一種深層發酵竹蓀菌絲體的制備及其在化妝品中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及食用真菌領域，具體涉及一種深層發酵竹蓀菌絲體的制備方法及其在 化妝品中的應用。
【背景技術】
[0002] 近年來隨著消費者對自身健康和安全的日益關注，相對于工業合成的化妝品功效 原料，來源于天然且功效卓著的原料更受青睞，特別是從天然植物中提取有效成分作為化 妝品原料更易為消費者所接受。中國古代的日常美容用藥，較之皮膚疾患治療的處方更加 傾向于整體膚質的改善所帶來的美容功效，因而不僅較為安全，而且能夠通過調節皮膚內 外的陰陽氣血平衡，恢復健康有序的自身良好狀態而達成綜合的美容護養功效。正如古代 常見的美容護膚面脂、面膏等對功效的記載："令面光悅"、"令光潤"、"令人好顏色"、"令人 面白凈悅澤"等等，都間接體現了美白、保濕、滋潤、抗衰老等作用。因此這也為我們拓展美 容用藥的思路提供了 一定的指導。
[0003] 竹蓀又名竹笙、竹參、面紗菌、網紗菌、竹姑娘、僧竺蕈、竹菌等，是鬼筆科竹蓀屬中 珍貴的食用菌。素有"菌菇之花"、"雪裙仙子"、"山珍之花"、"菌中皇后"的美譽。竹蓀是 優質的植物蛋白和營養源，菌體含有豐富的營養成分，據報道菌體約含蛋白20. 2%，粗脂肪 2. 6 %，碳水化合物38. 1 %，粗纖維9. 4%，還含有21種氨基酸，8種為人體所必需，其中谷 氨酸的含量高達1. 76%，占氨基酸總量的17. 0%以上，為蔬菜和水果所不及，且竹蓀所含 的氨基酸大多以菌體蛋白的形態存在，因此不易喪失。竹蓀富含多種維生素，如B族維生素 中的VB^VBpVBe，以及維生素A、D、E、K等。其中VB2(核黃素）含量較高。竹蓀所含多糖 以半乳糖、葡萄糖、甘露糖和木糖為主。竹蓀還含有多種微量元素，其中重要的有鋅、鐵、銅、 硒。
[0004] 竹蓀性溫味甘，有活血、健脾益胃、助消化之功效，適用于咳嗽、高血壓、高血脂等 癥的治療和預防。在云南，苗族同胞將竹蓀和糯米一起泡水喝，可以治療虛弱癥、損傷癥和 咳嗽，有直通補氣之功效，竹蓀還具有解膩助消化的作用。中醫認為竹蓀有大補之功，但其 藥用價值在歷代本草著作中鮮有論述。常食竹蓀能保護肝臟，減少腹壁脂肪的積存，有俗稱 "刮油"的作用。竹蓀還有延長湯羹食品的存放時間、保持菜肴的鮮味而不霉餿的奇特功能。
[0005] 竹蓀是世界上名貴的大型食用菌之一，其不僅營養豐富，而且富含多糖及其他活 性物質，具有抑菌、提1?機體免疫力等多種生物功能，因此，其在醫藥、食品、保健品等領域 具有較高的應用前景。研究表明，竹蓀子實體提取物具有較好的美白和抗衰老效果，在細胞 平臺其美白效果可以與熊果苷相媲美，在人體功效測試中亦具有明顯美白功效。但竹蓀屬 珍稀食用菌，資源有限且價格昂貴。另一方面由于竹蓀的產地、來源及培育方法不同，因此 其產品質量不易控制，這些因素都限制了對其進一步開發和利用。
[0006] 深層發酵培養技術是近年來發展較快的現代生物工程技術之一，該技術以真菌的 無性繁殖為基礎，通過培養獲得菌絲體和發酵液，從中獲取活性物質。具有生產周期短、生 產工藝簡便、培養材料易得、產品質量易于控制及成本低等優點，特別是對于不能人工栽培 的食用菌來說，發酵法是大量獲得其活性物質的重要途徑。目前關于竹蓀液體發酵的報道 較少，且未有針對性獲得美白及抗衰老活性產物的竹蓀發酵工藝的報道，因此本發明首次 提供一種竹蓀液體發酵工藝方法，獲得的菌絲體提取物和發酵液具有較好的美白及抗衰老 效果。
[0007] 本發明開發了針對竹蓀菌株的深層發酵方法，首次提出經過我們的發酵工藝得到 的竹蓀菌絲體提取物具有美膚功效，適用于具有美白及抗衰老功效的化妝品中。

【發明內容】

[0008] 經本發明人研究發現，竹蓀菌絲體提取物具有卓越的美白肌膚功效。它可以通過 抑制酪氨酸酶活性的方式，減少B16黑素細胞中黑素的生成以達到亮白肌膚的效果。并且 該提取物具有提高角質細胞活力的功效，進而具有抗衰老的功效。
[0009] 因此，本發明的一個目的是提供一種竹蓀菌絲體提取物的制備方法，該方法包括 深層發酵竹蓀菌絲體的制備以及竹蓀菌絲體提取物的制備。
[0010] 深層發酵竹蓀菌絲體的制備包括：取竹蓀母菌種菌絲塊接種于斜面培養基上，避 光培養待菌絲長滿斜面，取出保存待用。將已活化的斜面菌種接種于裝有液體種子培養液 的三角瓶中，搖床培養10天，制得一級種子液，然后將一級種子液按一定接種量接到液體 種子培養基中，在相同的培養條件下制備二級種子液。以此類推，得到三級種子液。以二級 或三級種為種子液，以相同接種量，接種于裝有發酵培養液的三角瓶中，搖床培養7天，搖 瓶得到菌絲體。
[0011] 竹蓀菌絲體提取物的制備包括：取竹蓀菌絲體與蒸餾水按照一定的料液比混合， 采用超聲法及高溫水提法經過離心，去除沉淀，得到的上清液即為竹蓀菌絲體提取物。
[0012] 因此，在本發明的一個方面，提供了一種深層發酵竹蓀菌絲體的制備方法，所述方 法包括以下步驟：
[0013] a.提供竹蓀菌株，所述竹蓀菌株以ACCC4912來自中國微生物菌種保藏管理委員 會農業微生物中心上海食用菌分中心，
[0014] b.斜面培養，
[0015] c.液體種子培養，
[0016]d.發酵液培養，得到竹蓀菌絲體。
[0017] 在一個具體的實施方式中，所述斜面培養采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基。在一個 具體的實施方式中，所述液體種子培養采用馬鈴薯葡萄糖培養基。在一個具體的實施方式 中，所述發酵液培養采用的培養基包含玉米粉，葡萄糖，七水硫酸鎂，磷酸二氫鉀，維生素 Bl〇
[0018] 在本發明的另一方面，提供了一種竹蓀菌絲體，該竹蓀菌絲體是通過本發明的深 層發酵方法制備得到的。
[0019] 在本發明的另一方面，提供了一種竹蓀菌絲體提取物的制備方法，所述方法包括 以下步驟：
[0020] a.提供本發明深層發酵方法制備得到的竹蓀菌絲體，
[0021] b.超聲提取，
[0022] c.溫度60~90°C水提4~6小時，
[0023] d.離心后，取上清液，得到竹蓀菌絲體提取物。
[0024] 在本發明的另一方面，提供了本發明方法制備得到的竹蓀菌絲體提取物在具有美 白和/或抗衰老功效的化妝品中的應用。
[0025] 在本發明的另一方面，提供了一種化妝品組合物，所述組合物包含竹蓀菌絲體提 取物和化妝品領域可接受的輔料。在一個實施方式中，所述化妝品領域可接受的輔料選自： 溶劑、增溶劑、防腐劑、抗氧劑、pH調節劑、促滲劑、脂質體、保濕劑、增稠劑、螯合劑、膚感調 節劑、表面活性劑、乳化劑、推進/拋射劑、香精、色素，以及其他功效添加劑。在一個具體的 實施方式中，所述化妝品組合物可以為霜劑、乳劑、溶液劑、膜劑、氣霧或噴霧形式，更具體 地，所述組合物可以為洗面奶、沐浴露、柔膚水、護膚啫喔、護膚乳液、護膚霜、精華液、眼霜、 面膜、氣霧或噴霧形式。這些形式可通過本領域技術人員熟知的方法制備。
【附圖說明】
[0026] 圖1顯示了竹蓀菌絲體對黑素形成的影響。
[0027] 圖2顯示了竹蓀菌絲體對酪氨酸酶的影響。
[0028] 圖3顯示了D0PA染色結果。
[0029] 圖4顯示了竹蓀菌絲體對角質細胞活力的影響。
【具體實施方式】
[0030] 本發明的發明人在經過了廣泛而深入的研究之后發現：竹蓀菌絲體提取物具有抑 制酪氨酸酶活性的作用，并且增強角質細胞活力的作用。因此，本發明涉及竹蓀菌絲體的美 白及抗衰老功效，竹蓀菌絲體提取物可作為功效添加劑加入到化妝品組合物中。
[0031] 文獻中均未涉及竹蓀菌絲體具有美白及抗衰老的作用，也未提及將其作為功能添 加劑加入化妝品中。也就是說，本發明首次提出經過我們的發酵工藝得到的竹蓀菌絲體具 有美膚作用，可以作為功能添加劑加入化妝品中，用于實現美白及抗衰老功效。
[0032] 本發明具體描述了一種深層發酵竹蓀菌絲體的制備方法，所述方法包括：
[0033]提供竹郝菌株（DictyophoraduplicataACCC4912)，來自于中國微生物菌種保藏 管理委員會農業微生物中心上海食用菌分中心；
[0034] 使用的培養基為：
[0035] ①斜面培養基（PDA斜面）：馬鈴薯葡萄糖瓊脂（美國BD公司生產，商品名：馬鈴 薯葡萄糖瓊脂）粉末35-45g溶于1L去離子水中滅菌后即得。
[0036] ②種子培養基（g/L):馬鈴薯葡萄糖（美國BD公司生