMAM1.0將溶解在無水DMF(1ml)中的溴乙酸4-硝基苯酯(0.40g；1.5mmol)溶液加入被攪動的溶解在DMF(3ml)中的PAMAM1.0(0.18g；0.5mmol)溶液中。將所得到的黃色溶液在室溫下攪拌20小時，同時，所進行的水合茚三酮試驗呈陰性。濃縮該溶液(30°/0.1mmHg)，得到一種黃色油狀物。將這種油狀物分配在水和氯仿之間，分離水層，用氯仿洗滌(2X)，最后用乙酸乙酯洗滌。濃縮(35°/25mmHg)所得水溶液，得到溴乙酰化PAMAM1.0樹枝狀體，呈黃色油狀(0.36g；100％)。13Cnmr(D2O)δ32.8，33.3，43.0，43.5，54.4，174.5，176.4。將溶解在水(1ml)中的亞硫酸鈉(0.2g；1.6mmol)溶液加入溶于水(5ml)中的上述乙酰化PAMAM1.0樹枝狀體(0.36g；0.5mmol)溶液中，并將所得到的溶液在室溫下放置11天。濃縮所得到的黃色溶液，得到一種黃色固體(0.60g)。13Cnmr(D2O)δ34.4，43.1，43.4，54.0，61.7，171.3，177.2。無須分離溴乙酰化樹枝狀體即可進行上述反應順序，只要簡單地將亞硫酸鈉溶液加入從第一個反應中所得到的粗制含水提取物就行。B.PAMAM2.0方法1將溶解在無水DMF(1ml)中的溴乙酸4-硝基苯酯(0.18g；0.7mmol)溶液加進被攪動的溶解在DMF(3ml)中的PAMAM2.0(0.10g；0.1mmol)溶液中。將所得到的黃色溶液在室溫下攪動20小時，同時，所進行的水合茚三酮試驗呈陰性。將該溶液渦旋加入水(150ml)中，用氯仿(3X)和乙酸乙酯萃取所得到的混合物。將溶解在水(1ml)中的亞硫酸鈉(0.1g；0.8mmol)溶液加入粗制的溴乙酰化樹枝狀體溶液中，將該混合物在室溫下放置3天。然后濃縮所得到的黃色溶液，得到一種黃色固體殘余物，通過凝膠過濾(SephadexLH20；水)得到以磺基乙酰胺鈉為末端的PAMAM2.0樹枝狀體(103mg)。13Cnmr(D2O)δ33.0，35.7，36.0，37.7，40.3，43.0，43.2，53.4，53.7，56.0，61.6，171.2，174.6，178.5。方法2將固體乙酰硫代乙酸琥珀酰亞胺基酯(67mg；0.33mmol)加入溶解在無水DMF(2ml)中的PAMAM2.0(52mg；0.05mmol)溶液中，并把所得到的溶液在室溫下攪拌2天。然后濃縮(30°/10-3mmHg)該混合物，得到一種油狀殘余物。將該殘余物分配在水與氯仿之間，分離水層，并將其濃縮成一種粘性油(117mg)。1H和13Cnmr光譜證實，其為酰化樹枝狀體和N-羥基琥珀酰亞胺的混合物。凝膠過濾(SephadexG10；水)得到一種純的以乙酰硫代乙酰胺為末端的PAMAM2.0樹枝狀體(29mg)的樣品。13Cnmr(D2O)δ34.0，34.2，37.3，43.0，43.1，43.3，53.5，54.0，56.3，175.4，177.2，177.5。將溶解在40％甲酸水溶液(7ml)中的上述官能化樹枝狀體的溶液加進冰鎮的新制備的溶解在甲酸(2ml)里的過甲酸(1.6mmol)溶液中。在0℃溫度下攪拌該混合物1小時，然后再在室溫下攪拌20小時。隨后加進少量活性炭，以分解剩余的過酸，將所得混合物攪拌30分鐘，然后過濾并濃縮，得到一種粘性油。將所得到的粗制品溶于水中，用碳酸氫鈉水溶液把pH調至9.0，并以從SephadexG10柱中通過的方式將所得材料脫鹽。低壓升華干燥后得到一種白色固體(20mg)，其光譜學特征大致與用方法1獲得的材料相同。13Cnmr(D2)δ33.0，38.7，42.9，43.0，43.1，53.9，54.3，56.5，61.6，171.2，176.4，177.0。實施例3磺基琥珀酰胺酸鈉為末端的樹枝狀體的制備。A.PAMAM1.0將固體馬來酐(0.11g；1.1mmol)加入被攪動的溶解在無水DMF(3ml)里的PAMAM1.0(0.12g；0.33mmol)中。當馬來酐溶解時該混合物略微變熱并呈棕色，將所得到的溶液在室溫下攪拌過夜。然后濃縮(30°/10-4mmHg)該溶液，得到一種粘性油。1H和13Cnmr(D2O)證實，PAMAM已完全轉化成三酰胺及一些馬來酸。13Cnmr(D2O)δ33.1，42.8，43.1，54.3，135.0，137.1，169.1，171.9，173.3。然后把粗制三酰胺溶解在水(4ml)中，并加入固體亞硫酸鈉(0.20g；1.6mmol)。將所得到的溶液在室溫下放置4天，然后濃縮。1H和13Cnmr(D2O)證實，其為一種以區域異構的磺基琥珀酰胺酸鈉為末端的PAMAM1.0樹枝狀體與磺基琥珀酸的1∶1混合物。通過凝膠過濾(SephadexG10；水)純化所得粗制品，得到一種以磺基琥珀酰胺酸鈉為末端的PAMAM樹枝狀體(107mg)。13Cnmr(D2O)δ33.3，39.6，40.0，42.9，43.1，54.0，67.9，69.4，173.8，176.3，177.6，181.8。B.PAMAM2.0按照上述方法制備一種以區域異構的磺基琥珀酰胺酸鈉為末端的PAMAM2.0樹枝狀體混合物。13CnmrPAMAM2.0馬來酰胺酸衍生物(D2O)δ32.8，33.0，38.7，42.9，53.8，54.3，56.5，135.2，136.8，169.2，171.9，173.5，174.6.13CnmrPAMAM2.0磺基琥珀酰胺酸鈉衍生物(D2O)δ37.0，40.1，41.1，43.0，43.2，43.9，53.0，53.3，55.5，68.0，69.4，173.8，177.6，179.1，179.5，179.8，182.3。C.PAMAM4.0(化合物14)將固體馬來酐(60mg；0.6mmol)加入被攪動的溶解在無水DMF(2ml)里的PAMAM4.0溶液中。該混合物開始時變濁，但不久就變成一種透明的溶液，在室溫下攪拌該溶液過夜。濃縮(35°/10-4mmHg)該溶液，得到一種粘性油。1H和13Cnmr(D2O)證實，所述PAMAM4.0已完全轉化成聚酰胺與某些馬來酸。然后把這種粗制聚酰胺溶于水(2ml)中，并加入溶解在水(2ml)中的亞硫酸鈉(126mg；1.0mmol)溶液。將所得溶液在室溫下放置2天，然后濃縮。1H和13Cnmr(D2O)證實其為一種以區域異構的磺基琥珀酰胺酸鈉為末端的PAMAM4.0樹枝狀體與某些磺基琥珀酸的混合物。通過凝膠過濾(SephadexLH20；水)純化該粗制品，得到一種以24個區域異構的磺基琥珀酰胺酸基為末端的PAMAM4.0樣品(90mg)。1Hnmr(D2O)δ2.4-2.6；2.7-3.1；3.2-3.4；3.9-4.0。13Cnmr(D2O)δ36.2；39.8；40.5；43.0；43.2；53.5；55.8；68.1；69.5；173.8；177.4；177.6；178.7；182.3。實施例4以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺鈉為末端的樹枝狀體的制備a.N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁銨的制備將固體琥珀酐(0.5g；5.0mmol)加入被攪動的溶解在無水二氯甲烷(30ml)里的2-氨基乙基磺酸四丁銨(1.83g；5.0mmol)溶液中。琥珀酐緩慢地溶解，將所得到的混濁液在室溫下攪拌過夜。過濾該混合物，濃縮濾液，得到一種粘性油(2.41g)。13Cnmr證實其已完全轉化成所需的單酰胺與少量的琥珀酸。通過向大量過剩的乙醚中滴加二氯甲烷溶液反復沉淀所得產物，得到N-(2-磺乙基)琥珀酰胺基四丁銨白色固體(1.762g；76％)，mp125-127℃.1Hnmr(CDCl3)δ0.86(t，12h，4xCH3)，1.28(m，8H，4xCH2)，1.50(m，8H，4xCH2)，2.33(m，2H，CH2COOH)，2.44(m，2H，CH2CONH)，2.76(m，2H，CH2NHCO)，3.12(m，8H，4xCH2N)，3.50(m，2H，CH2SO3-)，7.53(brt，1H，NH).13Cnmr(CDCl3)δ13.5，19.5，23.8，30.1，30.9，35.6，50.0，58.5，172.0，174.1.b.4-硝基苯基N-(2-磺乙基)-琥珀酰胺酸四丁銨的制備將溶解在無水二氯甲烷(1ml)里的二環己基碳化二亞胺(45mg；0.22mmol)溶液加入被攪動的溶解在二氯甲烷(2ml)里的N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁銨(94mg；0.20mmol)和4-硝基苯酚(28mg；0.20mmol)溶液中，并在室溫下攪拌該混合物過夜。過濾所得到的懸浮液，并濃縮濾液，得到粗制活性酯，無須進一步提純即可使用。A.以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺鈉為末端的PAMAM樹枝狀體的制備PAMAM4.0將溶解在無水DMF(1ml)里的粗制4-硝基苯基N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁銨(0.30mmol)溶液加入被攪動的溶解在50％DMF水溶液(3ml)里的PAMAM4.0(51.5mg；0.01mmol)溶液中，并將所得到的黃色溶液在室溫下攪拌過液。濃縮(35°/10-5mmHg)所得混合物，并把黃色殘余物分配在水和氯仿之間。分離水層，用氯仿(2X)和乙酸乙酯洗滌，并濃縮，得到一種黃色油狀物(134mg)。讓上述粗制產品從一個AmberliteIR-120(Na)柱中通過將其轉化成鈉鹽，得到85mg材料。通過凝膠過濾(SephadexLH20；水)進一步提純該材料，得到以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺鈉為末端的PAMAM4.0樹枝狀體(45mg)。13Cnmr(D2O)δ33.2，33.6，35.5，39.0，39.5，42.8，43.2，53.8，54.1，54.4，56.6，176.5，176.9，177.2，178.9，179.4。以類似方法制備以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺鈉為端基的相應PAMAM1.0和PAMAM樹枝狀體。13CnmrPAMAM3.0衍生物(D2O)δ33.4，35.5，39.0，39.5，42.9，43.2，53.8，54.1，54.3，56.5，176.4，176.9，177.4，178.9，179.4。13CnmrPAMAM1.0衍生物(D2O)δ34.9，35.5，39.5，42.9，43.1，53.7，54.1，179.0，179.1，179.3。B.以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺鈉為末端的聚賴氨酸樹枝狀體的制備BHAlyslys2lys4lys8lys16將三氟乙酸(1ml)加入懸浮在無水二氯甲烷(1ml)里的BHAlyslys2lys4lys8DBL16(36.5mg；5.0μmol)懸浮液中，在室溫下，于氮氣中將所得到的溶液攪拌2小時，然后濃縮。將殘余物溶于無水DMSO(2ml)中，并用三乙胺把pH調至8.5。然后把溶解在DMSO(1ml)里的粗制4-硝基苯基N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁銨(約0.2mmol)溶液滴加進去，并在室溫下攪拌該混合物過液。濃縮(50°/10-5mmHg)所得黃色溶液，并將該黃色殘余物分配在水和氯仿之間。分離水層，并用氯仿(3X)和乙酸乙酯洗滌，然后濃縮得到一種油狀物(99mg)。讓該粗制品從一個AmberliteIR120(Na)柱中通過，以便將其轉化成鈉鹽，得到81mg材料。通過凝膠過濾(SephadexLH20；水)進一步提純該材料，得到以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺鈉為末端的BHAlyslys2lys4lys8lys16樹枝狀體(39mg)。13Cnmr(D2O)δ27.0，32.3，35.2，35.3，35.6，35.7，39.5，43.5，54.1，58.5，131.5，132.0，133.3，145.1，177.8，178.0，178.4，178.8，178.9，179.2，179.7，179.8。以類似方法制備相應的以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺鈉為端基的BHAlyslys2、BHAlyslys2lys4和BHAlyslys2lys4lys8。13CnmrBHAlyslys2lys4lys8衍生物(D2O)δ26.9，32.3，35.1，35.3，35.6，35.7，39.5，43.5，54.1，58.5，131.6，131.9，132.2，132.3，133.2，133.3，145.0，145.2，177.2，177.8，177.9，178.0，178.2，178.3，178.6，178.7，178.8，178.9，179.2，179.3，179.7，179.8.13CnmrBHAlyslys2lys4衍生物(D2O)δ26.9，32.3，35.1，35.4，35.7，35.8，39.5，43.5，54.1，58.5，61.8，131.7，132.0，132.2，132.3，133.2，133.3，145.0，145.1，177.3，178.0，178.3，178.4，178.7，178.9，179.0，179.3，179.7，179.8.13CnmrBHAlyslys2衍生物(D2O)δ26.9，27.1，32.2，32.3，34.7，34.8，35.1，35.3，35.6，35.7，39.5，43.4，54.1，58.6，61.8，131.7，131.9，132.2，132.3，133.3，144.9，145.0，177.7，178.4，178.8，179.0，179.3，180.0.實施例5以4-磺苯基硫脲鈉為末端的樹枝狀體的制備A.DAMAM4.0(化合物1)將固體一水合4-磺苯基異硫氰酸鈉(500mg；1.96mmol)加入溶解在水(10ml)里的PAMAM4.0(300mg；0.0582mmol)溶液中，將所得溶液在氮氣中于53°下加熱2小時，然后冷卻。濃縮所得溶液，并通過凝膠過濾(SephadexLH20；水)純化所得黃色固體殘余物。合并純化級分并冷凍干燥，得到以4-磺苯基硫脲鈉為末為末端的PAMAM4.0樹枝狀體，為一種飛揚性白色固體(370mg)。1Hnmr(D2O)62.28；2.52；2.69；3.15；3.27；3.60；7.32(d，J＝9Hz)；7.72(d，J＝9Hz)。13Cnmr(D2O)δ36.9；41.1；43.1；48.3；53.6；55.8；129.0；131.1；144.4；178.5；179.1；184.4。以類似方法制備分別以3、6、12和48個4-磺苯基硫脲鈉為端基的PAMAM1.0、PAMAM2.0、PAMAM3.0和PAMAM5.0(化合物2)樹枝狀體。B.PAMAM4.0(EDA)(化合物3)將固體一水合4-磺苯基異硫氰酸鈉(130mg；0.5mmol)加入溶解在水(4ml)里的PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)溶液中，并在氮氣中于53°下加熱2小時，然后冷卻。濃縮該溶液，并通過凝膠過濾(SephadexLH20；水)純化所得固體殘余物。合并純化級分，并冷凍干燥，得到以32個4-磺苯基硫脲鈉為端基的PAMAM4.0，為一種飛揚性白色固體(136mg)。1Hnmr(D2O)δ2.30；2.50；2.70；3.18；3.62；7.35(d，J＝9Hz)；7.72(d，J＝9Hz)。13Cnmr(D2O)δ36.8；41.0；43.1；48.4；53.6；55.7；128.9；131.0；144.3；178.5；179.0；184.5。C.BHAlyslys2lys4lys8lys16(化合物4)將三氟乙酸(4ml)在氮氣下加入溶解在無水二氯甲烷(4ml)里的BHAlyslys2lys4lys8DBL16(0.73g；0.1mmol)懸浮液中。觀察到短時間劇烈放氣現象，將所得溶液在室溫下攪拌2小時，然后濃縮。將殘余漿狀物溶于水(5ml)中，讓該溶液通過AmberliteIRA-401(OH)柱，并濃縮濾液，得到BHAlyslys2lys4lys8lys16粘性油(0.49g)。將所得的油再溶解在水(5ml)中，并加入N，N-二甲基-N-烯丙胺緩沖液(pH9.5，3ml)。然后加入固體一水合4-磺苯基異硫氰酸鈉(1.30g；5.1mmol)，并在氮氣中于53°加熱2小時，然后冷卻。濃縮所得溶液，并通過凝膠過濾(SephadexLH20；水)純化棕色固體殘余物。合并純化的級分，讓其通過一個AmberliteIR120(Na)柱，冷凍干燥得到以4-磺苯基硫脲鈉為末端的BHAlyslys2lys4lys8lys16樹枝狀體，為一種飛揚性白色固體(374mg)。1Hnmr(D2O)δ1.40；1.72；3.08；3.42；4.24；4.60；7.30；7.40(d，J＝9Hz)；7.78(d，J＝9Hz)。13Cnmr(D2O)δ27.3；32.5；35.9；43.7；48.9；58.6；63.3；128.8；131.0；143.7；144.7；145.1；177.7；178.1；183.8；185.2。以類似方法制備分別以16、64和128個4-磺苯基硫脲鈉為端基的BHAlyslys2lys4lys8、BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32(化合物5)和BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32lys64(化合物6)樹枝狀體。實施例6以3，6-二磺萘基硫脲鈉為末端的樹枝狀體的制備A.PAMAM4.0(化合物9)將固體3，6-二磺萘基異硫氰酸鈉(160mg；0.41mmol)加入溶解在水(3ml)里的PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)溶液中，并在氮氣中于53°加熱所得溶液2小時，然后冷卻。濃縮該溶液，并通過凝膠過濾(SephadexLH20；水)純化棕色固體殘余物。合并純化級分，并濃縮得到以3，6-二磺萘基硫脲鈉為末端的PAMAM4.0樹枝狀體，為一種棕色固體(73mg)。1Hnmr(D2O)δ2.30；2.60；2.74；3.20；3.57；7.75；7.86；8.28。13Cnmr(D2O)δ35.0；39.9；43.1；48.1；53.8；56.1；128.4，128.6；129.3；131.0；131.3；136.0；136.8；138.2；145.5；146.0；177.2；177.8；185.5。以類似方法制備以3，6-二磺萘基硫脲鈉為端基的PAMAM2.0樹枝狀體。B.PAMAM4.0(EDA)(化合物11)將固體3，6-二磺萘基異硫氰酸鈉(220mg；0.57mmol)加入溶解在水(4ml)里的PAMAM4.0(EDA)(74mg；0.01mmol)溶液中，并在氮氣中于53°加熱該溶液2小時，然后冷卻。濃縮所得溶液，并通過凝膠過濾(SephadexLH20；水)純化棕色固體殘余物。合并純化級分并濃縮得到以32個3，6-二磺萘基硫脲鈉為端基的PAMAM4.0，為一種鞣料固體(148mg)。1Hnmr(D2O)δ2.30；2.80；3.20；3.54；7.74；7.85；8.25。13Cnmr(D2O)δ36.0；40.8；43.1；48.3；53.6；55.9；128.5；129.4；131.0；131.3；136.0；136.8；138.3；145.5；146.0；178.2；185.6。C.BHAlyslys2lys4lys8lysl6(化合物12)將三氟乙酸(2ml)在氮氣下加入懸浮在無水二氯甲烷(2ml)里的BHAlyslys2lys4lys8DBLl6(73mg；0.01mmol)懸浮液中。觀察到短時間的劇烈放氣現象，將所得溶液在室溫下攪拌2小時，然后濃縮。將殘余漿體溶于水(5ml)中，讓所得溶液從一個AmberliteIRA-401(OH)柱中通過，濃縮濾液得到BHAlyslys2lys4lys8lys16，為一種粘性油。將這種油再溶解在水(5ml)里，并加入N，N-二甲基-N-烯丙胺緩沖液(pH9.5；3ml)。然后加入固體3，6-二磺萘基異硫氰酸鈉(234mg；0.60mmol)，并在氮氣中于53°加熱該溶液2小時，然后冷卻。濃縮該溶液，并通過凝膠過濾(SephadexLH20；水)純化所得棕色固體殘余物。合并純化級分，讓其通過一個AmberliteIR120(Na)柱，并冷凍干燥得到以32個3，6-二磺奈基硫脲鈉為端基的BHAlyslys2lys4lys8lys16，為一種飛揚灰白色固體(119mg)。1Hnmr(D2O)δ1.0-2.0；3.18；3.43；4.31；7.22；7.80；7.89；8.25。13Cnmr(D2O)δ27.2；32.4；35.3；43.7；49.0；58.5；63.6；128.4；129.1；131.4；136.1；136.6；138.6；139.0；145.1；145.6；178.4；184.8；186.7。實施例7以4-磺萘基硫脲鈉為末端的樹枝狀體的制備PAMAM4.0(化合物8)將4-磺萘基異硫氰酸鈉固體(180mg；0.5mmol)加入溶解在水(5ml)里的PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)溶液里，并在氮氣中于53°加熱該混合物2小時，然后冷卻。在減壓條件下將水從所得到的懸浮液中蒸餾掉，并通過凝膠過濾(SephadexLH20；水)純化所得到的灰白色固體殘余物。合并純化級分，并冷凍干燥得到4-磺萘基硫脲鈉為末端的PAMAM4.0樹枝狀體，為一種飛揚白色固體(60mg)。1Hnmr(D2O)δ2.20；2.60；3.14；3.48；7.23；7.47；7.56；7.77；7.93(d，J＝6Hz)；8.56(d，J＝6Hz)。13Cnmr(D2O)δ35.8；40.5；43.1；48.4；53.6；55.9；127.6；128.6；130.3；131.9；132.5；133.5；134.7；140.5；142.7；177.8；178.0；185.4。實施例8以3，5-二磺苯基硫脲鈉為末端的樹枝狀體的制備PAMAM4.0(化合物7)將3，5-二磺苯基異硫氰酸鈉固體(110mg；0.32mmol)加入溶解在水(3ml)里的PAMAM4.0(63mg；0.012mmol)溶液里，并在氮氣下于53°加熱該溶液2小時，然后冷卻。冷縮所得溶液，并通過凝膠過濾(SephadexG25；水)純化所得到的棕色固體殘余物。合并純化級分，并濃縮得到以24個3，5-二磺苯基硫脲鈉為端基的PAMAM4.0，為一種灰白色固體(110mg)。1Hnmr(D2O)δ2.53；3.08；3.36；3.66；7.90；7.95。13Cnmr(D2O)δ34.8；41.0；43.1；48.0；53.7；56.2；124.1；128.6；143.5；148.8；177.6；185.0。實施例9以3，6，8-三磺萘基硫脲鈉為末端的樹枝狀體的制備PAMAM4.0(化合物10)將固體3，6，8-三磺萘基異硫氰酸鈉(250mg；0.5mmol)加入溶解在水(2ml)里的PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)和N，N-二甲基-N-烯丙胺緩沖液(pH9.5；1ml)溶液中，并在氮氣下以53°加熱該混合物2小時，然后冷卻。在減壓條件下濃縮該混合物，得到一種橙色固體。將殘余固體溶于水(2ml)中，并通過一個短AmberliteIR-120(Na)柱。濃縮濾液，并通過凝膠過渡(SephadexLH20；水)純化所得殘余物。合并純化級分，冷凍干燥，得到以3，6，8-三磺萘基硫脲鈉為末端的PAMAM4.0樹枝狀體，為一種灰白色固體(102mg)。1Hnmr(D2O)δ2.65；3.02；3.30；3.66；8.05；8.42；8.59；8.67。13Cnmr(D2O)δ33.2；38.7；43.2；43.7；47.8；54.0；54.3；56.7；131.0；131.3；131.9；135.9；138.0；139.6；143.8；144.1；145.6；176.2；176.5；186.0。實施例10以4-(磺甲基)苯甲酰胺鈉為末端的樹枝狀體的制備PAMAM4.0(化合物13)將固體4-(氯甲基)苯甲酸4-硝基苯基酯(200mg；0.68mmol)加入被攪動的溶解在無水DMSO(4ml)里的PAMAM4.0(70mg；0.014mmol)溶液中，在室溫下攪動所得到的黃色溶液2小時。濃縮(40°；10-4mmHg)該溶液，并用水與二氯甲烷的混合物(1∶1)萃取所得殘余物。將所殘余的固體材料溶解在DMSO(5ml)中，并加入溶解在水(3ml)里的亞硫酸鈉(130mg；1mmol)溶液。將所得到的略顯混濁的混合物放置4天，此后加更多的水(2ml)，產生透明的均勻黃色溶液。然后濃縮該溶液首先在25mmHg和40°條件下，接著在10-4mmHg和50°條件下，得到粗制品。通過凝膠過濾(SephadexG25；水)純化該粗制品；得到以24個4-(磺甲基)苯甲酰胺鈉為端基的PAMAM4.0(24mg)。1Hnmr(D2O)δ2.25；2.66；3.08；3.20；3.33；3.38；4.01；7.40(brd)；7.62(brd)。13Cnmr(D2O)δ36.7；40.9；43.0；43.6；53.5；55.5；61.0；131.6；135.0；137.2；140.4；174.5；178.6；179.2。實施例11以4-磺基苯甲酰胺為末端的樹枝狀體的制備PAMAM4.0(EDA)將固體N-羥基琥珀酰亞胺基4-磺基苯甲酸鉀(100mg；0.3mmol)加入溶解在0.1MpH8.5的硼酸緩沖液(5ml)里的PAMAM4.0(EDA)(3.5mg；0.005mmol)溶液中，在室溫下攪拌該溶液2小時。此時所得到的乳狀液其pH為4.5。然后加入1M的碳酸鈉溶液(1ml)，得到一種透明的溶液，濃縮得到白色固體狀粗制品。通過凝膠過濾(SephadexG25；水)該粗制品得到以32個4-磺基苯甲酰胺鈉為端基的PAMAM4.0(EDA)(47mg)。1Hnmr(D2O)δ2.25；2.42；2.63；3.05；3.18；3.31；3.38；7.72(d，J＝8Hz)；7.78(d，J＝8Hz)。13Cnmr(D2O)δ36.0；40.4；43.0；43.7；53.7；55.8；130.2；132.2；140.4；150.1；173.6；178.0；178.5.實施例12以N-(4-磺苯基)丙酰胺鈉為末端的樹枝狀體的制備PAMAM4.0(EDA)將固體N-(4-磺苯基)丙烯酰胺鈉(250mg；1mmol)和固體碳酸鈉(106mg；1mmol)依次加入被攪動的溶解在水(4ml)里的PAMAM4.0(EDA)(78mg；0.011mmol)溶液中。所得到的溶液在氮氣下攪拌4天，再冷凍干燥，得到一種飛揚白色固體。通過凝膠過濾(SephadexLH20；水)所得到的粗制品，得到以64個N-(4-磺苯基)丙酰胺鈉為端基的PAMAM4.0(EDA)(206mg)。13Cnmr證實有少量的一烷基化末端氨基。1Hnmr(D2O)δ2.10；2.48；2.58；2.79；3.20；7.42(d，J＝7Hz)；7.65(d，J＝7Hz)。13Cnmr(D2O)δ36.5；37.9；41.1；53.4；55.6；124.8；130.9；143.0；144.2；177.4；178.5。實施例13以4-磺苯基脲鈉為末端的樹枝狀體的制備PAMAM4.0(EDA)將溶解在無水DMSO(3ml)里的磺胺酸鈉(195mg；1mmol)溶液滴加到溶解在無水DMSO(4ml)里的N，N’-二琥珀酰亞胺基碳酸酯(530mg；2mmol)溶液里，并將所得到的棕色溶液在室溫下攪拌20小時。將溶解在無水DMSO(1ml)里的PAMAM4.0(EDA)(75mg；0.011mmol)溶液加進去，并且再攪拌該溶液18小時。然后在高真空(10-5mmHg；35°)條件下濃縮該溶液，得到一種黃色半固體。將該粗制品溶解在DMSO(4ml)中，并把該溶液加入200ml攪勻的乙酸乙酯中。過濾收集沉淀的白色固體，并用乙酸乙酯(2X)和乙醚(2X)洗滌，然后干燥，得到一種白色粉末(275mg)。通過凝膠過濾(SephadexLH20；水)進一步純化所得到的材料，得到以32個4-磺苯基脲鈉為端基的PAMAM4.0(EDA)(106mg)。1Hnmr(D2O)δ2.31；2.55；2.75；3.19；7.32(d，J＝9Hz)；7.63(d，J＝9Hz)。13Cnmr(D2O)δ36.3；40.7；43.3；43.8；53.7；55.7；123.3；130.9；140.9；146.0；161.4；178.2；178.6。實施例14以N，N，N-三甲基甘氨酰胺氯為末端的樹枝狀體的制備BHAlyslys2lys4lys8lys16(化合物15)將三氟乙酸(4ml)加入懸浮于無水二氯甲烷(2ml)里的BHAlyslys2lys4lys8DBL16(220mg；30μmol)懸浮液中，并在氮氣下，于室溫下攪拌2小時，然后濃縮。將殘余物溶解在無水DMSO(5ml)中，并用三乙胺把pH調至8.5。然后加入固體N，N，N-三甲基甘氨酸4-硝基苯基氯(0.50g；1.8mmol)，并在室溫下攪拌該混合物過夜。濃縮所得到的混濁液(50°/10-5mmHg)，并把殘余物分配在水和二氯甲烷之間。分離水層，用二氯甲烷(3X)和乙酸乙酯洗滌，然后濃縮得到一種油狀物(1.128g)。通過凝膠過濾(SephadexLH20；水)純化該粗制品，得到以N，N，N-三甲基甘氨酰胺為末端的BHAlyslys2lys4lys8lys16樹枝狀體(116mg)。13Cnmr(D2O)δ25.5，30.5，30.8，33.4，42.1，56.5，57.1，67.5，68.1，166.7，167.0，167.1，176.0，176.2。實施例15以4-三甲銨苯甲酰胺為末端的樹枝狀體的制備PAMAM4.0(化合物16)將1，1′-羰基二咪唑(85mg；0.52mmol)加入溶解在無水DMF(4ml)里的4-三甲銨苯甲酸碘化物(154mg；0.5mmol)溶液，并在氬氣下，于室溫下攪拌所得混合物2小時。在此期間，從該溶液中分離得到一種白色固體。然后將溶解在無水DMF(2ml)里的PAMAM4.0(58mg；0.011mmol)溶液加進去，并在室溫下攪拌該混合物過夜。此后，大基團沉淀已溶解，所進行的水合茚三酮試驗呈陰性。濃縮該混合物(10-4mmHg；30°)，得到一種白色固體殘余物。通過凝膠過濾(SephadexLH20；10％AcOH)純化該粗制品，得到以24個4-三甲銨苯甲酰胺為端基的PAMAM4.0的乙酸鹽(89mg)。1Hnmr(D2O)δ1.96；2.65-2.85；3.25-3.55；3.64；7.92。13Cnmr(D2O)δ25.8；33.1；33.5；38.7；43.1；43.5；53.5；54.1；56.4；61.2；124.8；133.6；139.9；153.2；173.2；176.3；176.8；182.6。以類似方法制備出以6個4-三甲銨苯甲酰胺為端基的PAMAM2.0樹枝狀體。實施例16以4-(三甲銨甲基)苯甲酰胺為末端的樹枝狀體的制備PAMAM4.0(化合物17)將固體4-(氯甲基)苯甲酸4-硝基苯基酯(150mg；0.5mmol)加入被攪動的溶解在無水DMSO(3ml)里的PAMAM4.0(52mg；0.01mmol)溶液中。在室溫下攪拌所得到的黃色溶液20小時，同時進行的水合茚三酮試驗呈陰性(pH約為8.5)。濃縮(10-5mmHg；40°)該溶液，并將所得殘余物與水和二氯甲烷的混合物(1∶1)一起搖動。過濾收集不可溶的凝膠狀材料，用水(2X)和二氯甲烷(2X)洗滌，然后風干。將粗制的以4-(氯甲基)苯甲酰胺為末端的樹枝狀體溶解在25％三甲胺水溶液(20ml)中，并將該溶液放置過夜。然后濃縮該溶液，把殘余物溶解在水(5ml)中，讓其通過一個AmberliteIRA-401(OH)柱，濃縮無色的濾液，得到一種粘性油，通過凝膠過濾(SephadexG10；10％AcOH)進行純化，得到以24個4-(三甲銨甲基)苯甲酰胺為末端的PAMAM4.0(90mg)。1Hnmr(D2O)δ1.88；2.56-2.80；2.98；3.10-3.60；7.52(brd，J＝9Hz)；7.72(brd，J＝9Hz)。13Cnmr(D2O)δ26.6；33.4；38.8；43.2；43.5；53.6；53.6；54.1；56.8；62.8；73.0；132.1；135.3；137.5；140.0；176.4；176.9；183.6。實施例17以N-(2-乙酸基乙基)-N，N-(二甲銨)甲基甲酰胺為末端的樹枝狀體的制備PAMAM4.0將固體1，1′-羰基二咪唑(85mg；0.52mmol)加入溶解在無水DMF(3ml)里的N-(2-乙酸基乙基)-N-(羧甲基)-N，N-二甲銨溴化物(135mg；0.5mmol)溶液里，在氮氣下攪拌所得溶液2小時。然后加入溶解在DMF(2ml)里的PAMAM4.0(60mg；0.012mmol)溶液中，這會導致馬上形成一種絮凝狀沉淀，這些沉淀又緩慢地再溶解。將該混合物攪拌2天，然后濃縮(10-4mmHg；40°)，得到一種粘性油。通過凝膠過濾(SephadexG10；10％AcOH)純化該粗制品，得到以24個N-(2-乙酸基乙基)-N，N-(二甲銨)甲基甲酰胺為端基的PAMAM4.0(64mg)。1Hnmr(D2O)δ1.93；2.05；2.70；3.10-3.60；3.28；3.93(m)；4.14；4.48(m)。13Cnmr(D2O)δ24.6；26.2；33.2；38.7；42.8；42.9；53.9；57.4；62.6；67.3；67.5；168.9；176.4；176.8；177.3；183.2。實施例18以胍基為端基的樹枝狀體的制備PAMAM4.0(化合物18)將溶解在水(5ml)里的PAMAM4.0(63mg；0.012mmol)和硫酸甲硫基假脲(170mg；0.61mmol)溶液在氮氣下以80°加熱2小時。濃縮所得溶液，并通過凝膠過濾(SephadexG10；10％AcOH)純化殘余物，得到以24個胍基為端基的PAMAM4.0的乙酸鹽(107mg)。1Hnmr(D2O)δ2.00；2.80(brt)；3.09(brt)；3.32；3.45(brt)；3.60(brt)。13Cnmr(D2O)δ25.2；33.2；33.4；38.7；41.2；42.6；43.4；44.7；53.5；54.0；56.3；176.5；176.7；176.9；181.6。以類似方法制備以6個胍基為端基的PAMAM2.0樹枝狀體。實施例19以4-([1，4，8，11-四氮雜環十四碳烷]甲基)苯甲酰胺為末端的樹枝狀體的制備PAMAM4.0(化合物19)將溶解在pH7的磷酸緩沖液(10ml)里的1-(4-羧苯基)甲基-1，4，8，11-四氮雜環十四碳烷四氫氯化物(120mg；0.25mmol)、N-羥基琥珀酰亞胺(60mg；0.52mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺氫氯化物(250mg；1.3mmol)溶液在室溫下放置1小時，然后將溶解在pH7的磷酸緩沖液(10ml)里的PAMAM4.0(32mg；0.006mmol)溶液加進去。將該混合物放置兩天，然后濃縮。通過凝膠過濾(SephadexLH20；10％AcOH)純化殘余物，得到以大約12個4-([1，4，8，11-四氮雜環十四碳烷]甲基)苯甲酰胺為端基的PAMAM4.0(80mg)，這一結果是1H和13Cnmr測得的。將所得產物溶解在水中，并通過一個AmberliteIRA-401(Cl)樹酯柱，然后濃縮。將殘余物溶解在水(1ml)中，加入濃HCl(1ml)，并用乙醇(30ml)稀釋該溶液，沉淀出一種白色固體。過濾收集沉淀的固體(68mg)。1H和13Cnmr再次證實有大約50％的官能化末端氨基。1Hnmr(D2O)δ2.17；2.36；2.50；2.78；2.85；325；3.40；3.50；3.60；3.62；4.49；7.63(brd)；7.78(brd).13Cnmr(D2O)δ22.7；23.1；33.2；38.8；39.9；40.2；40.3；41.0；41.2；42.0；42.9；43.2；43.6；45.5；46.1；49.1；52.2；53.9；54.3；56.6；62.7；132.5；135.7；137.1；139.7；174.3；176.2；176.3；176.7；177.0；178.2；178.5.實施例20以4-羧基-3-羥基芐胺為末端的樹枝狀體的制備PAMAM4.0(EDA)將氰基硼氫鈉(32mg；0.5mmol)加入溶解在水(4ml)里的PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)、4-甲酰-2-羥基苯甲酸(83mg；0.5mmol)和碳酸氫鈉(42mg；0.5mmol)混合物中。在室溫下攪拌所得到的不均勻的橙色混合物4小時，在這段時間內，它變均勻。然后濃縮該橙色溶液，并通過凝膠過濾(SephadexLH20；水)純化殘余物，得到以大約32個4-羧基-3-羥基芐胺為端基的PAMAM4.0(EDA)(91mg)。1H和13Cnmr(D2O)表明氨基端基大基團為單烷基化，但也有二烷基化的跡象，兩種光譜都有寬峰。13Cnmr(D2O)δ37.0；41.1；50.9；53.4；55.5；55.8；61.5；120.9；122.2；122.4；132.3；132.7；135.0；135.8；163.5；163.7；169.0；178.6；179.3。1Hnmr(D2O)δ2.20；2.35；2.60；3.15；3.30；3.55；4.25；6.68；7.12；7.55。實施例21試驗抗凝活性從屠宰場收集牛血，把血放進桶里，每升新鮮血液中含有3.5g檸檬酸鈉。把這樣的血送回實驗室，并保持在37℃的水浴中。然后以3000rpm的速度將上述全血的試樣離心5分鐘以分離血漿。收集血漿并放回到水浴里。制備出余量血漿并保存在液氮中，以備后面的試驗使用。以37℃下試驗上述檸檬酸化血液的再鈣化時間。在再洗滌和干燥之前，對所有的玻璃器皿進行洗滌、干燥和用‘Coatasil’硅化。每支12×75mm的培養管中含有0.1ml血漿，先向其中加入0.1ml鹽溶液(0.9％NaCl)，接著再加入0.1ml0.025MCaCl2，并在此時開啟秒表。每隔15秒將上述試管傾向一側，以估價塊凝度。當硬的塊凝形成時，停下秒表，并記錄時間。在試驗抗凝劑時用0.1ml試驗品代替鹽水。一定范圍內的試驗化合物的濃度和時間記錄在表1中。將肝素、檸檬酸鈉和試驗化合物在水中配成濃度為10mg/ml的溶液。稀釋上述溶液，得到在一定范圍內的各種濃度。試管里的最終濃度列于表1中。表1中的數字為10次重復的平均時間。例23試驗抗病毒活性將抗HIV1、HIV2、CMV和各種單純皰疹病毒(HSV)的活性的試驗結果分別記錄在表2-5中。表2表3表4抗人巨細胞病毒細胞培養物(Davis菌株)活性</tables>用人胚胎肺細胞(HEL)試驗。IC50＝減少50％病毒噬斑的抑制濃度CC50＝減少HEL細胞生長的50％所需的胞毒濃度表5BRI化合物抗各種病毒的活性</tables>a使正常形態產生顯微鏡可檢測的變化所需的濃度b減少病毒引起的細胞病變性的50％所需的濃度權利要求1.一種抗病毒化合物，它包括一種具有多個端基的樹枝狀體，其中，至少所述端基之一上結合有含陰離子或陽離子的基團。2.如權利要求1的化合物，其中所述樹枝狀體包括一個至少與兩個樹枝狀分枝共價結合的多價核心并延伸至少兩代。3.如權利要求1或2的化合物，其中所述樹枝狀體是一種以氨為核心的聚酰氨基胺樹枝狀體。4.如權利要求1或2的化合物，其中所述樹枝狀體是以乙二胺為核心的聚酰氨基胺樹枝狀體。5.如權利要求1或2所述的化合物，其中所述樹枝狀體是以二苯甲基胺或其它合適核心為基礎的聚賴氨酸樹枝狀體。6.如權利要求1～5中任一項所述的化合物，其中所述含陰離子或陽離子的基團是通過酰胺或硫脲鍵與所述樹枝狀體的末端胺基、巰基、羥基或其它反應活性官能端基結合。7.如權利要求1-6中任一項所述的化合物，其中所述含陰離子的基團是含磺酸的基團或含羧酸的基團。8.如權利要求1-6中任一項所述的化合物，其中所述含陽離子的基團是含三甲銨的基團或含聚氨基大環的基團。9.如權利要求1-6中任一項所述的化合物，其中所述與樹枝狀體的氨基或其它反應活性官能端基結合的基團選自以下基團——NH(CH2)nSO3-——(CH2)nSO3-——Ar(SO3-)n——CH2CH(SO3)COOH——CH(SO3)CH2COOH——ArX(CH2)nSO3-X＝O，S，NH其中，n是0或正整數。10.如權利要求1～6中任一項所述的化合物，它是以烷基磺酸為末端的樹枝狀體。11.如權利要求1-6中任一項所述的化合物，它是以磺基乙酰胺為末端的樹枝狀體。12.如權利要求1-6中任一項所述的化合物，它是以磺基琥珀酰胺酸為末端的樹枝狀體。13.如權利要求1-6中任一項所述的化合物，它是以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺為末端的樹枝狀體。14.如權利要求1-6中任一項所述的化合物，其中所述與樹枝狀體的端基結合的基團是被一個或多個磺酸基取代的芳基或雜芳基硫脲。15.如權利要求14的化合物，它是以4-磺苯基硫脲為末端的樹枝狀體。16.如權利要求14的化合物，它是以3，6-二磺萘基硫脲為末端的樹枝狀體。17.如權利要求14的化合物，它是以4-磺萘基硫脲為末端的樹枝狀體。18.如權利要求14的化合物，它是以3，5-二磺苯基硫脲為末端的樹枝狀體。19.如權利要求14的化合物，它是以3，6，8-三磺萘基硫脲為末端的樹枝狀體。20.如權利要求1-6中任一項的化合物，其中所述與樹枝狀體的端基結合的基團是被一個或多個磺酸、磺烷基、磺烷氧基、磺烷基氨基或磺烷基硫基取代的芳基或雜芳基酰胺。21.如權利要求20的化合物，它是以4-(磺甲基)苯甲酰胺為末端的樹枝狀體。22.如權利要求20的化合物，它是以4-磺基苯甲酰胺為末端的樹枝狀體。23.如權利要求1-6中任一項所述的化合物，其中所述與樹枝狀體的端基結合的基團是被一個或多個磺酸基取代的芳基或雜芳基鏈烷酰胺。24.如權利要求23的化合物，它是以N-(4-磺苯基)丙酰胺為末端的樹枝狀體。25.如權利要求1-6中任一項所述的化合物，其中所述與樹枝狀體的端基結合的基團是被一個或多個磺酸基取代的芳基或雜芳基脲。26.如權利要求25的化合物，它是以4-磺苯基脲為末端的樹枝狀體。27.如權利要求1-6中任一項所述的化合物，其中所述與樹枝狀體的端基結合的基團是一種氨基酸的N，N，N-三甲基衍生物。28.如權利要求27的化合物，它是以N，N，N-三甲基甘氨酰胺為末端的樹枝狀體。29.如權利要求1-6中任一項所述的化合物，其中所述與樹枝狀體的端基結合的基團是被一個或多個三烷基氨基、三烷基氨基烷基、三烷基氨基烷氧基、三烷基氨基烷基氨基或三烷基氨基烷基硫基取代的芳基或雜芳基酰胺。30.如權利要求29的化合物，它是以4-三甲銨苯甲酰胺為末端的樹枝狀體。31.如權利要求29的化合物，它是以4-(三甲銨甲基)苯甲酰胺為末端的樹枝狀體。32.如權利要求1-6中任一項所述的化合物，它是以N-(2-乙酸基乙基)-N，N-(二甲銨)甲基甲酰胺為末端的樹枝狀體。33.如權利要求1-6中任一項所述的化合物，它是以胍基為末端的樹枝狀體。34.如權利要求1-6中任一項所述的化合物，其中所述樹枝狀體是一種大環聚氨基，它帶有一個或多個通過烷基或芳基間隔基團與該樹枝狀體的端基連接的大環。35.如權利要求34的化合物，它是以4-([1，4，8，11-四氮雜環十四碳烷]甲基)苯甲酰胺為末端的樹枝狀體。36.一種如權利要求1-6中任一項所述的化合物，它是以4-羧基-3-羥基-芐胺為末端的樹枝狀體。37.一種用于人或人以外的動物的預防性或治療性抗病毒治療的藥用或獸用組合物，它包括權利要求1-36中任一項所述的化合物，以及至少一種可以藥用或獸用的載體或稀釋劑。38.一種用于人或人以外的動物的預防性或治療性抗病毒治療方法，它包括給所述人或動物服用預防或治療有效量的權利要求1-36中任一項所述的化合物。39.如權利要求38的方法，其中所述抗病毒治療是指治療由HIV1或HIV2、乙肝病毒或丙肝病毒、牛病毒性腹瀉病毒、甲型或乙型人流感病毒、鼻病毒、人副流感病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)、水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)、人巨細胞病毒(CMV)、EB病毒(EBV)、人乳頭瘤病毒(HPV)、腺病毒-8、1型和2型單純皰疹病毒(HSV)、麻疹病毒或水泡性口炎病毒(VSV)引起的感染。40.將權利要求1-36中任一項所述的化合物用于人或人以外動物的預防性或治療性抗病毒治療或用于生產用于這種治療的藥物的用途。全文摘要一種抗病毒化合物，包括一種諸如聚酰氨基胺或聚賴氨酸樹枝狀體的樹枝狀體，具有多個端基，其中，至少一個端基上結合有含陰離子或陽離子的基團，特別是含磺酸、含羧酸、或含三甲銨之類的基團。文檔編號C08G69/42GK1154123SQ95194145公開日1997年7月9日申請日期1995年6月15日優先權日1994年6月15日發明者B·R·馬修斯,G·霍蘭申請人:生物分子研究所