本發明屬于生物醫藥材料領域(yu)，尤其涉及一(yi)種海蜇蛋白(bai)復合(he)生物玻璃組織(zhi)修(xiu)復材料的制備方法。
背景技術：
自發(fa)(fa)現生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)玻(bo)璃至今，人們更(geng)多(duo)關注的(de)(de)(de)是(shi)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)玻(bo)璃組份對生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)活(huo)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)影響(xiang)。納(na)米技術的(de)(de)(de)興(xing)起，使人們開始認識到結(jie)構(gou)對生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)活(huo)性(xing)(xing)也有重(zhong)要(yao)影響(xiang)，更(geng)加注重(zhong)于尺寸效應(ying)、微觀精細(xi)結(jie)構(gou)對材(cai)料(liao)結(jie)構(gou)和(he)性(xing)(xing)能的(de)(de)(de)影響(xiang)。從(cong)納(na)米尺寸出發(fa)(fa)研發(fa)(fa)設計(ji)的(de)(de)(de)納(na)米生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)玻(bo)璃、介(jie)孔生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)玻(bo)璃更(geng)是(shi)備受國內外學者的(de)(de)(de)關注。生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)玻(bo)璃能激活(huo)細(xi)胞(bao)(bao)基(ji)因，有利(li)于增(zeng)(zeng)強細(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)增(zeng)(zeng)殖(zhi)與分化，具有骨誘導(dao)和(he)骨傳導(dao)的(de)(de)(de)作用。但鑒于其(qi)無(wu)(wu)定形硅骨架的(de)(de)(de)存(cun)在，生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)玻(bo)璃仍(reng)呈現為無(wu)(wu)定形態，機械性(xing)(xing)能差(cha)，且藥物(wu)附著性(xing)(xing)差(cha)，其(qi)在生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)醫(yi)藥材(cai)料(liao)上的(de)(de)(de)應(ying)用還(huan)有待進一(yi)步開發(fa)(fa)。
技術實現要素：
為了解(jie)決現有(you)技術中存在的(de)問題，本發明(ming)提供了一(yi)種機械性能好，且具有(you)優良的(de)藥(yao)物附(fu)著性的(de)海蜇蛋白復合生物玻璃組織修復材(cai)料的(de)制備方法(fa)。
本發明采(cai)用以(yi)下技術方案：
一種海蜇蛋白復(fu)合生物玻璃組織修復(fu)材(cai)料的制(zhi)備方(fang)法(fa)，包括(kuo)以下步(bu)驟(zou)：
步驟一：將(jiang)新鮮的(de)海蜇傘部用自來水(shui)流水(shui)清洗(xi)(xi)(xi)，剪碎(sui)，放入(ru)燒杯(bei)中(zhong)，加(jia)入(ru)10倍(bei)體積(ji)(ji)的(de)0.1m氫氧化鈉(na)溶(rong)液(ye)(ye)，攪拌3d后(hou)清洗(xi)(xi)(xi)至(zhi)中(zhong)性；再加(jia)入(ru)10倍(bei)體積(ji)(ji)的(de)0.5mol/l乙(yi)酸(suan)(suan)(suan)溶(rong)液(ye)(ye)，攪拌2d，清洗(xi)(xi)(xi)至(zhi)中(zhong)性后(hou)，將(jiang)海蜇溶(rong)于8倍(bei)體積(ji)(ji)的(de)0.5m乙(yi)酸(suan)(suan)(suan)溶(rong)液(ye)(ye)中(zhong)，并(bing)加(jia)入(ru)質量(liang)百分比1％的(de)胃(wei)蛋(dan)(dan)白酶于5℃條(tiao)件下攪拌抽提3d，離(li)(li)心處理(li)(li)10000rpm×1h，取出(chu)上清液(ye)(ye)，上清液(ye)(ye)為胃(wei)蛋(dan)(dan)白酶促溶(rong)膠(jiao)原蛋(dan)(dan)白粗(cu)制液(ye)(ye)，向粗(cu)制液(ye)(ye)中(zhong)加(jia)入(ru)nacl濃度(du)至(zhi)0.9m，攪拌過夜，離(li)(li)心處理(li)(li)10000rpm×15min，取出(chu)沉淀溶(rong)于6倍(bei)體積(ji)(ji)0.5m乙(yi)酸(suan)(suan)(suan)，轉(zhuan)入(ru)透(tou)析(xi)袋透(tou)析(xi)2d，離(li)(li)心處理(li)(li)10000rpm×15min，所得沉淀再用0.5m乙(yi)酸(suan)(suan)(suan)溶(rong)液(ye)(ye)洗(xi)(xi)(xi)2遍，轉(zhuan)入(ru)透(tou)析(xi)袋透(tou)析(xi)2d，干燥后(hou)即得海蜇蛋(dan)(dan)白；
步驟(zou)二：將2l去(qu)離(li)子水(shui)燒熱至沸(fei)騰，加入(ru)4.24g碳酸(suan)鈉及(ji)5g家蠶(can)生絲，煮沸(fei)30min，用去(qu)離(li)子水(shui)清洗干凈，烘干后，用9.3mol/l的(de)libr溶液(ye)溶解；待完全溶解后將溶液(ye)裝入(ru)透析袋，去(qu)離(li)子水(shui)透析72h，9000r/min離(li)心處理20min，重復兩次，得蠶(can)絲蛋白溶液(ye)；
步(bu)驟三：將5g聚(ju)環(huan)(huan)氧(yang)(yang)乙烷-聚(ju)環(huan)(huan)氧(yang)(yang)丙(bing)烷-聚(ju)環(huan)(huan)氧(yang)(yang)乙烷三嵌段共聚(ju)物溶(rong)(rong)于62g體積濃度(du)為70％的乙醇溶(rong)(rong)液(ye)中(zhong)，充分攪拌(ban)后，依次加入(ru)6g硅酸乙酯(zhi)、0.7g磷(lin)酸三乙酯(zhi)、1.5gca(no3)2·4h2o、1g0.5m鹽酸溶(rong)(rong)液(ye)，得(de)混合液(ye)；
步驟四：將(jiang)混合液在室溫下攪(jiao)拌(ban)24h后靜置，當溶液呈(cheng)粘稠(chou)狀溶液時，即制得生物玻璃(li)溶液；
步驟五：將蠶絲(si)蛋(dan)白溶液、海蜇(zhe)蛋(dan)白、生物(wu)玻璃溶液按質量比50:5:9混合均勻，使(shi)用超聲波(bo)震(zhen)蕩對其進(jin)行分散，50℃條件(jian)下(xia)磁力攪(jiao)拌1h，再(zai)在室溫下(xia)繼續攪(jiao)拌8h，得(de)到(dao)粘稠溶液置(zhi)于與高壓(ya)裝(zhuang)置(zhi)連(lian)接的醫用針管中，通過靜電紡絲(si)制得(de)修復材料，高壓(ya)裝(zhuang)置(zhi)電壓(ya)為20kv，將制得(de)的材料在40℃下(xia)真空干燥(zao)。
優選的，步(bu)驟五中所述的醫用針管的容量為20ml。
優(you)選的，步驟五中(zhong)所述的醫用(yong)針(zhen)管的針(zhen)頭(tou)固定在距離靜(jing)電紡絲接收板20cm處。
本(ben)發(fa)明的有益(yi)效果在于(yu)：
1)蠶絲蛋白具有(you)良好的生物(wu)相容性及組織(zhi)修(xiu)復能(neng)力，有(you)利于(yu)增強細胞(bao)的增殖(zhi)與分(fen)化。
2)生(sheng)物(wu)玻璃(li)具(ju)(ju)有(you)(you)良好(hao)的(de)生(sheng)物(wu)相(xiang)容(rong)性，且具(ju)(ju)有(you)(you)組織(zhi)修復的(de)功(gong)能，能激活細胞(bao)基因，有(you)(you)利于增強細胞(bao)的(de)增殖與(yu)分化，具(ju)(ju)有(you)(you)骨(gu)誘導(dao)和骨(gu)傳(chuan)導(dao)的(de)作用。
3)海(hai)蜇(zhe)膠(jiao)原(yuan)(yuan)蛋白(bai)能夠保(bao)持(chi)i/iii型膠(jiao)原(yuan)(yuan)蛋白(bai)比例，改(gai)善膠(jiao)原(yuan)(yuan)纖維的(de)排列與分布，促進皮膚(fu)組(zu)織(zhi)細胞的(de)恢(hui)復和再生(sheng)。
4)蠶絲蛋白可以改(gai)善材(cai)料的(de)機械性能(neng)，生物玻(bo)璃可以改(gai)善材(cai)料的(de)醫(yi)藥(yao)性能(neng)。
5)采(cai)用(yong)靜電紡絲技術制備的材(cai)料，具(ju)有(you)良好的孔(kong)隙(xi)率，有(you)利于藥物的附著(zhu)。
具體實施方式
下面結合(he)實施例對本發(fa)明做(zuo)進一(yi)步的描述(shu)。
實施例1
一種海蜇蛋白復合生物玻(bo)璃(li)組織修復材料的制(zhi)備方法，包(bao)括以下(xia)步驟：
步驟一(yi)：將新鮮的(de)海蜇傘部用自來(lai)水流水清(qing)(qing)(qing)洗(xi)，剪碎，放(fang)入(ru)(ru)燒杯中，加(jia)(jia)入(ru)(ru)10倍(bei)(bei)體(ti)積(ji)(ji)的(de)0.1m氫氧(yang)化鈉溶(rong)(rong)液(ye)，攪(jiao)拌(ban)3d后(hou)清(qing)(qing)(qing)洗(xi)至中性；再加(jia)(jia)入(ru)(ru)10倍(bei)(bei)體(ti)積(ji)(ji)的(de)0.5mol/l乙酸(suan)溶(rong)(rong)液(ye)，攪(jiao)拌(ban)2d，清(qing)(qing)(qing)洗(xi)至中性后(hou)，將海蜇溶(rong)(rong)于8倍(bei)(bei)體(ti)積(ji)(ji)的(de)0.5m乙酸(suan)溶(rong)(rong)液(ye)中，并加(jia)(jia)入(ru)(ru)質(zhi)量百(bai)分(fen)比1％的(de)胃(wei)蛋(dan)白酶于5℃條件下(xia)攪(jiao)拌(ban)抽提(ti)3d，離(li)(li)心(xin)處(chu)理(li)10000rpm×1h，取(qu)出(chu)上清(qing)(qing)(qing)液(ye)，上清(qing)(qing)(qing)液(ye)為胃(wei)蛋(dan)白酶促溶(rong)(rong)膠(jiao)原蛋(dan)白粗(cu)制液(ye)，向粗(cu)制液(ye)中加(jia)(jia)入(ru)(ru)nacl濃度(du)至0.9m，攪(jiao)拌(ban)過夜，離(li)(li)心(xin)處(chu)理(li)10000rpm×15min，取(qu)出(chu)沉淀溶(rong)(rong)于6倍(bei)(bei)體(ti)積(ji)(ji)0.5m乙酸(suan)，轉(zhuan)入(ru)(ru)透(tou)(tou)析(xi)袋透(tou)(tou)析(xi)2d，離(li)(li)心(xin)處(chu)理(li)10000rpm×15min，所得(de)沉淀再用0.5m乙酸(suan)溶(rong)(rong)液(ye)洗(xi)2遍，轉(zhuan)入(ru)(ru)透(tou)(tou)析(xi)袋透(tou)(tou)析(xi)2d，干燥后(hou)即得(de)海蜇蛋(dan)白；
步(bu)驟二：將2l去(qu)離(li)子(zi)水燒熱至(zhi)沸騰，加入4.24g碳(tan)酸鈉及5g家蠶(can)生(sheng)絲，煮沸30min，用去(qu)離(li)子(zi)水清洗干(gan)(gan)凈，烘(hong)干(gan)(gan)后，用9.3mol/l的libr溶(rong)液溶(rong)解；待完全溶(rong)解后將溶(rong)液裝入透析(xi)袋(dai)，去(qu)離(li)子(zi)水透析(xi)72h，9000r/min離(li)心(xin)處理20min，重復(fu)兩次，得蠶(can)絲蛋(dan)白溶(rong)液；
步驟三：將5g聚環(huan)氧乙烷-聚環(huan)氧丙烷-聚環(huan)氧乙烷三嵌段共聚物溶(rong)于62g體積濃度為(wei)70％的(de)乙醇溶(rong)液中，充分攪(jiao)拌后，依次加入6g硅酸乙酯、0.7g磷(lin)酸三乙酯、1.5gca(no3)2·4h2o、1g0.5m鹽(yan)酸溶(rong)液，得混合液；
步驟四(si)：將混合液(ye)在室(shi)溫下攪拌24h后靜置，當溶液(ye)呈(cheng)粘稠狀(zhuang)溶液(ye)時，即制得生物玻璃(li)溶液(ye)；
步驟五(wu)：將蠶絲蛋白溶(rong)液(ye)、海蜇(zhe)蛋白、生(sheng)物玻璃溶(rong)液(ye)按質量(liang)比50:5:9混(hun)合均勻，使用超聲波震蕩對其(qi)進(jin)行(xing)分散，50℃條件(jian)下磁力攪拌1h，再在室溫下繼續攪拌8h，得到(dao)粘稠溶(rong)液(ye)置(zhi)(zhi)于與高(gao)壓(ya)裝(zhuang)置(zhi)(zhi)連(lian)接的(de)醫用針管中，通過靜電紡絲制得修復(fu)材料，高(gao)壓(ya)裝(zhuang)置(zhi)(zhi)電壓(ya)為20kv，將制得的(de)材料在40℃下真空干燥。
步(bu)驟(zou)五中所(suo)(suo)述(shu)的醫用針管的容量(liang)為20ml，步(bu)驟(zou)五中所(suo)(suo)述(shu)的醫用針管的針頭固定在距離靜電紡(fang)絲接收板20cm處。