覽菜紅（Acid Red 27,純度 89% )、日落黃（Sunset Yellow FCF， 純度 90%)、頗藍（Indigo carmine,純度 89%)、誘惑紅（Allura Red AC,純度 91 %)、亮 黑 PN炬rilliant Black BN，純度 91%)、蒙酪黃 S(Naphthol Yellow S，純度 89%)、酸 性紅 18 (New Coccine (Acid Red 18 ;Red 6)，純度 91 %)、酸性黃 17 (Acid Yellow 17,純 度 89%)、嗟林黃（Quinoline yellow,純度 91 % )、酸性紅 2G(Acid Red 1，純度 89%)、 亮綠 SF(Li曲t Green SF，純度 91 % )、偶氮玉紅（Azorubine (Carmoisine)，純度 91 % )、 酸性紅 26(Ponceau X}didine，純度 91%)、羊毛綠（Wool Green S(酸性綠 50)，純度 91%)、澄色 I (Orange I (Acid Orange 20)，純度 91%)、澄色 II (Orange II，純度 91%)、 監牢綠FCF(FsatGreenFCF佑reen3)，純度 91%)、蒙酪藍黑（(AcidBlank1)，純度 91%)、酸性藍巧rioglaucinedisodiumsalt炬rilliantBlue),純度 91%)、酸性紅 52(SulforhodamineB，純度91%)、赤薛紅巧iTt虹osinB巧ed7)，純度91%)、巧光桃紅 (PhloxineB，純度91%)、酸性黃36(MetanilYellow,純度91%)、酸性綠3(GuineaGreen B，純度91% )、巧光素鋼（化anine，純度91% )、孟加拉玫瑰紅（RoseBengal,純度91% )、 酸性紅87巧osinYdisodiumsalt,純度91%)、麗春紅SX(PonceauS)〇標準樣品購于上 海安譜實驗科技股份有限公司。
[003引1. 11標準溶液的配制；分別準確稱取28種酸性色素標準品各lOmg于lOmL容量 瓶中，用甲醇溶解，配制成Ig/L的單標準儲備液，密封儲存于4°C冰箱中。再分別準確吸取 Ig/L的28種單標準儲備液各ImL于lOOmL容量瓶中，用甲醇定容得lOmg/L的混合標準溶 液。使用時用A流動相將混合標準溶液稀釋成一系列濃度的標準溶液，待測。
[0037] 1. 2 儀器
[0038]AgilentUHPLC和Agilent6540-QT0F(美國Agilent公司）。高速冷凍離屯、機、 禍旋混合器、氮吹儀、樣品萃取管，甲醇、己膳、甲酸為色譜純，己酸錠、丙酬、正己燒、己醇和 氨水（質量分數為25%~28% )為分析純，試驗用水為Milli-Q超純水，C18復合硅膠混 合基質萃取管（自制）。
[0039] 1. 3色譜條件
[0040]采用 Agilent Eclipse Plus-ClS (3. 0X 100mm，1. 8 y m)分離。流動相；A 相為 5mmol/L己酸錠、0. 1% (v/v)甲酸水溶液；B相為己膳。柱溫為30°C，樣品溫度為25°C，進 樣體積為3 y L，流速為0. 2ml/min。梯度洗脫程序；0~lmin，5% B~20% B ;1~lOmin， 20% B ~100% B ;10 ~15min，100% B。
[0041] 質譜條件表如下：
[0042]
【主權項】
1. 一種水產品中43種人工合成色素的篩查方法，包括以下步驟，采用液相色譜的四 極桿串聯飛行時間質譜篩查，調用已建立的質譜篩查數據庫以分子式匹配模式自動掃描檢 索，質量允許誤差控制在5ppm ;其特征在于：使用3. OX 100mm，I. 8 ym的Agilent Eclipse Plus-CIS作為分析柱，以5毫mol/L乙酸銨水溶液含0. 1%甲酸的乙腈溶液為流動相進行 梯度洗脫，流速〇. 3ml/min ;采用電噴霧離子源在負離子模式下進行檢測，提取可疑樣品， 用基質分散法凈化，液相色譜分離，外標法定量測定，確證，上述為體積百分比；所述43種 人工合成色素為28種為酸性色素和15種堿性色素，所述28種人工合成的酸性色素染料 為：莧菜紅，日落黃，顔藍，誘惑紅，亮黑PN，萘酚黃S，酸性紅18,酸性黃17,喹林黃、酸性紅 2G，亮綠SF、偶氮玉紅，酸性紅26,羊毛綠，橙色I，橙色II，監牢綠FCF、萘酚藍黑，酸性藍，酸 性紅52,赤蘚紅，熒光桃紅，酸性黃36,酸性綠3,熒光素鈉、孟加拉玫瑰紅，酸性紅87,麗春 紅SX ;所述15種人工合成的堿性色素染料為：金胺、隱性孔雀石綠、孔雀石綠、蘇丹紅III、 蘇丹紅IV、蘇丹黃、蘇丹黑B、堿性橙II、羅丹明B、蘇丹橙、蘇丹紅7B、蘇丹紅G、蘇丹紅I、蘇 丹紅II、橘紅2號。
2. 根據權利要求1所述的篩查方法，其特征在于：所述數據庫的建立步驟為： 一、 將化合物的名稱、分子式、保留時間、母離子質荷比信息加入到化合物數據庫 MassHunter 軟件中； 二、 進行化合物標樣配置，準確稱量標準品于100mL容量瓶中，用甲醇定容，配置成濃 度 10ug/ml ; 三、 標樣直接質譜進樣，進行一級準確質量數的采集，優化離子源參數和質譜電壓，掃 描采集參數； 四、 對于已采集并確認的化合物一級準確質量數，進行針對性的二級質譜掃描采集，并 進行不同碰撞能量下的測試，最終將二級全質量碎片信息加入到化合物數據庫軟件中，為 樣品進行二級精確匹配。
3. 根據權利要求2所述的篩查方法，其特征在于：所述色譜條件為：采用Agilent Eclipse Plus_C18 分離，Agilent Eclipse Plus_C18 的規格為：3. OX 100mm，1.8 y m，流動 相：A相為5毫mol/L乙酸銨，體積百分比0.1 %的甲酸水溶液；B相為乙腈，分析柱溫度控 制為30°C，樣品溫度為25°C，進樣體積為3 y L，流速為0. 2ml/min，梯度洗脫程序為：0~1 分鐘，5%~20% B相；1~10分鐘，20%~100% B相；10~15分鐘，100% B相，上述為體 積百分比。
4. 根據權利要求2所述的篩查方法，其特征在于：所述流動相的選擇甲醇0. 1 %，甲 酸水溶液，乙腈〇. 1 %甲酸水溶液，含〇. 1 %甲醇的甲酸5毫mol/L乙酸銨溶液和乙腈，含 0. 1 %甲酸的5毫mol/L乙酸銨溶液作為流動相分析比較色素分離結果。
5. 根據權利要求2所述的篩查方法，其特征在于：所述優化離子源參數和質譜電壓為： 選取負離子模式，在全掃描方式下優化離子化電壓、毛細管電壓、母離子質荷比范圍、離子 源溫度、裂解溫度、脫溶劑氣流速參數，所述采集數據為：優化碰撞電壓，通過不同的碰撞電 壓進行碎裂，把全息二級圖譜進行數據庫建立，最終確定質譜條件，同時將一級質量數，同 位素豐度和二級碎片信息建立成一個完成的數據庫。
6. 根據權利要求1至5中任一所述的篩查方法，其特征在于：可疑樣品的提取方法為： 酸性色素的可疑樣品用氨化乙醇提取，而對堿性可疑樣品用含有1 %乙酸的乙腈提取，所述 百分比為體積百分比。
7. 根據權利要求1至5中任一所述的篩查方法，其特征在于：所述確證方法為：分子特 征提取：對原始數據進行處理并結合數據庫進行匹配，采用四極桿串聯飛行時間質譜進行 分析，然后自動生成確證結果，對陽性制備樣品保留時間結合離子源進一步確證。
8. 根據權利要求7所述的篩查方法，其特征在于：所述進一步確證的步驟為：采用MSC 結構的解析軟件對可疑化合物進行進一步結構確證，然后自動生成進一步確證結果。
9. 根據權利要求7所述的篩查方法，其特征在于：所述四極桿串聯飛行時間質譜采用 一級信息匹配和二級信息的匹配，通過一級信息匹配與二級信息的匹配相結合獲得化合物 篩查的準確度。
【專利摘要】一種水產品中43種人工合成色素的篩查方法，包括以下步驟，采用液相色譜的四極桿串聯飛行時間質譜篩查，調用已建立的質譜篩查數據庫以分子式匹配模式自動掃描檢索，通過C18分析柱，以5毫mol/L乙酸銨水溶液含0.1％甲酸的乙腈溶液為流動相進行梯度洗脫，流速0.3ml/min；采用電噴霧離子化源，在負離子模式下進行檢測，提取可疑樣品，用基質分散法凈化，液相色譜分離，外標法定量測定，確證。其優點在于：本發明的檢測方法操作簡便快速，靈敏度高，采用基質分散法凈化樣品，有效地減少了基體成分的干擾，利用四極桿串聯飛行時間質譜定性的功能，大大地減少了假陽性等誤判事件，極大地提高了檢測機構對水產品風險的監測能力。
【IPC分類】G01N30-88
【公開號】CN104749307
【申請號】CN201510040913
【發明人】黃鸝, 周勇, 王萍亞, 戴意飛, 蔣玲波, 趙巧靈
【申請人】舟山市質量技術監督檢測研究院
【公開日】2015年7月1日
【申請日】2015年1月26日