專利名稱：黑青霉及其代謝產物的生產方法
技術領域：
本發明涉及一種微生物及其代謝產物的培養生產方法。
背景技術：
黑青霉(Penicillium nigricans Bainier)是一種青霉屬絲狀真菌，天然存在于 土壤中，能抑制引起多種植物枯萎病等病害發生的尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)的生 長繁殖，是西瓜枯萎病、黃瓜枯萎病、番茄枯萎病、辣椒枯萎病等多種植物枯萎病病原菌的 天然拮抗微生物。

發明內容
本發明目的在于提供一種黑青霉及其代謝產物的生產方法，通過工業化生產，大
量獲取黑青霉菌體、孢子及其代謝產物的人工培養方法。 本發明的目的是通過以下措施實現的 黑青霉及其代謝產物的生產方法，其特征是生產過程如下 將重量份為0-13%豆餅粉、0-6.8%菜子餅粉、0. 5-6%小麥粉、0_4%硫酸銨、 0-0. 2%硫酸鎂、0_0. 3%氯化鈣、0_0. 4%磷酸氫二鉀，上述原料投入發酵罐內，以自來水配 制培養基，調整ra為4. 5 5. 5，保持發酵罐內溫度為12rC，壓力為0. 12MPa，滅菌30 45分鐘; 發酵罐降溫，使罐內培養基質溫度為32 35t:后，接種黑青霉，接種量占罐內培 養基的重量比為1 8. 5% ; 接種后，保持發酵罐壓力為0.03 0. 1Mpa，連續向罐內通入無菌空氣，通氣量保 持在0. 4 0. 5VVM ; 液體培養時間約為3 5天，結束后，收集活菌及代謝產物，再進行干燥、濃縮、吸
附、蒸發，添加吸附劑，在膠體磨中碾磨，制得產品。 發酵罐壓力控制為前期0. 04Mpa，中期0. 1Mpa，后期0. 03Mpa。 本發明與現有技術相比具有以下優點 黑青霉在生長過程中與病原菌爭奪營養和空間，并分泌拮抗物質直接抑制尖孢鐮 刀菌的生長，從而控制植物病害的發生，是一種生態有益微生物。由于其能在土壤中存活多 年，孢子的抗逆性很強且能在大田土壤中重復循環增殖，施用到植物和土壤后，能較長時間 的保持對植物病原菌尖孢鐮刀菌產生抑制作用，因此是有很有前途的微生物源農藥。可用 于防治農田葫蘆科、茄科、禾本科等作物的枯萎病，有獨特的效果，用量省、成本低、效果好、 專業性強、污染少、不傷害天敵、環境友好，因此是農林牧及園藝上的優良生物農藥，有利于 人類可持續發展和生態平衡。 本發明生產方法，操作簡便，生產過程不要高溫、高壓和易燃易爆原輔材料，也不 產生三廢，同時利用現代微生物工藝技術能很容易實現室內工業化、規模化生產，生產條件 和生產過程容易人工調控，質量容易控制，產品能進行連續化、批量化生產，特別是作為生物農藥使用的黑青霉制劑能大大降低生產和使用成本，提高產品單位效價，而且不同于一
般的制劑類生物農藥，該制劑由活菌、孢子和代謝產物組成，施用到土壤和植物上后，活菌
和孢子能繼續生長繁殖，并抑制病原菌，具有很高的經濟價值和良好的應用前景。 為了提高生產率，本發明還對各類步驟工藝選擇了適宜的相應條件，利于黑青霉
的生長。 生產方法簡便，生產過程不需要高溫、高壓、易燃易爆原輔材料，無三廢排放；產 品為培養基和活菌體、活孢子及次生代謝產物組成，不是提取的純制劑，不需要提取醇化設 備，節省投資，同時產品使用到植物和土壤上后，活菌和活孢子能循環生長繁殖，持續控制 土傳病害。本發明中接種所使用的黑青霉可以從有關高等院校、科研院所或科技公司購買。
具體實施例方式
現舉兩個實施例，進一步說明。
液體培養法 1、將0-13 %豆餅粉、0-6. 8 %菜子餅粉、0. 5-6 %小麥粉、0_4 %硫酸銨、0-0. 2 % 硫酸鎂、0-0.3%氯化鈣、0-0.4%磷酸氫二鉀等上述原料投入發酵罐內，加入足量水份， 使培養料含水量約為80-99 % ，調整ra為4. 5-5. 5 ，保持發酵罐內溫度為121°C ，壓力為 0. 12MPa，滅菌30-45分鐘。 2、發酵罐降溫，使罐內培養基質溫度為35t:后，接種黑青霉，接種量占罐內培養基 的重量比為1_8%。 3、接種后，保持發酵罐壓力為0. 04MPa(前期)、0. lMPa(后期)、0. 03MPa(后期)， 連續向罐內通入無菌空氣，通氣量保持在0. 4-0. 5VVM。 4、液體培養時間約為3 5天，結束后，可進行干燥、濃縮、吸附、蒸發、膠體磨碾 磨，添加占產品總重10%吸附劑(300-400目碳酸鈣)和占產品總重10%載體(粘土)及 不同助劑(1_2%洗衣粉)，在膠體磨中碾磨，制成產品。
權利要求
黑青霉及其代謝產物的生產方法，其特征是生產過程如下將重量份為0-13％豆餅粉、0-6.8％菜子餅粉、0.5-6％小麥粉、0-4％硫酸銨、0-0.2％硫酸鎂、0-0.3％氯化鈣、0-0.4％磷酸氫二鉀，上述原料投入發酵罐內，以自來水配制培養基，調整PH為4.5～5.5，保持發酵罐內溫度為121℃，壓力為0.12MPa，滅菌30～45分鐘；發酵罐降溫，使罐內培養基質溫度為32～35℃后，接種黑青霉，接種量占罐內培養基的重量比為1～8％；接種后，保持發酵罐壓力為0.03～0.1Mpa，連續向罐內通入無菌空氣，通氣量保持在0.4～0.5VVM；培養過程中不斷進行攪拌，攪拌速度初期30-50轉/分，中期80-100轉/分，后期30-40轉/分。液體培養時間約為3～5天，結束后，收集活菌及代謝產物，再進行干燥、濃縮、吸附、蒸發，添加吸附劑，在膠體磨中碾磨，制得產品。
2. 根據權利要求1所述的生產方法，其特征是接種后，控制發酵罐壓力控制為前期 0. 04Mpa，中期0. 1Mpa，后期0. 03Mpa。
3. 根據權利要求l所述的生產方法，其特征是所述吸附劑為碳酸鈣、粘土或兩者的混 合，吸附劑的添加量為產品總重的10-60 % 。
4. 根據權利要求1所述的生產方法，其特征是制得產品中還可以添加占產品總重 1-2%的助劑。
5. 根據權利要求4所述的生產方法，其特征是所述助劑為洗衣粉。
全文摘要
本發明提供一種黑青霉及其代謝產物的生產方法，通過工業化生產，大量獲取黑青霉菌體、孢子及其代謝產物的人工培養方法。將培養基置入培養容器內，滅菌后，接種一定量的黑青霉，在一定的溫度、濕度、壓力、pH條件下，通以無菌空氣，經一段時間培養后，將培養基質連同黑青霉菌體、孢子和次生帶產物一起收集，制得產品。該生產方法簡便，生產過程不需要高溫、高壓、易燃易爆原輔材料，無三廢排放。
文檔編號A01N63/04GK101735953SQ20091002593
公開日2010年6月16日 申請日期2009年3月13日 優先權日2009年3月13日
發明者吳洪生 申請人:南京信息工程大學