生產冬蟲夏草菌絲體的冬蟲夏草誘變菌株的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及食品微生物技術應用領域，尤其設及一株通過誘變獲得的可用于發酵 液態米慷和教皮全料新培養基并生產冬蟲夏草菌絲體原料的冬蟲夏草新菌株。
【背景技術】
[0002] 藥食兩用真菌在中國有著悠久的使用歷史和廣泛的使用人群。現代科學掲示，現 在常用的藥食兩用真菌如冬蟲夏草、猴頭菌、靈芝、灰樹花等的菌絲體、子實體或抱子中能 產生諸如氨基酸、蛋白質、維生素、多糖、核巧類、黃酬類及抗生素等多種活性成分或富集多 種微量元素如砸、鋒等，具有提高人體免疫力、抗腫瘤、增強肝臟功能、抗氧化等多種功效。 正因為如此，國際國內研究和開發藥食兩用真菌的熱情方興未艾，在醫藥領域、食品領域、 中醫保健領域、農業和工業生產領域都有許多研究者和開發者，獲得眾多的研究成果或產 品。就珍稀食用菌用于食品而言，國內市場已有食用菌保健食品如靈芝膠囊、灰樹花膠囊及 冬蟲夏草膠囊等在熱銷，它們的經濟價值很高。餅干中添加猴頭茹則制成了猴頭茹餅干，已 經成為普通食品在國內超市進行銷售。國際上新西蘭、日本、美國、韓國等均產有類似的食 用菌保健食品產品。
[0003] 就冬蟲夏草而言，針對其的研究表明：冬蟲夏草具有抗衰老、抗病源微生物、抗惡 性腫瘤、擴張血管、改善動脈粥樣硬化癥W及對內分泌、呼吸、免疫、神經系統及腎臟和肝臟 功能具有調節作用等多種功效（參考文獻：雷Zhang W.，Yang J.，Chen J.，et al. Immunomodul曰tory 曰nd 曰ntitumour effects of 曰n exopolys曰cch曰ride fraction from cultivated Cordyceps sinensis (Chinese c曰terpill曰r fungus) on tumour-be曰ring mice[J]. Biotechnology and Applied Biochemistry，2005,42(1): 9-15 ;遲Shen W.， Song D.，Wu J.，et al. Protective effect of a polysaccharide isolated from a cultivated Cordyceps mycelia on hydrogen peroxide-induced oxidative damage in PC12 cells[J]. Phytotherapy Research,2011,25(5):675-680:鷄國景坤.抗氧化新型 冬蟲夏草胞外多糖的制備、結構與溶液特征研究[D].廣州:華南理工大學，2010;藻Kazuki Nakamura, Kazumasa Shinozuka, Noriko Yoshikawa. Anticancer and antimetastatic effects of cordycepin, an active component of Cordyceps sinensis. Journal of Pharamacological Sciences, 2014,5:1-4)。
[0004]冬蟲夏草(Cordyceps sinensis)，又名蟲草，是麥角菌科真菌冬蟲夏草寄生在騙 幅蛾科昆蟲幼蟲上的子座和幼蟲尸體的復合物，在我國主要產于西藏、青海、甘肅、四川、云 南、貴州等高海拔的亞高山草甸上地帶、高山。國外主要見于尼泊爾、不丹及印度等少部分 地區。國內由于多種原因導致冬蟲夏草子實體被狂采濫挖，其自然資源遠遠不能滿足需求。 于是，我國科研人員進行了分離冬蟲夏草菌種W及人工培養和發酵制藥等大量的研究工 作，并且已經成功分離出多個冬蟲夏草菌株。目前分成兩條研究和開發思路:其一是用冬蟲 夏草菌感染騙幅蛾科昆蟲幼蟲，希望得到最為接近于自然狀態生長和形態的冬蟲夏草子實 體;其二是采用固態或液態發酵的方法生產冬蟲夏草菌絲體并加 w深加工應用。思路一的 方案難度較大，研究人員還在努力掲示感染及培育的機理和方法。思路二的方案則得到廣 泛應用，取得的成果也較多。浙江萬豐企業集團制藥有限公司、西安雙德生物技術有限公司 等向全國提供冬蟲夏草液體發酵菌絲體粉。對冬蟲夏草的研究和開發取得的進步都將進一 步推動冬蟲夏草的應用，帶來實際的社會和經濟效益。正因為如此，才有必要研究新的冬蟲 夏草及其深加工產品的生產方法，例如考慮將一些低端農產品加工副產品原料如米慷、教 皮高效轉化為高價值的冬蟲夏草菌絲原料，可望降低冬蟲夏草菌粉原料的生產成本從而降 低終產品冬蟲夏草保健食品的價格，讓普通人都能消費得起，促進大眾健康，運也是本發明 專利關注點之一。
[0005] 中國是水稻和小麥的生產大國，米慷和教皮資源豐富。米慷和教皮作為稻谷或小 麥加工的副產物，營養成分豐富，價格低廉。米慷中含有豐富優質的蛋白質、活性多糖、脂肪 和生育Ξ締酪、生育酪等生理功能顯著的活性物質，教皮富含脂肪、蛋白質、礦物質、維生素 和纖維素等營養成分，其中纖維素的含量可達教皮總量的18%W上，所W，米慷和教皮能為 冬蟲夏草生長提供充足的碳源、氮源、維生素和礦物質。在冬蟲夏草纖維素酶及其它酶系的 作用下，冬蟲夏草可將米慷和教皮轉化成所需營養物質進行生長代謝，合成冬蟲夏草菌絲 體和腺巧類功能性物質。因此，運用農副產品米慷、教皮作為全部的碳源和氮源，進行冬蟲 夏草液體發酵生長冬蟲夏草類保健食品原料，具有技術可行性，并可帶來較好的社會和經 濟效益。
[0006] 多數食用菌粉液態發酵生產方法采用葡萄糖、糧食類原料如淀粉、馬鈴馨或黃豆 粉等作為培養基，即使用到農副產品如米慷、教皮等，也是將其作為輔助成分加入。原始食 用菌冬蟲夏草、靈芝、灰樹花等菌株在不添加葡萄糖或其他糧食類原料的米慷教皮全料液 態培養基上生長狀況并非為最好，加之米慷、教皮原料中可能含有一些有害物質如鉛、神、 黃曲霉毒素等可能會轉移到菌絲體中，為阻止運些有害物的轉移，故需要對此類菌的發酵 米慷教皮液態全料方法進行創新研究。
[0007] 本專利第一發明人劉偉民的研究小組十多年來對灰樹花、靈芝、冬蟲夏草的液態 發酵進行了大量的研究，先后形成碩±論文和發明專利等多個成果。劉偉民指導的碩±論 文有：（1)楊鎖華，灰樹花發酵米慷制備多糖(2006年）；（2)顧慧敏，灰樹花在米慷培養基中 液態培養產多糖和富集有機砸的研究(2009年）；（3 )張建，物理法誘變灰樹花液體發酵米慷 教皮產多糖的研究(2010年）；（4)郭春梅，灰樹花的菌種誘變、液體發酵米慷教皮產多糖及 富砸研究（2011年）；巧)李亞楠，灰樹花菌種誘變及發酵和性能研究（2013年）；（6)郭天龍， 靈芝菌種誘變及液態發酵高值化轉化全米慷教皮研究(2013年）；（7)陳靜，冬蟲夏草液體發 酵高值化利用米慷教皮產多糖的研究（2014年）；（8)張笑飛，靈芝菌株（Ganoderma lucidum CFCC6043)液體發酵全米慷教皮及多糖活性的研究(2014年），等。劉偉民作為第一 發明人的發明專利有：（〇使用米慷教皮復合原料和灰樹花誘變菌株生產多糖的方法， 208.4; (2)用于米慷和教皮復合原料生產多糖的灰樹花菌株， 201010579078.5;(3)用于發酵米慷和教皮提取液生產灰樹花多糖的菌株， 20 1 1 10150888. 3; (4)用于米慷和教皮全料液態發酵生產灰樹花多糖的菌株， 201310274913.8; (5) -種靈芝誘變株液態發酵米慷教皮全料生產多糖的方法， 20 1310275061 . 4; (6)-種液態發酵米慷教皮全料生產冬蟲夏草多糖的方法， 201310274914.2; (7)-種灰樹花誘變株液態發酵米慷教皮全料生產多糖的方法， 20131027491 1.9; (8)用于米慷和教皮全料液態發酵生產靈芝多糖的菌株， 201310274915.7,等。由W上描述可知，本專利第一發明人劉偉民一直圍繞利用米慷和教皮 高效高值化生產珍稀食用菌菌絲及其功效成分運一專題進行研究，實現發明創造的設想， 所W能提出用誘變的冬蟲夏草菌株進行米慷教皮全料液體發酵，高效高值化轉化米慷教皮 生產冬蟲夏草菌絲體原料，并可將此菌絲體原料用于進一步深加工成保健食品。
[0008] 本專利第一發明人劉偉民曾指導碩±生陳靜完成碩±論文《冬蟲夏草液體發酵高 值化利用米慷教皮產多糖的研究》，該碩±論文已掲示出所用冬蟲夏草菌株CFCC83924可W 進行米慷教皮全料液體發酵，但在高效性方面還需進行深入研究。陳靜克服許多困難在反 復試驗之后，回答了冬蟲夏草菌株CFCC83924能否發酵米慷和教皮混合物構成的培養基問 題，并給出冬蟲夏草發酵米慷和教皮全料培養基的最大發酵濃度為米慷3.0 g/100 mL，教 皮3.0 g/100血，兩者之和為6.0 g/100 mL(陳靜論文第Ξ章的12.0 g/100血米慷和12.0 g/100 mL教皮不是全料用于發酵，而是經水提后的提取液用于發酵，與本專利的米慷和教 皮全料用于發酵時的原料利用率本質不同），得到的冬蟲夏草菌絲、米慷和教皮的混合物干 重為3.6g/100mL、菌絲混合物多糖為122.3mg/100mL，胞外多糖為176.5mg/100血，且 冬蟲夏草菌絲、米慷和教皮的混合物從外觀上看還含有較多的未被發酵完的米慷和教皮