專利名稱：通過施用cd2拮抗劑預防或治療t細胞惡性腫瘤的方法
本申請要求2002年9月5日提交的美國臨時專利申請號60/409,024和2002年9月12日提交的美國臨時專利申請號60/410,385的優先權，它們在此處都被完整并入作為參考。
1.發明領域本發明包括CD2拮抗劑，優選MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段用作單劑療法以治療、預防、處理或改善癌癥的用途，尤其是T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。本發明還包括CD2拮抗劑，優選MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段與其他癌癥治療組合的用途。本發明還提供了含有CD2拮抗劑，優選MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段的藥物組合物，所含的CD2拮抗劑的量可有效預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。
2.發明背景2.1癌瘤或腫瘤是異常的不受控制的細胞生長導致的贅生物，其可以是良性或惡性的。良性腫瘤通常保持局部化。惡性腫瘤通稱為癌。術語“惡性的”通常指腫瘤可以侵染或破壞鄰近身體結構并擴散到遠處而導致死亡(綜述見Robbins和Angell，1976，Basic Pathology，第二版，W.B.Saunders Co.，Philadelphia，68-122頁)。癌可以從身體的許多部位產生并且根據其起源而表現不同。癌性細胞破壞它們所起源的身體部分然后擴散到身體的其他部分，在那里它們開始新的生長并導致更多破壞。
每年120萬以上的美國人患癌癥。癌癥是美國第二位首要死因并且如果當前趨勢持續下去，預計到2010年癌癥將是第一位的死因。肺癌和前列腺癌是美國男人的主要癌癥殺手。肺癌和乳腺癌是美國女人的主要癌癥殺手。美國每兩個男性中就有一個在他的生命期間某一時間將被診斷患癌。美國每三個女性中就有一個在她的生命期間某一時間將被診斷患癌。
2.2T-細胞惡性腫瘤已經鑒定了T-細胞來源或者與T-細胞發育相關的其他細胞的腫瘤。T-細胞淋巴增殖失調包括胸腺和胸腺后惡性。T-細胞腫瘤包括淋巴祖細胞、胸腺基質細胞或上皮細胞、胸腺細胞、T-細胞、天然殺傷(“NK”)細胞或抗原呈遞細胞的腫瘤。T細胞惡性腫瘤包括急性淋巴母細胞白血病、淋巴瘤、胸腺瘤、急性淋巴母細胞白血病、何杰金氏病和非何杰金氏病。根據T-細胞怎樣受到影響將淋巴瘤分類。更深入的淋巴瘤分類和類型列表可從參考文獻列表并且在下文表1中總結。T-淋巴瘤包括，例如，淋巴母細胞淋巴瘤、退行性(anaplastic)大細胞淋巴瘤、外周T-細胞淋巴瘤、血管免疫母細胞淋巴瘤、血管中心型淋巴瘤(鼻T-細胞淋巴瘤)、腸T-細胞淋巴瘤，和成人T-細胞淋巴瘤/白血病，下面討論它們中的一些。
淋巴母細胞淋巴瘤淋巴母細胞淋巴瘤是一種主要的侵染性T-細胞淋巴瘤，其主要發生在兒童和青少年中，其中淋巴母細胞淋巴瘤占兒童期淋巴瘤的約一半。約2/3的患者是男性。在40歲以上的患者中見到第二個發病峰。淋巴母細胞淋巴瘤和淋巴母細胞白血病之間的區別部分(武斷地)基于骨髓受連累的程度。主要的生物學不同是淋巴母細胞白血病主要是B-細胞疾病，不像髓外，主要是T-細胞淋巴母細胞淋巴瘤。
T-細胞幼淋巴細胞白血病(“T-PLL”)T-細胞幼淋巴細胞白血病是一種罕見的侵染性胸腺后惡性腫瘤，具有明顯的臨床和形態以及細胞遺傳特征(綜述見Matutes E.等人，1991 Blood，783269-74)。T-PLL對化療有抗性并且具有低存活期中位數(7.5月)。盡管一些患者可能最初疾病進展緩慢，但是它們最終惡化并且結果是類似的。需要新的治療方法以改善該致命疾病的結果。
成人T-細胞白血病/淋巴瘤(“ATL”)成人T-細胞白血病(“ATL”)是與人T細胞白血病I型病毒(HTLV-1)有關的一種T細胞惡性腫瘤。它是成熟CD4+淋巴細胞的一種侵染性致命惡性腫瘤(見綜述Hatta等人，2002，Leukemia，161069-85；Yamada Y.1983，Blood，61192-9)。ATL在日本南部和加勒比海盆地中普遍并且在非洲、拉丁美洲、中東和美國偶發。由于白血病細胞對常規化療的內在抗性，ATL具有差的預后。
ATL已經被分成4個主要亞型。在相對郁積和慢性形式中，存活期中位數為2年或更長時間。在急性或淋巴瘤性形式中，存活期中位數為13個月。造血干細胞移植和化療已經用于ATL治療。
退行性大細胞淋巴瘤(Ki-30/CD-30)退行性大細胞淋巴瘤(“ALCL”)可以在兒童或青年人中是全身性的或者皮膚的(皮膚內或上)。局限于皮膚的疾病生長相當緩慢(惰性)并且保持局限于皮膚，有許多自發緩解的例子——通常稱為“經典”ATCL在兒童和青少年中最普遍并且具有高頻率基因易位t(2；5)。原發性皮膚ALCL傾向于更多地在成年人中發生并且缺乏易位。更多病例是T-細胞或未知細胞型(null)。ALCL的全身性形式涉及淋巴結和結外部位。化療已經用于治療ALCL的全身性形式。
表1T-細胞淋巴增殖性失調
2.3癌癥治療當前，癌癥治療可包括手術、化療、激素治療和/或放療以除去患者中的腫瘤細胞(見，例如，Stockdale，1998，″癌癥患者處理原理″，Scientific AmericanMedicine，卷3，Rubenstein andFederman，編輯，12章，第IV節)。最近，癌癥治療也已經使用生物療法或免疫療法。所有這些方法都對患者造成明顯的缺點。例如手術可由于患者的健康而被禁忌或者不能被患者接受。此外，手術可能沒有完全除去瘤性組織。僅當瘤性組織表現出比正常組織對放射更高敏感性的時候放療才有效，并且放療也可以引起嚴重的副作用。激素治療很少作為單一藥劑施用并且雖然其可以有效，但是通常用于其他治療已經除去大部分癌細胞后防止或延緩癌癥的復發。生物學療法/免疫療法在數量上有限并且可產生副作用如皮疹或腫大、類似流感的癥狀，包括發熱、寒戰和疲勞、消化道問題或變態反應。
關于化療，可以利用各種化療劑治療癌癥。大多數癌癥化療劑通過抑制DNA合成，直接或間接通過抑制脫氧核糖核苷酸三磷酸前體的生物合成以防止DNA復制或伴隨的細胞分裂而起作用(見，例如，Gilman等人，Goodman和GilmanThe Pharmacological Basis ofTherapeutics，第八版(Pergamom Press，New York，1990))。這些試劑包括烷化劑如亞硝基脲、抗代謝劑如氨甲蝶呤和羥基脲，和其他試劑如，例如，依托泊苷、campathecins、博萊霉素、阿霉素，和柔紅霉素，它們盡管不一定是細胞周期特異的，但是由于它們對DNA復制的影響而在細胞周期的S期殺死細胞。其他試劑，特別是秋水仙素和長春花生物堿類，如長春花堿和長春新堿，干擾微管裝配而導致有絲分裂抑制。化療方案通常包括施用化療劑的組合以增加治療的效能。
盡管可以利用各種化療劑，但是化療有許多缺點(見，例如，Stockdale，1998，″癌癥患者處理的原理″Scientific AmericanMedicine，卷3，Rubenstein和Federman，編者，12章，10節)。幾乎所有化療劑都是有毒的，并且化療導致明顯且通常危險的副作用，包括嚴重惡性、骨髓抑制、免疫抑制，等。此外，即使施用化療劑的組合，許多腫瘤細胞也對這些化療劑是抗性的或者產生抗性。實際上，對用于治療方案中的特定化療劑有抗性的那些細胞通常被證明對其他藥物，甚至作用機理與該特定治療中的藥物的作用機理不同的那些藥物也有抗性；該現象被稱為多效藥物或多種藥物抗性。從而，由于藥物抗性，證明許多癌癥是標準化療治療方案難治的。
強烈需要備選癌癥療法，尤其需要標準癌癥治療，如手術、放療、化療和激素治療難治的癌癥的療法。此外，癌癥僅被一種方法治療是不尋常的。從而，需要開發新的癌癥治療劑和新的、更有效的治療組合以治療癌癥。
2.4T-細胞表面抗原T細胞通過與靶細胞和抗原呈遞細胞相互作用而在免疫應答中發揮主要作用。這些相互作用是高度特異的并且依賴于T細胞上一種特異抗原受體對靶細胞或抗原呈遞細胞表面上抗原的識別。各種T細胞表面蛋白，例如，抗原受體復合體CD3和輔助粘附分子如CD4、LFA-1、CDS和CD2也促進T細胞和其他細胞的受體-抗原相互作用。
T細胞上的特征性細胞表面標記物已經成為癌癥治療的靶標。已經檢查了針對T-細胞表面標記物，包括CD2、CD3、CD4、CD11a和CD25的抗體例如作為免疫抑制劑(見Berlin等人，1992 Transplantation53840；Latinne等人，1996 Int.Immunol.81113)。
本發明涉及CD2拮抗劑，特別是MEDI-507(識別CD2T細胞標記物的一種人源化單克隆抗體)在預防、治療、處理，或改善癌癥中的用途，特別是T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。人CD2(T11)分子是在95％以上的胸腺細胞和幾乎所有外周T淋巴細胞上表達的一種50kDa的表面糖蛋白。CD2通過與靶細胞上的其主要配體CD58(或LFA-3)相互作用而作為粘附分子。針對CD2的單克隆抗體是本領域中公知的，并且它們主要針對CD2的兩個位點稱為T11-1(區域2)和T11-2(區域1)(見Denning等人，1987 J.Immunology 1392573；Peterson等人，1987 Nature329842)。
此處參考文獻的引用或討論將不被理解為承認這些參考文獻是本發明的現有技術。
3.發明概述本發明包括MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段作為單劑療法以預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的用途。具體地，本發明包括MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段在治療當前標準或實驗性癌癥療法，特別T-細胞惡性腫瘤的療法部分或完全難以治療的受試者中的用途。本發明提供了預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用預防或治療有效量的MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段。具體地，本發明提供了預防、治療、處理或改善進展緩慢或侵襲性T-細胞白血病或T細胞淋巴瘤的方法，條件是該T細胞淋巴瘤不是皮膚T細胞淋巴瘤，所述方法包括對需要該治療的受試者施用預防或治療有效量的MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段。在特定實施方案中，通過對需要該治療的受試者施用預防或治療有效量的MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段預防、治療、處理或改善了淋巴母細胞白血病、成年T-細胞白血病或何杰金氏淋巴瘤。在優選的實施方案中，通過對需要的受試者施用預防或治療有效量的MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段預防、治療、處理或改善了非皮膚性T細胞惡性腫瘤。
本發明還提供了預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要的受試者施用綴合治療劑或藥物的MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段。可以綴合到MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段的治療劑包括，但不限于，細胞因子、毒素、放射性元素、和抗代謝劑。在特定實施方案中，將預防或治療有效量的綴合腫瘤相關抗原特異的抗體的MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段施用于需要該治療的受試者以預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在另一實施方案中，將預防或治療有效量的綴合對非CD2的免疫細胞表面抗原特異的抗體或配體的MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段施用于需要該治療的受試者以預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在一些實施方案中，綴合毒素(例如細胞毒素或免疫毒素)或放射性元素的MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段不被施用于需要該治療的受試者以預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。
在一個實施方案中，MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段的使用增強了癌癥的標準或實驗治療方案的效能。在優選的實施方案中，MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段的使用增強了T-細胞惡性腫瘤的標準或實驗治療方案(例如，化療、放射免疫療法，或放療)的效能。在另一實施方案中，MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段的使用延長了被診斷為T-細胞惡性腫瘤的受試者的存活時間。
本發明包括MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段與標準或實驗性癌癥療法組合在預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途。本發明提供了預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用預防或治療有效量的MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段，和一種或多種預防或治療劑，優選非CD2拮抗劑的預防或治療劑，其當前正用于，或者已經用于或者公知將用于預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。本發明還提供了預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要的受試者施用預防或治療有效量的綴合到治療劑或藥物的MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段，和一種或多種預防或治療劑，優選非CD2拮抗劑的預防或治療劑，其當前正用于，或者已經用于或者公知將用于預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。可以與MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段組合使用以預防、治療、處理或改善癌癥的治療劑的實例包括但不限于，化療劑、治療性抗體，和血管生成抑制劑。尤其與MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段組合使用以預防、治療、處理或改善T-細胞惡性腫瘤的治療劑的實例包括但不限于，Campath、抗-Tac、嘌呤類似物、戊糖苷、細胞毒性劑、抗逆轉錄病毒劑、三氧化二砷、α-干擾素，和抗癌劑。可以與MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段組合使用的化療劑包括但不限于烷基化劑、抗代謝物、天然產物，和激素。本發明的組合療法能夠降低MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段的劑量和/或降低MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段施用于癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤患者以實現治療或預防效果的施用頻率。
本發明提供了按照本發明的方法使用的藥物組合物，所述藥物組合物含有MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段，所含的量可有效預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，還含有藥學上可接受的載體。在特定實施方案中，藥物組合物含有對預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀有效量的編碼MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段的核酸分子和藥學上可接受的載體。
本發明提供了按照本發明的方法使用的藥物組合物，所述藥物組合物含有綴合到治療劑或藥物的MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段，所含的量可有效預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，還含有藥學上可接受的載體。在一些實施方案中，這些組合物不含有綴合到毒物或放射性元素的MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段。本發明還提供了按照本發明的方法使用的藥物組合物，所述藥物組合物含有MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段、非CD2拮抗劑的預防或治療劑，和藥學上可接受的載體。
在各種實施方案的每一種中，可通過腸胃外施用(例如，皮內、肌內、腹膜內、靜脈內和皮下施用)、硬膜外施用、局部施用和粘膜施用(例如，鼻內)，或口服施用方法施用含有MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段的藥物組合物。在特定實施方案中，皮下、肌內或靜脈內施用含有MEDI-507，其類似物、衍生物或抗原結合片段的藥物組合物。
在備選實施方案中，本發明包括非MEDI-507的一種或多種CD2拮抗劑在預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途。本發明提供了預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用預防或治療有效量的一種或多種不同于MEDI-507的CD2拮抗劑。本發明還提供了預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要的受試者施用綴合到治療劑或藥物的CD2拮抗劑。在一些實施方案中，用于本發明的方法和組合物中的CD2拮抗劑沒有綴合毒素或放射性元素。
在特定實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要的受試者施用預防或治療有效量的免疫特異結合含有人CD2的氨基酸殘基18、55或59的CD2表位的抗體(

圖1)，條件是所述抗體不是MEDI-507或LO-CD2a/BTI-322。在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括需要該治療的受試者施用預防或治療有效量的免疫特異結合含有人CD2的氨基酸殘基18和55的CD2表位的抗體(圖1)。在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括需要該治療的受試者施用預防或治療有效量的免疫特異結合含有人CD2的氨基酸殘基18和59的CD2表位的抗體(圖1)。在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括需要該治療的受試者施用預防或治療有效量的免疫特異結合含有人CD2的氨基酸殘基55和59的CD2表位的抗體(圖1)，條件是所述抗體不是MEDI-507或LO-CD2a/BTI-322。在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括需要該治療的受試者施用預防或治療有效量的免疫特異結合人CD2或黑猩猩CD2但是不結合狒狒CD2的抗體，條件是所述抗體不是MEDI-507或LO-CD2a/BTI-322。
本發明提供了預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用預防或治療有效量的非MEDI-507的一種或多種CD2拮抗劑組合其他癌癥療法。本發明還提供了含有非MEDI-507的一種或多種CD2拮抗劑的藥物組合物和藥盒，它們用于預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。
3.1定義如此處所用的，術語“T-細胞惡性腫瘤”指任一種T-細胞淋巴增殖失調，包括胸腺和胸腺后惡性腫瘤。T-細胞惡性腫瘤包括T-細胞起源的腫瘤。T-細胞惡性腫瘤指淋巴樣祖細胞、胸腺細胞、T-細胞、NK-細胞，或抗原呈遞細胞起源的腫瘤。在一些實施方案中，術語“T-細胞惡性腫瘤”指包括表達可按照本發明被靶定的CD2多肽的其他細胞類型，如與T-細胞發育、胸腺基質細胞和胸腺上皮細胞有關的細胞。T-細胞惡性腫瘤包括，但不限于，急性淋巴母細胞白血病、淋巴瘤、胸腺瘤、急性淋巴母細胞白血病、何杰金氏病和非何杰金氏病，條件是T-細胞惡性腫瘤不是皮膚T-細胞惡性腫瘤，尤其皮膚T-細胞淋巴瘤。在優選的實施方案中，T-細胞惡性腫瘤是全身性、非皮膚T-細胞惡性腫瘤。
如此處所用的，術語“附屬的”和“聯合”可以與“組合”或“組合的”互換使用。
如此處所用的，蛋白劑(例如，蛋白質、多肽和抗體)語境中術語“類似物”指一種蛋白劑，其具有與第二種蛋白劑類似或相同的功能但是不必含有與該第二種蛋白劑類似或相同的氨基酸序列，或者具有與該第二種蛋白劑類似或相同的結構。具有與第二種蛋白劑類似的氨基酸序列的蛋白劑滿足下面條件的至少一項(a)一種蛋白劑，其氨基酸序列與第二種蛋白劑的氨基酸序列具有至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性；(b)被核苷酸序列編碼的蛋白劑，該核苷酸序列在嚴格條件下與編碼至少5個連續氨基酸殘基、至少10個連續氨基酸殘基、至少15個連續氨基酸殘基、至少20個連續氨基酸殘基、至少25個連續氨基酸殘基、至少40個連續氨基酸殘基、至少50個連續氨基酸殘基、至少60個連續氨基酸殘基、至少70個連續氨基酸殘基、至少80個連續氨基酸殘基、至少90個連續氨基酸殘基、至少100個連續氨基酸殘基、至少125個連續氨基酸殘基，或至少150個連續氨基酸殘基的第二種蛋白劑的核苷酸序列雜交；和(c)被核苷酸序列編碼的蛋白劑，該核苷酸序列與編碼第二種蛋白劑的核苷酸序列具有至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。具有與第二種蛋白劑相似結構的蛋白劑指具有與第二種蛋白劑的相似的二級、三級或四級結構的蛋白劑。可通過本領域中技術人員公知的方法確定多肽的結構，這些方法包括，但不限于，肽測序、X-射線晶體學、核磁共振、圓二色性，和晶體電子顯微術。
為了確定兩個氨基酸序列或兩個核苷酸序列的百分數同一性，為了最優比較目的將序列比對(例如，可以在第一個氨基酸或核酸序列中導入缺口以與第二個氨基酸或核酸序列最優比對)。然后比較相應氨基酸位置或核苷酸位置的氨基酸殘基或核苷酸。當第一個序列中的一個位置被占據的氨基酸殘基或核苷酸與第二個序列中相應位置的相同時，那么這兩個分子在該位置是相同的。兩個序列之間的百分數同一性是兩個序列共有的相同位置的函數(即％同一性＝相同的重疊位置的數目/位置總數×100％)。在一個實施方案中，兩個序列具有相同長度。
也可以使用數學算法確定兩個序列之間百分數同一性。用于兩個序列比較的數學算法的一個優選的非限制性實例是Karlin和Altschul，1990，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.872264-2268的算法，其在Karlin和Altschul，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.905873-5877中被改進。這種算法被并入到Altschul等人，1990，J.Mol.Biol.215403的NBLAST和XBLAST程序中。可以用NBLAST核苷酸程序參數設置，例如得分＝100，字長＝12實施BLAST核苷酸搜索，以得到與本發明的核酸分子同源的核酸序列。可以用XBLAST核苷酸程序參數設置，例如得分＝50，字長＝3實施BLAST蛋白質搜索，以得到與本發明的蛋白質分子同源的氨基酸序列。為了得到用于比較目的的缺口比對，可以如Altschul等人，1997，NucleicAcids Res.253389-3402描述的利用缺口BLAST。備選地，可以用PSI-BLAST實施迭代搜索，其檢測分子(Id.)之間遠的關系。當利用BLAST、缺口BLAST和PSI-BLAST程序時，可以使用各自程序(例如XBLAST和NBLAST的)的默認參數(見，例如，NCBI網站)。用于序列比較的數學算法的另一優選的、非限制性實例是Myers和Miller，1988，CABIOS 411-17的算法。這種算法被并入到ALIGN程序(2.0版本)中，該程序是GCG序列比對軟件包的一部分。當使用ALIGN程序比較氨基酸序列時，可以使用PAM120權重殘基表、缺口長度罰分為12，缺口罰分為4。
可以用類似于上述的技術，允許或不允許缺口，確定兩個序列之間的百分數同一性。在計算百分數同一性時，通常僅計算精確的匹配。
如此處所用的，非-蛋白劑語境中的術語“類似物”指第二種有機或無機分子，其具有與第一種有機或無機分子類似或相同的功能并且在結構上類似于該第一種有機或無機分子。
如此處所用的，術語“拮抗劑”指任一蛋白質、多肽、肽、抗體、抗體片段、大分子，或小分子(小于10kD)，其阻斷、抑制、減小或中和另一分子的功能、活性和/或表達。在各種實施方案中，相對于對照如磷酸鹽緩沖液(PBS)，拮抗劑將另一分子的功能、活性和/或表達減小至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％。
如此處所用的，術語“抗體”指單克隆抗體、合成的多特異性抗體、人抗體、人源化抗體、camelised抗體、單結構域抗體、嵌合抗體、單鏈Fvs(scFv)、單鏈抗體(包括雙特異單鏈抗體)、Fab片段、F(ab’)片段、二硫鍵連接的Fvs(sdFv)，和抗-獨特型(抗-Id)抗體(包括，例如，針對本發明抗體的抗Id-抗體)、intrabodies，和上面任一種的表位-結合片段。具體地，抗體包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白的免疫學活性片段，即含有抗原-結合位點的分子。免疫球蛋白分子可以是任一類型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、類別(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亞類。
如此處所用的，術語“CD2多肽”指CD2糖蛋白(a.k.a.T11或LFA-2)或其片段。在優選的實施方案中，CD2多肽是被免疫細胞如T-細胞和天然殺傷(“NK”)細胞表達的細胞表面50-55kDa糖蛋白。CD2多肽可來自任一物種。在一些實施方案中，CD2多肽是人或黑猩猩CD2分子。在其他實施方案中，CD2多肽不是狒狒CD2分子。CD2多肽的核苷酸和/或氨基酸序列可以在文獻或公共數據庫中發現，或者可以用本領域技術人員公知的克隆和測序方法確定該核苷酸和/或氨基酸序列。例如，可以在GenBank數據庫中發現人CD2的核苷酸序列(見，例如，記錄號X06143、AH002740和M16445)。在優選的實施方案中，CD2多肽是人CD2分子(見，例如，圖1)。
如此處所用的，術語“競爭”指抑制或降低CD2結合分子，尤其LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507與CD2多肽結合的試劑，這可通過本領域技術人員熟知的競爭ELISA測定法或BIACORE測定法或者此處描述的方法評估(見，例如，5.8節)。在特定實施方案中，如通過競爭性ELISA測定法或BIAcore測定法所評估的，相對于對照如PBS，治療或預防劑將CD2結合分子與CD2多肽的結合減小至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％。在優選的實施方案中，如通過競爭性ELISA測定法或BIAcore測定法所評估的，相對于對照如PBS，抗-CD2抗體將LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507與CD2多肽的結合減小至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％。
如此處所用的，在蛋白劑(例如，蛋白質、多肽，和抗體)語境中的術語“衍生物”指一種蛋白劑，其所含有的氨基酸序列已經通過氨基酸置換、缺失或加入的導入而被改變。如此處所用的術語“衍生物”還指一種蛋白劑，其例如通過將任一類型的分子共價粘附到該蛋白劑而被修飾。例如，但不限于，例如，通過糖基化、乙酰化、PEG化、磷酸化、酰胺化、通過公知的保護/封閉基團衍生、蛋白水解切割、連接到細胞配體或其他蛋白質等可以修飾抗體。使用本領域技術人員公知的技術通過化學修飾可以產生衍生的蛋白劑，這些技術包括，但不限于特異化學切割、乙酰化、甲酰化、衣霉素的代謝合成，等。此外，衍生的蛋白劑可以含有一種或多種非典型氨基酸。蛋白劑衍生物與其所衍生自的蛋白劑具有類似或相同的功能。
如此處所用的，非蛋白劑語境中的術語“衍生物”指基于第一種有機或無機分子的結構形成的另一種有機或無機分子。有機分子的衍生物包括，但不限于，例如，通過羥基、甲基、乙基、羧基或氨基的加入或缺失修飾的分子。有機分子也可以被酯化、烷基化和/或磷酸化。
如此處所用的，術語“有效量”指一種治療的量，該量足夠減小或改善癌癥(尤其T-細胞惡性腫瘤)或者其一種或多種癥狀的嚴重性和/或持續時間，預防癌癥(尤其T-細胞惡性腫瘤)或者其一種或多種癥狀的惡化，導致癌癥(尤其T-細胞惡性腫瘤)或者其一種或多種癥狀退化，或者增強或提高另一種治療(例如，預防或治療劑)的預防或治療效果。
如此處所用的，術語“表位”指在動物，優選哺乳動物，最優選人中具有抗原性或免疫原性活性的多肽或蛋白質的片段。具體地，如此處所用的術語“CD2表位”指在動物，優選哺乳動物，最優選人中具有抗原性或免疫原性活性的CD2多肽的片段。具有免疫原性活性的表位是引起動物中抗體應答的多肽或蛋白質的片段。具有抗原活性的表位是抗體免疫特異地結合的多肽或蛋白質的片段，該結合可通過本領域中的技術人員熟知的任一種方法，例如，通過免疫測定法測定。抗原表位不必是免疫原性的。
如此處所用的，術語“片段”指肽或多肽(包括，但不限于抗體)，其含有另一多肽氨基酸序列的至少5個鄰接的氨基酸殘基、至少10個鄰接的氨基酸殘基、至少15個鄰接的氨基酸殘基、至少20個鄰接的氨基酸殘基、至少25個鄰接的氨基酸殘基、至少40個鄰接的氨基酸殘基、至少50個鄰接的氨基酸殘基、至少60個鄰接的氨基酸殘基、至少70個鄰接的氨基酸殘基、至少80個鄰接的氨基酸殘基、至少90個鄰接的氨基酸殘基、至少100個鄰接的氨基酸殘基、至少125個鄰接的氨基酸殘基、至少150個鄰接的氨基酸殘基、至少175個鄰接的氨基酸殘基、至少200個鄰接的氨基酸殘基、或至少250個鄰接的氨基酸殘基。在特定實施方案中，多肽的片段保持該多肽的至少一種功能。
如此處所用的，術語“功能片段”指肽或多肽(包括，但不限于抗體)，其含有另一不同多肽氨基酸序列的至少5個鄰接的氨基酸殘基、至少10個鄰接的氨基酸殘基、至少15個鄰接的氨基酸殘基、至少20個鄰接的氨基酸殘基、至少25個鄰接的氨基酸殘基、至少40個鄰接的氨基酸殘基、至少50個鄰接的氨基酸殘基、至少60個鄰接的氨基酸殘基、至少70個鄰接的氨基酸殘基、至少80個鄰接的氨基酸殘基、至少90個鄰接的氨基酸殘基、至少100個鄰接的氨基酸殘基、至少125個鄰接的氨基酸殘基、至少150個鄰接的氨基酸殘基、至少175個鄰接的氨基酸殘基、至少200個鄰接的氨基酸殘基、或至少250個鄰接的氨基酸殘基，其中所述肽或多肽保持該另一不同多肽的至少一種功能。
如此處所用的，術語“融合蛋白”指一種多肽，其含有第一種蛋白質的氨基酸序列或者其功能片段、類似物或衍生物，和一種異源蛋白的氨基酸序列(即與第一種蛋白或者其功能片段、類似物或衍生物不同的第二種蛋白或者其功能片段、類似物或衍生物)。在一個實施方案中，融合蛋白含有融合(例如，可操作地連接)到異源蛋白、多肽或肽的預防或治療劑。根據該實施方案，該蛋白、多肽或肽可以是或不是一種不同類型的預防或治療劑。在一些實施方案中，融合蛋白含有具有CD2拮抗劑活性的蛋白、多肽或肽和異源蛋白、多肽或肽。在其他實施方案中，融合蛋白含有CD2結合分子和異源蛋白、多肽或肽。在特定實施方案中，融合蛋白含有MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段和異源多肽。根據這些實施方案，異源多肽為至少5個氨基酸殘基、至少10個氨基酸殘基、至少15個氨基酸殘基、至少20個氨基酸殘基、至少25個氨基酸殘基、至少30個氨基酸殘基、至少40個氨基酸殘基、至少50個氨基酸殘基、至少75個氨基酸殘基、至少100個氨基酸殘基、或至少150個氨基酸殘基。
如此處所用的，術語“宿主細胞”包括用核酸分子轉染的特定受試細胞和這種細胞的后代或潛在后代。這種細胞的后代由于在連續傳代中可能發生突變或環境影響或者核酸分子整合到宿主基因組而可能與用該核酸分子轉染的親本細胞不同。
如此處所用的，術語“在嚴格條件下雜交”描述了雜交和洗滌條件，在該條件下相互具有至少60％(優選地，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、或至少95％)相同的核苷酸序列通常保持相互雜交。這種嚴格條件是本領域技術人員公知的并且可以在Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons，N.Y.(1989)，6.3.1-6.3.6中發現。在一個非限制性實例中，嚴格雜交條件是在6×氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)中約45℃雜交，然后在0.1×SSC，0.2％SDS約68℃下洗滌一次或多次。在優選的、非限制性實例中，嚴格雜交條件是在6×SSC中約45℃雜交，然后在0.2×SSC，0.1％SDS，50-65℃洗滌一次或多次(例如，在50℃、55℃、60℃或65℃洗滌一次或多次)。應該理解本發明的核酸不包括在這些條件下僅雜交僅由A或T核苷酸組成的核酸序列的核酸分子。
如此處所用的，術語“免疫特異地結合抗原”和類似的術語指特異結合一種抗原或片段并且不特異結合其他抗原的肽、多肽、融合蛋白和抗體或其片段。免疫特異地結合抗原的肽或多肽可以以低親和力結合其他肽或多肽，如通過例如，免疫測定法、BIAcore，或本領域中公知的其他測定法所確定的。免疫特異地結合抗原的抗體或片段可以與相關抗原交叉反應。優選地，免疫特異地結合抗原的抗體或片段不與其他抗原交叉反應。
如此處所用的，術語“免疫特異地結合CD2多肽”和類似術語指特異結合CD2多肽或其片段并且不特異結合其他多肽的肽、多肽、融合蛋白和抗體或其片段。免疫特異地結合CD2多肽的肽或多肽可以以低親和力結合其他肽或多肽，如通過例如，免疫測定法、BIAcore，或本領域中公知的其他測定法所確定的。免疫特異地結合CD2多肽的抗體或片段可以與相關抗原交叉反應。優選地，免疫特異地結合CD2多肽的抗體或片段不與其他抗原交叉反應。可以通過，例如，免疫測定法、BIAcore，或本領域中公知的其他技術鑒定免疫特異地結合CD2多肽的抗體或片段。當抗體或其片段結合CD2多肽的親和性比結合任何交叉反應抗原的親和性更強時，該抗原或其片段特異結合CD2多肽，這可使用實驗技術，如免疫測定法(RIA)和酶聯免疫吸附測定法(ELISAs)確定。關于抗體特異性的討論，見，例如，Paul，編著，1989，Fundamental Immunology第二版，Raven Press，New York，332-336頁。
如此處所用的，術語“組合”指使用一種以上的療法(例如，一種或多種預防和/或治療劑)。術語“組合”的使用不限制預防和/或治療劑施用于患有癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤的受試者的順序。第一種預防或治療劑可以在第二種治療劑(例如，第二種預防或治療劑)之前(例如，5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周、或12周之前)、同時，或者隨后(例如，5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周、或12周之后)施用于患有癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤的受試者。
如此處所用的，蛋白劑(例如，肽、多肽、融合蛋白或抗體)中的術語“分離的”指一種蛋白劑，其基本上沒有其細胞或組織來源的細胞材料或污染性蛋白，或者當該蛋白劑是化學合成時其基本上沒有化學前體或其他化學藥品。術語“基本上無細胞材料”包括蛋白劑制劑，其中該蛋白劑與細胞的細胞組分分開，其中該蛋白劑從該細胞分離或者重組產生。從而，基本上無細胞材料的蛋白劑包括具有小于約30％、20％、10％，或5％(按干重計)異源蛋白(此處也稱為“污染性蛋白”)的蛋白劑制劑。當該蛋白劑是重組產生時，其還優選基本上無培養基，即，培養基占蛋白質制劑體積的約20％、10％，或5％以下。當通過化學合成產生蛋白劑時，其優選基本上無化學前體或其他化學藥品，即，該蛋白劑從與其合成有關的化學前體或其他化學藥品分離。因此，這種蛋白劑制劑所含有的不同于目標蛋白劑的化學前體或化合物小于約30％、20％、10、5％(按干重計)。在特定實施方案中，分離CD2拮抗劑或CD2結合分子。在優選的實施方案中，分離MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段。
如此處所用的，核酸分子語境中的術語“分離的”指一種核酸分子，其與存在于該核酸分子的天然來源中的其他核酸分子分離。此外，“分離的”核酸分子，如cDNA分子，當通過重組技術產生時，可以基本上無其他細胞材料或者培養基，或者當通過化學合成時，可以基本上無化學前體或其他化學藥品。在特定實施方案中，分離了編碼CD2拮抗劑的核酸分子。在優選實施方案中，分離了編碼MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段的核酸分子。
如此處所用的，術語“處理”指受試者從治療(例如，預防或治療劑)得到的有益效果，該治療不導致癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤的治愈。在一些實施方案中，受試者被施用一種或多種治療(例如，一種或多種預防或治療劑)以“處理”癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，從而預防該癌癥的發展或惡化。
如此處所用的，術語“非應答的”和“難治的”描述了用癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的當前可利用的預防或治療劑治療的患者，該預防或治療劑不足夠在臨床上減輕與癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀相關的一種或多種癥狀的。通常，這些患者患有嚴重的、持久活動的疾病并且需要額外的治療以改善與癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀相關的癥狀。
如此處所用的，術語“核酸”和“核苷酸序列”包括DNA分子(例如，cDNA、或基因組DNA)、RNA分子(例如，mRNA)、DNA和RNA分子的組合或者雜交DNA/RNA分子，和DNA或RNA分子的類似物。可以用，例如，核苷酸類似物產生類似物，該核苷酸類似物包括，但不限于，次黃苷或三苯甲基化堿基。這些類似物還可以包括含有修飾的主鏈的DNA或RNA分子，該修飾的主鏈賦予該分子有益性質如，例如，核酸酶抗性或穿過細胞膜的能力增加。核酸或核酸序列可以是單鏈的、雙鏈的，并且可以含有單鏈和雙鏈部分，并且可以含有三鏈部分，但是優選雙鏈DNA。
如此處所用的，術語“預防劑”指可用于預防癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤的任何試劑。在一些實施方案中，術語“預防劑“指CD2拮抗劑(例如，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)。在一些其他實施方案中，術語“預防劑”不指CD2拮抗劑(例如，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)。優選地，預防劑是公知將用于，或者已經或者當前正用于預防或阻礙癌癥、尤其T-細胞惡性腫瘤的發展、發作或惡化的試劑。
如此處所用的，術語“預防”、“防止”指由于施用治療(例如，預防或治療劑)或者治療的組合(例如，預防和/或治療劑的組合)導致受試者中癌癥(尤其T-細胞惡性腫瘤)發展或發作的抑制或預防癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤的一種或多種癥狀的復發、發作或惡化。
如此處所用的，術語“預防有效量”指預防劑的量足夠防止癌癥(尤其T-細胞惡性腫瘤)或其一種或多種癥狀。
如此處所用的，“預防方案”指施用一種或多種預防劑的劑量和時間選擇的方案。
如此處所用的，“方案”包括給藥時間表和給藥方案。此處的方案是使用方法并且包括預防和治療方案。
如此處所用的，短語“副作用”包括治療(例如，預防和/或治療劑)的不需要的和不利的作用。不利的作用總是不需要的，但是不需要的作用不一定是不利的。預防和治療劑的不利作用可以是有害的或者不舒服的或者危險的。
如此處所用的，術語“小分子”和類似術語包括，但不限于，分子量小于1,000g/mol的有機和無機化合物(即，包括異有機(heterorganic)和有機金屬化合物)。在優選實施方案中，“小分子”包括分子量小于750g/mol的有機或無機化合物。在另一特定實施方案中，“小分子”包括分子量小于500g/mol的有機或無機化合物。還包括這些化合物的鹽、酯，和其他藥學上可接受的形式。
如此處所用的，術語“受試者”和“患者”互換使用。如此處所用的，術語“受試者”指動物，優選哺乳動物，包括，但不限于，非靈長類動物(例如，奶牛、豬、馬、貓、狗、大鼠和小鼠)和靈長類動物(例如，猴，如獼猴和人)，更優選地，人。在特定實施方案中，受試者是患有癌癥的人。在優選的實施方案中，受試者是患有不同于皮膚T-細胞淋巴瘤的T-細胞惡性腫瘤的人。在另一實施方案中，受試者是非人動物如鳥(例如，鵪鶉、雞，和火雞)，農場動物(例如，奶牛、馬、豬，和綿羊)，寵物(例如，貓、狗，和豚鼠)，或者實驗動物(例如，T-細胞惡性腫瘤的動物模型，如患有T-細胞惡性腫瘤的黑猩猩和小鼠)。
如此處所用的，術語“協同的”指治療的組合(例如，預防和/或治療劑的組合)，其比任何兩種或多種單一治療(例如，兩種或多種單一預防或治療劑)的加合效果更有效。治療的組合(例如，預防或治療劑)的協同效果允許使用更低劑量的一種或多種治療(例如，一種或多種預防和/或治療劑)和/或所述治療施用于患有癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤的受試者的頻率更低。能夠使用更低劑量的治療(例如，預防和/或治療劑)和/或頻率更低地使用所述治療可以減少將所述治療施用于受試者相關的毒性而不減少所述治療在預防、治療、處理、或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的效能。此外，協同效果可以提高療法(例如，預防和/或治療劑)在預防、治療、處理、或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的功效。最后，療法的組合(例如，預防和/或治療劑)的協同效果可以避免或減少與任一單一療法的使用相關的不利的或者不需要的副作用。
如此處所用的，術語“療法”可以指用于預防、治療、處理、或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的任何一種或多種方案、一種或多種方法和/或一種或多種試劑。在一些實施方案中，術語“療法”指本領域中技術人員，例如，醫學專業人員，如醫生公知的用于預防、治療、處理、或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的抗癌劑、生物學療法、支持療法和/或其他療法。
如此處所用的，術語“治療劑”指可用于預防、治療、處理、或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的任何一種或多種試劑。在一些實施方案中，術語“治療劑”指CD2拮抗劑(例如，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)。在一些其他實施方案中，術語“治療劑”不指CD2拮抗劑(例如，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)。優選地，治療劑是公知可用于，或者已經或者當前正用于預防、治療、處理、或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的試劑。
如此處所用的，術語“治療有效量”指療法(例如，預防或治療劑)的量，該量足夠減小癌癥(尤其，T-細胞惡性腫瘤)的嚴重性、減少癌癥(尤其，T-細胞惡性腫瘤)的持續時間、改善癌癥(尤其，T-細胞惡性腫瘤)的一種或多種癥狀、防止或延緩癌癥(尤其，T-細胞惡性腫瘤)的惡化，導致癌癥(尤其，T-細胞惡性腫瘤)的退化，或者增強或提高另一種療法(例如，預防或治療劑)的一種或多種治療效果。
如此處所用的，術語“治療方案”指一種或多種治療劑的劑量和施用時間選擇方案。
如此處所用的，術語“治療”指一種或多種療法(例如，一種或多種預防和/或治療劑)的施用導致減輕和改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的惡化、嚴重性，和/或持續時間。
4.附圖簡述圖1.描述了人CD2氨基酸序列(SEQ ID NO7)。
圖2.用熒光-激活的細胞分選儀(“FACS”)分析MEDI-507與MET-1成人T-細胞白血病(“ATL”)細胞的結合。
圖3.用MET-1白血病細胞注射并以每周4次PBS、每周4次100μg MEDI-507、每周4次100μg HAT、每周4次100μg MEDI-507與人源化抗-Tac(“HAT“)、每周1次100μg MEDI-507持續6個月施用的非肥胖糖尿病(“NOD”)/重癥聯合免疫缺陷(“SCID”)小鼠中人β-2微球蛋白(“β2μ”)的平均濃度。
圖4.用MET-1白血病細胞注射并以每周4次PBS、每周4次100μg MEDI-507、每周4次100μg HAT、每周4次100μg MEDI-507與HAT、每周1次100μg MEDI-507持續6個月施用的NOS/SCID小鼠和未注射MET-1白血病細胞和沒有施用治療劑的NOS/SCID小鼠的Kaplan-Meier存活圖。
圖5.在注射MET-1白血病細胞并以每周施用100μg MEDI-507持續6個月的NOS/SCID小鼠中觀察到的人β2μ水平的變化。
圖6.MET-1FcRγ敲除的和FcRγ完整的攜帶ATL的NOS/SCID小鼠的Kaplan-Meier存活圖。
5.發明詳述本發明包括治療方案，其提供了比關于癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的當前的單劑療法或組合療法更好的預防或治療概況(profile)。本發明提供了基于CD2拮抗劑的療法以預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。具體地，本發明提供了預防和治療方案以預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，該方案包括對需要治療的患者施用MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原片段。
本發明還提供了用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的含有CD2拮抗劑的藥物組合物和藥盒。具體地，本發明提供了含有MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段的藥物組合物和藥盒。
5.1MEDI-507、其衍生物、類似物、抗原結合片段本發明包括MEDI-507(MedImmune，Inc.，Gaithersburg，MD；Branco等人，1999，Transplantation 68(10)1588-1596)、其類似物、衍生物或抗原結合片段(例如，MEDI-507的一個或多個互補決定區(“CDRs”)在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途。MEDI-507在例如，國際公開號WO 99/03502、國際申請號PCT/US02/22273和PCT/US02/06761和美國專利序列號09/462,140、10/091,268、和10/091,313中公開，這些文獻的每一篇都在此處完整并入作為參考。MEDI-507是一種人源化IgG1κ類單克隆抗體，其免疫特異地結合人CD2多肽。用分子技術將來自大鼠單克隆抗體LO-CD2a/BTI-322的CDRs插入人IgG1框架構建MEDI-507。LO-CD2a/BTI-322具有在例如美國專利號5,730,979、5,817,311和5,951,983；以及美國申請序列號09/056,072和09/462,140(每一篇都在此處完整并入作為參考)中公開的氨基酸序列，或者通過1993年6月28日保藏在美國典型培養物保藏中心(ATCC)10801 University Boulevard，Manassas，Virginia20110-2209保藏號為HB 11423的細胞系產生的單克隆抗體的氨基酸序列。
本發明包括免疫特異地結合本發明的CD2多肽的抗體在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途，所述抗體含有可變重(“VH”)結構域，其具有LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507的VH結構域的氨基酸序列。具體地，本發明包括單結構域抗體，其含有具有LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507的VH結構域的氨基酸序列的兩個VH結構域。本發明還包括免疫特異地結合CD2多肽的抗體在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途，所述抗體含有VH CDR，其具有LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507的VH CDR的任一個的氨基酸序列。具體地，本發明包括免疫特異地結合CD2多肽的抗體在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途，所述抗體含有具有表2中所列VH CDRs的任一個的氨基酸序列的VH CDR。
表2.LO-CD2a/BTI-322的CDR序列
在一個實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽并且含有具有SEQ IDNO1的氨基酸序列的VH CDR1的抗體用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽并且含有具有SEQ ID NO2的氨基酸序列的VH CDR2的抗體用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽并且含有具有SEQ ID NO3的氨基酸序列的VH CDR3的抗體用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在優選的實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽并且含有具有SEQ ID NO1的氨基酸序列的VH CDR1、具有SEQ IDNO2的氨基酸序列的VH CDR2、并且具有SEQ ID NO3的氨基酸序列的VH CDR 3的抗體用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。
本發明包括免疫特異地結合CD2多肽的抗體在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途，所述抗體含有可變輕(“VL”)結構域，該結構域具有LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507的VL結構域的氨基酸序列。本發明還包括免疫特異地結合CD2多肽的抗體在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途，所述抗體含有VL CDR，其具有LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507的VL CDR的氨基酸序列。具體地，本發明包括免疫特異地結合CD2多肽的抗體在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途，所述抗體含有具有表2(如前)中所列的VL CDRs任一個的氨基酸序列的VL CDR。
在一個實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽并且含有具有SEQ IDNO4的氨基酸序列的VL CDR1的抗體用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽并且含有具有SEQ ID NO5的氨基酸序列的VL CDR2的抗體用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽并且含有具有SEQ ID NO6的氨基酸序列的VL CDR3的抗體用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在優選的實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽并且含有具有SEQ ID NO4的氨基酸序列的VL CDR1、具有SEQ IDNO5的氨基酸序列的VL CDR2、并且具有SEQ ID NO6的氨基酸序列的VL CDR 3的抗體用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。
本發明包括免疫特異地結合CD2多肽的抗體在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途，所述抗體含有此處公開的VH結構域與此處公開的VL結構域，或者其他VL結構域的組合。本發明還包括免疫特異地結合CD2多肽的抗體在，預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途，所述抗體含有此處公開的VL結構域與此處公開的VH結構域，或者其他VH結構域的組合。
具體地，本發明包括免疫特異地結合CD2多肽的抗體在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途，所述抗體含有LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507的一種或多種VH CDRs和一種或多種VL CDRs。本發明還包括免疫特異地結合CD2多肽的抗體在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途，所述抗體含有表2中所列的一種或多種VH CDRs和一種或多種VL CDRs。更特別地，本發明包括免疫特異地結合CD2多肽的抗體在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途，所述抗體含有VH CDR1和VL CDR1；VH CDR1和VL CDR2；VH CDR1和VL CDR3；VH CDR2和VL CDR1；VH CDR2和VL CDR2；VH CDR2和VL CDR3；VH CDR3和VH CDR1；VH CDR3和VL CDR2；VH CDR3和VL CDR3；VH 1CDR1、VH CDR2和VL CDR1；VH CDR1、VH CDR2和VL CDR2；VHCDR1、VH CDR2和VL CDR3；VH CDR2、VH CDR3和VL CDR1、VH CDR2、VH CDR3和VL CDR2；VH CDR2、VH CDR2和VL CDR3；VHCDR1、VLCDR1和VL CDR2；VH CDR1、VL CDR1和VL CDR3；VH CDR2、VL CDR1和VL CDR2；VH CDR2、VL CDR1和VL CDR3；VH CDR3、VL CDR1和VL CDR2；VH CDR3、VL CDR1和VL CDR3；VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3和VL CDR1；VHCDR1、VH CDR2、VH CDR3和VL CDR2；VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3和VL CDR3；VH CDR1、VH CDR2、VL CDR1和VLCDR2；VH CDR1、VH CDR2、VL CDR1和VL CDR3；VH CDR1、VH CDR3、VL CDR1和VL CDR2；VH CDR1、VH CDR3、VL CDR1和VL CDR3；VHCDR2、VH CDR3、VL CDR1和VL CDR2；VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1和VL CDR3；VH CDR2、VH CDR3、VL CDR2和VL CDR3；VHCDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1和VL CDR2；VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1和VL CDR3；VHCDR1、VH CDR2、VL CDR1、VL CDR2，和VLCDR3；VH CDR1、VH CDR3、VLCDR1、VL CDR2，和VL CDR3；VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2，和VL CDR3；或者表2(如前)中所列的VH CDRs和VL CDRs的任意組合。
在一個實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽并且含有具有SEQ IDNO1的氨基酸序列的VH CDR1和具有SEQ ID NO4的氨基酸序列的VLCDR1的抗體被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽并且含有具有SEQ ID NO1的氨基酸序列的VH CDR1和具有SEQ ID NO5的氨基酸序列的VL CDR2的抗體被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽并且含有具有SEQ ID NO1的氨基酸序列的VH CDR1和具有SEQ ID NO6的氨基酸序列的VL CDR 3的抗體被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。
在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽并且含有具有SEQ IDNO2的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO4的氨基酸序列的VLCDR1的抗體被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽并且含有具有SEQ ID NO2的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO5的氨基酸序列的VL CDR2的抗體被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽并且含有具有SEQ ID NO2的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO6的氨基酸序列的VL CDR3的抗體被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。
在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽并且含有具有SEQ IDNO3的氨基酸序列的VH CDR3和具有SEQ ID NO4的氨基酸序列的VLCDR1的抗體被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽并且含有具有SEQ ID NO3的氨基酸序列的VH CDR3和具有SEQ ID NO5的氨基酸序列的VL CDR2的抗體被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在優選的實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽并且含有具有SEQ IDNO3的氨基酸序列的VH CDR3和具有SEQ ID NO6的氨基酸序列的VLCDR3的抗體被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。
本發明包括通常分離的、編碼MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段的核酸分子在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途。編碼免疫特異地結合CD2多肽的抗體的分離的核酸分子被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，所述抗體含有VH結構域，其具有LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507的VH結構域的氨基酸序列。在另一實施方案中，編碼免疫特異地結合CD2多肽的抗體的分離的核酸分子被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，所述抗體含有VH結構域，該VH結構域具有保藏在ATCC中保藏號為HB 11423的細胞系產生的單克隆抗體VH結構域的氨基酸序列。在另一實施方案中，編碼免疫特異地結合CD2多肽的抗體的分離的核酸分子被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，所述抗體含有LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507或者保藏在ATCC中保藏號為HB11423的細胞系產生的單克隆抗體的VH CDR。在另一實施方案中，編碼免疫特異地結合CD2多肽的抗體的分離的核酸分子被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，所述抗體含有具有表2(如前)中所列VH CDR1的氨基酸序列的VHCDR1。在另一實施方案中，編碼免疫特異地結合CD2多肽的抗體的分離的核酸分子被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，所述抗體含有具有表2(如前)中所列VH CDR2的氨基酸序列的VH CDR2。在再一個實施方案中，編碼免疫特異地結合CD2多肽的抗體的分離的核酸分子被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，所述抗體含有具有表2(如前)中所列VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR3。
在一個實施方案中，編碼免疫特異地結合CD2多肽的抗體的分離的核酸分子被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，所述抗體含有VL結構域，該VL結構域具有LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507的VL結構域的氨基酸序列。在另一實施方案中，編碼免疫特異地結合CD2多肽的抗體的分離的核酸分子被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，所述抗體含有VL結構域，該VL結構域具有保藏在ATCC中保藏號為HB 11423的細胞系產生的單克隆抗體的VL結構域的氨基酸序列。在另一實施方案中，編碼免疫特異地結合CD2多肽的抗體的分離的核酸分子被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，所述抗體含有LO-CD2a/BTI-322、MEDI-507或保藏在ATCC中保藏號為HB 11423的細胞系產生的單克隆抗體的VL CDR。在另一實施方案中，編碼免疫特異地結合CD2多肽的抗體的分離的核酸分子被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，所述抗體含有具有表2(如前)中所列VL CDR1的氨基酸序列的VL CDR1。在另一實施方案中，編碼免疫特異地結合CD2多肽的抗體的分離的核酸分子被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，所述抗體含有具有表2(如前)中所列VL CDR2的氨基酸序列的VL CDR2。在再一個實施方案中，編碼免疫特異地結合CD2多肽的抗體的分離的核酸分子被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，所述抗體含有具有表2(如前)中所列VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR3。
在另一實施方案中，編碼免疫特異地結合CD2多肽的抗體的分離的核酸分子被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，所述抗體含有具有LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507的VH結構域的氨基酸序列的VH結構域和具有LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507的VL結構域的氨基酸序列的VL結構域。在另一實施方案中，編碼免疫特異地結合CD2多肽的抗體的分離的核酸分子被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，所述抗體含有具有保藏在ATCC中保藏號為HB 11423的細胞系產生的單克隆抗體的VH結構域的氨基酸序列的VH結構域和具有保藏在ATCC中保藏號為HB 11423的細胞系產生的單克隆抗體的VL結構域的氨基酸序列的VL結構域。在另一實施方案中，編碼免疫特異地結合CD2多肽的抗體的分離的核酸分子被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，所述抗體含有LO-CD2a/BTI-322、MEDI-507或保藏在ATCC中保藏號為HB 11423的細胞系產生的單克隆抗體的VH CDR和LO-CD2a/BTI-322、MEDI-507或保藏在ATCC中保藏號為HB 11423的細胞系產生的單克隆抗體的VL CDR。在另一實施方案中，編碼免疫特異地結合CD2多肽的抗體的分離的核酸分子被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，所述抗體含有具有表2(如前)中所列氨基酸序列的VH CDR1、VL CDR1、VHCDR2、VL CDR2、VH CDR3、VL CDR3、或者它們的任意組合。
本發明包括免疫特異地結合CD2多肽的抗體在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途，所述抗體含有此處公開的VH結構域、VH CDRs、VL結構域、或VL CDRs的衍生物，其免疫特異地結合CD2多肽。可以用本領域技術人員公知的標準技術在編碼本發明的抗體的核苷酸序列中導入突變，這些標準技術包括，例如，定點誘變和PCR-介導的誘變，其導致氨基酸置換。優選地，相對于原始分子，衍生物包含少于25個氨基酸置換、少于20個氨基酸置換、少于15個氨基酸置換、少于10個氨基酸置換、少于5個氨基酸置換、少于4個氨基酸置換、少于3個氨基酸置換、或少于2個氨基酸置換。在優選的實施方案中，衍生物具有在一個或多個預測的非必需氨基酸殘基(即，對于抗體免疫特異地結合CD2多肽不關鍵的氨基酸殘基)處進行的保守氨基酸置換。“保守氨基酸置換”是一種氨基酸置換，其中氨基酸殘基被側鏈具有類似電荷的氨基酸殘基代替。本領域中已經定義了側鏈具有類似電荷的氨基酸殘基的家族。這些家族包括具有堿性側鏈的氨基酸(例如，賴氨酸、精氨酸、組氨酸)、具有酸性側鏈的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、具有不帶電的極性側鏈的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非極性側鏈的氨基酸(例如，丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、具有β分枝側鏈的氨基酸(例如，蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)和具有芳香側鏈的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)。備選地，可以通過如飽和誘變在編碼序列的所有或部分序列隨機導入突變，并且可以篩選所得突變體的生物學活性以鑒定保留活性的突變體。突變后，可以表達編碼的抗體并確定抗體的活性。
本發明包括免疫特異地結合本發明中CD2多肽的抗體在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途，所述抗體含有LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507的氨基酸序列，其中在LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507可變輕(VL)結構域和/或可變重(VH)結構域中具有一個或多個氨基酸殘基置換。本發明還包括免疫特異地結合本發明中CD2多肽的抗體在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途，所述抗體含有LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507的氨基酸序列，其中在LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507一個或多個VL CDRs和/或一個或多個VH CDRs中具有一個或多個氨基酸殘基置換。可以在體外和/或體內試驗通過在LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507的VH結構域、VH CDRs、VL結構域和/或VL CDRs中導入置換產生的抗體的例如，結合CD2多肽的能力，或者抑制T-細胞活化的能力，或者抑制T-細胞增殖的能力，或者誘導T-細胞裂解的能力，或者預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的能力。
在特定實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述CD2含有一段核苷酸序列，該序列與編碼保藏在ATCC中保藏號為HB 11423的細胞系產生的單克隆抗體的核苷酸序列在嚴格條件下雜交，例如，在6×氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)中約45℃與濾器-結合的DNA雜交，然后在0.2×SSC/0.1％SDS中約50-65℃洗滌一次或多次，在高度嚴格條件下雜交，例如，在6×SSC中約45℃與濾器-結合的核酸雜交，然后在0.1×SSC/0.2％SDS中約68℃下洗滌一次或多次，或者在本領域技術人員公知的其他嚴格雜交條件下雜交(見，例如，Ausubel，F.M.等人，編者，1989，Current Protocols in Molecular Biology，卷I，Green Publishing Associates，Inc.and John Wiley & Sons，Inc.，New York 6.3.1-6.3.6頁和2.10.3)。
在特定實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有VH結構域或VL結構域的氨基酸序列，所述VH或VL的氨基酸序列由在嚴格條件下與編碼LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507的核苷酸序列雜交的核苷酸序列編碼，嚴格條件，例如，在6×氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)中約45℃與濾器-結合的DNA雜交，然后在0.2×SSC/0.1％SDS中約50-65℃洗滌一次或多次，在高度嚴格條件下雜交，例如，在6×SSC中約45℃與濾器-結合的核酸雜交，然后在0.1×SSC/0.2％SDS中約68℃下洗滌一次或多次，或者在本領域技術人員公知的其他嚴格雜交條件下雜交(見，例如，Ausubel，F.M.等人，編者，1989，Current Protocols in Molecular Biology，卷I，GreenPublishing Associates，Inc.and John Wiley & Sons，Inc.，NewYork 6.3.1-6.3.6頁和2.10.3)。
在特定實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有VH CDR或VL CDR的氨基酸序列，所述氨基酸序列由在嚴格條件下與編碼LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507的核苷酸序列雜交的核苷酸序列編碼，嚴格條件，例如，在6×氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)中約45℃與濾器-結合的DNA雜交，然后在0.2×SSC/0.1％SDS中約50-65℃洗滌一次或多次，在高度嚴格條件下雜交，例如，在6×SSC中約45℃與濾器-結合的核酸雜交，然后在0.1×SSC/0.2％SDS中約68℃下洗滌一次或多次，或者在本領域技術人員公知的其他嚴格雜交條件下雜交(見，例如，Ausubel，F.M.等人，編者，1989，Current Protocolsin Molecular Biology，卷I，Green Publishing Associates，Inc.and John Wiley & Sons，Inc.，New York 6.3.1-6.3.6頁和2.10.3)。
在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有被核苷酸序列編碼的VH CDR的氨基酸序列或者VL CDR的氨基酸序列，所述核苷酸序列與編碼LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507的核苷酸序列在嚴格條件下雜交。在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有被核苷酸序列編碼的VH CDR的氨基酸序列或者VL CDR的氨基酸序列，所述核苷酸序列與編碼表2(如前)中所列的VH CDRs或VL CDRs的任何一個的核苷酸序列在嚴格條件下雜交。在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有被核苷酸序列編碼的VH CDR的氨基酸序列或者VLCDR的氨基酸序列，所述核苷酸序列與編碼保藏在ATCC中保藏號為HB 11423的細胞系產生的單克隆抗體的VH CDRs或VL CDRs的任何一個的核苷酸序列在嚴格條件下雜交。
在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有被核苷酸序列編碼的VH CDR的氨基酸序列和VL CDR的氨基酸序列，該核苷酸序列與編碼LO-CD2a/BTI-322或MEDI-507的核苷酸序列在嚴格條件下雜交。在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有被核苷酸序列編碼的VH CDR的氨基酸序列和VL CDR的氨基酸序列，所述核苷酸序列與編碼表2(如前)中所列的VH CDRs和VL CDRs的任何一個的核苷酸序列在嚴格條件下雜交。在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有被核苷酸序列編碼的VH CDR的氨基酸序列或和VL CDR的氨基酸序列，所述核苷酸序列與編碼保藏在ATCC中保藏號為HB11423的細胞系產生的單克隆抗體的核苷酸序列在嚴格條件下雜交。
在特定實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有氨基酸序列，該氨基酸序列與保藏在ATCC中保藏號為HB11423的細胞系產生的單克隆抗體的氨基酸序列具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有氨基酸序列，該氨基酸序列與MEDI-507的氨基酸序列具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有一氨基酸序列，該氨基酸序列與LO-CD2a/BTI-322的氨基酸序列具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。
在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有VH結構域的氨基酸序列，該VH結構域與MEDI-507的VH結構域至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有VH結構域的氨基酸序列，該VH結構域與LO-CD2a/BTI-322的VH結構域具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有VH結構域的氨基酸序列，該VH結構域與保藏在ATCC中保藏號為HB 11423的細胞系產生的單克隆抗體的VH結構域具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。
在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有一個或多個VH CDRs的氨基酸序列，該一個或多個VH CDRs與LO-CD2a/BTI-322的VH CDRs的任一個具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有一個或多個VH CDRs的氨基酸序列，該一個或多個VH CDRs與MEDI-507的VH CDRs的任一個具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有一個或多個VH CDRs的氨基酸序列，該一個或多個VH CDRs與表2(如前)中所列的VH CDRs的任一個具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有一個或多個VHCDRs的氨基酸序列，該一個或多個VH CDRs與保藏在ATCC中保藏號為HB 11423的細胞系產生的單克隆抗體的VH CDRs的任一個具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。
在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有VL結構域的氨基酸序列，該VL結構域與MEDI-507的VL結構域具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有VL結構域的氨基酸序列，該VL結構域與LO-CD2a/BTI-322的VL結構域具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有VL結構域的氨基酸序列，該VL結構域與保藏在ATCC中保藏號為HB 11423的細胞系產生的單克隆抗體的VL結構域具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。
在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有一個或多個VL CDRs的氨基酸序列，該一個或多個VL CDRs與MEDI-507的VL CDRs的任一個具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有一個或多個VL CDRs的氨基酸序列，該一個或多個VL CDRs與LO-CD2a/BTI-322的VL CDRs的任一個具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有一個或多個VL CDRs的氨基酸序列，該一個或多個VL CDRs與表2(如前)中所列的VL CDRs的任一個具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用免疫特異地結合CD2多肽的抗體，所述抗體含有一個或多個VLCDRs的氨基酸序列，該一個或多個VL CDRs與保藏在ATCC中保藏號為HB 11423的細胞系產生的單克隆抗體的VL CDRs的任一個具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。
本發明包括與LO-CD2a/BTI-322或其抗原結合片段競爭結合本發明的CD2多肽的抗體的用途，用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在優選的實施方案中，本發明包括與MEDI-507或其抗原結合片段競爭結合本發明的CD2多肽的抗體的用途，用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。
本發明包括MEDI-507或其抗原結合片段的衍生物在本發明的方法和組合物中的用途，其中該衍生物被修飾(即，通過任一類型的分子共價附著到該抗體)。例如，但是不作為限制，MEDI-507或其抗原結合片段的衍生物包括例如，通過糖基化、乙酰化、PEG化、磷酸化、酰胺化、通過公知的保護/封閉基團衍生、蛋白水解切割、連接到細胞配體或其他蛋白質等方法修飾的抗體。可通過公知技術實施各種化學修飾的任一種，這些技術包括，但不限于，特異化學切割、乙酰化、甲酰化、衣霉素的代謝合成，等。此外，衍生物可以含有一種或多種非典型氨基酸。
本發明包括免疫特異地結合本發明方法和組合物中的CD2多肽的抗體的用途，所述抗體含有在框架區具有突變(例如，一個或多個氨基酸置換)的MEDI-507的氨基酸序列。在一些實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的抗體含有MEDI-507的氨基酸序列，其中在MEDI-507的VH和/或VL結構域的框架區中有一個或多個氨基酸殘基置換。
本發明還包括免疫特異地結合本發明方法和組合物中的CD2多肽的抗體的用途，所述抗體含有在可變區和框架區具有突變(例如，一個或多個氨基酸置換)的MEDI-507的氨基酸序列。
5.2CD2拮抗劑在本發明的方法和組合物中除了使用MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段，還可以按照本發明使用其他CD2拮抗劑。CD2拮抗劑包括，但不限于，似蛋白質(proteinaceous)分子(例如，蛋白質、多肽(例如，可溶性CD2多肽和可溶性LFA-3多肽)、肽、融合蛋白(例如，綴合到治療性部分的可溶的CD2多肽和綴合到治療性部分的可溶的LFA-3多肽)，抗體(例如抗-CD2抗體)，和抗體片段)、核酸分子(例如，CD2反義核酸分子、編碼似蛋白質分子的三螺旋或核酸分子)、有機分子、無機分子、小有機分子、藥物，和小無機分子，它們阻斷、抑制、減小或中和免疫細胞，優選T-細胞或NK細胞表達的CD2多肽的功能、活性和/或表達。CD2拮抗劑的額外的實例和特征在國際申請號PCT/US02/22273和PCT/US02/06761的4.1小節，和美國專利申請號10/091,268和10/091,313(2002年3月3日提交)中公開，這些文獻的每一個的內容都在此處完整并入作為參考。在一些實施方案中，按照本發明方法使用的CD2拮抗劑不是小有機分子、藥物或反義分子。可以用本領域中公知的此處描述的(例如5.8小節)技術鑒定CD2拮抗劑。
在一些實施方案中，CD2拮抗劑降低患有T-細胞惡性腫瘤的受試者中CD2多肽的功能、活性和/或表達。在其他實施方案中，CD2拮抗劑直接結合CD2多肽并直接或間接調節T-淋巴細胞的活性和/或功能。在具體實施方案中，CD2拮抗劑抑制或減小患有T-細胞惡性的受試者中T-細胞活化或增殖，如通過此處描述或者本領域中技術人員熟知的標準體內和/或體外測定法確定的。在特定實施方案中，CD2拮抗劑介導患有T-細胞惡性的受試者中淋巴細胞，尤其外周血T細胞的耗盡，如通過此處描述或者本領域中技術人員熟知的標準體內和/或體外測定法確定的。在另一實施方案中，CD2拮抗劑通過利用依賴抗體的細胞毒性(ADCC)直接或間接調節T-淋巴細胞的活性和/或功能。
在一些實施方案中，在此處描述的(例如，競爭性ELISA)或者本領域中技術人員熟知的體內和/或體外測定法中，CD2拮抗劑抑制或降低CD2多肽和LFA-3之間的相互作用。在其他實施方案中，CD2拮抗劑不抑制或干擾CD2多肽和LFA-3之間的相互作用。在特定實施方案中，如通過本領域中公知的或此處描述的競爭性測定法(例如，競爭ELISA)所評估的，CD2拮抗劑將CD2多肽和LFA-3之間的相互作用減少至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或至少99％。在另一特定實施方案中，如通過本領域中公知的或此處描述的競爭性測定法(例如，競爭ELISA)所評估的，CD2拮抗劑將CD2多肽和LFA-3之間的相互作用減少30％以下、25％以下、15％以下、10％以下、或5％以下。
在一些實施方案中，如通過此處描述的或者本領域中技術人員熟知的標準體內或體外測定法所確定的，CD2拮抗劑調節細胞因子表達和/或釋放。在特定實施方案中，CD2拮抗劑調節施用CD2拮抗劑的受試者的血清中細胞因子如，例如，γ干擾素(“IFN-γ”)、白介素-2(“IL-2”)、白介素-4(“IL-4”)、白介素-6(“IL-6”)、白介素-9(“IL-9”)、白介素-12(“IL-12”)、白介素-15(“IL-15”)的濃度。可通過本領域技術人員熟知的任一種技術如免疫測定法，包括，例如ELISA來測量細胞因子的血清濃度。
在優選的實施方案中，用作CD2拮抗劑的蛋白質、多肽或肽(包括抗體和融合蛋白)來自與該蛋白質、多肽或肽的受體相同的物種以便減小針對這些蛋白質、多肽或肽的免疫應答的可能性。在另一優選的實施方案中，當受試者是人時，用作CD2拮抗劑的蛋白質、多肽或肽是人的或者被人源化。
按照本發明，編碼用作CD2拮抗劑的蛋白質、多肽或肽的核酸分子可被施用于患有癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤的受試者。此外，按照本發明，編碼用作CD2拮抗劑的蛋白質、多肽或肽的衍生物、類似物、片段或變體的核酸分子可被施用于患有癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤的受試者。優選地，這些衍生物、類似物、變體和片段保持全長野生型蛋白質、多肽或肽的CD2拮抗劑活性。
5.2.1CD2結合分子本發明包括被稱為CD2結合分子的CD2拮抗劑在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途。如此處所用的術語“CD2結合分子”和類似術語指一種生物活性分子，其免疫特異地結合CD2多肽并且直接或間接調節淋巴細胞，尤其外周血T一細胞的活性和/或功能。在一個實施方案中，CD2結合分子直接或間接介導淋巴細胞，尤其外周血T-細胞的耗盡。在特定實施方案中，CD2結合分子結合CD2多肽并優先介導記憶T細胞(例如，CD45RO+T細胞)和非原初(naive)T細胞的耗盡。可通過例如，本領域技術人員熟知的免疫測定法或其他技術鑒定CD2結合分子。CD2結合分子包括，但不限于，肽、多肽、融合蛋白、小分子、模擬劑、合成藥物、有機分子、無機分子，和抗體。CD2拮抗劑的額外的實例和特征在國際申請號PCT/US02/22273和PCT/US02/06761的4.2小節，和美國專利申請號10/091,268和10/091,313(2002年3月3日提交)中公開，這些文獻的每一個的內容都在此處完整并入作為參考。
在一個實施方案中，CD2結合分子是免疫特異地結合CD2多肽的抗體或其抗原結合片段。在一些實施方案中，CD2結合分子不是MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段或LO-CD2a/BTI-322。在優選的實施方案中，CD2結合分子是免疫特異地結合被免疫細胞如T-細胞或NK細胞表達的CD2多肽的抗體或其抗原結合片段。在另一實施方案中，CD2結合分子是免疫特異地結合的CD2多肽的多肽、肽、模擬劑、無機分子或有機分子。在另一實施方案中，CD2結合分子是免疫特異地結合CD2多肽的LFA-3肽、多肽、其衍生物或類似物。在另一實施方案中，CD2結合分子是免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白。在優選的實施方案中，CD2結合分子是免疫特異地結合被免疫細胞如T-細胞或NK細胞表達的CD2多肽的融合蛋白。在一些實施方案中，CD2結合分子不是小有機分子或藥物。
在特定實施方案中，CD2結合分子免疫特異地結合人和/或黑猩猩CD2多肽但是不結合狒狒CD2多肽。在另一實施方案中，CD2結合分子免疫特異地結合含有人CD2的氨基酸殘基18、55，和/或59的表位(圖1)。在另一實施方案中，CD2結合分子免疫特異地結合含有人CD2的氨基酸殘基18和55的表位(圖1)。在另一實施方案中，CD2結合分子免疫特異地結合含有人CD2的氨基酸殘基18和59的表位(圖1)。在另一實施方案中，CD2結合分子免疫特異地結合含有人CD2的氨基酸殘基55和59的表位(圖1)。在再一個實施方案中，CD2結合分子免疫特異地結合含有人或黑猩猩CD2的氨基酸序列中一個或多個12個氨基酸殘基的表位，所述氨基酸殘基與狒狒CD2的氨基酸序列中發現的氨基酸殘基不同。按照這些實施方案，CD2結合分子優選不是LOCD2a/BTI-322或MEDI-507。
在一些實施方案中，在此處描述的(例如，ELISA)或本領域中技術人員公知的體內和/或體外測定法中，CD2結合分子抑制或減小CD2多肽和LFA-3之間的相互作用。在其他實施方案中，CD2結合分子不抑制或干擾CD2多肽和LFA-3之間的相互作用。
5.2.1.1免疫特異地結合CD2多肽的非MEDI-507的抗體應該認識到免疫特異地結合CD2多肽的抗體是本領域中公知的。免疫特異地結合CD2多肽的非上述MEDI-507的公知抗體的實例包括，但不限于，細胞系UMCD2產生的鼠單克隆抗體(Ancell ImmunologyResearch Products，Bayport，MN；Kozarsky等人，1993，CellImmunol.150235-246)、細胞系RPA2.10產生的鼠單克隆抗體((Zymed Laboratories，Inc.，San Francisco，CA；Rabinowitz等人，Clin.Immunol.&Immunopathol.76(2)148-154)、大鼠單克隆抗體LO-CD2b(國際公開號WO 00/78814A2)、和大鼠單克隆抗體LO-CD2a/BTI-322(Latinne等人，1996，Int.Immunol.8(7)1113-1119)。
免疫特異地結合CD2多肽的抗體包括，但不限于，單克隆抗體、多特異性抗體、人抗體、人源化抗體、camelised抗體、單結構域抗體、嵌合抗體、單鏈Fvs(scFv)、單鏈抗體、Fab片段、F(ab’)片段、二硫鍵連接的Fvs(sdFv)，和抗-獨特型(抗-Id)抗體(包括，例如，針對本發明抗體的抗Id-抗體)、和上面任一種的表位-結合片段。具體地，免疫特異地結合CD2多肽的抗體包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特異地結合CD2多肽的抗原結合位點的分子。本發明的免疫球蛋白分子可以是免疫球蛋白分子的任一型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、類別(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亞類。在特定實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽并介導T細胞耗盡的抗體含有Fc結構域或其片段(例如，Fc結構域的CH2、CH3、和/或鉸鏈區)。在優選的實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽并介導T細胞耗盡的抗體含有Fc結構域或其片段，該Fc結構域或其片段結合免疫細胞表達的FcR，優選FcγRIII。
在一些實施方案中，在此處描述的或本領域中技術人員公知的體內和/或體外測定法(例如，ELISA)中，免疫特異地結合CD2多肽的抗體抑制或減小CD2多肽和LFA-3之間的相互作用。在其他實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的抗體不抑制或干擾CD2多肽和LFA-3之間的相互作用。
在特定實施方案中，免疫特異地結合人和/或黑猩猩CD2多肽的抗體不結合狒狒CD2多肽。在另一實施方案中，該抗體免疫特異地結合含有人CD2的氨基酸殘基18、55，和/或59的表位(圖1)。在另一實施方案中，該抗體免疫特異地結合含有氨基酸殘基18和55的表位(圖1)。在另一實施方案中，該抗體免疫特異地結合含有氨基酸殘基18和59的表位(圖1)。在另一實施方案中，該抗體免疫特異地結合含有氨基酸殘基55和59的表位(圖1)。在再一個實施方案中，該抗體免疫特異地結合含有人CD2或黑猩猩CD2的氨基酸序列中一個或多個12個氨基酸殘基的表位，所述氨基酸殘基與狒狒CD2的氨基酸序列中發現的氨基酸殘基不同。按照這些實施方案，該抗體優選不是LOCD2a/BTI-322或MEDI-507。
免疫特異地結合CD2多肽的抗體可以來自任何動物來源，包括鳥類和哺乳動物(例如，人、鼠、驢、綿羊、兔、山羊、豚鼠、駱駝、馬，或雞)。優選地，本發明的抗體是人或人源化單克隆抗體。免疫特異地結合CD2多肽的人抗體包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗體和從人免疫球蛋白文庫或者從表達來自人基因的抗體的小鼠分離的抗體。
免疫特異地結合CD2多肽的抗體可以是單特異的、雙特異的、三特異的、或具有更大的多特異性。多特異抗體可以對CD2多肽的不同表位特異或者可以對CD2多肽以及異源表位，如異源多肽或固體支持體材料都特異。見，例如，PCR公開WO 93/17715、WO 92/08802、WO91/00360、和WO 92/05793；Tutt，等人，J.Immunol.14760-69(1991)；美國專利號4,474,893、4,714,681、4,925,648、5,573,920和5,601,819；和Kostelny等人，J.Immunol.1481547-1553(1992)。
本發明包括對CD2多肽具有高結合親和性的抗體在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途。在特定實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的抗體的締合速率常數或kon速率(抗體(Ab)+抗原(Ag)kon→Ab-Ag)為至少105M-1s-1、至少5×105M-1s-1、至少106M-1s-1、至少5×106M-1s-1、至少107M-1s-1、至少5×107M-1s-1、或至少108M-1s-1。在優選的實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的抗體的kon速率為至少2×105M-1s-1、至少5×105M-1s-1、至少106M-1s-1、至少5×106M-1s-1、至少107M-1s-1、至少5×107M-1s-1、或至少108M-1s-1。
在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的抗體的koff速率(抗體(Ab)+抗原(Ag)koff→Ab-Ag)為小于10-1s-1、小于5×10-1s-1、小于10-2s-1、小于5×10-2s-1、小于10-3s-1、小于5×10-3s-1、小于10-4s-1、小于5×10-4s-1、小于10-5s-1、小于5×10-5s-1、小于10-6s-1、小于5×10-6s-1、小于10-7s-1、小于5×10-7s-1、小于10-8s-1、小于5×10-8s-1、小于10-9s-1、小于5×10-9s-1、或小于10-10s-1。在優選的實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的抗體的koff速率為小于5×10-4s-1、小于10-5s-1、小于5×10-5s-1、小于10-6s-1、小于5×10-6s-1、小于10-7s-1、小于5×10-7s-1、小于10-8s-1、小于5×10-8s-1、小于10-9s-1、小于5×10-9s-1、或小于10-10s-1。
在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的抗體的親和常數或Ka(kon/koff)為至少102M-1、至少5×102M-1、至少103M-1、至少5×103M-1、至少104M-1、至少5×104M-1、至少105M-1、至少5×105M-1、至少106M-1、至少5×106M-1、至少107M-1、至少5×107M-1、至少108M-1、至少5×108M-1、至少109M-1、至少5×109M-1、至少1010M-1、至少5×1010M-1、至少1011M-1、至少5×1011M-1、至少1012M-1、至少5×1012M-1、至少1013M-1、至少5×1013M-1、至少1014M-1、至少5×1014M-1、至少1015M-1、或至少5×1015M-1。在再一個實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的抗體的解離常數或Kd(koff/kon)為小于10-2M、小于5×10-2M、小于10-3M、小于5×10-3M、小于10-4M、小于5×10-4M、小于10-5M、小于5×10-5M、小于10-6M、小于5×10-6M、小于10-7M、小于5×10-7M、小于10-8M、小于5×10-8M、小于10-9M、小于5×10-9M、小于10-10M、小于5×10-10M、小于10-11M、小于5×10-11M、小于10-12M、小于5×10-12M、小于10-13M、小于5×10-13M、小于10-14M、小于5×10-14M、小于10-15M、或小于5×10-15M。
在特定實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的抗體是LO-CD2a/BTI-322或其抗原結合片段(例如，LO-CD2a/BTI-322的一個或多個互補決定區(CDRs))。LO-CD2a/BTI-322具有在例如美國專利號5,730,979、5,817,311和5,951,983；以及美國申請序列號09/056,072和09/462,140(每一篇都在此處完整并入作為參考)中公開的氨基酸序列，或者1993年6月28日保藏在美國典型培養物保藏中心(ATCC)10801 University Boulevard，Manassas，Virginia20110-2209保藏號為HB 11423的細胞系產生的單克隆抗體的氨基酸序列。在備選實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的抗體不是LO-CD2a/BTI-322或者LO-CD2a/BTI-322的抗原結合片段。
在另一特定實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的抗體是LO-CD2b或其抗原結合片段(例如，LO-CD2b的一個或多個CDRs)。LO-CD2b具有1999年6月22日保藏在ATCC，10801 University Boulevard，Manassas，Virginia 20110-2209保藏號為PTA-802的細胞系產生的抗體的氨基酸序列，或者在，例如，Dehoux等人，2000，Transplantation 69(12)2622-2633和國際專利公開號WO00/78814(每一篇都在此處完整并入作為參考)中公開的氨基酸序列。在備選實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的抗體不是LO-CD2b或者LO-CD2b的抗原結合片段。
5.2.1.2免疫特異地結合CD2多肽的LFA-3多肽本發明包括免疫特異地結合CD2多肽的LFA-3肽、多肽、其衍生物和類似物作為CD2拮抗劑在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途。優選地，免疫特異地結合CD2多肽的可溶性LFA-3多肽含有至少5個、優選至少10個、至少20個、至少30個、至少40個、至少50個、至少60個、至少70個、至少80個、至少80個、或至少100個鄰接的LFA-3的氨基酸殘基，用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。可以從任一物種得到免疫特異地結合CD2多肽的可溶性LFA-3肽、多肽、其衍生物、和類似物。LFA-3的核苷酸和/或氨基酸序列可以在文獻或公共數據庫中發現，或者可以用本領域技術人員公知的克隆和測序方法確定該核苷酸和/或氨基酸序列。例如，可以在GenBank數據庫中發現人LFA-3的核苷酸和氨基酸序列(見，例如，記錄號E12817和CAA29622)。
在特定實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的可溶性LFA-3多肽由天然發生的LFA-3的胞外結構域或者國際申請號PCT/US02/22273和PCT/US02/06761，和美國專利申請序號10/091,268和10/091,313中SEQ ID NO7的氨基酸殘基1到187組成。在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的可溶性LFA-3多肽含有LFA-3的胞外結構域的片段(例如，國際申請號PCT/US02/22273和PCT/US02/06761，和美國專利申請序號10/091,268和10/091,313中SEQ ID NO7的氨基酸殘基1到92、氨基酸殘基1到85、氨基酸殘基1到80、氨基酸殘基1到75、氨基酸殘基1到70、氨基酸殘基1到65、氨基酸殘基1到60)。
5.2.1.3免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白本發明包括免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白作為CD2拮抗劑在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途。在一個實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有融合到免疫球蛋白分子的Fc結構域或者其片段的生物活性分子。在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有融合到免疫球蛋白分子的Fc結構域的CH2和/或CH3區的生物活性分子。在再一個實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有融合到免疫球蛋白分子的Fc結構域的CH2、CH3、和鉸鏈區的生物活性分子。按照這些實施方案，該生物活性分子免疫特異地結合CD2多肽。免疫特異地結合CD2多肽的生物活性分子包括，但不限于，肽、多肽、小分子、模擬劑、合成藥物、無機分子，和有機分子。優選地，免疫特異地結合CD2多肽的生物活性分子是一種多肽，其含有至少5個、優選至少10個、至少20個、至少30個、至少40個、至少50個、至少60個、至少70個、至少80個、至少80個、或至少100個鄰接的氨基酸殘基，并且與免疫球蛋白分子的Fc結構域或者其片段的氨基酸序列異源。
在特定實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有LFA-3或者其片段，LFA-3或者其片段免疫特異地結合融合到免疫球蛋白分子的Fc結構域或者其片段的CD2多肽。在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有LFA-3或者其片段，LFA-3或者其片段免疫特異地結合融合到免疫球蛋白分子的Fc結構域的CH2和/或CH 3區的CD2多肽。在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有LFA-3或者其片段，LFA-3或者其片段免疫特異地結合融合到免疫球蛋白分子的Fc結構域的CH2、CH3和鉸鏈區的CD2多肽。
在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有LFA-3的胞外結構域(例如，國際申請號PCT/US02/22273和PCT/US02/06761，和美國專利申請序號10/091,268和10/091,313中SEQ ID NO7的氨基酸殘基1到187)，該LFA-3的胞外結構域融合到免疫球蛋白分子的Fc結構域或者其片段。在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有LFA-3的胞外結構域(例如，國際申請號PCT/US02/22273和PCT/US02/06761，和美國專利申請序號10/091,268和10/091,313中SEQ ID NO7的氨基酸殘基1到187)，該LFA-3的胞外結構域融合到免疫球蛋白分子的Fc結構域的CH2和/或CH3區。在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有LFA-3的胞外結構域(例如，國際申請號PCT/US02/22273和PCT/US02/06761，和美國專利申請序號10/091,268和10/091,313中SEQ ID NO7的氨基酸殘基1到187)，該LFA-3的胞外結構域融合到免疫球蛋白分子的Fc結構域的CH2、CH3和鉸鏈區。
在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有LFA-3的胞外結構域的片段(例如，國際申請號PCT/US02/22273和PCT/US02/06761，和美國專利申請序號10/091,268和10/091,313中SEQ ID NO7的氨基酸殘基1到92、氨基酸殘基1到85、氨基酸殘基1到80、氨基酸殘基1到75、氨基酸殘基1到70、氨基酸殘基1到65、氨基酸殘基1到60)，該片段融合到免疫球蛋白分子的Fc結構域或者其片段。在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有LFA-3的胞外結構域的片段(例如，國際申請號PCT/US02/22273和PCT/US02/06761，和美國專利申請序號10/091,268和10/091,313中SEQ ID NO7的氨基酸殘基1到92、氨基酸殘基1到85、氨基酸殘基1到80、氨基酸殘基1到75、氨基酸殘基1到70、氨基酸殘基1到65、氨基酸殘基1到60)，該片段融合到免疫球蛋白分子的Fc結構域的CH2和/或CH3區。在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有LFA-3的胞外結構域的片段(例如，國際申請號PCT/US02/22273和PCT/US02/06761，和美國專利申請序號10/091,268和10/091,313中SEQ ID NO7的氨基酸殘基1到92、氨基酸殘基1到85、氨基酸殘基1到80、氨基酸殘基1到75、氨基酸殘基1到70、氨基酸殘基1到65、氨基酸殘基1到60)，該片段融合到免疫球蛋白分子的Fc結構域的CH2、CH3和鉸鏈區。
在特定實施方案中，CD2結合分子是LFA-3TIP(Biogen，Inc.，Cambridge，MA)。在備選實施方案中，CD2結合分子不是LFA-3TIP。
在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有一多肽，該多肽的氨基酸序列與融合到免疫球蛋白分子的Fc結構域或者其片段的LFA-3或其片段的氨基酸序列具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有一多肽，該多肽的氨基酸序列與融合到免疫球蛋白分子的Fc結構域的CH2和/或CH3區的LFA-3或其片段的氨基酸序列具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有一多肽，該多肽的氨基酸序列與融合到免疫球蛋白分子的Fc結構域的CH2、CH3和鉸鏈區的LFA-3或其片段的氨基酸序列具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。
在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有一多肽，該多肽的氨基酸序列與融合到免疫球蛋白分子的Fc結構域或者其片段的LFA-3的胞外結構域的氨基酸序列(例如，國際申請號PCT/US02/22273和PCT/US02/06761，和美國專利申請序號10/091,268和10/091,313中SEQ ID NO7的氨基酸殘基1到187)具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有一多肽，該多肽的氨基酸序列與融合到免疫球蛋白分子的Fc結構域的CH2和/或CH3區的LFA-3的胞外結構域的氨基酸序列(例如，國際申請號PCT/US02/22273和PCT/US02/06761，和美國專利申請序號10/091,268和10/091,313中SEQ ID NO7的氨基酸殘基1到187)具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有一多肽，該多肽的氨基酸序列與融合到免疫球蛋白分子的Fc結構域的CH2、CH3和鉸鏈區的LFA-3的胞外結構域的氨基酸序列(例如，國際申請號PCT/US02/22273和PCT/US02/06761，和美國專利申請序號10/091,268和10/091,313中SEQ ID NO7的氨基酸殘基1到187)具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。
在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有一多肽，該多肽的氨基酸序列與融合到免疫球蛋白分子的Fc結構域或者其片段的LFA-3的胞外結構域的片段的氨基酸序列(例如，國際申請號PCT/US02/22273和PCT/US02/06761，和美國專利申請序號10/091,268和10/091,313中SEQ ID NO7的氨基酸殘基1到92、氨基酸殘基1到85、氨基酸殘基1到80、氨基酸殘基1到75、氨基酸殘基1到70、氨基酸殘基1到65、氨基酸殘基1到60)具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。
在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有一多肽，該多肽的氨基酸序列與融合到免疫球蛋白分子的Fc結構域的CH2和/或CH3區的LFA-3的胞外結構域的片段的氨基酸序列(例如，國際申請號PCT/US02/22273和PCT/US02/06761，和美國專利申請序號10/091,268和10/091,313中SEQ ID NO7的氨基酸殘基1到92、氨基酸殘基1到85、氨基酸殘基1到80、氨基酸殘基1到75、氨基酸殘基1到70、氨基酸殘基1到65、氨基酸殘基1到60)具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。
在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有一多肽，該多肽的氨基酸序列與融合到免疫球蛋白分子的Fc結構域的CH2、CH3和鉸鏈區的LFA-3的胞外結構域的片段的氨基酸序列(例如，國際申請號PCT/US02/22273和PCT/US02/06761，和美國專利申請序號10/091,268和10/091,313中SEQ ID NO7的氨基酸殘基1到92、氨基酸殘基1到85、氨基酸殘基1到80、氨基酸殘基1到75、氨基酸殘基1到70、氨基酸殘基1到65、氨基酸殘基1到60)具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。
在另一實施方案中，免疫特異地結合CD2多肽的融合蛋白含有融合到多肽的免疫球蛋白分子的Fc結構域或者其片段，所述多肽由與編碼LFA-3或其片段的核苷酸序列雜交的核酸分子編碼。
此外，可將抗體綴合到白蛋白使得抗體或抗體片段在體內更穩定或者在體內具有更長的半壽期。該技術是本領域中熟知的，見，例如，國際公開號WO 93/15199、WO 93/15200、和WO 01/77137；和歐洲專利號EP 413,622，所有這些文獻在此處被完整并入作為參考。
5.3半壽期增加的CD2拮抗劑本發明包括體內半壽期增加的似蛋白CD2拮抗劑(優選地，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途。具體地，本發明提供了似蛋白CD2拮抗劑(優選地，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)，其在動物，優選哺乳動物，最優選人體內的半壽期大于3天、大于7天、大于10天、優選大于15天、大于25天、大于30天、大于35天、大于40天、大于45天、大于2個月、大于3個月、大于4個月、或大于5個月。
為了延長似蛋白CD2拮抗劑(例如，肽、多肽、蛋白質、單克隆抗體、單鏈抗體和Fab片段)在體內的血清循環，可將惰性聚合物分子如高分子量聚乙二醇(PEG)附著到有或沒有多功能連接體的抗體，這可通過將PEG位點特異地綴合到該多肽的N-或C-末端或者通過賴氨酸殘基上的ε-氨基酸綴合到多肽來實現。將使用線性或分枝的聚合物衍生物，其導致生物活性損失最小。可通過SDS-PAGE和質譜密切監視綴合程度以確保PEG分子正確綴合到抗體。可通過大小排阻層析或離子交換層析將未反應的PEG與抗體-PEG綴合物分離。用本領域技術人員熟知的方法，例如，通過此處描述的免疫測定法可以例如試驗PEG-衍生的抗體的結合活性以及體內效能。
也可以將一種或多種氨基酸修飾(例如，置換、插入或缺失)導入IgG恒定區，或者其FcRn結合片段(優選Fc或鉸鏈-Fc結構域片段)產生體內半壽期增加的抗體(優選地，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)。見，例如，國際公開號WO 98/23289；國際公開號WO97/34631；和美國專利號6,277,375，所有這些文獻在此處被完整并入作為參考。
5.4CD2拮抗劑綴合物本發明提供了綴合治療劑或藥物部分的CD2拮抗劑(優選地，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)，該治療劑或藥物部分修飾了給定生物學應答，該CD2拮抗劑用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在特定實施方案中，不同于MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段的CD2拮抗劑沒有綴合到治療劑或藥物部分。在備選實施方案中，不同于MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段的CD2拮抗劑綴合到治療劑或藥物部分。
在一些實施方案中，綴合到治療劑或藥物部分的CD2拮抗劑如，例如，抗-CD2抗體(優選地，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在其他實施方案中，未綴合到治療劑或藥物部分的CD2拮抗劑如，例如，抗-CD2抗體(優選地，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在其他實施方案中，綴合到非毒素(例如，細胞毒素或免疫毒素)、細胞毒性劑或放射性元素的治療劑或藥物部分的CD2拮抗劑如，例如，抗-CD2抗體(優選地，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。
治療性部分包括，但不限于，抗代謝劑(例如，氨甲蝶呤、6-巰基嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶decarbazine)；烷基化劑(例如，氮芥、thioepa苯丁酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、亞硝脲氮芥(BCNU)和羅氮芥(CCNU)、cyclothosphamide、白消安、二溴甘露醇、鏈脲霉素、絲裂霉素C和順-雙氯雙氨絡鉑(II)(DDP)，和順鉑)；安慈那環素(例如，柔紅霉素(以前為道諾霉素)和阿霉素)；抗生素(例如，更生霉素(以前為放線菌素)、博來霉素、光神霉素、和氨茴霉素(AMC))；Auristatin分子(例如，Auristatin PHE、薯司他丁-1，和solastatin 10；見Woyke等人，Antimicrob.Agents Chemother.463802-8(2002)，Woyke等人，Antimicrob.Agents Chemother.453580-4(2001)，Mohammad等人，Anticancer Drugs 12735-40(2001)，Wall等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.26676-80(1999)，Mohammad等人，Int.J.Oncol.15367-72(1999)，所有都在此處并入作為參考)；激素(例如，糖皮質激素、孕酮、雄激素，和雌激素)、DNA-修復酶抑制劑(例如，表鬼臼毒吡喃葡糖苷或拓撲替康)，激酶抑制劑(例如，化合物ST1571、imatinib甲磺酸鹽(Kantarjian等人，Clin Cancer Res.8(7)2167-76(2002))；細胞毒性劑(例如，紫杉醇、松胞菌素B、短桿菌肽D、溴乙啡啶、依米丁、絲裂霉素、依托泊苷、tenoposide、長春花新堿、長春花堿、秋水仙素、阿霉素、柔紅霉素、二羥基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光神霉素、放線菌素D、1-去氫睪酮、glucorticoids、普魯卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛爾，和嘌呤霉素和它們的類似物或同系物，和在美國專利號6,245,759、6,399,633、6,383,790、6,335,156、6,271,242、6,242,196、6,218,410、6,218,372、6,057,300、6,034,053、5,985,877、5,958,769、5,925,376、5,922,844、5,911,995、5,872,223、5,863,904、5,840,745、5,728,868、5,648,239、5,587,459中公開的那些化合物)；法尼基轉移酶抑制劑(例如，R115777、BMS-214662和在例如，美國專利號6,458,935、6,451,812、6,440,974、6,436,960、6,432,959、6,420,387、6,414,145、6,410,541、6,410,539、6,403,581、6,399,615、6,387,905、6,372,747、6,369,034、6,362,188、6,342,765、6,342,487、6,300,501、6,268,363、6,265,422、6,248,756、6,239,140、6,232,338、6,228,865、6,228,856、6,225,322、6,218,406、6,211,193、6,187,786、6,169,096、6,159,984、6,143,766、6,133,303、6,127,366、6,124,465、6,124,295、6,103,723、6,093,737、6,090,948、6,080,870、6,077,853、6,071,935、6,066,738、6,063,930、6,054,466、6,051,582、6,051,574、和6,040,305中公開的那些化合物)；拓撲異構酶抑制劑(例如，喜樹堿、依立替康、SN-38、拓撲替康、9-氨基喜樹堿、GG-211(GI147211)、DX-8951f、IST-622、rubitecan、吡唑并吖啶、XR-5000、saintopin、UCE6、UCE1022、TAN-1518A、TAN-1518B、KT6006、KT6528、ED-110、NB-506、ED-110、NB-506、和瑞必克霉素)；bulgarein；Hoescht染料33342和Hoechst染料33258、兩面針堿、法格羅寧、表小檗堿、甲氧檗因、β-lapachone、BC-4-1、二膦酸鹽(例如，阿侖特羅、cimadronte、氯屈膦酸二鈉、替魯膦酸鈉、依替膦酸鈉、伊本膦酸鈉、neridronate、olpandronate、利塞膦酸鈉、piridronate、氨羥二磷酸二鈉、zolendronate)；HMG-CoA還原酶抑制劑(例如，洛弗斯特丁、辛伐他汀、托伐他汀、普伐他汀、氟伐地汀、斯特汀、西伐他丁、來適可、lupitor、rosuvastatin、和托伐他汀)；反義寡核苷酸(例如在美國專利號6,277,832、5,998,596、5,885,834、5,734,033和5,618,709中公開的)；腺苷脫氨酶抑制劑(例如，磷酸氟達拉濱和2-氯脫氧腺苷)、ibritumomab tiuxetan(Zevalin)；tositumomab(Bexxar))，其其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、絡合物，和前藥。
此外，抗體或其片段可以綴合到治療部分或藥物部分，該治療部分或藥物部分改變了給定的生物學應答。治療部分或藥物部分不被認為局限于常規化學治療劑。例如，藥物部分可以是具有所希望的生物學活性的蛋白質、肽或多肽。這些蛋白質可以包括，例如，毒素如紅豆毒素、蓖麻毒蛋白A、假單胞菌外毒素、霍亂毒素，或白喉毒素；蛋白質如腫瘤壞死因子、α-干擾素、β-干擾素、神經生長因子、血小板衍生生長因子、組織纖溶酶原激活物、凋亡劑，例如，TNF-α、TNF-β、AIM I(見，國際公開號WO 97/33899)、AIM II(見，國際公開號WO 97/34911)、Fas配體(Takahashi等人，1994，J.Immunol.，61567-1574)，和VEGF(見國際公開號WO 99/23105)和抗-血管生成劑，例如，血管抑素、內皮抑素或凝固途徑的組分(例如，組織因子)；或者生物血應答修飾物如，例如，淋巴因子(例如，γ干擾素(“IFN-γ”)、白介素-1(“IL-1”)、白介素-2(“IL-2”)、白介素-5(“IL-5”)、白介素-6(“IL-6”)、白介素-7(“IL-7”)、白介素-10(“IL-10”)、白介素-12(“IL-12”)、白介素-15(“IL-15”)、白介素-23(“IL-23”)、粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(“GM-CSF”)，和粒細胞集落刺激因子(“G-CSF”)，或者生長因子(例如，生長激素(“GH”))，或者凝固劑(例如，鈣、維生素K、組織因子，如但不限于，Hageman因子(因子XII)、高分子量激肽原(HMWK)、前激肽釋放酶(PK)、凝固蛋白-因子II(凝血酶原)、因子V、XIIa、VIII、XIIIa、XI、XIa、IX、IXa、X、磷脂、血纖蛋白原的α和β鏈的血纖肽A和B、血纖蛋白單體)。在特定實施方案中，免疫特異地結合IL-9多肽的抗體與白三烯拮抗劑(例如，孟魯司特、扎魯司特、普侖司特和zyleuton)綴合。
此外，抗體可以綴合到治療部分如放射性金屬離子，如α-射線發射物如213Bi或用于將放射性金屬離子，包括但不限于，131In、131LU、131Y、131Ho、131Sm綴合到多肽的大環螯合劑。在一些實施方案中，大環螯合劑是1，4，7，10-四氮雜環十二烷-N，N’，N”，N-四乙酸(DOTA)，其可以通過接頭分子附著到抗體。這些接頭分子是本領域中公知的并且在Denardo等人，1998，Clin Cancer Res.4(10)2483-90；Peterson等人，1999，Bioconjug.Chem.10(4)553-7；和Zimmerman等人，1999，Nucl.Med.Biol.26(8)943-50中描述，這些文獻的每一篇都被完整并入作為參考。
將治療部分綴合到抗體的技術是熟知的，見，例如，Arnon等人，″用于癌癥治療中藥物免疫靶定的單克隆抗體″，MonoclonalAntibodies And Cancer Therapy，Reisfeld等人(編者)，243-56頁(Alan R.Liss，Inc.1985)；Hellstrom等人，″用于藥物遞送的抗體″，Controlled Drug Delivery(第二版)，Robinson等人(編者)，623-53頁(MarcelDekker，Inc.1987)；Thorpe，″癌癥治療中細胞毒性劑的抗體載體綜述″，Monoclonal Antibodies 84BiologicalAnd Clinical Applications，Pinchera等人(編者)，475-506頁(1985)；″放射性標記的抗體在癌癥治療中治療用途的分析、結果，和前景″，Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy，Baldwin等人(編者)，303-16頁(Academic Press 1985)，和Thorpe等人，1982，Immunol.Rev.62119-58。
備選地，抗體可以綴合到第二抗體以形成如Segal在美國專利號4,676,980(其在此處被完整并入作為參考)中描述的抗體異共軛綴合物。
本發明還提供了綴合到診斷劑的CD2拮抗劑，優選MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段。MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段可診斷性地用于例如，監視臨床試驗方法中癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤的發展或惡化，以例如，確定給定治療方案的效能。將CD2拮抗劑，優選MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段偶聯到可檢測物質可以方便檢測。可檢測物質的實例包括各種酶、輔基、熒光物質、發光物質、生物發光物質、放射性物質、發射正電子的金屬，和非-放射性順磁金屬離子。使用本領域中公知的技術，可以將可檢測物質直接地或者間接通過中間物(如，例如，本領域中公知的接頭)偶聯或綴合到抗體。見，例如，關于可以綴合到抗體的金屬離子以用作根據本發明的診斷劑，見例如，美國專利號4,741,900。將抗體偶聯到可檢測物質可以實現這種診斷和檢測，這些可檢測物質包括，但不限于，各種酶，包括但不限于辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶，或者乙酰膽堿酯酶；輔基復合體如，但不限于，鏈霉抗生物素蛋白/生物素和抗生物素蛋白/生物素；熒光物質如，但不限于，傘形酮、熒光素、異硫氰酸熒光素、羅丹明、二氯三吖嗪胺熒光素、丹酰氯或藻紅蛋白；發光物質如，但不限于，魯米諾；生物發光物質如，但不限于，螢光素酶、螢光素和水母發光蛋白；放射性物質如，但不限于，鉍(213Bi)、碳(14C)、鉻(51Cr)、鈷(57Co)、氟(18F)、釓(153Gd，159Gd)、鎵(68Ga、67Ga)、鍺(68Ge)、鈥(166Ho)、銦(115In、113In、112In、111In)、碘(131I、125I、123I、121I)、鑭(140La)、镥(177Lu)、錳(54Mn)、鉬(99Mo)、鈀(103Pd)、磷(32P)、鐠(142Pr)、钷(149Pm)、錸(186Re、188Re)、銠(105Rh)、釕(97Ru)、釤(153Sm)、鈧(47Sc)、硒(75Se)、鍶(85Sr)、硫(35S)、锝(99Tc)、鉈(201Ti)、錫(113Sn、117Sn)、氚(3H)、氙(133Xe)、鐿(169Yb、175Yb)、釔(90Y)、鋅(65Zn)；使用各種正電子發射X射線斷層術的正電子發射金屬，和非放射性順磁金屬離子。
5.5可以與CD2拮抗劑組合用于預防或治療癌癥的試劑本發明還提供了含有CD2拮抗劑(優選MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)和非CD2拮抗劑的一種或多種預防或治療劑的組合物和預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，該方法包括對需要該治療的受試者施用所述組合物。治療或預防劑包括，但不限于，小分子、合成藥物、肽、多肽、蛋白質、核酸(例如，DNA和RNA核苷酸，包括，但不限于，反義核苷酸序列、三螺旋和編碼生物活性蛋白、多肽或肽的核苷酸序列)、抗體、合成的或天然無機分子、模擬劑，和合成或天然的有機分子。公知可用于或者已經用于或者當前正用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的任一種試劑都可以與按照此處描述的CD2拮抗劑組合。關于已經用于或者當前正用于治療癌癥或者其一種或多種癥狀的預防劑或治療劑的信息見，例如，Hardman等人，編者，1996，Goodman & Gilman′s ThePharmacological Basis Of Basis Of Therapeutics第九版，Mc-Graw-Hill，New York和emedicine網站。
5.5.1抗癌劑和治療性抗體可用于本發明的各種實施方案(包括本發明的藥物組合物和劑型和試劑盒)的抗癌劑的實例包括，但不限于異惡唑醋酸、阿克拉霉素、阿可達唑鹽酸鹽、山油柑堿、阿多來新、阿地流津、六甲密胺、丙氨肽霉素、阿美坦醌、氨魯米特、胺苯吖啶、阿那曲唑、氨茴霉素、天冬酰胺酶、asperlin、阿扎胞苷、azetepa、含氮霉素、巴馬司他、芐替哌、比卡魯胺、鹽酸必桑郡、bisnafide二甲磺酸鹽、bizelesin、博來霉素硫酸鹽、白瑞夸爾鈉、溴匹利明、白消安、放線菌素C、二甲睪酮、卡拉酰胺、卡比替膜、卡鉑、亞硝脲氮芥、鹽酸卡米諾霉素、carzelesin、cedefingol、苯丁酸氮芥、西羅里霉素、順鉑、克拉屈濱、甲磺酸克雷斯托、環磷酰胺、阿糖胞苷、氮烯唑胺、放線菌素D、鹽酸柔紅霉素、脫氧氮雜胞苷、dexormaplatin、dezaguanine、dezaguanine甲磺酸鹽、地吖醌、多西他賽、阿霉素、鹽酸阿霉素、著洛西芬、著洛西芬檸檬酸鹽、丙酸甲雄烷酮、偶氮霉素、依達曲沙、依洛尼塞鹽酸鹽、elsamitrucin、恩絡鉑、恩普氨酯、依匹哌啶、鹽酸表阿霉素、erbulozole、鹽酸去羥阿霉素、雌莫司汀、磷雌氮芥、依他硝唑、依托泊苷、磷酸依托泊苷、氯苯乙嘧胺、鹽酸法羅唑啉、fazarabine、維甲酰酚胺、5-氟脫氧尿苷、磷酸氟達拉濱、氟尿嘧啶、氟西他賓、fosquidone、佛司曲辛鈉、吉西他濱、鹽酸吉西他濱、羥基脲、鹽酸去甲柔毛霉素、異環磷酰胺、依莫佛新、白介素II(包括重組白介素II或rIL2)、α干擾素-2a、α干擾素-2b、α干擾素-n1、α干擾素-n3、β干擾素-Ia、γ干擾素-Ib、異丙鉑、鹽酸依立替康、生長妥林、來曲唑、醋酸亮丙瑞林、鹽酸利阿唑、洛美曲索鈉、環己亞硝脲、losoxantrone鹽酸鹽、馬丙考、美登素、鹽酸氮芥、乙酸甲地孕酮、醋酸美侖孕酮、苯丙氨酸氮芥、美洛格瑞、巰嘌呤、氨甲蝶呤、氨甲蝶呤鈉、氯苯氨啶、雙二甲磷酰胺乙酯、米汀多酰胺、mitocarcin、絲裂紅素、絲裂吉霉素、絲裂馬菌素、絲裂霉素、絲裂帕菌素、米托坦、鹽酸米托蒽醌、霉酚酸、洛可達唑、諾加霉素、ormaplatin、亞磺酰吡啶、紫杉醇、天門冬酰胺酶、佩里霉素、戊氮芥、硫酸培來霉素、哌磷酰胺、哌泊溴烷、哌酰硫烷、必散特隆鹽酸鹽、普卡霉素、plomestane、卟吩姆鈉、甲基絲裂霉素、松龍苯芥、鹽酸甲基芐肼、嘌呤霉素、鹽酸嘌呤霉素、吡唑霉素、利波腺苷、吡魯米特、、鹽酸鹽、司莫司汀、二甲二苯四氮烯、斯帕磷酸鈉、稀疏霉素、鹽酸鍺螺胺、螺旋氮芥、螺磺鉑胺、鏈黑霉素、鏈脲霉素、sulofenur、他利霉素、tecogalan鈉、替加氟、teloxantrone鹽酸鹽、temoporfin、替尼泊苷、臺羅西隆、睪內酯、硫唑鳥嘌呤、硫鳥嘌呤、噻替哌、磺嗪夫寧、替拉扎明、濤瑞米芬檸檬酸鹽、甲基諾龍、磷酸曲西瑞賓、曲麥克特、三甲曲沙葡萄醛酯、曲普瑞林、鹽酸九布洛唑、尿嘧啶氮芥、尿烷亞胺、vapreotide、verteporfin、硫酸長春堿、硫酸醛基長春堿、去乙酰長春酰胺、硫酸硫酸去乙酰長春酰胺、vinepidine硫酸鹽、硫酸長春苷酯、硫酸長春素、長春瑞賓、硫酸異長春堿、硫酸長春氮芥、伏羅唑、折尼拉汀、新制癌菌素、鹽酸正定苯酰肼。其他抗癌藥物包括，但不限于20-表-1，25-二羥基維生素D3、5-乙炔基尿嘧啶、abiraterone、阿克拉霉素、acylfulvene、adecypenol、阿多來新、阿地流津、ALL-TK拮抗劑、六甲密胺、安巴司丁、amidox、阿米斯丁、氨基乙酰丙酸、amrubicin、胺苯吖啶、anagrelide、阿那曲唑、穿心蓮內酯、血管生成抑制劑、拮抗劑D、拮抗劑G、安雷利克斯、抗-背部化形態發生蛋白-1、抗雄激素、前列腺癌、抗雌激素、antineoplaston、反義寡核苷酸、艾菲地可寧氨基乙酸、凋亡基因調節劑、凋亡調節劑、脫嘌呤核酸、ara-CDP-DL-PTBA、精氨酸脫氨酶、asulacrine、阿他美坦、阿曲氮芥、axinastatin 1、axinastatin 2、axinastatin 3、azasetron、azatoxin、azatyrosine、漿果赤霉素III衍生物、balanol、巴馬司他、BCR/ABL拮抗劑、benzochlorins、benzoylstaurosporine、β內酰胺衍生物、βalethine、betaclamycin B、白樺脂酸、bFGF抑制劑、比卡魯胺、必桑郡、bisaziridinylspermine、bisnafide、bistratene A、bizelesin、breflate、溴匹利明、布朵替坦、buthionine磺基肟、鈣泊三醇、calphostin C、喜樹堿衍生物、金絲雀痘IL-2、卡培他濱、氨甲酰-氨基-三唑、羧基酰胺三唑、CaRest M3、CARN 700、軟骨衍生的抑制劑、carzelesin、酪蛋白激酶抑制劑(ICOS)、castanospermine、殺菌肽B、西曲瑞利克斯、chlorlns、chloroquinoxaline磺胺、西卡前列素、順式卟啉、克拉屈濱、克羅米芬類似物、克霉唑、collismycin A、collismycin B、combretastatinA4、combretastatin類似物、conagenin、crambescidin 816、克雷斯托、cryptophycin 8、cryptophycin A衍生物、curacin A、cyclopentanthraquinones、cycloplatam、cypemycin、阿糖胞苷ocfosfate、溶細胞因子、磷酸己烷雌酚、dacliximab、脫氧氮雜胞苷、dehydrodidemnin B、deslorelin、地塞米松、dexifosfamide、右丙亞胺、地吖醌、didemnin B、didox、diethylnorspermine、二氫5-氮胞苷、二氫紫杉醇、9-、dioxamycin、聯苯螺旋氮芥、多西他賽、二十二醇、多拉司瓊、多西氟尿啶、著洛西芬、屈大麻酚、duocarmycin SA、依布硒、ecomustine、edelfosine、edrecolomab、eflornithine、欖香烯、emitefur、表柔比星、依立雄胺、雌莫司汀類似物、雌激素激動劑、雌激素拮抗劑、依他硝唑、磷酸依托泊苷、依西美坦、法羅唑啉、fazarabine、維甲酰酚胺、非格司亭、非那雄胺、flavopiridol、氟噻司汀、fluasterone、氟達拉濱、fluorodaunorunicin鹽酸鹽、伏芬尼美司、福美司坦、佛司曲辛、福泰氮芥、釓texaphyrin、硝酸鎵、galocitabine、加尼瑞克、明膠酶抑制劑、吉西他濱、谷胱甘肽抑制劑、hepsulfam、heregulin、六甲撐bisacetamide、金絲桃素、伊本膦酸、伊達比星、艾多昔芬、idramantone、依莫佛新、ilomastat、imidazoacridones、咪喹莫特、免疫刺激劑肽、胰島素生長因子-1受體抑制劑、干擾素激動劑、干擾素、白介素、碘芐胍、碘阿霉素、甘薯黑疤霉醇、4-、iroplact、亞蘇那啶馬來酸鹽、isobengazole、isohomohalicondrin B、itasetron、、F、lamellarin-N三乙酸鹽、生長妥林、leinamycin、利諾司啶、香菇多糖硫酸鹽、leptolstatin、來曲唑、白血病抑制因子、白細胞α干擾素、醋酸亮丙瑞林+雌激素+黃體酮、亮丙瑞林、左旋咪唑、利阿唑、線性多胺類似物、親脂性的二糖肽、親脂性的鉑化合物、lissoclinamide 7、洛巴鉑、胍乙基磷酸絲氨酸、洛美曲索、氯尼達明、losoxantrone、洛弗斯特丁、羅唑利賓、lurtotecan、镥texaphyrin、lysofylline、裂解肽、美坦辛、mannostatin A、馬馬司他、馬丙考、脈絲平、matrilysin抑制劑、基質金屬硫蛋白酶抑制劑、美洛格瑞、merbarone、meterelin、甲硫氨酸酶、滅吐靈、MIF抑制劑、米非司酮、米替福星、米英司定、錯配雙鏈RNA、丙脒腙、二溴衛矛醇、絲裂霉素類似物、米托萘胺、mitotoxin成纖維細胞生長因子-saporin、米托蒽醌、mofarotene、莫格拉司替姆、單克隆抗體、人絨毛膜促性腺激素、單磷酰基脂質A+myobacterium細胞壁sk、莫匹達謀、多種藥物抗性基因抑制劑、基于多種腫瘤抑制劑1的療法、芥子抗癌劑、mycaperoxide B、分枝桿菌細胞壁提取物、myriaporone、N-acetyldinaline、N-取代的苯甲酰胺、萘法瑞林、nagrestip、納洛酮+噴他佐辛、napavin、naphterpin、納妥格拉斯丁、nedaplatin、nemorubicin、neridronic酸的、中性的內肽酶、尼魯米特、nisamycin、一氧化氮調節劑、硝基氧抗氧化劑、nitrullyn、06-苯甲基鳥嘌呤、善得定、okicenone、寡核苷酸、澳那斯酮、奧丹西隆、奧丹西隆、oracin、口服細胞因子誘導劑、ormaplatin、osaterone、奧沙利鉑、oxaunomycin、紫杉醇、紫杉醇類似物、紫杉醇衍生物、palauamine、棕櫚酰根霉素、帕米膦酸、panaxytriol、巴洛米芬、三羥水楊胺、泊澤尼普定、天門冬酰胺酶、peldesine、戊聚糖多硫酸鈉、噴托他丁、pentrozole、perflubron、哌磷酰胺、紫蘇子醇、phenazinomycin、苯乙酸鹽、磷酸酶抑制劑、沙培林、鹽酸毛果蕓香堿、吡喃阿霉素、吡曲克辛、placetin A、placetin B、纖溶酶原活化劑抑制劑、鉑絡合物、鉑化合物、鉑-三胺絡合物、卟吩姆鈉、甲基絲裂霉素、潑尼松、丙基二-吖啶酮、前列腺素J2、蛋白酶體抑制劑、基于蛋白A的免疫調節劑、蛋白激酶C抑制劑、蛋白激酶C抑制劑、microalgal、蛋白質酪氨酸磷酸酶抑制劑、嘌呤核苷磷酸化酶抑制劑、紫紅素、吡唑并吖啶、pyridoxylated血紅蛋白聚氧乙烯綴合物、raf拮抗劑、雷替曲塞、拉莫西隆、ras法尼基蛋白質轉移酶抑制劑、ras抑制劑、ras-GAP抑制劑、脫甲基雷尼替卜定、錸Re 186依替膦酸鈉、根霉素、核糖酶、RII retinamide、吡魯米特、rohitukine、胞壁酰基二肽、羅喹美克、rubiginone B1、ruboxyl、safingol、saintopin、SarCNU、sarcophytol A、沙格司亭、Sdi 1模擬物、司莫司汀、衰老衍生抑制劑1、有義寡核苷酸、信號轉導抑制劑、信號轉導調節劑、單鏈抗原-結合蛋白、西作非蘭、索布佐山、鈉borocaptate、苯基乙酸鈉、solverol、生長調節素結合蛋白、sonermin、斯帕磷酸、spicamycin D、螺旋氮芥、斯耐潘定、spongistatin 1、squalamine、干細胞抑制劑、干細胞分裂抑制劑、stipiamide、stromelysin抑制劑、sulfinosine、超活性血管活性腸肽拮抗劑、suradista、蘇拉明、swainsonine、合成的糖胺聚糖、tallimustine、他莫昔芬甲碘化物、塔羅氮芥、他佐羅汀、tecogalan鈉、替加氟、tellurapyrylium、端粒酶抑制劑、temoporfin、泰莫佐羅、替尼泊苷、tetrachlorodecaoxide、tetrazomine、thaliblastine、thiocoraline、血小板生成素、血小板生成素模擬物、thymalfasin、胸腺生成素受體激動劑、thymotrinan、促甲狀腺素、錫乙基etiopurpurin、替拉扎明、二氯環戊二烯鈦、topsentin、濤瑞米芬、全能性干細胞因素、翻譯抑制劑、維甲酸、三乙酰尿苷、區西瑞賓、曲麥克特、曲普瑞林、托烷司瓊、turosteride、酪氨酸激酶抑制劑、tyrphostins、UBC抑制劑、羥氨苯丁酰亮氨酸、尿殖竇-衍生的生長抑制因子、尿激酶受體拮抗體、vapreotide、variolin B、載體體系、紅細胞基因療法、velaresol、veramine、、verteporfin、長春烯堿、vinxaltine、vitaxin、伏羅唑、、折尼拉汀、zilascorb、新制癌菌素stimalamer。優選的額外的抗癌藥物是5-氟尿嘧啶和甲酰四氫葉酸。
可用于本發明方法中的治療性抗體的實例包括但不限于HERCEPTIN(Trastuzumab)(Genentech，CA)，其是用于治療轉移性乳腺癌患者的抗-HER2單克隆抗體；REOPRO(abciximab)(Centocor)，其是血小板上抗-糖蛋白IIb/IIIa受體，用于防止凝塊形成；ZENAPAX(daclizumab)(Roche Pharmaceuticals，瑞士)，其是免疫抑制的、人源化抗-CD25單克隆抗體，用于防止急性腎同種異體移植排斥；PANOREXTM，其是鼠抗-17-IA細胞表面抗原IgG2a抗體(Glaxo Wellcome/Centocor)；BEC2，其是鼠抗-獨特型(GD3表位)IgG抗體(ImClone System)；IMC-C225，其是嵌合的抗-EGFR IgG抗體(ImClone System)；VITAXINTM，其是人源化抗-αVβ3整聯蛋白抗體(Applied Molecular Evolution/MedImmune)；Campath 1H/LDP-03，其是一種人源化抗CD52IgG1抗體(Leukosite)；Smart M195，其是人源化抗-CD3抗體(Protein Design Lab/Kanebo)；RITUXANTM，其是嵌合的抗-CD20 IgG1抗體(IDEC Pharm/Genentech，Roche/Zettyaku)；LYMPHOCIDETM，其是人源化抗-CD22 IgG抗體(Immunomedics)；LYMPHOCIDETMY-90(Immunomedics)；Lymphoscan(Tc-99m-標記的；放射成像；Immunomedics)；Nuvion(抗CD3；Protein Design Labs)；CM3是人源化抗-ICAM3抗體(ICOSPharm)；IDEC-114是靈長類化抗-CD80抗體(IDECPharm/Mitsubishi)；ZEVALINTM是放射標記的鼠抗-CD20抗體(IDEC/Schering AG)；IDEC-131是人源化抗-CD40L抗體(IDEC/Eisai)；IDEC-151是靈長類化抗-CD4抗體(IDEC)；IDEC-152是靈長類化抗-CD23抗體(IDEC/Seikagaku)；SMART抗-CD3是人源化抗-CD3 IgG(Protein Design Lab)；5G1.1是人源化抗-補體因子5(C5)抗體(Alexion Pharm)；D2E7是人源化抗-TNF-a抗體(CAT/BASF)；CDP870是人源化抗-TNF-αFab片段(Celltech)；IDEC-151是靈長類化抗-CD4 IgGI抗體(IDECPharm/SmithKlineBeecham)；MDX-CD4是人抗-CD4 IgG抗體(Medarex/Eisai/Genmab)；CD20-鏈霉抗生物素蛋白(+生物素-釔90；NeoRx)；CDP571是人源化抗-TNF-αIgG4抗體(Celltech)；LDP-02是人源化抗-α4β7抗體(LeukoSite/Genentech)；OrthoClone OKT4A是人源化抗-CD4 IgG抗體(Ortho Biotech)；ANTOVATM是人源化抗-CD40L IgG抗體(Biogen)；ANTEGRENTM是人源化抗-VLA-4 IgG抗體(Elan)；CAT-152是人抗-TGF-β2抗體(Cambridge Ab Tech)。在特定實施方案中，CD2拮抗劑與VITAXINTM組合使用，用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。
可以用于本發明的方法和組合物中的化療劑包括但不限于烷基化劑、抗代謝物、天然產物，或激素。用于本發明的方法和組合物中以預防、治療、處理，或改善T-細胞惡性腫瘤的烷基化劑包括但不限于，氮芥(例如，氮芥、環膦酰胺、苯丁酸氮芥等)，烷基磺酸鹽(例如，白消安)、亞硝基脲(例如亞硝脲氮芥、羅氮芥，等)，或三氮烯(decarbazine，等)。用于本發明的方法和組合物中以預防、治療、處理，或改善T-細胞惡性腫瘤的抗代謝物的實例包括但不限于，葉酸類似物(例如，氨甲蝶呤)、或嘧啶類似物(例如，阿糖胞苷)、嘌呤類似物(例如，硫嘌呤、硫鳥嘌呤、噴托他丁)。用于本發明的方法和組合物中以預防、治療、處理，或改善T-細胞惡性腫瘤的天然產物的實例包括但不限于，長春花生物堿類(例如，長春堿、長春花新堿)、表鬼臼脂素(例如，依托泊苷)、抗生素(例如，柔紅霉素、阿霉素、博來霉素)、酶(例如，L-天冬酰胺酶)，或者生物學應答調節劑(例如，α干擾素)。
用于本發明的方法和組合物中以治療或預防癌癥的烷基化劑的實例包括但不限于，氮芥(例如，氮芥、環磷酰胺、苯丁酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、等等)、氮丙啶和甲基密胺(例如，六甲基密胺、噻替哌)、烷基磺酸鹽(例如，busulfan)、亞硝基脲(例如，亞硝脲氮芥、羅氮芥、司莫司汀、鏈脲霉素、等等。)，或三氮烯(decarbazine、等等。)。用于本發明的方法和組合物中以治療或預防癌癥的抗代謝物的實例包括但不限于，葉酸類似物(例如氨甲蝶呤)，或嘧啶類似物(例如，氟尿嘧啶、氟尿苷、阿糖胞苷)，嘌呤類似物(例如，巰嘌呤、硫鳥嘌呤、噴托他丁)。用于本發明的方法和組合物中以治療或預防癌癥的天然產物的實例包括但不限于，長春花生物堿類(例如，長春堿、長春花新堿)、表鬼臼脂素(例如，依托泊苷、替尼泊苷)、抗生素(例如，放線菌素D、柔紅霉素、阿霉素、博來霉素、普卡霉素、絲裂霉素)、酶(例如，L-天冬酰胺酶)，或者生物學應答調節劑(例如，α干擾素)。用于本發明的方法和組合物中以治療或預防癌癥的激素和拮抗劑的實例包括但不限于，腎上腺皮質類固醇(例如，潑尼松)、孕酮(例如，己酸羥孕酮、乙酸甲地孕酮、乙酸甲羥孕酮)、雌激素(例如，二乙基己烯雌酚、乙炔雌二醇)，抗雌激素(例如，他莫昔芬)，雄激素(例如，丙酸睪酮、氟烴甲基睪丸素)，抗雄激素(例如，氟利坦)，促性腺激素釋放激素類似物(例如，醋酸亮丙瑞林)。用于本發明的方法和組合物中以治療或預防癌癥的其他試劑的實例包括鉑配位絡合物(例如，順鉑、carboblatin)，anthracenedione(例如，mitoxantrone)、取代脲(例如，羥基脲)、甲腙衍生物(例如，甲基芐肼)、腎上腺皮質抑制劑(例如，米托坦、氨魯米特)。
5.5.2血管生成抑制劑本發明包括一種或多種血管生成抑制劑與CD2拮抗劑的組合在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途。血管生成抑制劑的實例包括但不限于血管抑素(纖溶酶原片段)；抗血管生成抗凝血酶III；Angiozyme；ABT-627；Bay12-9566；氟草胺、bevacizumab；BMS-275291；軟骨-衍生的抑制劑(CDI)；CAI；CD59互補片段；CEP-7055；Col 3；Combretastatin A-4；內皮抑素(膠原XVIII片段)；粘連蛋白片段、Gro-β、鹵夫酮、肝素酶、肝素多聚己糖片段、HMV833、人絨毛膜促性腺激素(hCG)；IM-862；α/β/γ干擾素；干擾素可誘導的蛋白(IP-10)；白介素-12；Kringle 5(纖溶酶原片段)；馬馬司他；金屬蛋白酶抑制劑(TIMPs)；2-甲氧雌二醇；MMI 270(CGS 27023A)；MoAbIMC-1C11；Neovastat；NM-3；Panzem；PI-88；胎盤核糖核酸酶抑制劑；纖溶酶原活化劑抑制劑；血小板因子-4(PF4)；prinomastat、促乳素16kD片段、多育曲霉素-相關蛋白質(PRP)；PTK787/ZK 222594；類視黃醇；solimastat；squalamine；SS 3304；SU5416；SU6668；SU11248；四氫皮質甾醇-S、tetrathiomolybdate、沙立度胺、凝血栓蛋白-1(TSP-1)、TNP-470、轉化生長因素-β(TGF-b)、vasculostatin、vasostatin(calreticulin片段)、ZD6126、ZD 6474、法尼基轉移酶抑制劑(FTI)，和二膦酸。
5.6治療方案本發明包括基于CD-2拮抗劑的療法，其包括將CD2拮抗劑施用于動物，優選哺乳動物，最優選人，以預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在優選的實施方案中，用于本發明的治療方法和組合物中的CD2拮抗劑是MEDI-507、其類似物、衍生物、或抗原結合片段。在另一優選的實施方案中，本發明包括MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段作為單劑療法在預防、治療、處理，或改善T-細胞惡性腫瘤，或者與T-細胞惡性腫瘤相關的一種或多種癥狀中的用途。
本發明還包括組合療法，其提供了比當前用于癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤或者其一種或多種癥狀的單劑療法或組合療法更好的預防和治療概況。作為實施例，但是不作為限制，癌癥療法可以是凋亡誘導劑、細胞毒性劑、抗有絲分裂劑、微管穩定劑、微管形成抑制劑、拓撲異構酶活性劑、抗代謝劑，或DNA相互作用劑。相對于本領域中公知的癌癥療法，尤其對于T-細胞惡性腫瘤的療法，包括例如，當前標準的和實驗性化療、激素療法、免疫療法、放射療法等，本發明的方法增強了這些療法的有效性，提高了耐受性，和/或減小了副作用。
本發明包括組合療法，它們具有加合的效能或者加合的治療效果。本發明還包括協同組合，其中治療效能大于加合的效能。優選地，這些組合還減小或避免不想要的或不利的作用。在一些實施方案中，本發明包括的組合療法相對于CD2拮抗劑或者任何其他癌癥療法單獨施用改善了總體療法。在優選實施方案中，本發明包括的組合療法相對于MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段或者任何其他癌癥療法單獨施用改善了總體療法。在一些實施方案中，現有的或者實驗性癌癥療法的劑量可以減小或者施用頻率減小，這增加了患者依從性，改善了治療并減小了不想要的或不利的作用。
本發明提供了用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的組合療法，所述組合療法包括對需要該治療的受試者施用預防或治療有效量的一種或多種CD2拮抗劑和預防或治療有效量的一種或多種癌癥療法。在優選的實施方案中，本發明提供了用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的組合療法，所述組合療法包括對需要該治療的受試者施用預防或治療有效量的一種或多種MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段，和預防或治療有效量的一種或多種癌癥療法。具體地，本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用預防或治療有效量的一種或多種MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段，和預防或治療有效量的一種或多種癌癥化療、激素療法、生物學療法、免疫療法或放射療法。
在一些實施方案中，本發明包括CD2拮抗劑，優選MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段與基因療法的組合在預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀中的用途。在其他實施方案中，與本發明的方法和組合物組合使用的癌癥療法是用于癌癥療法，尤其T-細胞惡性腫瘤的療法中的另一種治療性抗體。
在一些實施方案中，本發明提供了預防和治療方式或方法，其包括將CD2拮抗劑，優選MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段與單獨的一種或多種化療組合或者，任選地，與激素療法、生物學療法/免疫療法和/或放射療法組合施用。考慮癌癥治療方法還包括手術與CD2拮抗劑，優選MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段，和任選地，化療、激素療法、生物學療法/免疫療法和/或放射療法組合。
在特定實施方案中，本發明提供了預防和治療方案，該方案包括將CD2拮抗劑，優選MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段與單獨的一種或多種化療劑組合施用，該化療劑如但不限于阿霉素、表柔比星、環磷酰胺、5-氟尿嘧啶，氟尿嘧啶、taxanes比如多西他賽和紫杉醇、甲酰四氫葉酸、左旋咪唑、依立替康、雌莫司汀、依托泊苷、長春花堿、氮烯唑胺、亞硝基脲比如亞硝脲氮芥和環己亞硝脲、長春花生物堿、鉑化合物、順鉑、絲裂霉素、長春烯堿、吉西他濱、卡鉑、六甲三聚氰胺和/或拓撲替康。這些方案任選還包括施用其他癌癥療法，如但不限于放射療法、生物學療法、激素療法和/或手術。
在另一特定實施方案中，本發明提供了預防和治療方式或方案，其包括將CD2拮抗劑，優選MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段與一種或多種類型的放射療法組合施用，如外部-束輻射治療、放射性同位素的間質植入(I-125、鈀、銥)、放射性同位素如鍶-89、胸部的放射療法、腹膜內P-32放射療法，和/或總的腹部和骨盆放射療法。這些方法任選還包括施用其他癌癥療法，如但不限于化療、生物學療法/免疫療法、激素療法和/或手術。
在再一個特定實施方案中，本發明提供了預防和治療方案，該方案包括將CD2拮抗劑，優選MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段與一種或多種生物學療法/免疫療法或激素療法組合施用，該生物學療法/免疫療法或激素療法如他莫昔芬、醋酸亮丙瑞林或其他的LHRH激動劑、非甾族的抗雄激素(氟利坦、尼魯米特、比卡魯胺)、甾族的抗雄激素(環丙孕酮)、雌激素(DES、氯三芳乙烯、乙炔雌二醇、綴合的雌激素USP、DES-二磷酸)、氨魯米特、氫化可的松、氟利坦withdrawl、黃體酮、酮康唑、潑尼松、α干擾素、白介素-2、腫瘤壞死因子-α，和/或苯丙氨酸氮芥。生物學療法還包括細胞因子如但不限于TNF配體家族成員如可以誘導凋亡的TRAIL抗癌激動劑、結合TRAIL受體1和2或稱為DR4和DR5(含有死亡結構域的受體4和5)的TRAIL抗體，以及DR4和DR5。TRAIL和TRAIL抗體、配體和受體是本領域技術人員公知的并且在美國專利號6,342,363、6,284,236、6,072,047和5,763,223中描述。這些方法可以任選還包括施用其他癌癥療法，如但不限于放射療法、化療和/或手術。
在一些實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善T-細胞惡性腫瘤的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用預防或治療有效量的MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段，和預防或治療有效量的T-細胞惡性腫瘤的一種或多種標準或實驗性療法。可用于本發明的方法和組合物中的T-細胞惡性腫瘤的標準或實驗性療法包括，但不限于，抗體療法(例如，Campath；抗-Tac，HuM291(針對CD3的人源化鼠IgG2單克隆抗體)、放射標記的單克隆抗體(例如，Bexxar，Zevalin，Lym-1))、細胞因子療法、與或不與細胞毒性劑的攻擊組合化療、造血干細胞移植，和T細胞-介導的療法(例如，具有針對靶標抗原的抗白血病活性的CD8+T細胞，該靶標抗原包括但不限于白血病特異蛋白(例如bcr/abl、PML/RARa、EMV/AML-1)、白血病相關的蛋白(例如，蛋白酶3、WT-1、h-TERT、hdm-2))。(見Riddell等人，2002，Cancer Control，9(2)114-122；Dearden等人，2002，Medical Oncology，19，Suppl.S27-32；Waldmann等人，2000，Hematology(Am Soc Hematol Educ Program)394-408)。
在特定實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善T-細胞幼淋巴細胞白血病(“T-PLL”)或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者只施用預防或治療有效量的MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段，或者組合施用預防或治療有效量的一種或多種用于T-PLL治療的試劑，所述治療劑包括但不限于CAMPTH-1H(Alemtuzumab)(Dearden等人，2002，Medical Oncology，19，Suppl.S27-32)、噴托他丁、嘌呤類似物(例如，氟達拉濱、克拉屈濱)、依托泊苷、博來霉素，組合化療，或在Dearden等人，2000，Blood，98(6)1721-6(其在此處被完整并入作為參考)中公開的任何其他療法。
在另一特定實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善成年T-細胞白血病(“ATL”)或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者只施用預防或治療有效量的MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段，或者組合施用預防或治療有效量的一種或多種用于預防、治療、處理，或改善ATL或者其一種或多種癥狀的試劑，所述試劑包括，但不限于CAMPATH-1H(Alemtuzumab)(Dearden等人，2002，Medical Oncol.19 SupplS27-32)、蛋白酶體抑制劑PS-341(Tan等人，2002，Cancer Research，621083-86，其在此處被并入作為參考)、噴托他丁、人源化抗-IL-2Ra抗體(例如，人源化抗-Tac(HAT)(見Phillips等人，2000，Cancer Research，606977-84))、daclizumab(Zenepax)、連接到假單胞菌外毒素A的重組CD7-特異單鏈免疫毒素(見Peipp等人，2002，Cancer Research，622848-55中的描述)、細胞毒性劑(例如，deoxycoformysin(DCF)、鹽酸依立替康(CPT-11)、MST-16，等)、類維生素A、抗逆轉錄病毒劑(例如，AZT、lamuvidine)，或三氧化二砷(見綜述Bazarbachi & Hennine，2001，Virus Research，7879-92)。
在另一實施方案中，本發明提供了預防、治療、處理，或改善ATL或者其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者只施用預防或治療有效量的MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段，或者組合施用預防或治療有效量的用于ATLL治療的其他療法，它們包括但不限于PUVA療法(見Takemori等人，1995，Human Cell，8(3)121-6)、自體外周血干細胞移植后的α-干擾素療法(FujiwaraH.，等人，2002，Acta Haematol.，107213-219)、免疫療法(例如，抗-Tac(Fv)-PE40KDEL；Ohno N.等人，2002，Leuk.Lymphoma，43(4)885-8)，與細胞毒性劑的組合化療(見綜述Siegel等人，2001，Curr.Treat.Options Oncol.，2(4)291-300)。
在另一特定實施方案中，本發明提供了在標準療法難以治療和/或免疫抑制的受試者中預防、治療、處理，或改善ATL或其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括將預防或治療有效量的MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段單獨施用或者與預防或治療有效量的ziodvudine(AZT)和/或α干擾素組合施用。在另一特定實施方案中，還對所述患者施用針對HTLV-1的抗逆轉錄病毒劑。在備選實施方案中，本發明提供預防、治療、處理，或改善ATL或其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用預防或治療有效量的一種或多種抗-白介素-2受體單克隆抗體和預防或治療有效量的MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段。在再一個特定實施方案中，將誘導HTLV-1陽性細胞中細胞周期抑制的試劑(例如，三氧化二砷、IFN，等)(見，Bazarbachi等人，2001，Virus Research，78(1-2)79-92)的預防或治療有效量與預防或治療的MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段組合施用于ATL患者。
本發明的方法和組合物不僅可用于未受治療的患者中，而且還可用于當前的標準和/或實驗性癌癥療法(包括，但不限于，化療、激素療法、生物學療法、放射療法和/或手術)部分或完全難以治療的患者的治療中。在優選的實施方案中，本發明提供了用于治療或預防癌癥的治療和預防方法，該癌癥已經表現出或者可能是不包括施用CD2拮抗劑(例如，MEDI-507)的那些療法難以治療或者對于這些療法不應答。在另一優選的實施方案中，本發明提供了用于治療或預防癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的治療和預防方法，該癌癥已經表現出或者可能是包括施用MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段的療法難以治療或者對于這些療法不應答。
本發明提供了預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療的受試者施用一種或多種CD2拮抗劑，優選MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段，和用于治療或預防癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或其一種或多種癥狀的一種或多種抗-血管生成劑。
本發明組合療法的預防或治療劑可以同時施用于受試者。術語“同時”不限于在精確的同一時間施用預防或治療劑，而是指CD2拮抗劑(例如，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)和其他劑順序地并且在一定時間間隔內施用于受試者從而CD2拮抗劑(例如，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)可以與其他劑一起作用以提供比它們以別的方式施用更多的好處。例如，每種預防或治療劑可以同時或順序地以任一順序在不同時間點施用；然而，如果不在同時施用，它們應該在足夠近的時間內施用從而提供所希望的治療或預防效果。每種預防或治療劑可以分開地、以任意適宜形式和通過任意適宜途徑施用。
在特定實施方案中，CD2拮抗劑(例如，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)在手術之前、同時或之后施用。優選地，手術完全除去局限化的腫瘤或者減小大腫瘤的尺寸。手術還可以作為預防措施進行或者用以減輕疼痛。
在各種實施方案中，預防或治療劑在相隔小于1小時、相隔約1小時、相隔約1小時到約2小時、相隔約2小時到約3小時、相隔約3小時到約4小時、相隔約4小時到約5小時、相隔約5小時到約6小時、相隔約6小時到約7小時、相隔約7小時到約8小時、相隔約8小時到約9小時、相隔約9小時到約10小時、相隔約10小時到約11小時、相隔約11小時到約12小時、相隔不超過24小時或相隔不超過48小時的時間內施用。在優選的實施方案中，兩種或多種組分在同一次患者拜訪施用。
在其他實施方案中，幾種預防或治療劑在相隔約2到4天、相隔約4到6天、相隔約1周、相隔約1到2周、或相隔超過2周的時間內施用。在優選的實施方案中，幾種預防或治療劑在一個時間框內施用，在該時間框內兩種試劑都仍然有活性。本領域技術人員將能夠通過確定所施用的試劑的半壽期確定這種時間框。
在一些實施方案中，本發明的預防或治療劑被循環地施用于受試者。循環療法包括將第一種試劑施用一段時間，然后將第二種和/或第三種試劑施用一定時間，并重復該順次施用。循環療法可減小產生對一種或多種療法的抗性，避免或減小一種或多種療法的副作用，和/或提高治療的效能。
在一些實施方案中，預防或治療劑以小于約3周，每兩周約1次，每10天約1次或每周約1次的周期施用。一個周期可以包括在每個周期約90分鐘、每個周期約1小時、每個周期約45分鐘內通過灌輸施用治療或預防劑。每個周期還可包括休息至少1周、休息至少2周、休息至少3周。所施用的周期數為約1到約12個周期，更典型地，約2到約10個周期，更典型地，約2到約8個周期。
在其他實施方案中，CD2拮抗劑(例如，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)每周或每兩周施用1次；其他癌癥療法(例如，化療、放射療法)每天施用持續數天。在其他優選的實施方案中，癌癥療法連續施用幾天到幾周。在其他優選的實施方案中，癌癥療法被施用幾小時到幾天。預期這些方法包括幾周的休息期間，在這期間不施用癌癥療法。
在其他優選的實施方案中，在有節奏的給藥方案中，通過連續灌輸或經常施用而無長時間休息期施用本發明的治療和預防劑。這種有節奏的施用可包括以恒定的間隔給藥而無休息期。通常，以較低劑量使用治療劑，尤其細胞毒性劑。這些給藥方案包括長時間慢性地每天施用相對低的劑量。在優選的實施方案中，較低劑量的使用可以使毒副作用最小并消除休息期。在一些實施方案中，通過長期低劑量或者連續灌輸遞送治療和預防劑，遞送時間為約24小時到約2天、到約1周、到約2周、到約3周、到約1個月、到約2個月、到約3個月、到約4個月、到約5個月、到約6個月。熟練的腫瘤學家可以優化這種劑量方案的日程安排。
當與其他預防和/或治療劑組合使用時，CD2拮抗劑(例如，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)和預防和/或治療劑可以相加地或者，更優選地，協同地作用。在一個實施方案中，CD2拮抗劑(例如，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)與相同藥物組合物中的一種或多種治療劑同時施用。在另一實施方案中，CD2拮抗劑(例如，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)與分離的藥物組合物中的一種或多種治療劑同時施用。在再一個實施方案中，CD2拮抗劑(例如，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)在另一預防或治療劑施用之前或之后施用。本發明考慮通過相同或不同的施用途徑，例如，經口和腸胃外組合施用CD2拮抗劑(例如，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)和其他預防或治療劑。在一些實施方案中，當CD2拮抗劑(例如，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)與潛在產生不利副作用(包括，但不限于毒性)的另一種預防或治療劑同時施用時，該預防或治療劑可以有利地以引起不利副作用的閾值以下的劑量施用。
術語治療有效和預防有效包括此處提供的劑量和施用頻率。劑量和頻率將通常還根據對每個患者特異的因素而變，這些因素包括所施用的特定治療或預防劑、癌癥的嚴重性和類型、施用途徑，以及患者的年齡、體重、應答、和過去的病史。本領域技術人員通過考慮這些因素并按照例如文獻中報導的和Physician′s Desk Reference(第56版，2002)中推薦的劑量選擇適宜的方案。
5.6.1所預防或治療的癌癥的類型本發明的抗體和含有所述抗體的組合物可用于預防、治療、處理，或改善增殖性失調或其一種或多種癥狀。在特定實施方案中，增殖性失調的特征是免疫細胞(包括，但不限于，T細胞、B細胞、肥大細胞、嗜酸性粒細胞、嗜中性粒細胞和胎兒胸腺細胞)的異常增殖(例如，不受控制的增殖或增殖缺乏)。
此處描述的組合物和方法可用于預防、治療或改善癌癥和相關失調包括，但不限于下面的白血病，如但不限于急性白血病、急性淋巴細胞白血病、急性髓細胞白血病如成髓細胞白血病、前髓細胞白血病、骨髓單核細胞白血病、單核細胞白血病、紅白血病和骨髓增生異常綜合癥；慢性白血病如但不限于慢性髓細胞(粒細胞)白血病、慢性淋巴細胞白血病，和毛細胞白血病；脾大性紅細胞增多；淋巴瘤，如但不限于何杰金氏病，和非何杰金氏病；多發性骨髓瘤如但不限于，淤積(smoldering)多發性骨髓瘤、非分泌性骨髓瘤、骨硬化性骨髓瘤、漿細胞白血病、單發性漿細胞瘤和髓外漿細胞瘤；Waldenstrom氏巨球蛋白血癥、未定重要性單克隆丙種球蛋白病、良性單克隆丙種球蛋白病、重鏈病、骨髓和結締組織肉瘤如但不限于骨肉瘤、骨肉瘤、軟骨肉瘤、Ewing氏肉瘤、惡性巨細胞瘤、骨纖維肉瘤、脊索瘤、骨膜肉瘤、軟組織肉瘤、血管肉瘤(血管肉瘤)、纖維肉瘤、卡波西肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、淋巴管肉瘤、神經鞘瘤、橫紋肌肉瘤，和滑液肉瘤；腦腫瘤如但不限于神經膠質瘤、星形細胞瘤、腦干神經膠質瘤、室管膜瘤、寡枝神經膠質細胞瘤、非神經膠質瘤、聽神經瘤、顱咽管瘤、成神經管細胞瘤、腦膜瘤、松果體細胞瘤、成松果體細胞瘤，和原發性腦淋巴瘤；乳腺癌如但不限于腺癌、小葉(小細胞)癌、管內癌、骨髓乳腺癌、粘蛋白乳腺癌、管狀乳腺癌、乳頭乳腺癌、派杰病、和炎性乳腺癌；腎上腺癌比如但不限于pheochromocytom和腎上腺皮質癌；甲狀腺癌如但不限于乳頭或卵泡甲狀腺癌、骨髓甲狀腺癌和退行性甲狀腺癌；胰腺癌如但不限于，胰島瘤、胃泌素瘤、胰升血糖素瘤、VIP腫瘤、促生長素抑制素-分泌瘤，和類癌瘤或胰島細胞瘤；垂體癌如但不限于庫興氏病、促乳素-分泌瘤、肢端肥大癥，和糖尿病insipius；眼癌如但不限于眼黑素瘤，如虹膜黑素瘤、脈絡膜黑素瘤，和睫狀體黑素瘤，和成視網膜細胞瘤；陰道癌如鱗狀細胞癌、腺癌，和黑素瘤；陰門癌如鱗狀細胞癌、黑素瘤、腺癌、基底細胞癌、肉瘤和Paget氏病；宮頸癌如但不限于，鱗狀細胞癌和腺癌；子宮癌如但不限于子宮內膜癌和子宮肉瘤；卵巢癌如但不限于，卵巢上皮癌、境界瘤、生殖細胞瘤，和基質瘤；食管癌如但不限于鱗狀癌、腺癌、腺樣cyctic癌、粘液表皮樣癌、腺鱗癌、肉瘤、黑素瘤、漿細胞瘤、疣狀癌，和燕麥細胞(小細胞)癌；胃癌如但不限于腺癌、真菌樣(息肉樣)潰瘍、表層傳播、廣泛傳播、惡性淋巴瘤、脂肪肉瘤、纖維肉瘤，和癌肉瘤；結腸癌；直腸癌；肝癌如但不限于肝細胞癌和肝母細胞瘤、膽囊癌如腺癌；膽管上皮癌如但不限于pappillary、結節性的，和擴散；肺癌如但不限于非小細胞肺癌、鱗狀細胞癌(epidennoid癌)、腺癌、大細胞癌和小細胞肺癌；睪丸癌如但不限于germinal瘤、精原細胞瘤、退行性、經典(典型的)的精細胞非精原細胞瘤、胚胎癌、畸胎瘤癌、惡性合胞體瘤(卵黃囊瘤)、前列腺癌如但不限于，腺癌、平滑肌肉瘤，和橫紋肌肉瘤；penal癌；口腔癌如但不限于鱗狀細胞癌；基底癌；唾液腺癌如但不限于，腺癌、粘液表皮樣癌和腺樣cystic癌；咽癌如但不限于扁平細胞癌，和疣；皮膚癌如但不限于，基底細胞癌、鱗狀細胞癌和黑素瘤、表層傳播黑素瘤、結節性黑素瘤、雀斑惡性黑色素瘤、acrallentiginous黑素瘤；腎癌如但不限于腎細胞癌、腺癌、腎上腺樣瘤、纖維肉瘤、移行細胞癌(腎盂和/或uterer)；韋爾姆斯氏瘤；膀胱癌如但不限于移行細胞癌、扁平細胞癌、腺癌、癌肉瘤。另外，癌包括粘液肉瘤、骨肉瘤、內皮肉瘤、淋巴管內皮細胞肉瘤、間皮瘤、滑膜瘤、成血管細胞瘤、上皮癌、囊腺癌、支氣管癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌和乳頭狀腺癌(這些失調的綜述見Fishman等人，1985，Medicine，第二版，J.B.Lippincott Co.，Philadelphiaand Murphy等人，1997，Informed DecisionsThe Complete Bookof Cancer Diagnosis，Treatment，and Recovery，Viking Penguin，Penguin Books U.S.A.，Inc.，美國)。
本發明的方法和組合也用于治療或預防各種癌或其他異常增殖疾病，包括(但不限于)下面的癌，包括膀胱、乳腺、結腸、腎、肝、肺、卵巢、胰腺、胃、宮頸、甲狀腺的癌；包括鱗狀細胞癌；淋巴譜系的造血腫瘤，包括白血病、急性淋巴細胞性白血病、急性淋巴母細胞性白血病、B細胞淋巴瘤、T細胞淋巴瘤、Berketts淋巴瘤；脊髓譜系的造血腫瘤，包括急性和慢性粒性白血病和早幼粒細胞性白血病；間充質來源的腫瘤，包括纖維肉瘤和橫紋肌肉瘤；其他瘤，包括黑素瘤、精原細胞瘤、tetratocarcinoma、成神經細胞瘤和神經膠質瘤；中樞和外周神經系統的腫瘤，包括星形細胞瘤、成神經細胞瘤、神經膠質瘤，并且許旺氏細胞瘤；間充質起源的腫瘤，包括纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤和骨肉瘤；和其他瘤，包括黑素瘤、xenodermapegmentosum、keratoactanthoma、精原細胞瘤、甲狀腺卵泡癌和畸胎癌。還考慮本發明的方法和組合物還可以治療凋亡異常導致的癌。這些癌包括但不限于濾泡性淋巴瘤、p53突變的癌、乳腺、前列腺和卵巢的依賴激素的腫瘤，和癌癥前期病變如家族性的腺瘤息肉病、和骨髓發育不良綜合征。在特定實施方案中，卵巢、膀胱、乳腺、結腸、肺、胰腺、或子宮中惡性腫瘤或異常增殖變化(如組織轉化和發育異常)，或異常增殖失調被治療或預防。
在優選的實施方案中，本發明的方法和組合物用于治療和/或預防乳腺癌、結腸癌、卵巢癌、肺癌和前列腺癌。
5.6.2所預防或治療的T-細胞惡性腫瘤的類型本發明的方法和組合物還可用于預防、治療、處理，或改善各種T-細胞惡性腫瘤。如此處所用的，術語“T-細胞惡性腫瘤”和類似術語指任何T-細胞淋巴增殖性失調，包括胸腺和胸腺后惡性腫瘤。T-細胞惡性腫瘤包括T-細胞起源的腫瘤。T-細胞惡性腫瘤指淋巴祖細胞、胸腺細胞、T-細胞、NK-細胞，或抗原呈遞細胞起源的腫瘤。T-細胞惡性腫瘤包括coomi n急性淋巴母細胞白血病、淋巴瘤、胸腺瘤、急性淋巴母細胞白血病，和何杰金氏病和非何杰金氏病，條件是淋巴瘤不是皮膚T-細胞淋巴瘤。
用本發明的方法和組合物可以預防、治療、處理，或改善的T-細胞惡性腫瘤包括但不限于，前體T細胞成淋巴細胞白血病/淋巴瘤、外周T細胞和NK細胞瘤、T細胞幼淋巴細胞白血病(例如，小細胞和腦形的)、T細胞粒狀淋巴細胞白血病、侵襲性NK細胞白血病、鼻和鼻型NK/T細胞淋巴瘤、侵染性NK細胞白血病、血管免疫母細胞T細胞淋巴瘤、未指定的外周T細胞淋巴瘤(例如，淋巴上皮樣的(Lennert′s)、T-區、多形的、小的、混合的、大的，和免疫母細胞的)、成人細胞白血病/淋巴瘤(例如，急性lymphomatous、慢性的、郁積的、和類似何杰金的)；退行性大細胞淋巴瘤(ALCL)(T和裸細胞類型)(例如，淋巴細胞與組織細胞的和小細胞)；腸T細胞淋巴瘤(腸病)；和肝脾γ/δT-細胞淋巴瘤。在優選的實施方案中，按照本發明預防或治療的T-細胞惡性腫瘤是系統的、非皮膚T-細胞惡性腫瘤。
5.7藥物組合物和施用方法本發明提供了治療、預防，和改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或其一種或多種癥狀的組合物。在特定實施方案中，組合物含有一種或多種CD2拮抗劑。在另一實施方案中，組合物含有編碼一種或多種CD2拮抗劑的一種或多種核酸分子。在另一實施方案中，組合物含有一種或多種CD2結合分子。在另一實施方案中，組合物含有編碼一種或多種CD2結合分子的一種或多種核酸分子。在優選的實施方案中，組合物含有MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段。在另一優選的實施方案中，組合物含有編碼MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段的核酸分子。
在特定實施方案中，本發明組合物含有非CD2拮抗劑或CD2結合分子的一種或多種預防或治療劑，所述預防或治療劑公知可用于、或者已經或當前正用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在另一實施方案中，本發明的組合物含有編碼非CD2拮抗劑或CD2結合分子的一種或多種預防劑的一種或多種核酸分子，所述預防或治療劑公知可用于、或者已經或當前正用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。
在一個實施方案中，本發明的組合物含有一種或多種CD2拮抗劑和不同于CD2拮抗劑的一種或多種預防或治療劑，所述預防或治療劑公知可用于、或者已經或當前正用于本發明以預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在另一實施方案中，發明的組合物含有一種或多種CD2結合分子和不同于CD2結合分子的一種或多種預防或治療劑，所述預防或治療劑公知可用于、或者已經或當前正用于本發明以預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在另一實施方案中，本發明的組合物含有編碼一種或多種CD2拮抗劑的一種或多種核酸分子和不同于CD2拮抗劑的一種或多種預防或治療劑，所述預防或治療劑公知可用于、或者已經或當前正用于本發明以預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在另一實施方案中，本發明的組合物含有編碼一種或多種CD2結合分子的一種或多種核酸分子和不同于CD2結合分子的一種或多種預防或治療劑，所述預防或治療劑公知可用于、或者已經或當前正用于本發明以預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。
在另一實施方案中，本發明的組合物含有一種或多種CD2拮抗劑和編碼不同于CD2拮抗劑的一種或多種預防或治療劑的一種或多種核酸分子，所述預防或治療劑公知可用于、或者已經或當前正用于本發明以預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在另一實施方案中，本發明的組合物含有一種或多種CD2結合分子和編碼不同于CD2結合分子的一種或多種預防或治療劑的一種或多種核酸分子，所述預防或治療劑公知可用于、或者已經或當前正用于本發明以預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。
在另一實施方案中，本發明的組合物含有編碼一種或多種CD2拮抗劑的核酸分子和編碼不同于CD2拮抗劑的一種或多種預防或治療劑的一種或多種核酸分子，所述預防或治療劑公知可用于、或者已經或當前正用于本發明以預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在另一實施方案中，本發明的組合物含有編碼一種或多種CD2結合分子的一種或多種核酸分子和編碼不同于CD2結合分子的一種或多種預防或治療劑的一種或多種核酸分子，所述預防或治療劑公知可用于、或者已經或當前正用于本發明以預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。
在優選的實施方案中，組合物含有MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段和一種或多種預防或治療劑，該預防或治療劑公知可用于、或者已經或當前正用于本發明以預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在另一優選的實施方案中，組合物含有編碼MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段的一種或多種核酸分子和一種或多種預防或治療劑，該預防或治療劑公知可用于、或者已經或當前正用于本發明以預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在優選的實施方案中，組合物含有MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段和編碼一種或多種預防或治療劑的一種或多種核酸分子，該預防或治療劑公知可用于、或者已經或當前正用于本發明以預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在另一優選的實施方案中，組合物含有編碼MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段的一種或多種核酸分子和編碼一種或多種預防或治療劑的一種或多種核酸分子，該預防或治療劑公知可用于、或者已經或當前正用于本發明以預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。
在優選的實施方案中，本發明的組合物是藥物組合物。這種藥物組合物含有預防或治療有效量的一種或多種預防或治療劑(例如，CD2拮抗劑或其他預防或治療劑)，和一種藥學上可接受的載體。在特定實施方案中，術語“藥學上可接受的”指聯邦或州政府的管理機構批準或者列于美國藥典或者其他公知的藥典中在動物，或更尤其人中使用。術語“載體”指稀釋劑、佐劑(例如，弗氏佐劑(完全和不完全))、賦形劑或媒介物，其中治療劑與其一起施用。這些藥物載體可以是無菌液體，如水和油，包括石油、動物、植物或合成來源的油，如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。當藥物組合物靜脈內施用時水是優選的載體。鹽溶液和水性右旋糖和甘油溶液也可用作液體載體，尤其用于可注射的溶液。適宜的藥物賦形劑包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻米、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油、滑石、氯化鈉、干脫脂奶、甘油、丙二醇、乙二醇、水、乙醇，等等。如果希望，該組合物還可含有少量增濕劑或乳化劑，或者pH緩沖劑。這些組合物可以采取溶液劑、懸浮劑、乳劑、片劑、丸劑、膠囊劑、粉劑、緩釋制劑等形式。口服制劑可包括標準載體如藥物級甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂，等。適宜的藥物載體的實例在E.W.Martin的″Remington′s PharmaceuticalSciences″中描述。這些組合物將含有預防或治療有效量的優選純的形式的治療或預防劑，以及適宜量的載體，從而提供適當施用于患者的形式。該制劑將適合施用模式。在優選的實施方案中，藥物組合物是無菌的并且為適當的形式以施用于受試者，優選動物受試者，更優選哺乳動物受試者，最優選人類受試者。
各種遞送系統是公知的并且可用于施用一種或多種預防或治療劑(包括CD2結合分子)，例如，與藥學上可接受的載體配制，包裹在脂質體、微粒、微膠囊中、能夠表達預防或治療劑的重組細胞、受體介導的胞吞(見，例如，Wu和Wu，J.Biol.Chem.2624429-4432(1987))、構建作為逆轉錄病毒或其他載體的一部分的核酸，等。施用預防或治療劑，或者含有預防或治療劑的藥物組合物的方法包括，但不限于，腸胃外施用(例如，皮內、肌內、腹膜內、靜脈內和皮下施用)、硬膜外施用、局部施用，和粘膜(例如，鼻內或經口途徑)施用。在特定實施方案中，CD2結合分子、MEDI-507和/或其他預防或治療劑，或者藥物組合物被肌內、局部或靜脈內地施用。在優選的實施方案中，CD2結合分子、MEDI-507和/或其他預防或治療劑被皮下施用。可以通過任一方便的途徑，例如，通過灌輸或大丸劑注射，通過上皮吸收或粘膜皮膚內層(例如，口粘膜、直腸和腸粘膜，等)施用組合物，并且該組合物可與其他生物活性劑一起施用。施用可以是全身性的或局部的。
在特定實施方案中，可能希望將本發明的藥物組合物局部施用于需要治療的區域；這可通過例如，并且不作為限制，局部灌輸、注射，或者通過植入物實現，所述植入物是有孔的、無孔的，或者明膠狀材料，包括膜，如sialastic膜或纖維。優選地，當施用預防或治療劑(例如，CD2結合分子)時，必須注意所使用的材料不吸收預防劑或治療劑。
在另一實施方案中，組合物可以在小泡，尤其脂質體中遞送(見，Langer，Science 2491527-1533(1990)；Treat等人，Liposomesin the Therapy of Infectious Disease and Cancer，Lopez-Berestein和Fidler(編者)，Liss，New York，353-365頁(1989)；Lopez-Berestein，ibid.，317-327頁；一般見ibid)。
在再一個實施方案中，可以以控釋或緩釋系統遞送組合物。在一個實施方案中，可以使用泵實現控制或緩釋(見Langer，如前；Sefton，1987，CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.1420；Buchwald等人，1980，Surgery 88507；Saudek等人，1989，N.Engl.J.Med.321574)。在另一實施方案中，可以施用聚合材料實現本發明抗體或者其片段的控釋或緩釋(見，例如，Medical Applications of Controlled Release，Langer和Wise(編者)，CRC Pres.，Boca Raton，Florida(1974)；Controlled Drug Bioavailability，Drug Product Design andPerformance，Smolen和Ball(編者)，Wiley，New York(1984)；Rangerand Peppas，1983，J.，Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.2361；還見Levy等人，1985，Science 228190；During等人，1989，Ann.Neurol.25351；Howard等人，1989，J.Neurosurg.7 1105)；美國專利號5,679,377；美國專利號5,916,597；美國專利號5,912,015；美國專利號5,989,463；美國專利號5,128,326；PCT公開號WO99/15154；和PCT公開號WO 99/20253)。用于緩釋制劑中的聚合物的實例包括，但不限于，聚(2-羥乙基甲基丙烯酸酯)、聚(甲基甲基丙烯酸酯)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯-共-乙酸乙烯)、聚(甲基丙烯酸)、聚乙交酯(PLG)、聚酸酐、聚(N-乙烯吡咯烷酮)、聚(乙烯醇)、聚丙烯酰胺、聚(乙二醇)、聚丙交酯(PLA)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)、和聚原酸酯。在優選的實施方案中，用于緩釋制劑中的聚合物是惰性的、無可濾出的雜質、保存時穩定的、無菌的，和生物可降解的。在再一個實施方案中，控釋或緩釋系統可以置于治療靶標即，表皮的附近，從而僅需要一部分系統劑量(見，例如，Goodson，Medical Applications of Controlled Release，如前，卷2，115-138頁(1984))。
控釋系統在Langer(1990，Science 2491527-1533)的綜述中討論。本領域中公知的任一技術可用于產生含有一種或多種本發明抗體或其片段的緩釋制劑。見，例如，美國專利號4,526,938、PCT公開號WO 91/05548、PCT公開號WO 96/20698、Ning等人，1996，″用緩釋凝膠腫瘤內放射免疫治療人結腸癌異種移植物″Radiotherapy &Oncology 39179-189，Song等人，1995，″長-循環乳劑的抗體介導的肺靶定″PDA Journal of Pharmaceutical Science &Technology 50372-397，Cleek等人，1997，″bFGF抗體的生物可降解的聚合載體用于心血管應用，″Pro.Int′l.Symp.Control.Rel.Bioact.Mater.24853-854，和Lam等人，1997，″用于局部遞送的重組人源化單克隆抗體的微囊化，″Proc.Int′l.Symp.ControlRel.Bioact.Mater.24759-760，這些文獻的每一種都在此處完整并入作為參考。
在特定實施方案中，本發明的組合物是編碼預防或治療劑的核酸，該核酸可以體內施用以促進其編碼的預防或治療劑的表達，施用方法可以是將該核酸構建為適宜的核酸表達載體的一部分并施用該載體從而核酸成為細胞內的，例如，通過利用逆轉錄病毒載體(見美國專利號4,980,286)，或者通過直接注射，或者利用微粒轟擊(例如，基因槍；Biolistic，Dupont)，或者用脂質或者細胞表面受體或者轉染劑包被，或者通過將該核酸與類似同源框的肽連接后施用，公知該類似同源框的肽可進入細胞核(見，例如Joliot等人，1991，Proc.Nat′l.Acad.Sci.USA 881864-1868)，等。備選地，核酸被導入細胞內并通過同源重組摻入宿主細胞DNA中進行表達。
在特定實施方案中，本發明的組合物是編碼一種或多種預防或治療劑的一種或多種核酸，該核酸可以體內施用以促進其編碼的預防或治療劑的表達，施用方法可以是將該核酸構建為適宜的核酸表達載體的一部分并施用該載體從而核酸成為細胞內的，例如，通過利用逆轉錄病毒載體(見美國專利號4,980,286)，或者通過直接注射，或者利用微粒轟擊(例如，基因槍；Biolistic，Dupont)，或者用脂質或者細胞表面受體或者轉染劑包被，或者通過將該核酸與類似同源框的肽連接后施用，公知該類似同源框的肽可進入細胞核(見，例如Joliot等人，1991，Proc.Nat′l.Acad.Sci.USA 881864-1868)，等。備選地，核酸被導入細胞內并通過同源重組摻入宿主細胞DNA中進行表達。
制備本發明的藥物組合物使其與計劃的施用途徑相容。施用途徑的實例包括，但不限于，腸胃外，例如，靜脈內、皮內、皮下、經口(例如，吸入)、鼻內、透皮(局部)、透粘膜和直腸施用。在特定實施方案中，按照常規方法配制該組合物作為藥物組合物，其適于靜脈內、皮下、肌內、經口、鼻內或局部施用于人。在優選的實施方案中，按照常規方法配制藥物組合物以皮下施用于人。通常，用于靜脈內施用的組合物是溶于無菌等滲水性緩沖液中的溶液。必要時，該組合物可以還包括增溶劑和局部麻醉劑如利多卡因(lignocaine)以減輕注射部位的疼痛。
如果本發明的組合物將局部施用，那么這些組合物可以以例如，軟膏劑、霜劑、透皮貼劑、洗劑、凝膠劑、洗發劑、噴霧劑、氣溶膠、溶液劑、乳劑，或本領域技術人員熟知的其他形式施用。見，例如，Remington′s Pharmaceutical Sciences and Introduction toPharmaceutical Dosage Forms，第四版，Lea & Febiger，Philadelphia，PA(1985)。對于非噴霧的局部劑型，通常使用粘稠到半固體到固體形式，其含有載體或與局部應用相容的一種或多種賦形劑并且具有優選大于水的動態粘滯度。適宜的制劑包括，但不限于，溶液劑、懸浮劑、乳劑、霜劑、軟膏劑、粉劑、擦劑、油膏劑，等，如果希望，可以將它們消毒或者與輔助劑(例如，防腐劑、穩定劑、增濕劑、緩沖劑，或鹽)混合以影響各種性質如，例如，滲透壓。其他適宜的局部劑型包括可噴霧的氣溶膠制劑，其中活性成分(優選與固體或液體惰性載體組合)與加壓的揮發物(例如，氣態推進劑，如氟里昂)混合包裝，或者包裝在擠壓瓶中。如果希望，可以將增濕劑或致濕劑加入藥物組合物和劑型中。這些額外的成分的實例是本領域中熟知的。
如果本發明的組合物將鼻內施用，那么該組合物可以配制成氣溶膠形式、噴霧劑、合劑或者滴劑的形式。具體地，根據本發明使用的預防或治療劑可以以從受壓的包裝或霧化器得到的氣溶膠噴霧的形式方便地遞送，所用的適宜推進劑為例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他適宜的氣體。對于受壓的氣溶膠，可通過提供閥門遞送計量的量來確定單位計量。用于吸入器或吹入器的例如明膠膠囊或藥筒可以配制成含有該化合物和適宜的粉劑基質如乳糖或淀粉的粉劑混合物。
如果本發明的組合物將經口施用，那么可以將這些組合物配制成例如，片劑、膠囊劑、扁囊劑、gelcaps、溶液劑、懸浮劑等口服形式。通過常規方法用藥學上可接受的賦形劑可以制備片劑或膠囊劑，這些賦形劑為比如結合劑(例如，預明膠化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或者羥丙基甲基纖維素)；填充劑(例如，乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣)；潤滑劑(例如，硬脂酸鎂、滑石或硅石)；崩解劑(例如，馬鈴薯淀粉或淀粉乙醇酸鈉)；或增濕劑(例如，十二烷基硫酸鈉)。通過本領域中熟知的方法可以包衣片劑。液體制劑可以采取例如，溶液劑、糖漿劑或懸浮劑的形式，或者它們以干燥產品給出，在使用前用水或適宜的載體重構。通過常規方法用藥學上可接受的添加劑可以制備這些液體制劑，這些添加劑為比如懸浮劑(例如，山梨醇糖漿劑、纖維素衍生物或氫化食用脂肪)；乳化劑(例如，卵磷脂或阿拉伯樹膠)；非水性載體(例如，杏仁油、油酯、乙醇或分餾的植物油)；和防腐劑(例如，甲基或丙基-對-羥基苯甲酸鹽或山梨酸)。適宜時，該制劑還可以含有緩沖鹽、增味劑、著色劑和增甜劑。可適宜地配制用于經口施用的制劑以緩慢釋放、控釋或緩釋預防或治療劑。
可以配制本發明的組合物以用于通過注射，例如，通過彈丸注射或連續灌輸腸胃外施用。用于注射的制劑可以以單位劑型給出，例如，以加入防腐劑的安瓿或多劑量容器給出。這些組合物可以采用如懸浮劑、溶液劑或油性或水性載體中的乳劑的形式，并且可以含有配制劑如懸浮、穩定和/或擴散劑。備選地，活性成分可以為粉劑形式，使用前將其用適宜的載體，例如，無菌無致熱原的水重構。
本發明的組合物還可以配制成栓劑或保留灌腸的直腸組合物，其例如含有常規栓劑基質如可可油或其他甘油酯。
除了前面描述的制劑，本發明的組合物還可以配制成長效制劑。可以通過植入(例如，皮下或肌內)或者通過肌內注射施用這種長效制劑。從而，例如，可以用適宜的聚合的或疏水物質(例如，作為可接受的油中的乳劑)或者離子交換樹脂，或者作為難溶的衍生物，例如，作為難溶的鹽配制這些組合物。
可以將本發明的組合物配制成中性的或者鹽形式。藥學上可接受的鹽包括與陰離子如來自鹽酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等的陰離子形成的鹽和與陽離子如來自鈉、鉀、銨、鈣、氫氧化鐵、異丙胺、三乙胺、2-乙胺醇、組氨酸、普魯卡因等形成的鹽。
通常，本發明組合物的成分被單獨提供或者混合在一起以單位劑型提供，例如，作為密封容器如安瓿或小袋中的凍干的粉劑或者無水濃縮物，該密封容器指出活性劑的量。當將通過灌輸施用組合物時，可以將其用含有藥物級水或鹽的灌輸瓶分配。當將通過注射施用組合物時，可以提供用于注射用無菌水或鹽水的安瓿從而可以在施用前混合成分。
具體地，本發明提供了一種或多種預防或治療劑或者本發明的藥物組合物，其被包裝在密封容器如安瓿或小袋中，該密封容器指出試劑的量。在一個實施方案中，本發明的一種或多種預防或治療劑或者藥物組合物被作為密封容器中的干燥無菌凍干粉或者無水濃縮物提供并且可以用例如，水或者鹽水重構到適宜濃度后施用于受試者。優選地，本發明的一種或多種預防或治療劑或者藥物組合物被作為密封容器中的干燥無菌凍干粉提供，其單位劑量為至少5mg、更優選至少10mg、至少15mg、至少25mg、至少35mg、至少45mg、至少50mg、至少75mg、或至少100mg。本發明的凍干的預防或治療劑，或者藥物組合物應該在其原來的容器中保存在2到8℃并且本發明的預防或治療劑，或者藥物組合物重構后應該在一周內、優選5天內，72小時內、48小時內、24小時內、12小時內、6小時內、5小時內、3小時內、或1小時內施用。在備選實施方案中，本發明的一種或多種預防或治療劑，或者藥物組合物以密封容器中的液體形式提供，該密封容器指示該劑的量和濃度。優選地，在密封容器中以至少0.25mg/ml、更優選地至少0.5mg/ml、至少1mg/ml、至少2.5mg/ml、至少5mg/ml、至少8mg/ml、至少10mg/ml、至少15mg/ml、至少25mg/ml、至少50mg/ml、至少75mg/ml、或至少100mg/ml提供所施用的組合物的液體形式。該液體形式應該在2℃到8℃保存在其原來的容器中。
在優選的實施方案中，本發明提供了包裝在密封容器如安瓿或小袋中的MEDI-507，該密封容器指出MEDI-507的量。在一個實施方案中，MEDI-507作為密封容器中的干燥無菌凍干粉或者無水濃縮物提供并且可以用例如，水或者鹽水重構到適宜濃度后施用于受試者。優選地，MEDI-507作為密封容器中的干燥無菌凍干粉提供，其單位劑量為至少5mg、更優選至少10mg、至少15mg、至少25mg、至少35mg、至少45mg、至少50mg、至少75mg、或至少100mg。在備選實施方案中，MEDI-507以密封容器中的液體形式提供，該密封容器指示MEDI-507的量和濃度。優選地，在密封容器中以至少0.25mg/ml、更優選地至少0.5mg/ml、至少1mg/ml、至少2.5mg/ml、至少5mg/ml、至少8mg/ml、至少10mg/ml、至少15mg/ml、至少25mg/ml、至少50mg/ml、至少75mg/ml、或至少100mg/ml提供MEDI-507的液體形式。
如果希望，該組合物可以在包裝或分配器裝置中給出，該包裝或分配器裝置可以包含含有活性成分的一種或多種單位劑型。該包裝可以例如含有金屬或塑料薄片，如泡罩包裝。該包裝或分配器裝置可與關于施用的使用說明書一起提供。
通常，本發明組合物的成分來自一種受試者，該受試者與這些組合物的接受者具有相同的物種起源或者物種反應性。從而，在優選的實施方案中，將人或人源化抗體施用于人類患者以進行治療或預防。
本發明組合物的量將有效預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，該有效性可通過標準臨床技術確定。用于制劑中的精確劑量將還取決于施用途徑、病癥的嚴重性，并且將根據開業醫生的判斷和每個患者的情況確定。可以從體外或動物模型試驗系統的劑量-應答曲線外推有效劑量。
小分子的示例性劑量包括每千克受試者或樣品重量小分子的毫克或微克量(例如，約1微克/千克到約500毫克/千克，約100微克/千克到約5毫克/千克，或約1微克/千克到約50微克/千克)。
對于本發明包括的抗體、蛋白質、多肽、肽和融合蛋白，施用于患者的劑量通常為0.0001mg/kg到100mg/kg患者體重。優選地，施用于患者的劑量為0.0001mg/kg到20mg/kg、0.0001mg/kg到10mg/kg、0.0001mg/kg到5mg/kg、0.0001到2mg/kg、0.0001到1mg/kg、0.0001mg/kg到0.75mg/kg、0.0001mg/kg到0.5mg/kg、0.0001mg/kg到0.25mg/kg、0.0001到0.15mg/kg、0.0001到0.10mg/kg、0.001到0.5mg/kg、0.01到0.25mg/kg、0.01到0.10mg/kg、0.1到10mg/kg、0.1到6mg/kg、0.1到5mg/kg、0.5到10mg/kg、0.5到6mg/kg、或0.5到5mg/kg患者的體重。通常，由于對外源多肽的免疫應答，在人體內人抗體比來自其他物種的抗體具有更長的半壽期。從而，通常可能需要人抗體的較低劑量和較低施用頻率。此外，通過抗體修飾如，例如脂質化增強抗體的攝取和組織滲透可以減小本發明抗體或其片段的劑量和施用頻率。
在一些實施方案中，對受試者施用一個或多個單位劑量的MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段以預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，單位劑量為0.1mg到20mg、0.1mg到15mg、0.1mg到12mg、0.1mg到10mg、0.1mg到8mg、0.1mg到7mg、0.1mg到5mg、0.1mg到2.5mg、0.25mg到20mg、0.25到15mg、0.25到12mg、0.25到10mg、0.25到8mg、0.25mg到7mg、0.25mg到5mg、0.25mg到2.5mg、1mg到20mg、1mg到15mg、1mg到12mg、1mg到10mg、1mg到8mg、1mg到7mg、1mg到5mg、或1mg到2.5mg。
在另一實施方案中，對受試者施用一個或多個單位劑量的MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段以預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀，單位劑量為0.1mg、0.25mg、0.5mg、1mg、1.5mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、或16mg。優選地，對癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤受試者靜脈內、皮下、肌內、經口或鼻內施用MEDI-507的單位劑量。
在另一實施方案中，施用MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段的預防或治療有效量的一個或多個劑量，其中預防或治療有效量不是對于每劑都相同。在再一個實施方案中，施用MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段的預防或治療有效量的一個或多個劑量，其中，隨著治療的進行，對所述受試者施用的預防或治療有效量的MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段的劑量增加例如，0.01μg/kg、0.02μg/kg、0.04μg/kg、0.05μg/kg、0.06μg/kg、0.08μg/kg、0.1μg/kg、0.2μg/kg、0.25μg/kg、0.5μg/kg、0.75μg/kg、0.1μg/kg、1.5μg/kg、2μg/kg、4μg/kg、5μg/kg、10μg/kg、15μg/kg、20μg/kg、25μg/kg、30μg/kg、35μg/kg、40μg/kg、45μg/kg、50μg/kg、55μg/kg、60μg/kg、65μg/kg、70μg/kg、75μg/kg、80μg/kg、85μg/kg、90μg/kg、95μg/kg、100μg/kg、或125μg/kg。
在另一實施方案中，對受試者，優選人，施用MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段的預防或治療有效量的一個或多個劑量，其中，隨著治療的進行，對所述受試者施用的預防或治療有效量的MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段的劑量減少例如，0.01μg/kg、0.02μg/kg、0.04μg/kg、0.05μg/kg、0.06μg/kg、0.08μg/kg、0.1μg/kg、0.2μg/kg、0.25μg/kg、0.5μg/kg、0.75μg/kg、0.1μg/kg、1.5μg/kg、2μg/kg、4μg/kg、5μg/kg、10μg/kg、15μg/kg、20μg/kg、25μg/kg、30μg/kg、35μg/kg、40μg/kg、45μg/kg、50μg/kg、55μg/kg、60μg/kg、65μg/kg、70μg/kg、75μg/kg、80μg/kg、85μg/kg、90μg/kg、95μg/kg、100μg/kg、或125μg/kg。在特定實施方案中，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段的預防或治療有效量每周增加，持續2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、12個月或更長。
在特定實施方案中，對受試者施用CD2拮抗劑(例如，CD2結合分子)的劑量為0.1到10mg/kg/周、0.1到6mg/kg/周、0.1到5mg/kg/周、0.1到2.5mg/kg/周、0.5到10mg/kg/周、0.5到6mg/kg/周、0.5到5mg/kg/周、0.5到2.5mg/kg/周、2到10mg/kg/周、2到6mg/kg/周、2到5mg/kg/周、或4到6mg/kg/周，施用時間為2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、12個月、或更長時間。優選地，CD2拮抗劑是MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段。
在一些實施方案中，在CD2拮抗劑(例如MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)的劑量施用之前、之中和/或之后用本領域技術人員公知的或者此處描述的技術監視受試者的外周血淋巴細胞數。在特定實施方案中，在CD2拮抗劑(例如MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)的劑量施用之前、之中和/或之后用本領域技術人員公知的或者此處描述的技術監視受試者的外周血T-淋巴細胞和/或NK細胞數。對絕對平均外周血淋巴數小于1000個細胞/mm3、小于800個細胞/mm3、小于750個細胞/mm3、小于500個細胞/mm3、或小于450個細胞/mm3、小于400個細胞/mm3、或小于350個細胞/mm3的受試者不施用CD2拮抗劑(優選地，CD2結合分子，例如MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段)劑量。
已經或者當前正被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的不同于CD2拮抗劑(例如，MEDI-507)的預防或治療劑的劑量可以用于本發明的組合療法中。優選地，在本發明的組合療法中所用的劑量低于已經或者當前正被用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的劑量。當前用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的試劑的推薦劑量可從本領域中的任一參考文獻得到，這些參考文獻包括，但不限于，Hardman等人，編者，1996，Goodman & Gilman′s The Pharmacological BasisOf Basis Of Therapeutics第9版，Mc-Graw-Hill，New York，Physician′s Desk Reference(PDR)第55版，2001，MedicalEconomics Co.，Inc.，Montvale，NJ，這些文獻的每一個都在此處被完整并入作為參考。
5.7.1基因療法在特定實施方案中，通過基因療法施用含有編碼一種或多種預防或治療劑的序列的核酸以預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。基因療法指通過對受試者施用表達的或者可以表達的核酸實施治療。在本發明的該實施方案中，核酸產生它們編碼的預防或治療劑，該預防或治療劑介導預防或治療效果。
可以根據本發明使用本領域中可利用的用于基因療法的任一種方法。下面公開示例性方法。
對于基因療法方法的一般綜述，見Goldspiel等人，1993，Clinical Pharmacy 12488-505；Wu和Wu，1991，Biotherapy387-95；Tolstoshev，1993，Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32573-596；Mulligan，Science 260926-932(1993)；和Morgan和Anderson，1993，Ann.Rev.Biochem.62191-217；5月，1993，TIBTECH 11(5)155-215。可以使用的重組DNA技術的本領域中公知的方法在Ausubel等人(編者)，Current Protocols inMolecular Biology，John Wiley & Sons，NY(1993)；和Kriegler，Gene Transfer and Expression，A Laboratory Manual，StocktonPress，NY(1990)中描述。
在優選的方面，本發明的組合物含有編碼預防或治療劑的核酸，所述核酸是表達載體的一部分，該表達載體在適宜的宿主中表達該預防或治療劑。具體地，這些核酸具有啟動子，優選異源啟動子，啟動子可操作地連接抗體編碼區，所述啟動子是可誘導的或者組成性的和任選組織特異的。在另一特定實施方案中，提供了核酸分子，其中預防或治療劑的編碼序列和任何其他希望的序列側接可以促進在基因組中所希望的位置同源重組的區域，從而提供抗體編碼核酸的染色體內表達(Koller和Smithies，1989，Proc. Natl. Acad. Sci.USA 868932-8935；Zijlstra等人，1989，Nature 342435-438)。在一些實施方案中，預防或治療劑表達。在其他實施方案中，所表達的預防或治療劑是公知用于，或者已經或者當前正用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的預防或治療劑。在優選的實施方案中，所表達的預防或治療劑是MEDI-507。
核酸向受試者的遞送可以是直接的，其中受試者直接暴露于該核酸或攜帶核酸的載體，或者間接的，其中首先在體外用核酸轉化細胞，然后將細胞移植到受試者。公知這兩種方法分別是體內和體外基因療法。
在特定實施方案中，體內直接施用核酸序列，其中該核酸序列表達而產生編碼產物。這可以通過本領域中公知的許多方法之一實現，例如，將它們構建作為適宜的核酸表達載體的部分并將其施用從而它們成為細胞內的，例如，通過用缺陷的或者減毒的逆轉錄病毒或其他病毒載體感染(見美國專利號4,980,286)，或者通過裸露DNA的直接注射，或者通過施用微粒轟擊(例如，基因槍；Biolistic，Dupont)，或者通過具有原位支架的基質，該基質中含有該核酸序列(見例如，歐洲專利號EP 0741 785 B1和美國專利號5,962,427)，或者用脂質或者細胞表面受體或者轉染劑包被，包裹在脂質體、微粒或微囊中，或者通過將它們與公知進入細胞核的肽連接后施用，將其連接配體以受到受體-介導的胞吞(見，例如，Wu和Wu，1987，J；Biol.Chem.2624429-4432)(其可用于靶定特異表達受體的細胞類型)，等。在另一實施方案中，可以形成核酸-配體復合體，其中配體含有融合基因病毒肽以破壞內體，從而使核酸避免被溶酶體降解。在再一個實施方案中，核酸通過靶定特定受體而被體內靶定進行細胞特異的攝入和表達(見，例如，國際公開號WO 92/06180、WO 92/22635、WO92/203 16、WO93/14188、WO 93/20221)。備選地，核酸可被導入細胞內并通過同源重組摻入到宿主細胞DNA后表達(Koller和Smithies，1989，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 868932-8935；和Zijlstra等人，1989，Nature 342435-438)。
在特定實施方案中，使用含有編碼預防或治療劑的核酸序列的病毒載體。例如，可以使用逆轉錄病毒(見，Miller等人，1993，Meth.Enzymol.217581-599)。這些逆轉錄病毒含有正確包裝病毒基因組并整合到宿主細胞DNA所必需的組分。編碼用于基因療法的抗體的核酸序列被克隆到一種或多種載體，其方便基因向受試者的遞送。關于逆轉錄病毒載體的更多細節可以在Boesen等人，1994，Biotherapy 6291-302中發現，該文獻描述了使用逆轉錄病毒將mdr1基因遞送到造血干細胞中，目的是使得干細胞對化療更有抗性。闡明在基因療法中使用逆轉錄病毒的其他參考文獻是Clowes等人，1994，J.Clin.Invest.93644-651；Klein等人，1994，Blood831467-1473；Salmons和Gunzberg，1993，Human Gene Therapy4129-141；和Grossman和Wilson，1993，Curr.Opin.Geneticsand Devel.3110-114。
腺病毒是可用于基因療法的其他病毒載體。腺病毒是將基因遞送到呼吸上皮細胞的特別吸引人的載體。腺病毒天然地感染呼吸上皮細胞，在那里它們導致輕微疾病。基于腺病毒的遞送系統的其他靶標是肝臟、中樞神經系統、內皮細胞和肌肉。腺病毒的優點是能夠感染非分裂的細胞。Kozarsky和Wilson，1993，Current Opinion inGenetics and Development 3499-503給出了關于基于腺病毒的基因療法的綜述。Bout等人，1994，Human Gene Therapy 53-10闡明使用腺病毒載體將基因轉移到恒河猴的呼吸上皮細胞。腺病毒在基因療法中使用的其他實例可以在Rosenfeld等人，1991，Science 252431-434；Rosenfeld等人，1992，Cell 68143-155；Mastrangeli等人，1993，J.Clin.Invest.91225-234；國際公開號WO94/12649；和Wang等人，1995，Gene Therapy 2775-783中發現。在優選的實施方案中，使用腺病毒載體。
腺相關病毒(AAV)也被提出用于基因療法(Walsh等人，1993，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.204289-300；和美國專利號5,436,146)。
基因療法的另一途徑包括通過電穿孔、脂轉染、磷酸鈣介導的轉染，或病毒感染等方法將基因轉移到組織培養物中的細胞。通常，轉移方法包括將可選擇標記物轉移到細胞。然后將細胞進行選擇以分離已經攝入并且正在表達所轉移的基因的細胞。然后將那些細胞遞送給宿主。
在該實施方案中，在所得重組細胞體內施用之前將核酸導入細胞中。可通過本領域中公知的任一種方法實施這種導入，該方法包括但不限于轉染、電穿孔、微注射、用含有核酸序列的病毒或噬菌體載體感染、細胞融合、染色體-介導的基因轉移、微細胞介導的基因轉移、原生質球融合，等。本領域中公知將外來基因導入細胞的許多技術(見，例如，Loeffler和Behr，1993，Meth.Enzymol.217599-618；Cohen等人，1993，Meth.Enzymol.217618-644；Clin.Parma.Ther.2969-92(1985))并且可以按照本發明使用這些技術，條件是受體細胞的必要發育和生理功能不被破壞。該技術應該提供核酸向細胞的穩定轉移，從而該核酸可被該細胞表達并且優選是可以遺傳的和可以被其細胞子代表達。
通過本領域中公知的各種方法可以將所得重組細胞遞送給受試者。優選靜脈內施用重組細胞(例如，造血干細胞或祖細胞)。所用的細胞量取決于所希望的效果、患者狀態等，并且可以由本領域技術人員確定。
為了基因療法的目的核酸可以導入的細胞包括任一種希望的、可以利用的細胞類型，并且包括但不限于上皮細胞、內皮細胞、角質細胞、成纖維細胞、肌肉細胞、肝細胞；血細胞如T淋巴細胞、B淋巴細胞、天然殺傷(NK)細胞、單核細胞、巨噬細胞、嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、巨核細胞、粒細胞；各種干細胞或祖細胞，尤其造血干細胞或祖細胞，例如，從骨髓、臍帶血、外周血、胎兒肝臟等得到的造血干細胞或祖細胞。
在優選的實施方案中，用于基因療法的細胞是受試者的自體細胞。
在一個實施方案中，其中重組細胞用于基因療法，編碼預防或治療劑的核酸序列被導入細胞，從而它們被細胞或細胞的子代表達，然后體內施用重組細胞以得到預防或治療效果。在特定實施方案中，使用干細胞或祖細胞。可被分離并體外保持的任一種干細胞和/或祖細胞都潛在可以按照本發明的該實施方案使用(見，例如，PCT公開WO94/08598；Stemple和Anderson，1992，Cell 7 1973-985；Rheinwald，1980，Metl.Cell Bio.21A229；和Pittelkow和Scott，1986，Mayo Clinic Proc.61771)。
在特定實施方案中，為了基因療法的目的所要導入的核酸含有與編碼區可操作地連接的組成性、組織特異的、或可誘導的啟動子。在優選的實施方案中，為了基因療法的目的所要導入的核酸含有與編碼區可操作地連接的可誘導的啟動子，從而通過控制存在可以控制核酸的表達。
5.8生物學測定和動物模型可以測定CD2拮抗劑，尤其MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段，和本發明的組合物調節T細胞活性的能力。通過測量例如，細胞因子和/或T細胞活化標記物的表達水平的改變可以確定T-細胞活化。本領域中公知的技術包括，但不限于，免疫沉淀后蛋白質印跡分析、ELISA、流式細胞術、RNA印跡分析和RT-PCR，這些技術可用于測量細胞因子和T-細胞活化標記物的表達。在優選的實施方案中，試驗了CD2結合分子或本發明的組合物誘導INF-γ和/或IL-2表達的能力。
還可以測定CD2拮抗劑，尤其MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段，和本發明的組合物誘導T-細胞信號的能力。可通過例如，激酶測定法和電泳遷移率變動測定法測量CD2拮抗劑或本發明的組合物誘導T-細胞信號的能力。
可以在體外和/或體內試驗CD2拮抗劑，尤其MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段，和本發明的組合物調節T細胞增殖的能力。例如，通過例如，3H-胸苷摻入、錐蟲藍細胞計數，和熒光激活細胞分選術(FACS)測定CD2拮抗劑或本發明的組合物調節T細胞增殖的能力。
可以在體外和/或體內試驗CD2拮抗劑，尤其MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段，和本發明的組合物誘導細胞裂解的能力。例如，通過例如，51Cr-釋放測定法可以評估CD2拮抗劑或本發明的組合物誘導細胞裂解的能力。
可以在體外和/或體內試驗CD2拮抗劑，尤其MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段，和本發明的組合物介導外周血T-細胞耗盡和/或NK細胞耗盡的能力。例如，通過例如，用流式細胞術測量T-細胞數可以評估MEDI-507或本發明的組合物介導外周血T-細胞耗盡和/或NK細胞耗盡的能力。
可以以各種方法表征CD2拮抗劑(例如，結合分子)。具體地，可以分析CD2結合分子免疫特異地結合CD2多肽的能力。這種測定法可以在溶液(例如，Houghten，1992，Bio/Techniques 13412-421)中、珠子上(Lam，1991，Nature 35482-84)、細菌上(美國專利號5,223,409)、孢子上(美國專利號5,571,698；5,403,484；和5,223,409)、質粒上(Cull等人，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 891865-1869)或噬菌體上(Scott和Smith，1990，Science 249386-390；Devlin，1990，Science 249404-406；Cwirla等人，1990，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 876378-6382；和Felici，1991，J.Mol.Biol.222301-310)實施(這些文獻的每一篇都在此處被完整并入作為參考)。可以測定已經被鑒定免疫特異地結合CD2多肽的CD2結合分子對CD2多肽的特異性和親和性。
通過本領域中公知的任一種方法可以分析CD2結合分子對CD2多肽的免疫特異結合和與其他多肽的交叉反應性。可用于分析免疫特異結合和交叉反應性的免疫測定法包括，但不限于，競爭和非競爭測定系統，它們使用如蛋白質印跡、放射免疫測定法、ELISA(酶聯免疫吸附測定法)、“三明治”免疫測定法、免疫沉淀測定法、沉淀素反應、凝膠擴散沉淀素反應、免疫擴散測定法、凝集測定法、補體-固定測定法、免疫放射分析、熒光免疫測定、蛋白質A免疫測定，等等。這些測定法是常規的和本領域中熟知的(見，例如，Ausubel等人，編者，1994，Current Protocols in Molecular Biology，卷1，John Wiley& sons，Inc.，New York，其在此處被完整并入作為參考)。下面簡要描述示例性免疫測定(但是不作為限制)。
免疫沉淀方案通常包括將細胞群體在裂解緩沖液中裂解，該裂解緩沖液為例如RIPA緩沖液(1％NP-40或Triton X-100，1％脫氧膽酸鈉，0.1％SDS，0.15M NaCl，0.01M磷酸鈉(pH 7.2)，1％Trasylol)，其補加蛋白質磷酸酶和/或蛋白酶抑制劑(例如，EDTA、PMSF、抑酶肽、釩酸鈉)，然后將目標CD2結合分子加入細胞裂解液，40℃下孵育一定時間(例如，1到4小時)，將蛋白質A和/或蛋白質G瓊脂糖珠子加到細胞裂解物，在40℃孵育1小時或更長時間，在裂解緩沖液中洗滌珠子并將珠子重懸在SDS/樣品緩沖液中。通過例如，蛋白質印跡分析可以評估目標CD2結合分子免疫沉淀特定抗原的能力。本領域技術人員將知道一些參數，可以修改這些參數以增加CD2結合分子與CD2多肽的結合并降低背景(例如，用瓊脂糖珠子預-清除細胞裂解物)。關于免疫沉淀方案的進一步討論，見例如，Ausubel等人，編者，1994，Current Protocols in Molecular Biology，Vol.1，John Wiley &Sons，Inc.，New York的10.16.1節。
蛋白質印跡分析通常包括制備蛋白質樣品，蛋白質樣品在聚丙烯酰胺凝膠中電泳(例如，8-20％SDS-PAGE，取決于抗原的分子量)，將蛋白質樣品從聚丙烯酰胺凝膠轉移到膜如硝酸纖維素、PVDF或尼龍膜，將膜在封閉液(含有3％BSA或無脂奶的PBS)中封閉，在洗滌緩沖液(例如，PBS-Tween 20)中洗滌膜，將膜與在封閉緩沖液中稀釋的目標CD2結合分子(例如，目標抗體)孵育，在洗滌緩沖液中洗膜，將膜與在封閉緩沖液中稀釋的綴合酶底物(例如，辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶)或放射性分子(例如，32P或125I)的抗體(其識別CD2結合分子)孵育，并檢測CD2多肽的存在。本領域技術人員將了解一些參數，可以修改這些參數以增加所檢測的信號比并降低背景噪音。關于蛋白質印跡方案的進一步討論，見，例如Ausubel等人，編者，1994，CurrentProtocols in Molecular Biology，Vol.1，John Wiley & Sons，Inc.，New York的10.8.1節。
ELISAs包括制備CD2多肽，用CD2多肽包被96孔微量滴定板的孔，將綴合可檢測分子如酶底物(例如，辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶)的目標CD2結合分子加入孔中并孵育一定時間，檢測CD2多肽的存在。在ELISAs中，目標CD2結合分子不必一定綴合到可檢測化合物；而是，可以向孔中加入綴合可檢測分子的抗體(其識別目標CD2結合分子)。此外，代替用CD2多肽包被孔的是可將CD2結合分子包被孔。在該情況中，CD2多肽加入被包被的孔后，可以將綴合可檢測化合物的抗體加入孔中。本領域技術人員將明白一些參數，可以修改這些參數以增強所檢測的信號以及本領域中公知的ELISAs的其他變通方案。關于ELISAs的進一步討論見，例如，Ausubel等人，編者，1994，CurrentProtocols in Molecular Biology，Vol.1，John Wiley & Sons，Inc.，New York的11.2.1節。
通過競爭性結合測定法可確定CD2結合分子與CD2多肽的結合親和性和CD2結合分子-CD2多肽相互作用的離解率(off-rate)。競爭性結合測定法的一個實例是放射免疫測定，其包括在增量未標記的CD2多肽的存在下將標記的CD2多肽(例如，3H或125I)與目標CD2結合分子孵育，并檢測結合到標記的CD2多肽的CD2結合分子。可以通過斯卡查德圖分析從數據確定CD2結合分子與CD2多肽的親和性和結合分開率。用放射免疫測定還可以確定與另一CD2結合分子的競爭。在該情況下，在增量第二種未標記的CD2結合分子的存在下將CD2多肽與綴合標記化合物(例如，3H或125I)的CD2結合分子孵育。
在優選的實施方案中，用BIAcore動力學分析確定CD2結合分子與CD2多肽的結合離解和離解率。BIAcore動力學分析包括分析來自芯片的CD2多肽與芯片表面上固定的CD2結合分子的結合和解離。
在另一實施方案中，CD2結合分子獨特型-特異的單克隆抗體可用于檢測結合到例如，T和NK細胞上CD2受體的CD2結合分子，并且可用第二抗體試劑檢測細胞上的單克隆抗體。在特定實施方案中，MEDI-507獨特型-特異的單克隆抗體MAb5e8d可用于檢測結合到T和NK細胞上CD2受體的MEDI-507，并且可用第二抗體試劑——綴合藻紅蛋白的山羊抗小鼠IgG(GAM-IgG-PE)檢測細胞上的MAb 5e8d。MAbTS2-18識別CD2，但是不與MEDI-507競爭，MAb TS2-18可用于定量T和NK細胞上總CD2。作為實例，但無限制，將MEDI-507施用之前和之后從受試者收集的全血的等分試樣在96孔板中與MAb TS2-18、無關的小鼠MAb、或MAb 5e8d混合。室溫下孵育后，紅細胞(RBCs)被裂解并通過洗滌從反應液除去裂解的RBCs。然后將樣品與GAM-IgG-PE孵育。洗滌除去未結合的第二抗體后，將樣品重懸在FACS緩沖液，福爾馬林中固定，并進行FACS分析。數據輸出可記錄為平均通道熒光單位(MCF)。可以用公式[(平均實驗的MCF-平均IgG對照MCF)/(平均CD2水平對照MCF-平均IgG對照MCF)]×100計算CD2受體occumpany。
通過例如用于確定細胞培養物或實驗動物中LD50(50％群體的致死劑量)和ED50(50％群體中治療有效量)的標準方法可以確定本發明的治療和/或預防方案的毒性和效能。毒性和治療效果制劑的劑量比是治療指標并且其可表達為比值LD50/ED50。優選表現出較大治療指標的預防和/或治療劑。盡管可以使用表現出毒副作用的預防和/或治療劑，但是應該注意設計的遞送系統將這種試劑靶向受侵襲的組織部位以使對未受感染的細胞的潛在危害最小，從而減小副作用。
從細胞培養測定法和動物研究得到的數據可用于配制用于人的預防和/或治療劑的一系列劑量。這些劑的劑量優選位于循環濃度范圍內，該濃度范圍包括幾乎沒有或沒有毒性的ED50。可以根據所用的劑型和所采用的施用途徑在該范圍內改變劑量。對于用于本發明的任一試劑，可最初從細胞培養測定估計治療有效量。可以配制動物模型中的劑量以實現循環血漿濃度范圍，其包括如在細胞培養物中確定的IC50(即，實現癥狀的半-最大抑制的受試化合物的濃度)。可以利用該信息更準確地確定在人中有用的劑量。通過例如，高效液相層析測量血漿中的水平。
本發明的藥物組合物或預防或治療劑的一些方面在人體中使用前優選在體外、在細胞培養系統中，和在動物模式生物，如嚙齒類動物模式系統中試驗所希望的治療活性。例如，可用于確定本發明的特定藥物組合物效果的測定法包括細胞培養測定法，其中患者組織樣品在培養基中生長，并暴露于或接觸本發明的藥物組合物，然后觀察該組合物對組織樣品的影響。可從患者活檢得到組織樣品。該試驗允許鑒定對每個個體患者治療上最有效的預防或治療劑。在各種特定實施方案中，可以用癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤相關的細胞類型的代表性細胞(例如，T細胞)實施體外測定以確定本發明的藥物組合物對這些細胞類型是否具有所希望的效果。
備選地，可以用腫瘤或惡性細胞系(例如，Jurkat)篩選治療或預防劑，而代替培養來自患者的細胞。本領域中許多標準測定法可用于評估這些細胞的存活和/或生長；例如，通過測量3H-胸苷摻入、通過直接細胞計數、通過檢測公知基因如原癌基因(例如，myc)或細胞周期標記物的轉錄活性的變化可以測定細胞增殖；通過錐蟲藍染色可以評估細胞存活力。基于形態等的改變可以通過目視評估分化。
用于預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的治療或預防劑在人體中試驗前可以并且優選在適宜的動物模型系統中試驗。可用作模型的動物包括，但不限于，大鼠、小鼠、雞、奶牛、猴、兔、倉鼠等。本領域中公知并且廣泛用于癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤的適宜的動物模型可用于檢驗該治療和/或預防劑的效能和/或毒性。可用于檢驗該治療和/或預防劑的效能和/或毒性的適宜的動物模型的實例包括，但不限于，長有腫瘤或者用惡性T-細胞(優選人惡性T-細胞)注射的人CD2轉基因小鼠、長有腫瘤或者用惡性T-細胞(優選人惡性T-細胞)注射的重度聯合免疫缺損(SCID)小鼠、長有腫瘤或者用惡性T-細胞(例如，MET-1白血病細胞)注射的非肥胖的糖尿病(NOD)/SCID小鼠。
此外，本領域中技術人員公知的任一測定法都可用于評價用于預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的此處公開的組合療法的預防和/或治療效用。
5.9產生抗體的方法通過本領域中關于抗體合成的任一種公知的方法，尤其通過化學合成或者優選通過重組表達技術可以產生免疫特異地結合抗原的抗體。
通過本領域中熟知的各種方法可以產生對抗原免疫特異的多克隆抗體。例如，人抗原可施用于各種宿主動物(包括但不限于，兔、小鼠、大鼠等)以誘導產生含有對人抗原特異的多克隆抗體。根據宿主類型，可以用各種佐劑增強免疫應答，這些佐劑包括但不限于，弗氏佐劑(完全和不完全)、礦物凝膠如氫氧化鋁、表面活性物質如溶血卵磷脂、pluronic多聚醇、聚陰離子、肽、油乳劑、匙孔血藍蛋白、二硝基苯酚，和潛在有用的人佐劑如BCG(bacille Calmette-Guerin)和小棒狀桿菌(corynebacterium parvum)。這些佐劑也是本領域中公知的。
用本領域中公知的各種技術可以制備單克隆抗體，包括使用雜交瘤、重組和噬菌體展示技術，或者它們的組合。例如，用本領域中公知的并且在例如，Harlow等人，AntibodiesA Laboratory Manual，(Cold Spring Harbor Laboratory Press，第二版1988)；Hammerling，等人，Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681(Elsevier，N.Y.，1981)(所述參考文獻被完整并入作為參考)中教導的雜交瘤技術可以產生單克隆抗體。如此處所用的術語“單克隆抗體”被局限于通過雜交瘤技術產生的抗體。術語“單克隆抗體”指來自單一克隆的抗體，該克隆包括真核、原核或噬菌體克隆，并且不是其所產生的方法。
用雜交瘤技術產生和篩選特定抗體的方法是本領域中常規和熟知的。簡言之，可以用非-鼠抗原免疫小鼠并且一旦檢測到免疫應答，例如，在小鼠血清中檢測到對該抗原特異的抗體，就收獲小鼠脾臟并分離脾細胞。然后通過熟知的技術將脾細胞與任一適宜的骨髓瘤細胞，例如，來自可從ATCC得到的細胞系SP20的細胞融合。通過有限稀釋選擇和克隆雜交瘤。然后通過本領域中公知的方法測定雜交瘤以得到分泌能夠結合本發明多肽的抗體。通過用陽性雜交瘤克隆免疫小鼠可以產生通常含有高水平抗體的腹水。
因此，本發明提供了產生單克隆抗體的方法以及通過該方法產生的抗體，該方法包括培養分泌本發明抗體的雜交瘤細胞其中，優選地，通過將從用非-鼠抗原免疫的小鼠分離的脾細胞與骨髓瘤細胞融合，然后從所得融合物篩選雜交瘤以得到分泌能夠結合該抗原的抗體的雜交瘤克隆。
通過本領域技術人員公知的任一種技術可以產生特異識別特定表位的抗體片段。例如，用酶如木瓜蛋白酶(以產生Fab片段)或胃蛋白酶(以產生F(ab’)2片段)對免疫球蛋白分子實施蛋白水解切割可以產生Fab和F(ab’)2片段。F(ab’)2片段片段含有可變區、輕鏈恒定區和CH1區以及重鏈CH1結構域。此外，用本領域中公知的各種噬菌體展示方法也可以產生本發明的抗體。
在噬菌體展示方法中，功能抗體結構域被展示在噬菌體顆粒表面上，該噬菌體顆粒攜帶編碼功能抗體結構域的多核苷酸序列。具體地，從動物cDNA文庫(例如，受感染組織的人或鼠cDNA文庫)擴增編碼VH和VL結構域的DNA序列。通過PCR將編碼VH和VL結構域的DNA用scFv接頭重組連接在一起并克隆到噬菌粒中。該載體在大腸桿菌中電穿孔并用輔助噬菌體感染大腸桿菌。用于這些方法的噬菌體通常是絲狀噬菌體，包括fd和M13并且VH和VL結構域通常重組地融合到噬菌體基因III或基因VIII。用抗原，例如，使用標記抗原或者結合成捕捉到固體表面或珠子的抗原可以選擇或鑒定表達抗原結合結構域的噬菌體，該抗原結合結構域與特定抗原結合。可用于產生本發明抗體的噬菌體展示方法的實例包括在Brinkman等人，1995，J.Immunol.Methods 18241-50；Ames等人，1995，J.Immunol.Methods 184177-186；Kettleborough等人，1994，Eur.J.Immunol.24952-958；Persic等人，1997，Gene 1879-18；Burton等人，1994，Advancesin Immunology 57191-280；PCT申請號PCT/GB911001134；國際公開號WO 90/02809、WO 91/10737、WO 92/01047、WO 92/18619、WO93/11236、WO 95/15982、WO 95/20401，和WO97/13844；和美國專利號5,698,426、5,223,409、5,403,484、5,580,717、5,427,908、5,750,753、5,821,047、5,571,698、5,427,908、5,516,637、5,780,225、5,658,727、5,733,743和5,969,108中公開的，這些文獻的每一篇都被完整并入參考文獻。
如在上面參考文獻中討論的，噬菌體選擇后，可以從噬菌體分離抗體編碼區并將其用于產生完整抗體，包括人抗體，或者任何其他希望的抗原結合片段，并在任一適宜的宿主中表達，這些宿主包括哺乳動物細胞、昆蟲細胞、植物細胞、酵母和細菌，例如，如下面描述的。使用本領域中公知的方法如國際公開號WO 92/22324；Mullinax等人，1992，Bio Techniques 12(6)864-869；Sawai等人，1995，AJRI 3426-34；和Better等人1988，Science 2401041-1043(所處參考文獻被完整并入作為參考)中公開的方法也可以利用重組產生Fab、Fab’和F(ab’)2片段的技術。
為了產生完整抗體，可以用PCR引物(包括VH或VL核苷酸序列、限制性位點，和保護該限制性位點的側翼序列)擴增scFv克隆中的VH或VL序列。利用本領域中技術人員公知的克隆技術，可以將PCR擴增的VH結構域克隆到表達VH恒定區，例如人γ4恒定區的載體中，并且PCR擴增的VL結構域可被克隆到表達VL恒定區，例如人κ或λ恒定區的載體中。優選地，表達VH或VL結構域的載體含有EF-1α啟動子、分泌信號、可變結構域的克隆位點、恒定結構域，和選擇標記如新霉素。使用本領域中技術人員公知的技術，也可以將VH和VL結構域克隆到表達必要恒定區的載體。然后將重鏈轉化載體和輕鏈轉化載體共轉染到細胞系以產生穩定的或者瞬時的細胞系，該細胞系表達全長抗體，例如，IgG。
對于一些用途，包括抗體在人和體外檢測測定中的用途，優選使用人或嵌合抗體。尤其希望完全的人抗體用于人受試者的治療性治療。可以通過本領域中公知的各種方法使用從人免疫球蛋白序列得到的抗體文庫可以產生人抗體，這些方法包括上述噬菌體展示方法。也見美國專利號4,444,887和4,716,111；和國際公開號WO 98/46645、WO 98/50433、WO 98/24893、WO98/16654、WO 96/34096、WO 96/33735、和WO 91/10741；這些文獻的每一篇都在此處被完整并入作為參考。
也可以用轉基因小鼠產生人抗體，該轉基因小鼠不能表達功能內源免疫球蛋白，但是能夠表達人免疫球蛋白基因。例如，可以將人重鏈和輕鏈免疫球蛋白基因復合體隨機或通過同源重組導入小鼠胚胎干細胞。備選地，除了人重鏈和輕鏈基因，還可將人可變區、恒定區，和多樣性區導入小鼠胚胎干細胞中。通過同源重組導入人免疫球蛋白基因座可以使小鼠重鏈和輕鏈免疫球蛋白基因單獨或同時失去功能。具體地，JH區的純合缺失防止內源抗體產生。將修飾的胚胎干細胞擴大并微注射到胚泡中以產生嵌合小鼠。然后繁殖嵌合小鼠以產生純合后代，該純合后代表達人抗體。用所選抗原，例如，本發明多肽的所有或部分以正常方式免疫轉基因小鼠。用常規雜交瘤技術可以從免疫的轉基因小鼠得到針對該抗原的單克隆抗體。轉基因小鼠所含有的人免疫球蛋白轉基因在B細胞分化期間重排，并隨后經歷類別轉換和體細胞突變。從而，使用這種技術，可能產生可用于治療的IgG、IgA、IgM和IgE抗體。關于產生人抗體的該技術的綜述，見Lonberg和Huszar(1995，Int.Rev.Immunol.1365-93)。用于產生人抗體和人單克隆抗體的該技術的詳細討論和產生這些抗體的方案見，例如，國際公開號WO 98/24893、WO 96/34096、和WO 96/33735；和美國專利號5,413,923、5,625,126、5,633,425、5,569,825、5,661,016、5,545,806、5,814,318和5,939,598，這些文獻都在此處被完整并入作為參考。此外，公司如Abgenix，Inc.(Freemont，CA)和Genpharm(San Jose，CA)可以使用類似于上面描述的技術提供針對所選抗原的人抗體。
嵌合抗體是一種分子，該分子中抗體的不同部分來自不同的免疫球蛋白。產生嵌合抗體的方法是本領域中公知的。見，例如，Morrison，1985，Science 2291202；Oi等人，1986，BioTechniques 4214；Gillies等人，1989，J.Immunol.Methods 125191-202；和美國專利號5,807,715、4,816,567、4,816,397和6,331,415，它們在此處被完整并入作為參考。
人源化抗體是一種抗體或其變體或其片段，該抗體或其變體或其片段能夠結合預定抗原并且含有基本上具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的框架區和基本上具有非-人免疫球蛋白的氨基酸序列的CDR。人源化抗體基本上含有所有的至少一個，通常兩個可變結構域(Fab、Fab’、F(ab’)2、Fabc、Fv)，其中所有或基本上所有CDR區都相應于非-人免疫球蛋白(即供體抗體)的CDR區并且所有或基本上所有框架區都是人免疫球蛋白共有序列的框架區。優選地，人源化抗體還含有通常人免疫球蛋白的免疫球蛋白恒定區(Fc)的至少一部分。通常，該抗體將含有輕鏈以及至少重鏈的可變結構域。該抗體還可以包括重鏈的CH1、鉸鏈、CH2、CH3和CH4區域。人源化抗體可選自任一類別的免疫球蛋白，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE，和任一同種型，包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。通常，恒定區是互補固定恒定結構域，其中希望該人源化抗體表現出細胞毒性活性，并且該類別是IgG1。但不希望這種細胞毒性時，恒定結構域可以是IgG2類別的。人源化抗體可含有來自一種以上類別或同種型的序列，并且選擇特定恒定結構域以優化所希望的效應子功能是本領域普通技術人員知識范圍內的。人源化抗體的框架和CDR區不必精確相應于親本序列，例如，通過至少一個殘基的置換、插入或缺失可以誘變供體CDR或共有框架，從而在該位點的CDR或框架不相應于共有的或輸入的抗體。然而，這些突變將不是廣泛的。通常，至少75％的人源化抗體殘基將相應于親本FR和CDR序列的殘基，更通常90％，最優選地大于95％。用本領域中公知的各種技術可以產生人源化抗體，這些技術包括，但不限于，CDR-嫁接(歐洲專利號EP239,400；國際公開號WO 91/09967；和美國專利號5,225,539、5,530,101和5,585,089)、飾面或表面重塑(res urfacing)(歐洲專利號EP 592,106和EP 519,596；Padlan，1991，MolecularImmunology 28(4/5)489-498；Studnicka等人，1994，ProteinEngineering 7(6)805-814；和Roguska等人，1994，PNAS 91969-973)、鏈改組(美國專利號5,565,332)，和在例如，美國專利號6,407,213，美國專利號5,766,886，國際公開號WO 93/17105，Tan等人，J.Immunol.1691119-1125(2002)，Caldas等人，ProteinEng.13(5)353-360(2000)，Morea等人，Methods 20(3)267-279(2000)，Baca等人，J.Biol.Chem.272(16)10678-10684(1997)，Roguska等人，Protein Eng.9(10)895-904(1996)，Couto等人，Cancer Res.55(23 Supp)5973s-5977s(1995)，Couto等人，Cancer Res.55(8)1717-1722(1995)，Sandhu JS，Gene150(2)409-410(1994)，和Pedersen等人，J.Mol.Biol.235(3)959-973(1994)中公開的技術。通常，框架區中的框架殘基將被來自CDR供體抗體的相應殘基置換以改變，優選改善抗原結合。通過本領域中熟知的方法鑒定這些框架置換，例如，通過CDR和框架殘基的相互作用建模鑒定對抗原結合重要的框架殘基，通過序列比較鑒定特定位置的不尋常框架殘基(見，例如，Queen等人，美國專利號5,585,089；和Riechmann等人，1988，Nature 332323，它們在此處被完整并入作為參考)。
通過本領域中熟知的方法可以產生單結構域抗體，例如，缺少輕鏈的抗體。見Riechmann等人，1999，J.Immuno.23125-38；Nuttall等人，2000，Curr.Pharm.Biotechnol.1(3)253-263；Muylderman，2001，J.Biotechnol.74(4)277302；美國專利號6,005,079；和國際公開號WO 94/04678，WO 94/25591，和WO01/44301，這些文獻的每一篇都在此處被完整并入作為參考。
此外，使用本領域技術人員熟知的技術，可以將免疫特異結合抗原(例如，CD2多肽)的抗體再用于產生“模擬”抗原的抗-獨特型抗體。(見例如，Greenspan & Bona，1989，FASEB J.7(5)437-444；和Nissinoff，1991，J.Immunol.147(8)2429-2438)。
5.9.1編碼抗體的多核苷酸序列本發明提供了含有編碼抗體或其片段的核苷酸序列多核苷酸，該抗體或其片段免疫特異地結合抗原(例如，CD2多肽)。本發明還包括在高嚴格、中等或較低嚴格雜交條件，例如，如前面定義的雜交條件下，與編碼本發明的抗體的多核苷酸雜交的多核苷酸。
通過本領域中公知的任一技術可以得到這些多核苷酸，并且確定這些多核苷酸的核苷酸序列。可以例如從文獻或者數據庫如GenBank得到對CD2多肽免疫特異的抗體的核苷酸序列。因為LoCD2a/BTI-322、LO-CD2b和MEDI-507的氨基酸序列是公知的，所以可以用本領域中公知的方法確定編碼這些抗體的核苷酸序列，即，公知編碼特定氨基酸的核苷酸密碼子以如此方式裝配以產生編碼該多肽的核酸。可以從化學合成的寡核苷酸裝配編碼該抗體的這種多核苷酸(例如，如Kutmeier等人，1994，BioTechniques 17242中描述的)，簡言之，其包括合成含有編碼該抗體的序列的部分的重疊寡核苷酸的合成，使那些寡核苷酸退火并連接，然后通過PCR擴增所連接的寡核苷酸。
備選地，可以從來自適宜來源的核苷酸產生編碼抗體的多核苷酸。如果不能得到含有編碼特定抗體的核酸的克隆，但是該抗體分子的序列是已知的，那么可通過化學合成或者從適宜的來源(例如，抗體cDNA文庫，或者從表達該抗體的任何組織或細胞，如選擇表達本發明抗體的雜交瘤細胞產生的cDNA文庫或者分離的核酸，優選poly A+RNA)使用可以與該序列的3’和5’末端雜交的合成引物通過PCR擴增，或者通過用對特定基因序列特異的寡核苷酸探針克隆以從例如編碼該抗體的cDNA文庫鑒定cDNA克隆得到編碼該免疫球蛋白的核酸。通過PCR擴增產生的核酸可以通過本領域公知的任何方法克隆到可復制克隆載體中。
一旦確定了抗體的核苷酸序列，就可以用本領域中熟知的操作抗體的核苷酸序列的方法例如，重組DNA技術、定點誘變、PCR，等(見，例如，Sambrook等人，1990，Molecular Cloning，A LaboratoryManual，第二版，Cold Spring Harbor Laboratory，Cold SpringHarbor，NY和Ausubel等人，編者，1998，Current Protocols inMolecular Biology，John Wiley & Sons，NY中描述的技術，這兩個文獻都被完整并入作為參考)操作該抗體的核苷酸序列以產生具有不同氨基酸序列的抗體，例如，產生氨基酸置換、缺失和/或插入。
在特定實施方案中，用常規重組DNA技術將一個或多個CDRs插入框架區中。框架區可以是天然發生的或共有框架區，優選人框架區(關于人框架區列表，見，例如，Chothia等人，1998，J.Mol.Biol.278457-479)。優選地，通過框架區和CDRs組合產生的多核苷酸編碼特異結合特定抗原(例如，CD2多肽)的抗體。優選地，如前面討論的，在框架區內可以進行一個或多個氨基酸置換，并且優選地，該氨基酸置換提高了抗體與其抗原的結合。此外，這些方法可用于對參與鏈內二硫鍵的一個或多個可變區半胱氨酸殘基實施氨基酸置換或缺失以產生缺少一個或多個鏈內二硫鍵的抗體分子。多核苷酸的其他改變被本發明包括并且在本領域技術范圍內。
5.9.2抗體的重組表達免疫特異地結合抗原的抗體的重組表達需要構建含有編碼該抗體的多核苷酸的表達載體。一旦得到編碼本發明的抗體分子的多核苷酸，就可通過重組DNA技術使用本領域中公知的技術制備產生抗體分子的載體。見，例如，美國專利號6,331,415，其在此處被完整并入作為參考。因而，此處描述了通過表達含有抗體編碼核苷酸序列的多核苷酸制備蛋白質的方法。可以用本領域中技術人員熟知的方法構建含有抗體編碼序列和適宜的轉錄和翻譯控制信號的表達載體。這些方法包括，例如，體外重組DNA技術、合成技術，和體內基因重組。從而，本發明提供了可復制的載體，其含有編碼本發明的抗體分子、抗體的重鏈或輕鏈、抗體的重鏈或輕鏈可變結構域或其部分，或者重鏈或輕鏈CDR的核苷酸序列，該核苷酸序列可操作地連接啟動子。這些載體可包括編碼該抗體分子的恒定區的核苷酸序列(見，例如，國際公開WO 86/05807；國際公開號WO 89/01036；和美國專利號5,122,464)，并且該抗體的可變結構域可被克隆到這種載體以表達完整重鏈、完整輕鏈或完整重鏈和完整輕鏈兩者。
通過常規技術將表達載體轉移到宿主細胞，然后通過常規技術培養轉染的細胞以產生本發明的抗體。從而，本發明包括宿主細胞，其含有編碼本發明的抗體或其片段、該抗體的重鏈或輕鏈、該抗體的部分、或本發明的單鏈抗體的多核苷酸，該多核苷酸可操作地連接異源啟動子。在關于雙鏈抗體表達的優選實施方案中，編碼重鏈和輕鏈的載體可以在宿主細胞中共表達以表達完整免疫球蛋白分子，如下詳述。
各種宿主表達載體系統可用于表達本發明的抗體分子(見，例如，美國專利號5,807,715)。這些宿主表達系統不僅代表載體，通過該載體可以產生并隨后純化目標編碼序列，而且還代表細胞，其當被適宜的核苷酸編碼序列轉化或轉染時，原位表達本發明的抗體分子。這些宿主表達系統包括但不限于微生物，如用含有抗體編碼序列的重組噬菌體DNA、質粒DNA或粘粒DNA表達載體轉化的細菌(例如，大腸桿菌(E.coli)和枯草芽孢桿菌(B.subtilis))；用含有抗體編碼序列的重組病毒表達載體(例如，桿狀病毒)感染的昆蟲細胞；用含有抗體編碼序列的重組病毒表達載體(例如，花椰菜花葉病毒花葉病毒CaMV；或煙草花葉病毒TMV)感染或者用含有抗體編碼序列的重組質粒表達載體(例如，Ti質粒)轉化的植物細胞系統；或者帶有來自哺乳動物細胞基因組的啟動子(例如，金屬硫蛋白啟動子)或來自哺乳動物病毒(例如，腺病毒晚啟動子；牛痘病毒7.5K啟動子)的重組表達構建體的哺乳動物系統(例如，COS、CHO、BHK、293、NSO和3T3細胞)。優選地，細菌細胞如大腸桿菌，更優選地，真核細胞，特別用于表達完整重組抗體分子的真核細胞被用于表達重組抗體分子。例如，中國倉鼠卵巢細胞(CHO)與一種載體如來自人巨細胞病毒的主要中早基因啟動子元件聯合是抗體的有效表達系統(Foecking等人，1986，Gene 45101；Cockett等人，1990，Bio/Technology 82)。在特定實施方案中，組成性啟動子、可誘導的啟動子或組織特異的啟動子調節編碼免疫特異地結合一種或多種抗原的抗體的核苷酸序列的表達。
在細菌系統中，根據所要表達的抗體分子的用途可以有利地選擇許多表達載體。例如，當將產生大量這種蛋白質以生產抗體分子的藥物組合物時，希望載體指導融合蛋白產物的高水平表達，其中可容易地純化融合蛋白產物。這些載體包括，但不限于，大腸桿菌表達載體pUR278(Ruther等人，1983，EMBO 121791)，其中抗體編碼序列可以單獨地連接到載體并與Lac Z編碼區處于同一讀框內從而產生融合蛋白；pIN載體(Inouye & Inouye，1985，Nucleic Acids Res.133101-3109；Van Heeke & Schuster，1989，J.Biol.Chem.245503-5509)；等等。pGEX載體也可用于表達外來蛋白，該外來蛋白作為與谷胱甘肽5-轉移酶(GST)的融合蛋白。通常，這些融合蛋白是可溶的并且可從裂解的細胞容易地純化，純化方法是將融合蛋白吸附并結合到基質谷胱甘肽瓊脂糖珠，然后在游離谷胱甘肽存在下洗脫。設計pGEX載體以包括凝血酶或因子Xa蛋白酶切割位點從而所克隆的靶基因可以從GST部分釋放。
在昆蟲系統中，苜蓿銀紋夜蛾核型多腳體病毒(AcNPV)被用作載體以表達外來基因。病毒在草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)細胞中生長。可將抗體編碼序列單獨克隆到病毒的非必需區(例如，多角體蛋白基因)并置于AcNPV啟動子(例如多角體蛋白啟動子)的控制下。
在哺乳動物宿主細胞中，可以利用許多基于病毒的表達系統。當用腺病毒作為表達載體時，可將目標抗體編碼序列連接到腺病毒轉錄/翻譯控制復合體，例如，晚啟動子和三聯前導序列。然后通過體外或體內重組將該嵌合基因插入到腺病毒基因組中。插入病毒基因組的非必需區(例如，區域E1或E3)將得到重組病毒，該病毒是可存活的并且能夠在受感染的宿主中表達抗體分子(例如，見Logan & Shenk，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 8 1355-359)。為了有效翻譯所插入的抗體編碼序列可能還需要特定啟動信號。這些信號包括ATG起始密碼子和相鄰序列。此外，起始密碼子必須與所希望的編碼序列的讀框同相以確保完整插入序列的翻譯。這些外源翻譯控制信號和起始密碼子可以是各種來源的(天然和合成的)。通過包括適宜的轉錄增強元件、轉錄終止子等可以提高表達效率(見，例如，Bittner等人，1987，Methods in Enzymol.15351-544)。
此外，可以選擇宿主細胞株系，其調節插入序列的表達，或者以所希望的特異方式修飾和加工基因產物。蛋白質的這些修飾(例如，糖基化)和加工(例如，切割)可能對于蛋白質的功能是重要的。不同宿主細胞的翻譯后加工和蛋白質和基因產物的修飾具有特征性和特定機理。可以選擇適宜的細胞系或宿主細胞以確保所表達的外來蛋白的正確修飾和加工。為此，可以使用真核宿主細胞，其細胞機器可以對初級轉錄產物正確加工、對基因產物正確糖基化和磷酸化。這些哺乳動物宿主細胞包括但不限于CHO，VERY、BHK、Hela、COS、MDCK、293、3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT20和T47D、NS0(不內源產生任何免疫球蛋白鏈的鼠骨髓瘤細胞系)、CRL7030和HsS78Bst細胞。
對于重組蛋白的長期、高產率生產，優選穩定表達。例如，可以將穩定表達抗體分子的細胞系工程化。與其使用含有病毒復制原點的表達載體，不如通過受到適宜的表達控制元件(例如，啟動子、增強子序列、轉錄終止子、多腺苷酸化位點，等)和適宜的選擇標記控制的DNA轉化宿主細胞。導入外來DNA后，可以讓工程化細胞在富集培養基中生長1-2天，然后轉到選擇培養基。重組質粒中的選擇標記賦予對選擇的抗性并使得細胞將質粒穩定整合到它們的染色體并生長而形成轉化灶，該轉化灶反過來又可以被克隆并擴大成細胞系。該方法可有利地用于工程化表達抗體分子的細胞系。這些工程化的細胞系可尤其用于篩選和評價與抗體分子直接或間接相互作用的組合物。
可以使用許多選擇系統，包括但不限于，單純皰疹病毒胸苷激酶(Wigler等人，1977，Cell 11223)、次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉移酶(Szybalska & Szybalski，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA48202)和腺嘌呤磷酸核糖基轉移酶(Lowy等人，1980，Cell 228-17)基因可分別用于tk-、hgprt-或aprt-細胞。此外，抗代謝物抗性可用作下列基因的選擇基礎dhfr，其賦予氨甲蝶呤抗性(Wigler等人，1980，Natl.Acad.Sci.USA 77357；O′Hare等人，1981，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 781527)；gpt，其賦予霉酚酸抗性(Mulligan& Berg，1981，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 782072)；neo，其賦予氨基糖苷G-418抗性(Wu和Wu，1991，Biotherapy 387-95；Tolstoshev，1993，Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32573-596；Mulligan，1993，Science 260926-932；和Morgan和Anderson，1993，Ann.Rev.Biochem.62191-217；5月，1993，TIB TECH 11(5)155-215)；和hygro，其賦予潮霉素抗性(Santerre等人，1984，Gene 30147)。本領域中公知的重組DNA技術的方法可常規地用于選擇所希望的重組克隆，并且這些方法在例如，Ausubel等人(編者)，Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons，NY(1993)；Kriegler，Gene Transfer and Expression，A LaboratoryManual，Stockton Press，NY(1990)；和第12和13章，Dracopoli等人(編者)，Current Protocols in Human Genetics，John Wiley& Sons，NY(1994)；ColberreGarapin等人，1981，J.Mol.Biol.1501中描述，這些文獻在此處被完整并入作為參考。
通過載體擴增可以增加抗體分子的表達水平(綜述，見Bebbington和Hentschel，使用基于基因擴增的載體在哺乳動物細胞中表達克隆的基因，DNA cloning，卷3(Academic Press，New York，1987))。當表達抗體的載體系統中的標記物是可擴增的時候，宿主培養物中存在的抑制劑的水平的增加將增加該標記基因的拷貝數。因為擴增的區域與抗體基因相關聯，所以抗體的產量也將增加(Crouse等人，1983，Mol.Cell.Biol.3257)。
可以用本發明的兩種表達載體共轉染宿主細胞，第一種載體編碼重鏈源自的多肽，第二種載體編碼輕鏈源自的多肽。這兩種載體可以含有相同的選擇標記，其使得重鏈和輕鏈多肽的表達相等。備選地，可以使用單一載體，其編碼并且能夠表達重鏈和輕鏈多肽。在這種情況下，輕鏈應該置于重鏈之前以避免無毒性的重鏈過量(Proudfoot，1986，Nature 32252；和Kohler，1980，Proc.Natl. Acad. Sci.USA 772197)。重鏈和輕鏈的編碼序列可以含有cDNA或基因組DNA。
一旦通過重組表達產生了本發明的抗體分子，就可以通過本領域中任一公知方法純化該抗體，例如，通過層析(例如，離子交換、親和，尤其通過對蛋白質A后的特定抗原的親和，和大小排阻柱層析)、離心、差別溶解性，或用于蛋白質純化的任一其他標準技術純化該抗體。此外，本發明的抗體或其片段可以與此處描述的或本領域中其他公知的異源多肽序列融合以方便純化。
5.10產生多肽和融合蛋白的方法通過標準重組DNA技術或通過蛋白質合成技術，例如，通過使用肽合成儀可以產生多肽和融合蛋白。例如，通過常規技術(包括自動化DNA合成儀)可以合成編碼多肽或融合蛋白的核酸分子。備選地，用錨定引物可以實施基因片段的PCR擴增，該錨定引物引起兩個連續基因片段之間的互補突出端，可隨后將這兩個基因片段退火并再擴增以產生嵌合基因序列(見，例如，Current Protocols in MolecularBiology，-Ausubel等人，編者John Wiley & Sons，1992)。此外，可將編碼生物活性分子的核酸克隆到含有Fc結構域或其片段的表達載體從而該生物活性分子連接到Fc結構域或Fc結構域片段的框內。
將多肽融合或綴合到抗體的恒定區的方法是本領域中公知的。見，例如，美國專利號5,336,603、5,622,929、5,359,046、5,349,053、5,447,851、5,723,125、5,783,181、5,908,626、5,844,095和5,112,946；歐洲專利號EP 307,434；EP 367,166；EP394,827；國際公開號WO 91/06570、WO96/04388、WO 96/22024、WO 97/34631和WO 99/04813；Ashkenazi等人，1991，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 8810535-10539；Traunecker等人，1988，Nature，33184-86；Zheng等人，1995，J.Immunol.1545590-5600；和Vil等人，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 8911337-11341，它們在此處被完整并入作為參考。
可從本領域中技術人員可得到的任何信息得到編碼生物活性分子和Fc結構域或其片段的核苷酸序列(即，從Genbank、文獻或通過常規克隆)。可以將編碼多肽或融合蛋白的核苷酸序列插入到適宜的表達載體，即含有所插入的蛋白-編碼序列的轉錄和翻譯必需的載體。本發明中可利用各種宿主-載體系統以表達蛋白質-編碼序列。這些系統包括但不限于用病毒(例如，牛痘病毒、腺病毒，等)感染的哺乳動物細胞系統；用病毒(例如，桿狀病毒)感染的昆蟲細胞系統；微生物，如含有酵母載體的酵母；或用噬菌體、DNA、質粒DNA或粘粒DNA轉化的細菌。載體的表達元件在它們的長度和特異性上不同。取決于所用的宿主-載體系統，可以使用多種適宜的轉錄和翻譯元件的任一種。
通過本領域中公知的任一啟動子或增強子可以控制多肽或融合蛋白的表達。可用于控制編碼融合蛋白的基因的表達的啟動子包括，但不限于，SV40早啟動子(Bernoist和Chambon，1981，Nature290304-310)、勞氏肉瘤病毒的3’長末端重復中所含的啟動子(Yamamoto，等人，1980，Cell 22787-797)、皰疹病毒胸苷激酶啟動子(Wagner等人，1981，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.781441-1445)、金屬硫蛋白基因的調節序列(Brinster等人1982，Nature 29639-42)、四環素(Tet)啟動子(Gossen等人，1995，Proc.Nat.Acad.Sci.USA 895547-5551)；原核表達載體，如β-內酰胺酶啟動子(Villa-Kamaroff等人，1-978，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.753727-3731)、或tac啟動子(DeBoer等人，1983，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.8021-25；還見″重組細菌的有用蛋白″，Scientific American，1980，24274-94)；含有胭脂氨酸核酶啟動子區的植物表達載體(Herrera-Estrella等人，Nature 303209-213)或花椰菜花葉病毒35S RNA啟動子(Gardner等人，1981，Nucl.Acids Res.92871)、和光合成酶核酮糖二磷酸羧化酶的啟動子(Herrera-Estrella等人，1984，Nature 310115-120)；酵母或其他真菌的啟動子元件，如Gal4啟動子、ADC(乙醇脫氫酶)啟動子、PGK(磷酸甘油激酶)啟動子、堿性磷酸酶啟動子，和下面的動物轉錄控制區，它們表現出組織特異性并已經用于轉基因動物彈性蛋白酶I基因控制區，其在胰腺的腺泡細胞中有活性(Swift等人，1984，Cell38639-646；Ornitz等人，1986，Cold Spring Harbor Symp.Quant.Biol.50399-409；MacDonald，1987，Hepatology 7425-515)；在胰腺β細胞中有活性的胰島素基因控制區(Hanahan，1985，Nature315115-122)；在淋巴細胞中有活性的免疫球蛋白基因控制區(Grosschedl等人，1984，Cell 38647-658；Adames等人，1985，Nature 318533-538；Alexander等人，1987，Mol.Cell.Biol.71436-1444)；在睪丸、乳腺、淋巴和肥大細胞中有活性的小鼠乳腺腫瘤病毒控制區(Leder等人，1986，Cell 45485-495)；在肝臟中有活性的白蛋白基因控制區(Pinkert等人，1987，Genes and Devel.1268-276)；在肝臟中有活性的α-胎蛋白(Krumlauf等人，1985，Mol.Cell.Biol.51639-1648；Hammer等人，1987，Science 23553-58；在肝臟中有活性的α1-抗胰蛋白酶基因控制區(Kelsey等人，1987，Genes和Devel.1161-171)；在骨髓細胞中有活性的β-珠蛋白基因控制區(Mogram等人，1985，Nature 315338-340；Kollias等人，1986，Cell 4689-94)；在腦中的少突膠質細胞中有活性的髓磷脂堿性蛋白基因控制區(Readhead等人，1987，Cell 48703-712)；在骨骼肌中有活性的肌球蛋白輕鏈-2基因控制區(Sani，1985，Nature 314283-286)；在神經元細胞中有活性的腦-來源的親神經因子(BDNF)基因控制區(Tabuchi等人，1998，Biochem.Biophysic.Res.Com.253818-823)；在星形細胞中有活性的膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)啟動子(Gomes等人，1999，Braz J Med Biol Res 32(5)619-631；Morelli等人，1999，Gen.Virol.80571-583)和在下丘腦中有活性的促性腺釋放激素基因控制區(Mason等人，1986，Science 2341372-1378)。
在特定實施方案中，多肽或融合蛋白的表達受到組成性啟動子的調節。在另一實施方案中，多肽或融合蛋白的表達受到可誘導的啟動子的調節。多肽或融合蛋白的表達受到組織特異的啟動子的調節。
在特定實施方案中，所用的載體含有啟動子，其可操作地連接多肽-或融合蛋白編碼核酸、一個或多個復制原點，和任選地，一個和多個可選擇的標記物(例如，抗生素抗性基因)。
在哺乳動物細胞中，可以利用許多基于病毒的表達系統。當用腺病毒作為表達載體時，多肽或融合蛋白編碼序列可以連接到腺病毒轉錄/翻譯控制復合體，例如，晚啟動子和三聯前導序列。然后通過體外或體內重組將該嵌合基因插入到腺病毒基因組中。插入病毒基因組的非必需區(例如，區域E1或E3)將得到重組病毒，該病毒是可存活的并且能夠在受感染的宿主中表達抗體分子(例如，見Logan & Shenk，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81355-359)。為了有效翻譯所插入的融合蛋白編碼序列可能還需要特定啟動信號。這些信號包括ATG起始密碼子和相鄰序列。此外，起始密碼子必須與所希望的編碼序列的讀框同相以確保完整插入序列的翻譯。這些外源翻譯控制信號和起始密碼子可以是各種來源的(天然和合成的)。通過包括適宜的轉錄增強元件、轉錄終止子等可以提高表達效率(見，例如，Bittner等人，1987，Methods in Enzymol.15351-544)。
可通過三種一般方法鑒定含有編碼多肽或融合蛋白的基因插入序列的表達載體(a)核酸雜交，(b)“標記”基因功能的存在或缺乏，和(c)插入序列的表達。在第一種方法中，分別用含有與編碼多肽或融合蛋白的插入基因同源的序列的探針通過核酸雜交可以檢測表達載體中編碼多肽或融合蛋白的基因的存在。在第二種方法中，基于由于載體中編碼多肽或融合蛋白的核苷酸序列的插入導致的某些“標記”基因功能(例如，胸苷激酶活性、抗生素抗性、轉化表型、桿狀病毒中包含體的形成，等)的存在或缺乏可以鑒定和選擇重組載體/宿主系統。例如，如果編碼融合蛋白的核苷酸序列插入到載體的標記基因序列，那么通過標記基因功能的缺乏可以鑒定含有編碼融合蛋白插入序列的基因重組體。在第三種方法種，通過測定重組體表達的基因產物(例如，融合蛋白)可以鑒定重組表達載體。這些測定可以基于，例如，體外測定系統中融合蛋白的物理或功能性質，例如，與抗-生物活性分子抗體的結合。
此外，可以選擇宿主細胞株系，該株系調節所插入序列的表達，或者以所希望的特定方式調節并加工基因產物。存在某些誘導劑時，某些啟動子的表達可以升高；從而，可以控制基因工程化的融合蛋白的表達。此外，不同宿主細胞的翻譯和翻譯后加工和修飾(例如，蛋白質的糖基化、磷酸化)具有特征性和特定機理。可以選擇適宜的細胞系或宿主細胞以確保所表達的外來蛋白的正確修飾和加工。例如，細菌系統中的表達將產生未糖基化產物，酵母中的表達將產生糖基化產物。可以使用真核宿主細胞，其細胞機器可以對初級轉錄產物正確加工、對基因產物正確糖基化和磷酸化。這些哺乳動物宿主細胞包括但不限于CHO，VERY、BHK、Hela、COS、MDCK、293、3T3、W138、NS0，和尤其神經元細胞系如，例如，SK-N-AS、SK-N-FI、SK-N-DZ人成神經細胞瘤(Sugimoto等人，1984，J.Natl.Cancer Inst.7351-57)、SK-N-SH人成神經細胞瘤(Biochim.Biophys.Acta，1982，704450-460)、Daoy人小腦成神經管細胞瘤(He等人，1992，Cancer Res.521144-1148)、DBTRG-05MG成膠質細胞瘤(Kruse等人，1992，InVitro Cell.Dev.Biol.28A609-614)、IMR-32人成神經細胞瘤(Cancer Res.，1970，302110-2118)、1321N1人星形細胞瘤(Proc.Natl Acad.Sci.USA，1977，744816)、MOG-G-CCM人星形細胞瘤(Br.J.Cancer，1984，49269)、U87MG人成膠質細胞瘤-星形細胞瘤(Acta Pathol.Microbiol.Scand.，1968，74465-486)、A172人成膠質細胞瘤(Olopade等人，1992，Cancer Res.522523-2529)、C6大鼠膠質瘤細胞(Benda等人，1968，Science 161370-371)、Neuro-2a小鼠成神經細胞瘤(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1970，65129-136)、NB41A3小鼠成神經細胞瘤(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1962，481184-1190)、SCP綿羊脈絡叢(Bolin等人，1994，J.Virol.Methods 48211-221)、G355-5、PG-4貓正常星形細胞(Haapala等人，1985，J.Virol.53827-833)、Mpf雪貂腦(Trowbridge等人，1982，In Vitro 18952-960)，和正常細胞系，如，例如CTX TNA2大鼠正常皮質腦(Radany等人，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 896467-6471)如，例如，CRL7030和Hs578Bst。此外，不同載體/宿主表達系統可以不同程度地影響加工反應。
對于重組蛋白的長期、高產率生產，優選穩定表達。例如，可以將穩定表達抗體分子的細胞系工程化。與其使用含有病毒復制原點的表達載體，不如通過受到適宜的表達控制元件(例如，啟動子、增強子序列、轉錄終止子、多腺苷酸化位點，等)和適宜的選擇標記控制的DNA轉化宿主細胞。導入外來DNA后，可以讓工程化細胞在富集培養基中生長1-2天，然后轉到選擇培養基。重組質粒中的選擇標記賦予選擇抗性并使得細胞將質粒穩定整合到它們的染色體并生長而形成轉化灶，該轉化灶反過來又可以被克隆并擴大成細胞系。該方法可有利地用于工程化細胞系，該細胞系表達免疫特異地結合CD2多肽的多肽或融合蛋白。這些工程化的細胞系可尤其用于篩選和評價影響免疫特異地結合CD2多肽的多肽或融合蛋白的活性的化合物。
可以使用許多選擇系統，包括但不限于，單純皰疹病毒胸苷激酶(Wigler等人，1977，Cell 11223)、次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉移酶(Szybalska & Szybalski，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA48202)和腺嘌呤磷酸核糖基轉移酶(Lowy等人，1980，Cell 228-17)基因可分別用于tk-、hgprt-或aprt-細胞。此外，抗代謝物抗性可用作下列基因的選擇基礎dhfr，其賦予氨甲蝶呤抗性(Wigler等人，1980，Natl.Acad.Sci.USA 77357；O′Hare等人，1981，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 781527)；gpt，其賦予霉酚酸抗性(Mulligan& Berg，1981，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 782072)；neo，其賦予氨基糖苷G-418抗性(Colberre-Garapin，等人，1981，J.Mol.Biol.1501)；和hygro，其賦予潮霉素抗性(Santerre等人，1984，Gene 30147)。
一旦通過重組表達產生了本發明的多肽或融合蛋白，就可以通過本領域中任一公知方法純化該抗體，例如，通過層析(例如，離子交換、親和，尤其通過對蛋白質A后的特定抗原的親和，和大小排阻柱層析)、離心、差別溶解性，或用于蛋白質純化的任一其他標準技術純化該抗體。
試劑盒本發明提供了藥物包裝或藥盒，其含有一個或多個裝有CD2拮抗劑的容器，CD2拮抗劑的量可有效預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。在優選的實施方案中，本發明提供了藥物包裝或藥盒，其含有一個或多個裝有MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段的容器，MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段的量可有效預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。本發明還提供了含有裝有一種或多種CD2拮抗劑和一種或多種其他預防或治療劑的一個或多個容器的藥物包裝或藥盒，一種或多種CD2拮抗劑和一種或多種其他預防或治療劑的量可有效預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。本發明還提供了含有裝有本發明的藥物組合物的一種或多種組分的一個或多個容器的藥物包裝或藥盒，本發明的藥物組合物的一種或多種組分的量可有效預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。任選地，與這些容器相伴的可以是由管理藥物或生物制品的生產、使用或銷售的政府機構規定的形式的公告，該公告反映了該機構批準用于人的施用的生產、使用或銷售。
5.12加工制品本發明還包括完成的包裝和標記的藥物產品。該制品包括裝在適宜的器皿或容器如玻璃瓶或其他密封容器中的適宜的單位劑量。對于適于腸胃外施用的劑型，活性成分，例如，CD2拮抗劑，尤其MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段是無菌的并且適于作為無微粒的溶液施用。換句話說，本發明包括腸胃外溶液和凍干的粉劑，它們都是無菌的，并且后者適于在注射前重構。備選地，單位劑型可以是適于經口、透皮、鼻內、或局部遞送的固體。
在優選的實施方案中，單位劑型適于靜脈內、肌內、鼻內、經口、局部或皮下遞送。從而，本發明包括適于每種遞送途徑的溶液，優選無菌溶液。
對于任一種藥物產品，設計包裝材料和容器以保護保存和運輸期間產品的穩定性。此外，本發明的產品包括關于使用或其他信息材料的教導，其建議醫生、技術人員或患者怎樣適當地防止、治療、處理或改善所述疾病或失調。換句話說，產品包括指示或建議給藥方案的教導，包括，但不限于，實際劑量、監視方法、總淋巴細胞、肥大細胞數、T細胞數、IgE產生，和其他監視信息。
特別地，本發明提供了加工制品，其包含包裝材料，如盒子、瓶子、管、小瓶、容器、噴霧器、吹入器、靜脈內(i.v.)包、封包等；和所述包裝材料含有的藥劑的至少一個單位劑型，其中所述藥劑含有CD2拮抗劑，尤其MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段，和本發明的組合物，其中所述包裝材料包括教導方法，其表明通過使用特定劑量并使用如此處描述的特定給藥方案，所述抗體可用于預防、治療、處理，或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。
本發明還提供了加工制品，其包含包裝材料，如盒子、瓶子、管、小瓶、容器、噴霧器、吹入器、靜脈內(i.v.)包、封包等；和所述包裝材料含有的每種藥劑的至少一個單位劑型，其中一種藥劑含有CD2拮抗劑，尤其MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段，本發明的組合物并且其他藥劑含有第二種不同的抗體，其中所述包裝材料包括教導方法，其表明通過使用特定劑量并使用如此處描述的特定給藥方案，所述藥劑可用于預防、治療、處理，和/或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。
本發明還提供了加工制品，其包含包裝材料，如盒子、瓶子、管、小瓶、容器、噴霧器、吹入器、靜脈內(i.v.)包、封包等；和所述包裝材料含有的每種藥劑的至少一個單位劑型，其中一種藥劑含有CD2拮抗劑，尤其MEDI-507、其類似物、衍生物或抗原結合片段，或本發明的組合物，并且其中所述包裝材料包括教導方法，其表明通過使用特定劑量并使用如此處描述的特定給藥方案，所述藥劑可用于預防、治療、處理，和/或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。
本發明提供了可通過本發明的方法減小或避免的副作用，這些副作用在信息材料中指出，該信息材料包含在用于預防、治療、處理，和/或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的加工制品中。可通過本發明的方法減小或避免的副作用包括，但不限于，重要體征異常(發熱、心搏過速、bardycardia、高血壓、低血壓)、血液學事件(貧血、淋巴細胞減少、白細胞減少、血小板減少)、頭痛、寒戰、眩暈、惡心、衰弱、背痛、胸痛(胸壓力)、腹瀉、肌痛、疼痛、搔癢、牛皮癬、鼻炎、出汗、注射部位反應，和血管舒張。因為CD2拮抗劑和本發明的組合物是免疫抑制的，長期免疫抑制可增加感染，包括機會感染的危險。長期和持續免疫抑制還可導致發生某些類型的癌癥的危險增加。
此外，包含在用于預防、治療、處理，和/或改善癌癥，尤其T-細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀的加工制品中的信息材料可以指出外來蛋白也可以導致變態反應，包括過敏反應，或者胞嘧啶釋放綜合癥。信息材料應該指出變態反應可以僅表現為輕微搔癢的皮疹或者可以是嚴重的如紅皮病、Stevens-Johnson綜合癥、血管炎或過敏反應。信息材料將還指出過敏反應是嚴重的并且偶爾是致命的超敏反應。當任何外來蛋白被注射到身體時可能發生包括過敏反應的變態反應。它們可以是輕微的表現如蕁麻疹或疹到致命的系統性反應。暴露后，通常10分鐘內發生過敏反應。患者可能經歷感覺異常、血壓過低、喉水腫、精神狀態變化、臉或咽血管性水腫、氣道阻塞、支氣管痙攣、蕁麻疹和瘙癢、血清病、關節炎、過敏性腎炎、血管球性腎炎、暫時性關節炎，或嗜酸粒細胞增多。
6.實施例該實施例闡明了MEDI-507單獨或與人源化抗-Tac(“HAT”)聯合用于治療成人T-細胞白血病(“ATL”)的效能。
6.1材料和方法雌性NOD/SCID小鼠購買于Jackson實驗室(Bar Harbor，ME)。用15×106個新鮮分離的MET-1細胞注射6到12周齡的小鼠以建立白血病。將MET-1白血病細胞導入小鼠后10到14天，動物的可溶性白介素2-受體α(sIL-2Rα)(Tac，CD25)的水平為1000到10,000pg/mL。將小鼠隨機分配到15組，每一組的替代腫瘤標記物——血清可溶性IL-2Rα(Tac，CD25)的水平相當。對每組小鼠靜脈內施用100μg PBS、HAT、MEDI-507或MEDI-507和HAT的組合，每周施用一次，持續4周。對另一組靜脈內施用100μg MEDI-507，每周施用一次，持續6個月。之所以使用每只小鼠100μg施用是因為發現該用量足夠保持施用之間的周內靶標抗原的飽和。包括NOD/SCID小鼠的對照組，其不接受腫瘤或治療劑。
在Jeffrey Ravetch(Rockefeller University，New York，NY)的實驗室產生FcRγ敲除小鼠。為了研究MEDI-507的腫瘤殺傷機理中FcRγ的角色，在FcRγ敲除小鼠和FcRγ完整的NOD/SCID小鼠中使用非常大的腫瘤負載。將sIL-2Rα水平為20,000到90,000pg/mL血清(平均80,000pg/mL)(其代表大腫瘤負載)的小鼠隨機分配到每組10只小鼠的研究組中。一組FcRγ敲除小鼠接受PBS，另一組接受每周4次腹膜內MEDI-507施用。在平行的兩組FcRγ完整的小鼠中，一組接受PBS，另一組接受4次腹膜內100μg MEDI-507施用。
6.1.1通過ELISA測量sIL-Rα和可溶的β2μ-微球蛋白在全部治療實驗中，人IL-2Rα和人β2-免疫球蛋白(β2μ)被用作替代腫瘤標記。用從R & D Systems(Minneapolis，MN)購買的酶聯免疫吸附測定(ELISA)試劑盒測量人IL-2Rα和人β2μ的血清濃度。按照生產商試劑盒插頁中建議的實施ELISAs。
6.1.2MEDI-507與MET-1 ATL細胞結合的分析在治療實驗實施前通過流式細胞術分析MEDI-507與CD2的結合。按照Phillips等人，2000，Cancer Res.606977-6984中描述的表型分析制備表型的MET-1白血病細胞。將細胞用第一抗體MEDI-507或利妥希瑪(rituximab)在冰上染色30分鐘，洗滌，然后用異硫氰酸熒光素(FITC)-標記的針對人免疫球蛋白G(IgG)Fc片段的抗體染色。洗滌后，用Becton Dickinson FACSort流式細胞儀(San Jose，CA)分析MET-1細胞上MEDI-507對CD2的結合。
6.1.3mAbs人源化mAb MEDI-507(其識別CD2)由BioTransplant贈送，從Hoffmann-La Roche(Nutley，NJ)得到HAT——(daclizumab(Zenapax)針對CD25的人源化mAb。從IDECPharmaceuticals(San Diego，CA)得到利妥希瑪。
6.1.4統計通過ELISA測定法測定血清中人β2μ并用Kaplan-Meier分析監視小鼠的存活以評估小鼠中白血病的發展。使用StatView(SASInstitute，Cary，NC)產生Kaplan-Meier累積存活圖。在β2μ水平的分析中實施不成對t檢驗。
6.2結果6.2.1MET-1 ATL細胞上MEDI-507與CD2結合的闡明使用熒光激活細胞分類術(FACS)分析，表明與B-細胞特異的抗-CD20mAb——利妥希瑪的反應性相比對(圖2B)，MEDI-507結合MET-1ATL細胞(圖2A)。在圖2A中，同種型對照用實心區域代表，而線代表人源化抗-CD2。在圖2B中，實心區域是同種型對照，線代表人源化抗-CD20。
6.2.2用針對CD2的MEDI-507對ATL的有效治療圖3是在研究的第14、28和60天患有MET-1 ATL白血病的NOD/SCID小鼠組的人β2μ血清水平的圖。圖3表明通過靜脈內施用100μg/周MEDI-507、HAT和MEDI-507與HAT的組合抑制了患有MET-1ATL的NOD/SCID小鼠中MET-1 ATL細胞的生長。如圖3所闡明，與接受PBS的對照組相比，在4周MEDI-507(P＜0.0001)、4周HAT(P＜0.0001)、4周MEDI-507與HAT組合(P＜0.0001)、和6個月MEDI-507組(P＜0.0001)的小鼠中人β2μ——鼠模型中的替代腫瘤標記的血清水平有顯著降低。
圖4是不同組小鼠的Kaplan-Meler存活圖。接受每周4次HAT施用的患有MET-1 ATL的NOD/SCID小鼠的累積存活用實心圓表示。接受每周4次MEDI-507施用的患有MET-1 ATL白血病的NOD/SCID小鼠的累積存活在圖4上用大菱形表示。接受每周4次MEDI-507與HAT組合施用的患有MET-1 ATL白血病的NOD/SCID小鼠的累積存活在圖4上用三角形表示。接受每周4次PBS施用的患有MET-1 ATL白血病的NOD/SCID小鼠的累積存活在圖4上用×表示。接受每周MEDI-507施用持續6個月的患有MET-1 ATL白血病的NOD/SCID小鼠的累積存活在圖4上用小菱形表示。沒有接受任何治療劑的無MET-1 ATL白血病的NOD/SCID小鼠的累積存活在圖4上用正方形表示。如圖4所示，與施用PBS的小鼠相比，用MEDI-507、HAT和MEDI-507與HAT的組合治療的小鼠的存活顯著(P＜0.0001)延長。PBS組中的所有小鼠在研究的第70天死亡，而在第70天，4周MEDI-507組中67％的小鼠、4周HAT組中53％的小鼠、4周MEDI-507和HAT組合組中80％的小鼠、6個月MEDI-507組中100％的小鼠存活。6個月MEDI-507組的壽命比所有其他組的都明顯更長并且與不接受腫瘤或治療劑的小鼠無腫瘤對照組的壽命相當。在治療開始后第180天，無腫瘤組的15只小鼠中的13只和6個月MEDI-507組中15只小鼠的13只是活的，相比4周MEDI-507組的15只中的6只和MEDI-507和HAT組合組的15只中的8只小鼠是活的。4周HAT組中所有小鼠到第114天時都死亡。
圖5表明在每周給予MEDI-507持續6個月的小鼠中整個施用期間人β2μ水平不斷下降。接受6個月每周MEDI-507治療的13只幸存小鼠中的12只在6個月末檢測不到人β2μ水平。
當研究在2個額外實驗中重復時，觀察到在ATL治療中MEDI-507的相當的效能。
6.2.3FcRγ表達可能在MEDI-507作用中發揮作用在FcRγ敲除組中，接受每周4次MEDI-507和接受PBS的動物之間的存活沒有顯著差異(P＞0.702)。
圖6A顯示了FcRγ完整的患有MET-1 ATL的NOD/SCID小鼠的Kaplan-Meier存活圖。圖6B顯示了FcRγ被敲除的患有MET-1 ATL的NOD/SCID小鼠的Kaplan-Meier存活圖。施用PBS的FcRγ被敲除的小鼠組和施用MEDI-507的FcRγ被敲除的小鼠組之間的存活沒有顯著的統計學差異。在治療開始的22天內所有FcRγ被敲除的小鼠都死亡。相比，施用MEDI-507的FcRγ完整的患有ATL的NOD/SCID小鼠比施用PBS的FcRγ完整的患有ATL的NOD/SCID小鼠存活期更長。施用PBS的所有FcRγ完整的小鼠在治療開始的30天內死亡，而施用+MEDI-507的所有FcRγ完整的小鼠在那時仍然存活。對動物存活跟蹤40天，此時施用MEDI-507的FcRγ完整小鼠的10只中的8只仍然存活。從而，在該模型中，MEDI-507提供了對ATL的有效治療，其機理可能涉及與Fcγ有關的FcRIII受體的表達。
7.等價方案本領域中技術人員施用常規實驗法將認識到，或者能夠確定此處描述的本發明的特定實施方案的許多等價方案。這些等價方案旨在被下面的權利要求書包括。
在該說明書中提到的所有出版物、專利和專利申請在此處作為參考文獻并入本說明書，就像每個單獨的出版物、專利或專利申請在此處被特別和單獨地并入作為參考一樣。
序列表<110>MedImmune，IncDingivan，ChristineWaldmann，Thomas<120>通過施用CD2拮抗劑預防或治療T細胞惡性腫瘤的方法<130>10271-116-228<140>
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<150>60/409,024<151>2002-09-05<150>60/410,385<151>2002-09-12<160>7<170>PatentIn版本3.2<210>1<211>5<212>PRT<213>人<400>1Glu Tyr Tyr Met Tyr1 5<210>2<211>17<212>PRT<213>人<400>2Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Ser Ile Asp Tyr Val Glu Lys Phe Lys1 5 10 15
Lys<210>3<211>9<212>PRT<213>人<400>3Gly Lys Phe Asn Tyr Arg Phe Ala Tyr1 5<210>4<211>16<212>PRT<213>人<400>4Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Asn1 5 10 15<210>5<211>7<212>PRT<213>人<400>5Leu Val Ser Lys Leu Glu Ser1 5<210>6<211>9<212>PRT<213>人<400>6
Met Gln Phe Thr His Tyr Pro Tyr Thr1 5<210>7<211>327<212>PRT<213>人<400>7Lys Glu Ile Thr Asn Ala Leu Glu Thr Trp Gly Ala Leu Gly Gln Asp1 5 10 15Ile Asn Leu Asp Ile Pro Ser Phe Gln Met Ser Asp Asp Ile Asp Asp20 25 30Ile Lys Trp Glu Lys Thr Ser Asp Lys Lys Lys Ile Ala Gln Phe Arg35 40 45Lys Glu Lys Glu Thr Phe Lys Glu Lys Asp Thr Tyr Lys Leu Phe Lys50 55 60Asn Gly Thr Leu Lys Ile Lys His Leu Lys Thr Asp Asp Gln Asp Ile65 70 75 80Tyr Lys Val Ser Ile Tyr Asp Thr Lys Gly Lys Asn Val Leu Glu Lys85 90 95Ile Phe Asp Leu Lys Ile Gln Glu Arg Val Ser Lys Pro Lys Ile Ser100 105 110Trp Thr Cys Ile Asn Thr Thr Leu Thr Cys Glu Val Met Asn Gly Thr115 120 125
Asp Pro Glu Leu Asn Leu Tyr Gln Asp Gly Lys His Leu Lys Leu Ser130 135 140Gln Arg Val Ile Thr His Lys Trp Thr Thr Ser Leu Ser Ala Lys Phe145 150 155 160Lys Cys Thr Ala Gly Asn Lys Val Ser Lys Glu Ser Ser Val Glu Pro165 170 175Val Ser Cys Pro Glu Lys Gly Leu Asp Ile Tyr Leu Ile Ile Gly Ile180 185 190Cys Gly Gly Gly Ser Leu Leu Met Val Phe Val Ala Leu Leu Val Phe195 200 205Tyr Ile Thr Lys Arg Lys Lys Gln Arg Ser Arg Arg Asn Asp Glu Glu210 215 220Leu Glu Thr Arg Ala His Arg Val Ala Thr Glu Glu Arg Gly Arg Lys225 230 235 240Pro His Gln Ile Pro Ala Ser Thr Pro Gln Asn Pro Ala Thr Ser Gln245 250 255His Pro Pro Pro Pro Pro Gly His Arg Ser Gln Ala Pro Ser His Arg260 265 270Pro Pro Pro Pro Gly His Arg Val Gln His Gln Pro Gln Lys Arg Pro275 280 285Pro Ala Pro Ser Gly Thr Gln Val His Gln Gln Lys Gly Pro Pro Leu290 295 300
Pro Arg Pro Arg Val Gln Pro Lys Pro Pro His Gly Ala Ala Glu Asn305 310 315 320Ser Leu Ser Pro Ser Ser Asn32權利要求
1.治療或改善癌癥或其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療或改善的受試者施用治療有效量的MEDI-507或其抗原結合片段。
2.治療或改善癌癥或其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療或改善的受試者施用治療有效量的一種或多種CD2拮抗劑，條件是所述CD2拮抗劑不是MEDI-507。
3.治療或改善癌癥或其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療或改善的受試者施用治療有效量的免疫特異地結合含有人CD2的氨基酸殘基18、55或59的表位的抗體，條件是所述抗體不是MEDI-507或LO-CD2a/BTI-322。
4.權利要求3的方法，其中表位含有人CD2的氨基酸殘基55和59。
5.治療或改善癌癥或其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療或改善的受試者施用治療有效量的不抑制或干擾人CD2和LFA-3之間相互作用的CD2拮抗劑，條件是所述CD2拮抗劑不是MEDI-507或LO-CD2a/BTI-322。
6.權利要求1、2、3或5的方法，其還包括對所述受試者施用治療有效量的一種或多種癌癥療法。
7.權利要求6的方法，其中至少一種所述癌癥療法是化療、生物學療法、放射療法、激素療法或手術。
8.治療或改善T-細胞惡性腫瘤或其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療或改善的受試者施用治療有效量的MEDI-507或其抗原結合片段。
9.治療或改善T-細胞惡性腫瘤或其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療或改善的受試者施用治療有效量的免疫特異地結合含有人CD2的氨基酸殘基18、55或59的CD2表位的抗體，條件是所述抗體不是MEDI-507或LO-CD2a/BTI-322。
10.權利要求9的方法，其中表位含有人CD2的氨基酸殘基55和59。
11.治療或改善T-細胞惡性腫瘤或其一種或多種癥狀的方法，所述方法包括對需要該治療或改善的受試者施用治療有效量的不抑制或干擾人CD2和LFA-3之間相互作用的CD2拮抗劑，條件是所述CD2拮抗劑不是MEDI-507或LO-CD2a/BTI-322。
12.權利要求8的方法，其中施用所述治療有效量的MEDI-507延長了所述受試者的存活期。
13.權利要求1、2、3、5、8、9或11的方法，其中所述受試者是人。
14.權利要求8、9或11的方法，其中所述T-細胞惡性腫瘤是前體T-細胞瘤或外周T-細胞或NK-細胞瘤。
15.權利要求8、9或11的方法，其中所述T-細胞惡性腫瘤是T-細胞慢性淋巴細胞白血病、大顆粒淋巴細胞白血病、外周T-細胞淋巴瘤、血管中心型淋巴瘤、腸T-細胞淋巴瘤、成人T-細胞白血病、成人T-細胞淋巴瘤、或退行性大細胞淋巴瘤。
16.權利要求8、9或11的方法，其中所述T-細胞惡性腫瘤不是皮膚T-細胞淋巴瘤。
17.權利要求8的方法，其中MEDI-507綴合到治療劑或藥物。
18.權利要求17的方法，其中治療劑是異源多肽。
19.權利要求17的方法，其中治療劑是免疫特異地結合非CD2的細胞表面受體的抗體。
20.權利要求19的方法，其中所述細胞表面受體是T-細胞或NK細胞抗原。
21.權利要求17的方法，其中治療劑是免疫特異地結合腫瘤相關抗原的抗體。
22.權利要求2的方法，其中至少一種CD2拮抗劑綴合到治療劑或藥物，條件是所述治療劑不是毒素或放射性元素。
23.權利要求17的方法，其中所述治療劑是細胞毒素。
24.權利要求23的方法，其中所述細胞毒素是紫杉醇、松胞菌素B、短桿菌肽D、溴化乙錠、依米丁、絲裂霉素、依托泊苷、tenoposide、長春新堿、長春花堿、秋水仙堿、阿霉素、柔紅霉素、二羥基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光神霉素、放線菌素D、1-去氫睪酮、糖皮質激素、普魯卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛爾、嘌呤霉素、表柔比星，或環磷酰胺。
25.權利要求8的方法，其還包括對所述受試者隨后施用一劑或多劑治療有效量的MEDI-507或其抗原結合片段。
26.權利要求8的方法，其還包括對所述受試者施用治療有效量的用于T-細胞惡性腫瘤的一種或多種標準或實驗性療法。
27.權利要求9或11的方法，其還包括對所述受試者施用治療有效量的用于T-細胞惡性腫瘤的一種或多種標準或實驗性療法。
28.權利要求26的方法，其中至少一種所述療法是抗體療法、細胞因子療法、化療、造血干細胞移植、T-細胞介導的療法、生物學療法、放射療法、激素療法或手術。
29.權利要求27的方法，其中至少一種所述療法是抗體療法、細胞因子療法、化療、造血干細胞移植、T-細胞介導的療法、生物學療法、放射療法、激素療法或手術。
30.權利要求26的方法，其中在MEDI-507或其抗原結合片段施用之前、同時，或之后施用所述標準或實驗性療法。
31.權利要求8的方法，其中所述受試者以前已經被施用用于T-細胞惡性腫瘤的一種或多種標準或實驗性療法進行治療但是沒有被施用MEDI-507或其抗原結合片段。
32.權利要求8的方法，其中MEDI-507或其抗原結合片段被靜脈內、皮下、肌內、經口，或鼻內施用。
33.含有一種或多種CD2拮抗劑和藥學上可接受的載體的藥物組合物，該一種或多種CD2拮抗劑的量可有效預防、治療、處理，或改善癌癥。
34.含有一種或多種CD2拮抗劑和藥學上可接受的載體的藥物組合物，該一種或多種CD2拮抗劑的量可有效預防、治療、處理，或改善T-細胞惡性腫瘤。
35.含有MEDI-507或其抗原結合片段和藥學上可接受的載體的藥物組合物，該MEDI-507或其抗原結合片段的量可有效預防、治療、處理，或改善癌癥。
36.含有MEDI-507或其抗原結合片段和藥學上可接受的載體的藥物組合物，該MEDI-507或其抗原結合片段的量可有效預防、治療、處理，或改善T-細胞惡性腫瘤。
37.權利要求33或34的組合物，其中CD2拮抗劑不是MEDI-507。
38.權利要求33或34的組合物，其中CD2拮抗劑沒有綴合到毒素或放射性元素。
39.含有免疫特異地結合含有人CD2的氨基酸殘基18、55或59的CD2表位的抗體和藥學上可接受的載體的藥物組合物，條件是所述抗體不是MEDI-507或LO-CD2a/BTI-322，該抗體的量可有效預防、治療、處理，或改善癌癥。
40.權利要求39的組合物，其中表位含有人CD2的氨基酸殘基55和59。
41.含有不抑制或干擾人CD2和LFA-3之間相互作用的CD2拮抗劑和藥學上可接受的載體的藥物組合物，條件是所述CD2拮抗劑不是MEDI-507或LO-CD2a/BTI-322，所述CD2拮抗劑的量可有效預防、治療、處理，或改善癌癥。
42.權利要求33、34、35、36、39、41或42的組合物，其還含有一種或多種化學治療劑、放射治療劑、激素治療劑，或生物學治療劑。
43.權利要求33或34的藥物組合物，其中CD2拮抗劑不是LFA-3TIP。
全文摘要
本發明包括CD2拮抗劑，優選MEDI－507，其類似物、衍生物或抗原結合片段作為單劑療法以預防、治療、處理或改善癌癥的用途，尤其是T－細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。本發明還包括CD2拮抗劑，優選MEDI－507，其類似物、衍生物或抗原結合片段與其他癌癥治療組合的用途。本發明還提供了含有CD2拮抗劑，優選MEDI－507，其類似物、衍生物或抗原結合片段的藥物組合物，所含的CD2拮抗劑的量可有效預防、治療、處理或改善癌癥，尤其T－細胞惡性腫瘤，或者其一種或多種癥狀。
文檔編號A61K39/395GK1771055SQ03824932
公開日2006年5月10日 申請日期2003年9月5日 優先權日2002年9月5日
發明者C·丁吉萬, T·沃爾德曼, Z·張, M·張 申請人:免疫醫療公司, 美國政府衛生與公眾服務部