專利名稱：：一種快速檢測乳粉中三聚氰胺的方法
技術領域：
：本發明屬于食品安全檢測領域，具體涉及食品中有害殘留物的檢測方法，特別是涉及一種快速檢測乳粉中三聚氰胺的方法領域。
背景技術：
：三聚氰胺(Me/aw/we，MEL),學名1,3,5-三氨基-2,4,6-三口秦(1,3,5-7H(3脂'"e-2,4,6-7H"d打e)，分子式C3N3(NH2)3，分子量126.12。簡稱三胺、又稱2,4,6-三氨基脲、蜜胺、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺等，白色結晶粉末，無味，是一種三溱類含氮雜環化合物，重要的有機化工原料，廣泛用于塑料、涂料、粘合劑、食品包裝材料、消毒劑、化肥和殺蟲劑的生產。三聚氰胺最主要的用途是作為生產三聚氰胺曱醛樹脂(MF)的原料。由于食品和祠料工業蛋白質含量測試方法的缺陷，三聚氰胺也常被不法商人用作食品添加劑，以提升食品檢測中的蛋白質含量指標，因此三聚氰胺也被人稱為"蛋白精"。資料表明,三聚氰胺可能從環境、食品包裝材料等途徑進入到食品中，其含量很低。三聚氰胺不是食品原料，也不是食品添加劑，禁止人為添加到食品中。蛋白質主要由氨基酸組成，其含氮量一般不超過30%,而三聚氰胺的分子式含氮量為66.7%左右。通用的蛋白質測試方法"凱氏定氮法"是通過測出含氮量來估算蛋白質含量，因此，添加三聚氰胺會使得食品的蛋白質測試含量偏高，從而使劣質食品通過食品檢驗機構的測試。但是食用添加了三聚氰胺的食品，會導致中毒和腎結石。2007年，美國報道了寵物貓、狗因食入含三聚氰胺飼料而死亡的事件，事后調查表明摻雜了6.6%三聚氰胺的小麥蛋白粉是寵物食品導致中毒的原因。隨后美國食品藥品管理局(FDA)制訂了相應的檢驗方法。2008年9月11日，有關部門披露，某些奶粉中含有三聚氰胺，導致了一些嬰幼兒因食用含三聚氰胺奶粉而出現腎結石癥狀，少數嬰幼兒搶救無效而死亡。隨后在一些液體奶、乳制品及含乳食品中也檢出三聚氰胺，給整個食品行業帶來巨大的沖擊，社會影響極壞。在檢出三聚氰胺的產品中，石家莊三鹿牌嬰幼兒配方奶粉三聚氰胺含量很高，其中最高的達2563mg/kg。2008年10月，國家有關部門參考美國食品藥品管理局(FDA)和美國食品化學品法典(FCC)三聚氰胺檢測方法，制定了《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》國家標準(GB/T223888-2008)。2008年10月7日，衛生部等5部門乂>布了乳制品及含乳食品中三聚氰胺臨時管理限量值，公告規定一、嬰幼兒配方乳粉中三聚氰胺的限量值為lmg/kg,高于lmgZkg的產品一律不得銷售。二、液態奶(包括原料乳)、奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值為2.5mg/kg,高于2.5mg/kg的產品一律不得銷售。三、含乳15%以上的其他食品中三聚氰胺的限量值為2.5mg/kg，高于2.5mg/kg的產品一律不得銷售。測定三聚氰胺的方法有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質譜法(GC-MS)和高效液相色譜-串聯質譜(HPLC-MS/MS)。HPLC的靈敏度較低且無法提供結構信息，一般常作為篩選方法；GC-MS、HPLC-MS/MS能夠進行確證分析。GB/T22388-2008《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》規定了原料乳與乳制品中三聚氰胺的三種測定方法，即HPLC法、GC-MS法、HPLC-MS/MS法。GB/T22388-2008《原料乳與乳制品中三聚氰胺;^測方法》中氣相色譜-質譜法(GC-MS)法樣品前處理繁瑣、需耗用大量試劑、費時、成本高，而且每次4全測樣品有限，不適應大量標本的篩查，也不適合現場快速的檢測，不能高通量的檢測樣品中三聚氰胺。因此，探索和研究簡便、快速，靈敏、準確、低成本、耐用的檢測食品中三聚氰胺的方法，對于維護食品安全，保護人民的身體健康和消費者的合法權益，促進食品行業的快速發展均具有重要意義。
發明內容針對GB/T22388-2008《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》中氣相色譜-質譜法(GC-MS)法樣品前處理繁瑣、需耗用大量試劑、費時、成本高，而且每次4企測樣品有限，不適應大量標本的篩查，也不適合現場快速的外企測，不能高通量的檢測乳粉中三聚氰胺的缺陷。本發明的目的在于提供了一種測定乳粉中三聚氰胺的簡便、快速，靈敏、準確、^氐成本、耐用的確i正和定量方法。本發明具體提供了一種測定乳粉中三聚氰胺的確證和定量方法。本發明的技術方案通過建立了GC-MS法測定乳粉中三聚氰胺的方法，用乙酸-乙腈-水溶液超聲提取乳粉中的三聚氰胺，離心后過濾，濾液經混合型陽離子交換固相萃取柱凈化，氮氣吹干，微波加熱衍生化反應，縮短反應時間，通過對選擇離子監測模式選擇離子的優化，消除基質影響，增強抗干擾能力，降低檢測限和提高定量重現性。從而建立了一種測定奶油餅干中三聚氰胺簡便、快速、靈敏、準確、低成本、耐用的確i正和定量方法。本發明具體提供了一種測定乳粉中三聚氰胺的方法步驟如下稱取0.50克乳粉樣品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管，加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振搖，乙酸-乙腈-水溶液按照體積比1:70:29配制，超聲提取10-30min,4500r/min離心5-10min，過濾后經固相萃取柱依次用3-5mL的甲醇活化，3-5mL水平衡，準確移取4-6mL濾液上柱，依次用3-5mL的0.1-0.3mol/L鹽酸溶液，3-5mL的甲醇淋洗，用吸耳球將小柱吹干，用3-5mL5。/。氨水甲醇洗脫，用5mL刻度試管收集洗脫液，在45-75°C氮吹濃縮至干后，加入200|aL吡啶和200jaL衍生化試劑，用玻璃磨口塞密封，在800W微波高檔條件下反應2-8min，冷卻，轉移至L5mL高回收率樣品瓶中，供氣相色譜-質譜測定。本領域所熟知，三聚氰胺微溶于水(3.1g/L，2(TC)、乙醇、弱酸和弱堿等，可溶于甲醇、吡啶、二甲基亞砜，水溶液呈弱堿性。三聚氰胺屬于極性化合物、堿性化合物，因此提取溶劑一般都選用稀酸溶液、有機溶劑和水的混合溶液、極性較強的有機溶劑或援沖溶液。本發明選擇乙酸-乙腈-水溶液為提取溶劑，加入乙酸有利于提高三聚氰胺萃取率，加入乙腈有利于沉淀水溶性蛋白，減少干擾，本發明采用的乙酸-乙腈-水溶液可有效的沉淀牛奶樣品中的蛋白質和部分脂肪，過濾迅速，濾液澄清。本發明通過對選擇離子監測模式(SIM)離子選擇的優化，有效消除復雜基體千擾三聚氰胺的特征離子為99、171、197、285、327、342,GB/T22388-2008《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》中GC-MS法使用的特征離子為99、171、327、342。經對乳粉加標樣品的分析，樣品基質中含有99、171離子碎片，對定量測定干擾大，本發明最終選定三聚氰胺的特征離子為197、285、327、342，采用上述離子組合來定量和確證。本領域熟知，衍生化反應一般為7(TC下加熱45min,本發明經過反復試驗確定采用在樣t波高檔800W條件下，衍生化5min,大大縮短了反應時間。通過實施本發明具體的技術指標，實現本
發明內容，可以達到以下有益效果。1.高回收率本發明中采用乙酸-乙腈-水溶液提取樣品中的三聚氰胺，使得三聚氰胺以正離子態被吸附在陽離子交換柱上，用0.1mol/L鹽酸代替水來淋洗，既可以使三聚氰胺保持正離子態被吸附在陽離子交換柱上，又可以有效除去樣品中的水溶性雜質、無機鹽和非離子化的脂溶性雜質，可減少進樣口和離子源的污染，三聚氰胺回收率介于93-107%。2.精確度高相對標準偏差小于9.2%。3.樣品前處理時間短2人在180min內可處理30份樣品，可實現對樣品中三聚氰胺進行高通量檢測。4.沉淀蛋白質效果好本發明經過創新優選，最終選擇乙酸-乙腈-水溶液為提取溶劑，有效的沉淀樣品中的蛋白質和部分脂肪，過濾迅速，濾液澄清。5.凈化效果好樣品加標譜圖"千凈，，，在三聚氰胺衍生物出峰時間無干擾，利于準確確證和定量。6.樣品稱樣量少，溶劑使用量少，污染小，環保樣品稱樣量僅為1克，通過對提取溶劑的篩選和優化，選擇出提取效率最佳的溶劑組合，每份奶油餅干樣品溶劑使用量僅為22mL,且不使用含氯化物溶劑，廢棄物少。7.流程簡單搡作性強，易于掌握，無需良好訓練和較高技能便能很好完成。8.使用很少的玻璃器皿只需使用15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管、5mL刻度試管、1.5mL高回收率樣品瓶。9.樣品制備過程中所使用裝置簡單只需小型超聲波清洗器、小型離心機、12孔固相萃取裝置、氮吹儀、渦旋混合器等，便于推廣應用。10.所需空間小，在小型實驗室便可完成樣品奶油餅干的前處理可在10平方的房間內完成，易于實現現場一企驗。11.成本低使用的試劑為實驗室常用試劑，價格便宜，易于采購，用量少。12.本發明通過對選擇離子監測(SIM)模式離子選擇的優化，有效消除復雜基體干擾選定三聚氰胺的特征離子為197、285、327、342,采用上述離子組合來定量和確證，為該發明為首創。13.本發明首次采用微波加熱衍生化反應，縮短反應時間衍生化反應一般為？(TC下加熱45min,本發明經過試驗確定采用在微波高檔800W條件下，衍生化5min，大大縮短了反應時間，為該發明為首創。圖1所示為三聚氰胺衍生物質譜圖2所示為添加1.Omg/kg三聚氰胺乳粉樣品SIM質語圖。具體實施例方式下面，舉實施例說明本發明，但是，本發明并不限于下述的實施例。另夕卜，在下述的說明中，如無特別說明，％皆指重量百分比。本發明中設備和材料有Jgz7eW7890A/5975C氣相色譜-質譜儀(美國^g/fe"/公司)，配備7683自動進樣器、增強型化學工作站；18790干熱樣品濃縮裝置(美國巧erce公司)；微波爐(格蘭仕公司，800W);小型離心機；超聲波清洗器；1.5mL螺紋口高回收率樣品瓶(美國JgZ/eW公司，P/N5183-2030)。三聚氰胺標準品純度為99.5°/。，C/7ewserv/ce公司提供；BESEP②混合型陽離子交換固相萃取柱，60mg/3mL，北京振翔公司；衍生化試劑N，O-雙三曱基-硅基三氟乙酰胺(SS7K4)+1%三曱基氯硅烷(rMCS),德國Mac/ze^yiVage/公司；吡啶(優級純)；曱醇、乙腈(色語純)；冰乙酸(分析純)；鹽酸(分析純)；氨水(分析純)；水為超純水。實施例一稱取0.50克乳粉樣品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管，加入lOmL乙酸-乙腈-水溶液振搖，乙酸-乙腈-水溶液按照體積比1:70:29配制，超聲提取10min,4500r/min離心5min，過濾后經固相萃取柱依次用3mL的甲醇活化，3mL水平衡，準確移取4mL濾液上柱，依次用3mL的O.lmol/l鹽酸溶液，3mL的甲醇淋洗，用吸耳球將小柱吹干，用3mL5。/。氨水甲醇洗脫，用5mL刻度試管收集洗脫液，在45°C氮吹濃縮至干后，加入200jul吡。定和200ml書f生化試劑，用玻璃磨口塞密封，在800W微波高檔條件下反應2min，冷卻，轉移至1.5mL高回收率樣品瓶中，供氣相色譜-質譜測定。采用乙酸-乙腈-水溶液提取樣品中的三聚氰胺，使得三聚氰胺以正離子態被吸附在陽離子交換柱上，用0.lmol/L鹽酸代替水來淋洗，既可以使三聚氰胺保持正離子態被吸附在陽離子交換柱上，又可以有效除去樣品中的水溶性雜質、無機鹽和非離子化的脂溶性雜質，可減少進樣口和離子源的污染，獲得高的回收率，三聚氰胺回收率達93%,相對標準偏差小于9.2%，精確度高；本實驗實現2人在180min內可處理30份樣品，實現了對樣品中三聚氰胺進行高通量抬r測，樣品前處理時間短；選擇乙酸-乙腈-水溶液為提取溶劑，過濾迅速，濾液澄清，沉淀蛋白質效果好；樣品加標譜圖"干凈"，在三聚氰胺衍生物出峰時間無干擾，利于準確確證和定量，凈化效果好；不使用含氯化物溶劑，每份樣品溶劑使用量僅為22mL，樣品稱樣量少，溶劑使用量少，廢棄物少，污染小，環保；使用很少的玻璃器皿，只需使用15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管、5mL刻度試管、1.5mL高回收率樣品瓶；樣品制備過程中所使用裝置簡單，只需小型超聲波清洗器、小型離心機、12孔固相萃取裝置、氮吹儀、渦旋混合器等，便于推廣應用；所需空間小，在小型實驗室便可完成樣品的前處理可在10平方的房間內完成，易于實現現場檢驗；使用的試劑為實驗室常用試劑，價格便宜，易于采購，用量少，成本低。本發明通過對選擇離子監測(S1M)模式離子選擇的優化，有效消除復雜基體干擾三聚氰胺的特征離子為99、171、197、285、327、342，GB/T22388-2008《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》中GC-MS法使用的特征離子為99、171、327、342。經對乳粉加標樣品的分析，樣品基質中含有99、171離子碎片，對定量測定干擾大，本最終選定三聚氰胺的特征離子為197、285、327、342，采用上述離子組合來定量和確證；本發明采用微波加熱衍生化反應，大大縮短了反應時間，以上兩點為該發明為首創。實施例二稱取0.50克乳粉樣品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管，加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振搖，乙酸-乙腈-水溶液按照體積比1:70:29配制，超聲提取30min,4500r/min離心10min,過濾后經固相萃耳又柱依次用5mL的甲醇活化，5mL水平衡，準確移取6mL濾液上柱，依次用5mL的0.3mol/L鹽酸溶液，5mL的甲醇淋洗，用吸耳球將小柱吹千，用5mL5。/。氨水曱醇洗脫，用5mL刻度試管收集洗脫液，在75°C氮吹濃縮至干后，加入200juLp比咬和200jiL衍生化試劑，用玻璃磨口塞密封，在800W微波高檔條件下反應8min,冷卻，轉移至1.5mL高回收率樣品瓶中，供氣相色諳-質譜測定。采用乙酸-乙腈-水溶液提取樣品中的三聚氰胺，既可以使三聚氰胺保持正離子態被吸附在陽離子交換柱上，又可以有效除去樣品中的水溶性雜質、無機鹽和非離子化的脂溶性雜質，可減少進樣口和離子源的污染，獲得高的回收率，三聚氰胺回收率達107%,相對標準偏差小于9.2%,精確度高，且過濾迅速，濾液澄清，沉淀蛋白質效果好。本實驗2人在180min內可處理30份樣品，實現了對樣品中三聚氰胺進行高通量檢測，樣品前處理時間短；樣品加標譜圖"干凈，，，在三聚氰胺衍生物出峰時間無干擾，利于準確確證和定量，凈化效杲好；不使用含氯化物溶劑，每份樣品溶劑使用量僅為22mL,樣品稱樣量少，溶劑使用量少，廢棄物少，污染小，環保；使用很少的玻璃器皿，只需使用15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管、5mL刻度試管、1.5mL高回收率樣品瓶；樣品制備過程中所使用裝置簡單，只需小型超聲波清洗器、小型離心機、12孔固相萃取裝置、氮吹儀、渦旋混合器等，便于推廣應用；所需空間小，在小型實驗室便可完成樣品的前處理可在10平方的房間內完成，易于實現現場檢驗；使用的試劑為實驗室常用試劑，價格便宜，易于采購，用量少，成本低。本發明通過對選擇離子監測(SIM)模式離子選擇的優化，有效消除復雜基體干擾，經對乳粉加標樣品的分析，樣品基質中含有99、171離子碎片，對定量測定干擾大，選定三聚氰胺的特征離子為197、285、327、342組合來定量和確證。實施例三稱取0.50克乳粉樣品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管，加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振搖，乙酸-乙腈-水溶液按照體積比1:70:29配制，超聲提取20min，4500r/min離心8min，過濾后經固相萃耳又柱依次用4mL的曱醇活化，4mL水平tf，準確移取5mL濾液上柱，依次用4mL的0.2mol/L鹽酸溶液，4mL的甲醇淋洗，用吸耳球將小柱吹干，用4mL5。/。氨水甲醇洗脫，用5mL刻度試管收集洗脫液，在60°C氮吹濃縮至千后，加入200|uL吡咬和200nL書f生化試劑，用玻璃磨口塞密封，在800W樣丈波高檔條件下反應4min,冷卻，轉移至1.5mL高回收率樣品瓶中，供氣相色譜-質譜測定。本實驗采用乙酸-乙腈-水溶液提取樣品中的三聚氰胺獲得高的回收率達96%，相對標準偏差小于9.2%，精確度高，且過濾迅速，濾液澄清，沉淀蛋白質效果好；實現了對樣品中三聚氰胺進行高通量;f企測，樣品前處理時間短；樣品加標譜圖"干凈，，，在三聚氰胺衍生物出峰時間無干擾，利于準確確證和定量，凈化效果好；不使用含氯化物溶劑，溶劑使用量少，污染小；樣品制備過程中所使用裝置筒單，所需空間小，在小型實驗室便可完成，便于推廣應用和實現現場檢驗；使用的試劑為實驗室常用試劑，價格便宜，易于采購，用量少，成本低；本發明通過對選擇離子監測(SIM)模式選擇離子的優化，消除基質影響，增強抗干擾能力，降低檢測限和提高定量重現性。實施例四稱取0.50克乳粉樣品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管，加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振搖，乙酸-乙腈-水溶液按照體積比1:70:29配制，超聲揭:取25min,4500r/min離心9min,過濾后經固相萃耳又柱依次用4mL的曱醇活化，3.5mL水平衡，準確移取4.5mL濾液上柱，依次用3.5mL的0.2mol/L鹽酸溶液，3.5mL的甲醇淋洗，用吸耳球將小柱吹干，用3mL5。/。氨水曱醇洗脫，用5mL刻度試管收集洗脫液，在46°C氮吹濃縮至干后，加入200mL吡咬和200pL衍生化試劑，用玻璃磨口塞密封，在800W微波高檔條件下反應3min，冷卻，轉移至1.5mL高回收率樣品瓶中，供氣相色語-質譜測定。本實驗采用乙酸-乙腈-水溶液提取樣品中的三聚氰胺獲得高的回收率達98%,相對標準偏差小于9.2%,精確度高，且過濾迅速，濾液澄清，沉淀蛋白質效果好；實現了對樣品中三聚氰胺進行高通量檢測，樣品前處理時間短；樣品加標譜圖"千凈"，在三聚氰胺衍生物出峰時間無干擾，利于準確確證和定量，凈化效杲好；不使用含氯化物溶劑，溶劑使用量少，污染小；樣品制備過程中所使用裝置簡單，所需空間小，在小型實驗室便可完成，便于推廣應用和實現現場檢驗；使用的試劑為實驗室常用試劑，價格便宜，易于采購，用量少，成本低；本發明通過對選擇離子監測(SIM)模式選擇離子的優化，消除基質影響，增強抗干擾能力，降低檢測限和提高定量重現性。實施例五稱取0.50克乳粉樣品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管，加入lOmL乙酸-乙腈-水溶液振搖，乙酸-乙腈-水溶液按照體積比1:70:29配制，超聲提取29min，4500r/min離心9min,過濾后經固相萃取柱依次用5mL的甲醇活化，5mL水平衡，準確移取5.5mL濾液上柱，依次用4.5mL的03mol/L鹽酸溶液，5mL的曱醇淋洗，用吸耳球將小柱吹干，用5mL5。/。氨水曱醇洗脫，用5mL刻度試管收集洗脫液，在74。C氮吹濃縮至干后，加入200iaLp比咬和200jjL衍生化試劑，用玻璃磨口塞密封，在800W微波高檔條件下反應7min,冷卻，轉移至1.5mL高回收率樣品瓶中，供氣相色語-質譜測定。本實驗采用乙酸-乙腈-水溶液提取樣品中的三聚氰胺獲得高的回收率達105°/。，相對標準偏差小于9.2%,精確度高，且過濾迅速，濾液澄清，沉淀蛋白質效果好；實現了對樣品中三聚氰胺進行高通量檢測，樣品前處理時間短；樣品加標譜圖"干凈"，在三聚氰胺衍生物出峰時間無干擾，利于準確確證和定量，凈化效果好；不使用含氯化物溶劑，溶劑使用量少，污染小；樣品制備過程中所使用裝置簡單，所需空間小，在小型實驗室便可完成，便于推廣應用和實現現場檢驗；使用的試劑為實驗室常用試劑，價格便宜，易于采購，用量少，成本低；本發明通過對選擇離子監測(SIM)模式選擇離子的優化，消除基質影響，增強抗干擾能力，降低檢測限和提高定量重現性。實施例六稱取0.50克乳粉樣品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管，加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振搖，乙酸-乙腈-水溶液按照體積比1:70:29配制，超聲提取llmin，4500r/min離心7min，過濾后經固相萃取4主依次用3mL的甲醇活化，3mL水平衡，準確移取4.5mL濾液上柱，依次用3mL的0.1mol/L鹽酸溶液，3mL的甲醇淋洗，用吸耳球將小柱吹干，用3mL5。/。氨水甲醇洗脫，用5mL刻度試管收集洗脫液，在50°C氮吹濃縮至干后，加入200fil吡啶和200ml衍生化試劑，用玻璃磨口塞密封，在800W微波高檔條件下反應6min,冷卻，轉移至1.5mL高回收率樣品瓶中，供氣相色譜-質譜測定。本實驗采用乙酸-乙腈-水溶液提取樣品中的三聚氰胺獲得高的回收率達101%,相對標準偏差小于9.2%，精確度高，且過濾迅速，濾液澄清，沉淀蛋白質效果好；實現了對樣品中三聚氰胺進行高通量檢測，樣前處理時間短；樣品加標譜圖"干凈，，，在三聚氰胺衍生物出峰時間無干擾，利于準確確證和定量，凈化效果好；不使用含氯化物溶劑，溶劑使用量少，污染小；樣品制備過程中所使用裝置簡單，所需空間小，在小型實驗室便可完成，便于推廣應用和實現現場檢驗；使用的試劑為實驗室常用試劑，價格便宜，易于采購，用量少，成本低；本發明通過對選擇離子監測(SIM)模式選擇離子的優化，消除基質影響，增強抗干擾能力，降低^f企測限和提高定量重現性。實施例七衍生化反應一般為7(TC下加熱45min,通過實驗微波加熱衍生化反應，固定其它條件不變，改變存b皮加熱時間，分別書f生2、3、4、5、6、7、8min,結果在微波高檔800W條件下，衍生化5min,三聚氰胺衍生化產物的相對含量最大，峰面積與在70。C下，加熱45min基本相當。最優選定書f生時間5min,大大縮短了反應時間。實施例/\:參見附圖1為三聚氰胺的全掃描(SCAN)質譜圖。選擇離子監測(SIM)經常被用于降低檢測限和提高定量重現性。SIM的離子選擇應能有效消除復雜基體干擾，三聚氰胺的特征離子為99、171、197、285、327、342,經對乳粉加標樣品的分析，樣品基質中含有99、171離子碎片，對定量測定干擾大，最終選定三聚氰胺的特征離子為197、285、327、342,采用上述離子組合來定量和確證，附圖2為添加1.Omg/kg三聚氰胺乳粉樣品SIM色譜圖，三聚氰胺的保留時間為6.985min。實施例九三聚氰胺的保留時間、定量離子、定性離子及定量離子與定性離子的相對豐度見表l。表l:三聚氰胺的保留時間、定量離子、定性離子及定量離子與定性離子的相對豐度<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>定性依據進行樣品測定時，如果試樣中的質量色譜峰保留時間與標準工作溶液一致(變化范圍在±0.5%之內)；并且在扣除背景后的樣品質譜圖中，所選擇的離子均出現，而且所選擇的離子相對豐度與濃度相當標準溶液的相對豐度相差不大于20%,則可判斷樣品中存在三聚氰胺。定量方法外標法定量，采用本領域常規^支術可知。實施例十配制三聚氰胺標準系列工作溶液，三聚氰胺濃度為0.025-2.50mg/mL之間，衍生后上機測試。通過軟件計算線性范圍、相關系數。檢出限(LOD)是指信噪比(S/N)大于3時的最低檢測濃度。線性方程、相關系數、檢出限見表2。表2:三聚氰胺線性范圍、相關系數、線性方程及檢出限測定結果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實施例十一以不同類別的乳粉為樣品，做三個水平的添加試驗，分別為0.25mg/kg、0.5mg/kg、1.Qmg/kg,每個添加水平重復6次，方法回收率和相對標準偏差符合國內外有關標準和法規的要求，見表3。表3:乳粉樣品三聚氰胺添加回收率測定結果(n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>權利要求1、一種快速測定乳粉中三聚氰胺的方法，乳粉經前處理后，氣相色譜-質譜測定，選擇離子監測模式，外標法定量，其特征在于，所述的前處理步驟如下稱取0.50克乳粉樣品于15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管，加入10mL乙酸-乙腈-水溶液振搖，乙酸-乙腈-水溶液按照體積比1∶70∶29配制，超聲提取10-30min，4500r/min離心5-10min，過濾后經固相萃取柱依次用3-5mL的甲醇活化，3-5mL水平衡，準確移取4-6mL濾液上柱，依次用3-5mL的0.1-0.3mol/L鹽酸溶液，3-5mL的甲醇淋洗，用吸耳球將小柱吹干，用3-5mL5％氨水甲醇洗脫，用5mL刻度試管收集洗脫液，在45-75℃氮吹濃縮至干后，加入200μL吡啶和200μL衍生化試劑，用玻璃磨口塞密封，經微波加熱衍生化反應后轉移至樣品瓶中，供氣相色譜-質譜測定。2、按照權利要求1的測定乳粉中三聚氰胺的方法，其特征在于，所述的離子監測模式，選定三聚氰胺的特征離子為197、285、327、342離子組合來定量和確證。3、按照權利要求1的測定乳粉中三聚氰胺的方法，其特征在于，所述的微波加熱衍生化反應在孩i波高檔800W條件下，衍生化2-8min。4、按照權利要求3的測定乳粉中三聚氰胺的方法，其特征在于，所述的衍生化5min。全文摘要本發明公開了一種快速檢測乳粉中三聚氰胺的方法，通過用乙酸-乙腈-水溶液超聲提取乳粉中的三聚氰胺，離心后過濾，濾液經混合型陽離子交換固相萃取柱凈化，氮氣吹干，微波加熱衍生化反應，縮短反應時間，通過對選擇離子監測模式選擇離子的優化，消除基質影響，增強抗干擾能力，降低檢測限和提高定量重現性。從而建立了一種測定乳粉中三聚氰胺簡便、快速、靈敏、準確、低成本、耐用的確證和定量方法，廣泛應用于乳粉為代表的食品中三聚氰胺的檢測
技術領域：
。文檔編號G01N30/06GK101576543SQ20091011329公開日2009年11月11日申請日期2009年4月21日優先權日2009年4月21日發明者姚偉琴,朱慧萍,欣李,炎李,李鋒格,王昭妮,輝竇,胡建民申請人:新疆出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心