水產品中43種人工合成色素的篩查方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及一種食品添加劑的檢測方法，尤其指一種水產品中43種人工合成色 素的篩查方法。
【背景技術】
[0002] 近年來，色素在水產品中非法添加和濫用現象層出不窮。因此相關的檢測方法也 隨之被關注和研究。人工合成色素由于色澤鮮艷、容易上色，主要應用于工業生產中如將羊 毛、皮革、蠶絲等方面的染色等，都是具有一定毒性的化學品。然而，有些不法分子為節省成 本，在水產品中非法添加人工合成色素，如偶氮玉紅、酸性紅、蘇丹紅等，對人民健康和社會 穩定產生了極大的危害。因此很有必要建立水產品中人工合成色素的篩查方法，為有效遏 制水產品非法添加行為和食品安全風險預警提供技術手段。
[0003] 現有一種申請號為CN201110384147. 1名稱為《食品中36種人工合成色素高通量 快速篩查方法》公開了一種36種人工合成色素高通量快速篩查方法，其方法為；食品中36 種人工合成色素高通量快速篩查方法，其特征在于：采用基于液相色譜/飛行時間質譜建 立的食品中亮黑、巧樣黃、嗟咐黃、姻脂紅、酸性紫7、覽菜紅、酸性紅2G、酸性黃17、日落黃、 誘惑紅、堅牢黃、結晶麗春紅6R、偶氮玉紅、麗春紅SX、蒙酪藍黑、間苯二酪黃、說藍、酸性紅 26、酸性紅4、麗春紅3R、酸性紅52、蒙酪黃色-S、巧光素鋼、毛料綠色S、專利藍五、堅牢綠 FCF、亮藍FCF、亮綠SF、酸性綠3、赤薛紅、巧光桃紅、孟加拉玫瑰紅、新紅、曙紅Y、澄色I和 澄色II的食品中人工合成色素高通量快速篩查方法，并對可疑樣品進行確證和定量。但其 缺點是樣品前處理復雜，只能通過一級信息來測定和確正，僅采用液相色譜/飛行時間，所 W檢測效率不高，速度不快，準確度也不高，并且，上述方法，只能適用于酸色素的篩查，而 不能用于堿性色素的篩查，所W該檢測方法還有待于進一步改進。

【發明內容】

[0004] 本發明所要解決的技術問題是針對上述現有技術現狀而提供一種操作簡便快速、 能有效地減少了基體成分的干擾、高靈敏度、高分辨率，利用四極桿串聯飛行時間質譜定性 的功能，對已知和未知的酸性或堿性的可疑化合物進行檢測，大大地減少了假陽性等誤判 事件的水產品中43種人工合成色素的篩查方法。
[0005] 本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為；水產品中43種人工合成色素的 篩查方法，包括W下步驟，采用液相色譜的四極桿串聯飛行時間質譜篩查，調用已建立的質 譜篩查數據庫W分子式匹配模式自動掃描檢索，質量允許誤差控制在5ppm;其特征在于： 使用 3. 0X 100mm，1. 8 y m 的 Agilent Eclipse Plus-C18 作為分析柱，W 5 毫 mol/L 己酸錠 水溶液含0. 1 %甲酸的己膳溶液為流動相進行梯度洗脫，流速0. 3ml/min ;采用電噴霧離子 源在負離子模式下進行檢測，提取可疑樣品，用基質分散法凈化，液相色譜分離，外標法定 量測定，確證，上述為體積百分比；所述43種人工合成色素為28種為酸性色素和15種堿性 色素，所述28種人工合成的酸性色素染料為；覽菜紅，日落黃，頗藍，誘惑紅，亮黑PN，蒙酪 黃S，酸性紅18,酸性黃17,嗟林黃、酸性紅2G，亮綠SF、偶氮玉紅，酸性紅26,羊毛綠，澄色 I，澄色II，監牢綠FCF、蒙酪藍黑，酸性藍，酸性紅52,赤薛紅，巧光桃紅，酸性黃36,酸性綠 3,巧光素鋼、孟加拉玫瑰紅，酸性紅87,麗春紅SX;所述15種人工合成的堿性色素染料為： 金胺、隱性孔雀石綠、孔雀石綠、蘇丹紅III、蘇丹紅IV、蘇丹黃、蘇丹黑B、堿性澄II、羅丹明 B、蘇丹澄、蘇丹紅7B、蘇丹紅G、蘇丹紅I、蘇丹紅II、橘紅2號。
[0006] 上述數據庫的建立步驟選擇為：
[0007] -、將化合物的名稱、分子式、保留時間、母離子質荷比信息加入到化合物數據庫 MassHunter 軟件中；
[000引二、進行化合物標樣配置，準確稱量標準品于100ml容量瓶中，用甲醇定容，配置 成濃度lOug/ml ;
[0009]=、標樣直接質譜進樣，進行一級準確質量數的采集，優化離子源參數和質譜電 壓，掃描采集參數；
[0010] 四、對于已采集并確認的化合物一級準確質量數，進行針對性的二級質譜掃描采 集，并進行不同碰撞能量下的測試，最終將二級全質量碎片信息加入到化合物數據庫軟件 中，為樣品進行二級精確匹配。
[0011] 上述色譜條件選擇為；采用AgilentEclipsePlus-ClS分離，AgilentEclipse Plus-C18的規格為；3.0X100mm，1.8ym，流動相；A相為5毫mol/L己酸錠，體積百分比 0. 1 %的甲酸水溶液；B相為己膳，分析柱溫度控制為30°C，樣品溫度為25°C，進樣體積為 3yL，流速為0. 2ml/min，梯度洗脫程序為；0~1分鐘，5 %~20 %B相；1~10分鐘，20 %~ 100%B相；10~15分鐘，100%B相，上述為體積百分比。
[0012]上述流動相的選擇為：甲醇0. 1 %，甲酸水溶液，己膳0. 1 %甲酸水溶液，含0. 1 % 甲醇的甲酸5毫mol/L己酸錠溶液和己膳，含0. 1%甲酸的5毫mol/L己酸錠溶液作為流動 相分析比較色素分離結果。
[0013] 上述優化離子源參數和質譜電壓選擇為；選取負離子模式，在全掃描方式下優化 離子化電壓、毛細管電壓、母離子質荷比范圍、離子源溫度、裂解溫度、脫溶劑氣流速參數， 所述采集數據為；優化碰撞電壓，通過不同的碰撞電壓進行碎裂，把全息二級圖譜進行數據 庫建立，最終確定質譜條件，同時將一級質量數，同位素豐度和二級碎片信息建立成一個完 成的數據庫。
[0014] 可疑樣品的提取方法為：酸性色素的可疑樣品用氨化己醇提取，而對堿性可疑樣 品用含有1%己酸的己膳提取，所述百分比為體積百分比。
[0015] 上述確證方法為；分子特征提取：對原始數據進行處理并結合數據庫進行匹配， 采用四極桿串聯飛行時間質譜進行分析，然后自動生成確證結果，對陽性制備樣品保留時 間結合離子源進一步確證。
[0016] 上述進一步確證的步驟選擇為；采用MSC結構的解析軟件對可疑化合物進行進一 步結構確證，然后自動生成進一步確證結果。
[0017] 上述四極桿串聯飛行時間質譜采用一級信息匹配和二級信息的匹配，通過一級信 息匹配與二級信息的匹配相結合獲得化合物篩查的準確度。
[0018] 上述的基質分散法W及梯度洗脫法均為本技術領域的公知技術，還有，所述軟件 如Mass化nter軟件W及MSC結構的解析軟件均不公知技術，在此不再細述。
[0019]現有技術相比，本發明的優點在于：本發明的檢測方法操作簡便快速，靈敏度高， 其回收率及重復性能滿足日常檢測的要求，采用基質分散法凈化樣品，有效地減少了基體 成分的干擾，而且，本方法具有高通量、高靈敏度、高分辨率，高質量精確度及可行的線性范 圍，利用四極桿串聯飛行時間質譜定性的功能，對已知和未知化合物進行檢測，大大地減少 了假陽性等誤判事件，極大地提高了檢測機構對水產品風險的監測能力，經檢測后的水產 品更為衛生安全；特別是發明的檢測方法對現有的"食品中36種人工合成色素高通量快速 篩查方法"相比，具有=大優點：一、本發明能夠二級精確匹配，二、不僅能夠對酸性色素進 行檢測，而且還能用于堿性色素檢測，從而使檢測更方便、應用范圍也更廣，=、樣品前處理 方法簡便快捷，所使用的基質分散管均自制，既可W降低購買成本，而自制的基質分散管質 量保證，使使用效果更好。
【附圖說明】
[0020] 圖1是本發明28種酸性色素標準溶液的峰面積小于流動相標準溶液的峰面積 圖；
[0021] 圖2是本發明實施例中28種酸性色素的陽性樣品的提取離子流圖；
[0022] 圖3是本發明實施例中28種酸性色素另一陽性樣品的提取離子流圖；
[0023] 圖4是本發明實施例28種酸性色素標準品的提取離子流圖；
[0024] 圖5是本發明實施例中28種酸性色素中的酸性紅18二級碎片圖譜；
[0025] 圖6是本發明實施例中種酸性色素中的偶氮玉紅二級碎片圖譜；
[0026] 圖7是本發明實施例15種堿性合成色素混合標準液的總離子流色譜圖；
[0027] 圖8是本發明堿性色素中基質標準溶液的峰面積小于流動相標準溶液的峰面積 圖；
[0028] 圖9本發明15種堿性合成色素中是陽性樣品的總離子流圖。
[0029] 圖10是本發明實施例中28種酸性色素中麗春紅SX同分異構體質譜圖；
[0030] 圖11是本發明實施例中28種酸性色素中酸性紅同分異構體質譜圖。
【具體實施方式】
[0031] W下結合附圖實施例對本發明作進一步詳細描述。
[0032] -、對人工合成28種酸性色素的檢測方法作具體說明，
[0033] 如圖1至圖6所示；
[0034]1試劑
[00巧]1. 1 標準物質；