本(ben)發明涉及中藥質量(liang)分析檢測，特別涉及一種消乳丸物質基準(zhun)指紋(wen)圖(tu)(tu)譜的構建方(fang)法及其指紋(wen)圖(tu)(tu)譜。

背景技術：

1、經典(dian)名方消(xiao)乳(ru)丸(wan)出(chu)自(zi)明朝魯伯嗣(si)所著的《嬰童(tong)百問》，該(gai)方由香附(fu)、甘草、陳(chen)皮、砂(sha)仁和神(shen)曲六(liu)味藥材組成，具(ju)體處方及制法為(wei)：香附(fu)一(yi)兩(炒)，甘草(炙)、陳(chen)皮各半兩，縮砂(sha)仁、神(shen)曲(炒)、麥(mai)芽(炒)各一(yi)兩。右為(wei)末，泡雪糕丸(wan)如黍米大。有(you)溫(wen)中快(kuai)膈(ge)止嘔(ou)吐(tu)(tu)(tu)，消(xiao)乳(ru)食之(zhi)效；主(zhu)治(zhi)百晬內嘔(ou)吐(tu)(tu)(tu)乳(ru)汁或大便青色；吐(tu)(tu)(tu)自(zi)口角(jiao)出(chu)；吐(tu)(tu)(tu)食吐(tu)(tu)(tu)乳(ru)；鬾病；驚瀉(xie)；宿食不消(xiao)。

2、

3、目前(qian)，對于(yu)消乳丸(wan)的(de)研究還相對不(bu)足(zu)，缺(que)乏質量控(kong)制(zhi)的(de)深入研究，無法全(quan)面(mian)反映出(chu)中藥多成分共同作用的(de)藥效特點，也無法為其(qi)質量提供充分的(de)控(kong)制(zhi)與評價依據。

技術實現思路

1、針對現有檢(jian)測方(fang)法(fa)的(de)不足，本發明提(ti)供(gong)一種消(xiao)乳丸物質基準指紋圖(tu)譜的(de)構建方(fang)法(fa)及其指紋圖(tu)譜，能夠為消(xiao)乳丸的(de)鑒(jian)別和質量控制(zhi)提(ti)供(gong)可靠(kao)依據。

2、本(ben)發明通(tong)過以下技術方(fang)案(an)實現：

3、一種消乳丸物質(zhi)基準指紋圖(tu)譜的構(gou)建方(fang)法，包括以下步驟：

4、s1、取消乳丸物質基準，采用甲醇溶液(ye)進(jin)行超聲提取，得供試品溶液(ye)；

5、s2、取橘皮(pi)(pi)素(su)、橙皮(pi)(pi)苷、大黃素(su)甲醚、甘草苷、甘草次酸、柚皮(pi)(pi)素(su)、香草酸、兒(er)茶素(su)、甘草素(su)和川陳皮(pi)(pi)素(su)對照品，分別加甲醇溶(rong)液溶(rong)解(jie)，得(de)到(dao)單(dan)一對照品溶(rong)液；

6、s3、將s1中供(gong)試品(pin)溶(rong)液和s2中各單(dan)一對照品(pin)溶(rong)液，分(fen)(fen)別注入高(gao)效液相色譜儀進行色譜分(fen)(fen)析(xi)，在相同的條件下進行檢測，得到供(gong)試品(pin)色譜圖(tu)(tu)和對照品(pin)色譜圖(tu)(tu)；

7、s4、將供試品溶液進行高分辨質(zhi)譜(pu)分析(xi)，得到總離子流圖以及化學成分的質(zhi)譜(pu)結果圖；

8、s5、根據總離子流圖(tu)以(yi)及化學成分的質譜結(jie)果(guo)圖(tu)結(jie)合對照品色(se)譜圖(tu)確定(ding)供試品色(se)譜圖(tu)中(zhong)各峰的化學成分，得到消乳丸物質基準指(zhi)紋圖(tu)譜。

9、優選的，s1中，所述甲醇(chun)溶(rong)液為純(chun)甲醇(chun)。

10、優(you)選(xuan)的，s3中的液(ye)相色譜條件為(wei)：色譜柱：shim-pack?vp-ods色譜柱；檢測器(qi)：紫外可(ke)見吸(xi)收檢測器(qi)，檢測波(bo)長為(wei)275nm。

11、優選的，s3中，色譜分析時，流(liu)動相為甲醇(a)-0.1％磷酸水溶液(b)。

12、進一步的，s3中(zhong)，色譜分析采用梯度洗脫(tuo)，洗脫(tuo)程(cheng)序如下(xia)：

13、

14、優選的，s3還(huan)包(bao)括：將(jiang)不同批次供試品溶(rong)液(ye)和對照(zhao)品溶(rong)液(ye)色(se)譜圖導(dao)出，將(jiang)供試品溶(rong)液(ye)色(se)譜圖導(dao)入中藥色(se)譜指紋(wen)圖譜相(xiang)似度評(ping)價系統并進行(xing)相(xiang)似度分析，確認結(jie)果的可靠性。

15、進(jin)一(yi)步的，具(ju)體為：將不(bu)同批次供(gong)試品(pin)溶液(ye)和對(dui)照(zhao)品(pin)溶液(ye)色(se)(se)譜(pu)圖(tu)(tu)導(dao)(dao)入中藥(yao)色(se)(se)譜(pu)指紋圖(tu)(tu)譜(pu)相(xiang)似度(du)評價系統；選(xuan)擇(ze)不(bu)同批次消乳丸(wan)物(wu)質基(ji)準(zhun)(zhun)的色(se)(se)譜(pu)圖(tu)(tu)中均(jun)存在的色(se)(se)譜(pu)峰作為共有峰；經過數據導(dao)(dao)入、多點矯正和數據匹配，進(jin)行相(xiang)似度(du)分析(xi)；獲得不(bu)同批次消乳丸(wan)物(wu)質基(ji)準(zhun)(zhun)色(se)(se)譜(pu)圖(tu)(tu)與共有峰模式之間的相(xiang)似度(du)結果(guo)(guo)表并導(dao)(dao)出；根據相(xiang)似度(du)結果(guo)(guo)表及(ji)消乳丸(wan)物(wu)質基(ji)準(zhun)(zhun)色(se)(se)譜(pu)圖(tu)(tu)，確(que)認結果(guo)(guo)的可靠性。

16、優選的，s4中，高(gao)分辨質譜檢測條件(jian)為：電噴霧電離，噴霧電壓3500v，鞘氣流速(su)40arb，輔助(zhu)(zhu)氣流速(su)10arb，毛細管溫度300℃，輔助(zhu)(zhu)氣溫度300℃，掃(sao)描(miao)模式為全掃(sao)描(miao)模式，質荷比(bi)掃(sao)描(miao)范圍m/z為100-1300。

17、優(you)選的，s5中(zhong)，確定的供試品色(se)譜圖中(zhong)各峰(feng)(feng)(feng)(feng)的化學成分，分別為(wei)(wei)：2號(hao)(hao)(hao)峰(feng)(feng)(feng)(feng)為(wei)(wei)兒茶素(su)，4號(hao)(hao)(hao)峰(feng)(feng)(feng)(feng)為(wei)(wei)香草酸，5號(hao)(hao)(hao)峰(feng)(feng)(feng)(feng)為(wei)(wei)大黃素(su)甲醚，7號(hao)(hao)(hao)峰(feng)(feng)(feng)(feng)為(wei)(wei)甘(gan)(gan)草苷(gan)，9號(hao)(hao)(hao)峰(feng)(feng)(feng)(feng)為(wei)(wei)橙皮(pi)苷(gan)，13號(hao)(hao)(hao)峰(feng)(feng)(feng)(feng)為(wei)(wei)甘(gan)(gan)草素(su)，19號(hao)(hao)(hao)峰(feng)(feng)(feng)(feng)為(wei)(wei)柚皮(pi)素(su)，26號(hao)(hao)(hao)峰(feng)(feng)(feng)(feng)為(wei)(wei)川陳皮(pi)素(su)，30號(hao)(hao)(hao)峰(feng)(feng)(feng)(feng)為(wei)(wei)橘皮(pi)素(su)，45號(hao)(hao)(hao)峰(feng)(feng)(feng)(feng)為(wei)(wei)甘(gan)(gan)草次酸。

18、本發明還提供如上所(suo)述的構(gou)建方法得到的消(xiao)乳丸物質基(ji)準指(zhi)紋圖譜。

19、與現有(you)(you)(you)技(ji)術相比，本發明具有(you)(you)(you)如(ru)下的(de)有(you)(you)(you)益效果：

20、本發(fa)(fa)明首(shou)次建(jian)(jian)立了消(xiao)乳(ru)(ru)(ru)(ru)丸(wan)(wan)(wan)(wan)物質基準指(zhi)紋(wen)圖(tu)譜，采用(yong)高效(xiao)液(ye)相(xiang)色(se)譜-高分(fen)辨質譜聯用(yong)的(de)(de)(de)方(fang)(fang)法，對消(xiao)乳(ru)(ru)(ru)(ru)丸(wan)(wan)(wan)(wan)中的(de)(de)(de)化學(xue)(xue)成(cheng)分(fen)種類和數(shu)量進行了詳(xiang)盡分(fen)析與(yu)(yu)確認，尤其對其中關鍵藥效(xiao)成(cheng)分(fen)進行了快(kuai)速(su)、準確、科學(xue)(xue)的(de)(de)(de)識別與(yu)(yu)分(fen)析，可(ke)(ke)從(cong)總體(ti)(ti)上反映消(xiao)乳(ru)(ru)(ru)(ru)丸(wan)(wan)(wan)(wan)中所含化學(xue)(xue)成(cheng)分(fen)的(de)(de)(de)信息，體(ti)(ti)現消(xiao)乳(ru)(ru)(ru)(ru)丸(wan)(wan)(wan)(wan)的(de)(de)(de)特征(zheng)性和整體(ti)(ti)性，對消(xiao)乳(ru)(ru)(ru)(ru)丸(wan)(wan)(wan)(wan)的(de)(de)(de)成(cheng)分(fen)鑒別、質量評價(jia)以及質量標準的(de)(de)(de)制(zhi)定(ding)具有(you)重要的(de)(de)(de)意義。高效(xiao)液(ye)相(xiang)色(se)譜法(hplc)是一種高效(xiao)、精(jing)密(mi)的(de)(de)(de)分(fen)析技術，其分(fen)離效(xiao)率高、分(fen)析速(su)度快(kuai)、定(ding)量精(jing)密(mi)度高、檢(jian)測(ce)器種類多樣(yang)且穩定(ding)性好(hao)(hao)等特點(dian)使其成(cheng)為(wei)構建(jian)(jian)指(zhi)紋(wen)圖(tu)譜的(de)(de)(de)理(li)想選擇。不(bu)受(shou)樣(yang)品揮發(fa)(fa)度和熱穩定(ding)性的(de)(de)(de)限制(zhi)，樣(yang)品中大多數(shu)成(cheng)分(fen)均可(ke)(ke)在高效(xiao)液(ye)相(xiang)色(se)譜儀上進行分(fen)析檢(jian)測(ce)，是構建(jian)(jian)指(zhi)紋(wen)圖(tu)譜的(de)(de)(de)主要方(fang)(fang)法之一。本發(fa)(fa)明采用(yong)的(de)(de)(de)液(ye)質聯用(yong)方(fang)(fang)法操(cao)作(zuo)簡便、穩定(ding)性好(hao)(hao)、精(jing)密(mi)度高、重現性好(hao)(hao)。

21、進(jin)(jin)一步(bu)的，本發明通(tong)過(guo)對提(ti)(ti)取(qu)溶劑(ji)、提(ti)(ti)取(qu)方(fang)式、流動(dong)相(xiang)、柱溫、檢測波長(chang)等條件進(jin)(jin)行優(you)化，最終確定(ding)液相(xiang)色(se)譜(pu)(pu)采用(yong)shim-pack?vp-ods(250mm×4.6mm，5μm)色(se)譜(pu)(pu)柱，流動(dong)相(xiang)為(wei)甲醇(chun)(a)-0.1％磷酸水溶液(b)，梯度洗脫。構建的指(zhi)紋(wen)圖譜(pu)(pu)化學信(xin)息豐(feng)富，能(neng)使(shi)多種有效成分(fen)(fen)得(de)到良好的分(fen)(fen)離，結合對照品(pin)溶液色(se)譜(pu)(pu)圖，最終指(zhi)認出10個化學成分(fen)(fen)，可以有效且全面地(di)對消(xiao)乳(ru)丸及其藥物制(zhi)(zhi)劑(ji)進(jin)(jin)行檢測，填補了經典名方(fang)消(xiao)乳(ru)丸質量控(kong)制(zhi)(zhi)中指(zhi)紋(wen)圖譜(pu)(pu)的空白，為(wei)消(xiao)乳(ru)丸及其相(xiang)關(guan)制(zhi)(zhi)劑(ji)研究提(ti)(ti)供參(can)考和(he)依(yi)據。

技術特征：

1.一種(zhong)消乳丸物(wu)質基準指紋(wen)圖(tu)譜的構建方法，其特征在于，包括以下步驟(zou)：

2.根據權利要求1所述一(yi)種(zhong)消乳丸(wan)物質(zhi)基準指(zhi)紋圖譜構建方法，其特征在于，s1中，所述甲(jia)醇溶液為純甲(jia)醇。

3.根據權利(li)要求(qiu)1所述的(de)一種消乳丸(wan)物質基準(zhun)指(zhi)紋圖譜(pu)(pu)的(de)構建(jian)方法，其特(te)征在于，s3中的(de)液(ye)相色譜(pu)(pu)條(tiao)件為(wei)：色譜(pu)(pu)柱：shim-pack?vp-ods色譜(pu)(pu)柱；檢(jian)測器：紫外可(ke)見(jian)吸收檢(jian)測器，檢(jian)測波長為(wei)275nm。

4.根據權(quan)利要求(qiu)1所(suo)述(shu)的(de)一(yi)種消乳丸物(wu)質基準指紋圖譜(pu)的(de)構建方法(fa)，其特征在于，s3中，色譜(pu)分(fen)析時，流動相為甲醇(a)-0.1％磷酸水(shui)溶液(b)。

5.根(gen)據權(quan)利(li)要(yao)求(qiu)4所述的(de)一種消乳丸物質基準指紋圖譜的(de)構建方法，其特征在(zai)于，s3中，色譜分析采(cai)用梯(ti)度洗(xi)脫，洗(xi)脫程序如下：

6.根據權利(li)要(yao)求1所述(shu)的(de)一種消乳丸物質基準指(zhi)紋圖(tu)(tu)譜(pu)的(de)構建方法，其特征在(zai)于，s3還(huan)包括：將不同批次供(gong)試(shi)品溶(rong)液和對照品溶(rong)液色(se)(se)譜(pu)圖(tu)(tu)導出，將供(gong)試(shi)品溶(rong)液色(se)(se)譜(pu)圖(tu)(tu)導入中藥(yao)色(se)(se)譜(pu)指(zhi)紋圖(tu)(tu)譜(pu)相(xiang)似度(du)評(ping)價系(xi)統(tong)并進行(xing)相(xiang)似度(du)分(fen)析，確認結果的(de)可靠性。

7.根據(ju)權利要求(qiu)6所述的一種(zhong)消乳(ru)丸物(wu)(wu)質基(ji)準指(zhi)紋圖(tu)譜(pu)(pu)(pu)的構建方(fang)法(fa)，其特征在于，具體為：將(jiang)不同批(pi)次供試品溶(rong)液(ye)和對照品溶(rong)液(ye)色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)圖(tu)導(dao)入中藥(yao)色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)指(zhi)紋圖(tu)譜(pu)(pu)(pu)相似度(du)(du)評價系(xi)統；選擇(ze)不同批(pi)次消乳(ru)丸物(wu)(wu)質基(ji)準的色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)圖(tu)中均存在的色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)峰作為共有峰；經過數(shu)據(ju)導(dao)入、多點矯正和數(shu)據(ju)匹配，進行(xing)相似度(du)(du)分析(xi)；獲(huo)得(de)不同批(pi)次消乳(ru)丸物(wu)(wu)質基(ji)準色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)圖(tu)與共有峰模式之間的相似度(du)(du)結果(guo)表并(bing)導(dao)出；根據(ju)相似度(du)(du)結果(guo)表及消乳(ru)丸物(wu)(wu)質基(ji)準色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)圖(tu)，確認結果(guo)的可(ke)靠(kao)性。

8.根據權利要(yao)求(qiu)1所述的(de)一(yi)種消乳丸物(wu)質基準(zhun)指紋圖譜(pu)的(de)構建(jian)方法，其特征在(zai)于，s4中(zhong)，高(gao)分辨質譜(pu)檢測(ce)條(tiao)件為(wei)：電噴(pen)霧電離，噴(pen)霧電壓3500v，鞘氣(qi)流速(su)40arb，輔助(zhu)氣(qi)流速(su)10arb，毛細管溫度300℃，輔助(zhu)氣(qi)溫度300℃，掃描模式為(wei)全掃描模式，質荷比(bi)掃描范圍m/z為(wei)100-1300。

9.根據權利要(yao)求1所(suo)述的(de)一種消乳(ru)丸物質基準指紋圖譜(pu)的(de)構建方法，其特征在(zai)于，s5中，確定(ding)的(de)供試品(pin)色譜(pu)圖中各峰的(de)化學成分(fen)，分(fen)別為(wei)(wei)(wei)：2號(hao)(hao)(hao)峰為(wei)(wei)(wei)兒茶素(su)，4號(hao)(hao)(hao)峰為(wei)(wei)(wei)香(xiang)草(cao)(cao)酸，5號(hao)(hao)(hao)峰為(wei)(wei)(wei)大(da)黃素(su)甲醚，7號(hao)(hao)(hao)峰為(wei)(wei)(wei)甘草(cao)(cao)苷(gan)，9號(hao)(hao)(hao)峰為(wei)(wei)(wei)橙皮(pi)苷(gan)，13號(hao)(hao)(hao)峰為(wei)(wei)(wei)甘草(cao)(cao)素(su)，19號(hao)(hao)(hao)峰為(wei)(wei)(wei)柚皮(pi)素(su)，26號(hao)(hao)(hao)峰為(wei)(wei)(wei)川陳皮(pi)素(su)，30號(hao)(hao)(hao)峰為(wei)(wei)(wei)橘皮(pi)素(su)，45號(hao)(hao)(hao)峰為(wei)(wei)(wei)甘草(cao)(cao)次酸。

10.采用權(quan)利要求1～9任一項所述的構建方法(fa)得(de)到的消乳丸物(wu)質基準指紋圖譜。

技術總結
本發明提供了一種消乳丸物質基準指紋圖譜的構建方法及其指紋圖譜，所述構建方法包括采用高效液相色譜結合高分辨質譜分析待測樣品，得到消乳丸指紋圖譜。本發明采用的液質聯用方法操作簡便、穩定性好、精密度高、重現性好，構建的指紋圖譜化學信息豐富，能使多種有效成分得到良好的分離，結合對照品溶液色譜圖，最終指認出10個化學成分，可以有效且全面地對消乳丸及其藥物制劑進行檢測，填補了經典名方消乳丸質量控制中指紋圖譜的空白，為消乳丸及其相關制劑研究提供參考和依據。

技術研發人員：趙倩倩,張博鑫,周晶晶,柯昌華,胡津榮,劉玉婷,王燕子,楊珊,楊岫錠,熊慧,張德柱,高鴻,李菡,梁承遠
受保護的技術使用者：陜西科技大學
技術研發日：
技術公布日：2024/9/19