重組腺相關病毒及其在治療和預防心功能不全和心力衰竭中的應用
【專利摘要】本發明公開了重組腺相關病毒及其在治療和預防心功能不全和心力衰竭中的應用。本發明公開的重組腺相關病毒表達Junctophilin?2蛋白，Junctophilin?2蛋白為下述A1)或A2)或A3)的蛋白質：A1)氨基酸序列是序列1的蛋白質；A2)在序列1所示的氨基酸序列中經過取代和/或缺失和/或添加一個或幾個氨基酸殘基得到的具有相同功能的由A1)衍生的蛋白質；A3)在A1)或A2)的N端或/和C端連接標簽得到的融合蛋白質。實驗證明，本發明的重組腺相關病毒對動物心功能不全和心力衰竭具有治療作用，可以提高動物的心臟射血分數，可以用來治療動物心功能不全和心力衰竭。
【專利說明】
重組腺相關病毒及其在治療和預防心功能不全和心力衰竭中 的應用
技術領域
[0001] 本發明設及生物技術領域中重組腺相關病毒及其在治療和預防屯、功能不全和屯、 力衰竭中的應用。
【背景技術】
[0002] 屯、臟是人體最重要的器官之一，人們通常將它比作向全身輸送新鮮有氧血液的 累。屯、肌細胞尤其是屯、室肌細胞持續不斷地有規律的周期性收縮是累行使功能的源動力。
[0003] 屯、力衰竭化ead hi lure)簡稱屯、衰，是指由于屯、臟累功能障礙，W致屯、輸出量減 少，不足W適應全身組織代謝需要的一種病理過程。屯、力衰竭亦稱累衰竭(pump failure)。 屯、力衰竭包括兩種情況:①屯、肌衰竭(myocardial failure):是指原發性屯、肌肌原纖維收 縮功能障礙所致的屯、力衰竭，此時累功能障礙是原發的。如屯、肌炎時，屯、肌的變質、滲出或 結締組織增生可使屯、肌收縮性明顯減弱。又如屯、肌梗死時可因部分屯、肌壞死而致屯、肌收縮 性減弱等等。②其他原因所致的屯、力衰竭:如屯、臟瓣膜病時，由于屯、肌負荷過重而發生屯、肌 肥大和屯、臟擴大，繼則屯、肌收縮性相對不足而導致屯、力衰竭，此時累功能障礙是繼發的，在 除去瓣膜障礙時較易逆轉。
[0004] 屯、功能不全（cardiac insufficiency)是由于各種原因造成屯、肌的收縮功能下 降，使屯、臟前向性排血減少，造成血液渺滯在體循環或肺循環產生的癥狀。屯、功能不全可分 為無癥狀和有癥狀兩個階段，前者有屯、室功能障礙的客觀證據(如左室射血分數降低），但 無典型充血性屯、力衰竭癥狀，屯、功能尚屬紐約屯、臟病學會(NY-HA)分級的I級，屬有癥狀屯、 力衰竭的前期，無癥狀屯、功能不全如不進行有效治療，遲早會發展成有癥狀屯、功能不全。屯、 臟射血分數化F)，指的是每搏輸出量占屯、室舒張末期容積量的百分比。正常的屯、臟射血分 數左室射血分數(LVE巧為>50%;右屯、室射血分數為>40%。若小于此值即為屯、功能不全。
[0005] 屯、功能不全與屯、力衰竭本質上是相同的，只是在程度上有所區別：屯、力衰竭一般 是指屯、功能不全的晚期，患者有明顯的屯、力衰竭的臨床癥狀，而屯、功能不全則指病情從輕 到重的全過程，包括沒有屯、力衰竭癥狀的屯、功能不全代償階段。
[0006] Junctophilin-2蛋白是2000年由一位日本科學家首次報道發現，屬于 Juncto地ilin家族。Junctophilin家族的Juncto地ilin-1主要存在于骨骼肌中，另兩種亞 型化ncto地1 in-3 W及化ncto地il in-4主要分布于大腦中。通過序列比對和二級結構預測， 發現化ncto地ilin家族蛋白的氨基端有8個序列保守的模式結構組成，簇基端是一段跨膜 區域。
[0007] 腺相關病毒(adeno-associated vi;rus，AAV)屬于微小病毒科，無外包膜單鏈線狀 DNA病毒。天然的腺相關病毒基因組大小約4700bp，包括上下游兩個開放讀碼框架，分別編 碼復制依賴蛋白R邱W及組配衣殼蛋白化P，位于2個由145個核巧酸組成的反向末端重復序 列（ITR)之間。腺相關病毒為復制缺陷型病毒，其復制依賴于腺病毒的早期蛋白ΕΙΑ,ΕΙΒ， Ε2Α W 及Ε4，VARNA等因子。
[000引目前主流的腺相關病毒包裝系統由Ξ個質粒組成，即pAAV-ITR，pAAV R/C和 pA加 eltaF6。其中pAAV-口R帶有口R序列和多克隆酶切位點，可W插入外源編碼基因 。pAAV R/C編碼Rep蛋白和Cap蛋白，而pA郵eltaF6則提供腺相關病毒基因組復制所必須的腺病毒 輔助因子E4 W及VARNA。Ξ質粒腺相關病毒包裝系統所使用的皿K293細胞系則可提供E1A， E1BW及E2A運Ξ種輔助因子。

【發明內容】

[0009] 本發明所要解決的技術問題是如何治療和/或預防屯、功能不全或屯、力衰竭。
[0010] 為解決上述技術問題，本發明首先提供了 一種重組腺相關病毒，其名稱為AAV- 肝 H-2，AAV-肝 H-2 表達化 ncto地 i 1 in-2 QPH-2)蛋白。
[0011] 上述重組腺相關病毒中，Junctophilin-2可為下述A1)或A2)或A3)的蛋白質：
[0012] A1)氨基酸序列是序列1的蛋白質；
[0013] A2)在序列1所示的氨基酸序列中經過取代和/或缺失和/或添加一個或幾個氨基 酸殘基得到的具有相同功能的由A1)衍生的蛋白質；
[0014] A3)在A1)或A2)的N端或/和C端連接標簽得到的融合蛋白質。
[001引其中，序列1由692個氨基酸組成。
[0016] 上述重組腺相關病毒中，AAV-肝H-2的基因組可包括下述1)、2)和3):
[0017] 1)腺相關病毒的R邱編碼基因與化P編碼基因；
[0018] 2)腺病毒的E4編碼基因、VARNA編碼基因、E1A編碼基因、E1B編碼基因與E2A編碼基 因；
[0019] 3)Juncto 地 ilin-2 編碼基因。
[0020] 上述重組腺相關病毒中，所述R邱編碼基因與所述化P編碼基因均可來源于PAAV2/ 9。所述E4編碼基因和所述VARNA編碼基因均可來源于pA郵e 1化F6。所述E1A編碼基因、E1B編 碼基因與E2A編碼基因均可來源于HEK293T細胞。
[0021] 上述重組腺相關病毒中，所述AAV-肝H-2的基因組也可僅由所述1)、所述2)和所述 3)組成。
[0022] 上述重組腺相關病毒中，所述化ncto地ilin-2編碼基因可為如下bl)或b2)或b3) 所示的核酸分子：
[0023] bl)編碼序列是序列表中序列1的DNA分子；
[0024] b2)與bl)限定的核巧酸序列具有75%或75% W上同一性，且編碼化ncto地ilin-2 的DM分子；
[0025] b3)在嚴格條件下與bl)限定的核巧酸序列雜交，且編碼JunctopMlin-2的DNA分 子。
[00%]其中，序列2由2079個核巧酸組成，序列2所示的DNA分子QPH-2基因）編碼序列1所 示的肝H-2。
[0027]為解決上述技術問題，本發明還提供了 AAV-肝H-2的構建方法，所述方法包括將含 有所述Rep編碼基因的重組載體、含有所述Cap編碼基因的重組載體、含有所述E4編碼基因 的重組載體、含有所述VARNA編碼基因的重組載體和含有所述化ncto地ilin-2編碼基因的 重組載體導入包裝細胞中，得到重組腺相關病毒;所述包裝細胞含有所述E1A編碼基因、所 述ElB編碼基因與所述E2A編碼基因。
[0028] 上述方法中，所述包裝細胞能表達E1A、E1B和E2A。所述包裝細胞具體可為皿K293 細胞，如HEK293T細胞。
[0029] 為解決上述技術問題，本發明還提供了下述任一產品：
[0030] P1、所述AAV-肝H-2的基因組；
[0031] P2、含有所述化ncto地i 1 in-2編碼基因的重組載體；
[0032] P3、含有所述化ncto地i 1 in-2編碼基因的表達盒。
[0033] 本領域普通技術人員可W很容易地采用已知的方法，例如定向進化和點突變的方 法，對本發明的編碼肝H-2的核巧酸序列進行突變。那些經過人工修飾的，具有與本發明分 離得到的肝H-2的核巧酸序列75%或者更高同一性的核巧酸，只要編碼肝H-2且具有JPH-2 功能，均是衍生于本發明的核巧酸序列并且等同于本發明的序列。
[0034] 運里使用的術語"同一性"指與天然核酸序列的序列相似性。"同一性"包括與本發 明的編碼序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質的核巧酸序列具有75%或更高，或85%或 更高，或90%或更高，或95%或更高同一性的核巧酸序列。同一性可W用肉眼或計算機軟件 進行評價。使用計算機軟件，兩個或多個序列之間的同一性可W用百分比（％)表示，其可W 用來評價相關序列之間的同一性。
[0035] 上述產品中，所述嚴格條件是在2 X SSC，0.1 %SDS的溶液中，在68°C下雜交并洗膜 2次，每次5min，又于0.5 X SSC，0.1 % SDS的溶液中，在68 °C下雜交并洗膜2次，每次15min; 或，0.1 X SS陽(或0.1 X SSC)、0.1 % SDS的溶液中，65°C條件下雜交并洗膜。
[0036] 上述75%或75%W上同一性，可為80%、85%、90%或95%^上的同一性。
[0037] 上述產品中，P3所述的含有JPH-2編碼基因的表達盒QPH-2基因表達盒），是指能 夠在宿主細胞中表達肝H-2的DNA，該DNA不但可包括啟動肝H-2基因轉錄的啟動子，還可包 括終止肝H-2基因轉錄的終止子。進一步，所述表達盒還可包括增強子序列。
[0038] 可用現有的載體構建含有所述肝H-2編碼基因表達盒的重組載體。
[0039] 上述產品中，所述載體可為質粒、黏粒、隧菌體或病毒載體。所述質粒具體可為 pAAV-cTNT-EGFP-2A-MCS-3Flag 〇
[0040] P2所述重組載體可含有序列2所示的用于編碼JPH-2的DM序列。在本發明的一個 實施例中，P2 所述重組載體為 PAAV-EGFP-2A-JPH-2，PAAV-EGFP-2A-肝 H-2 為將 pAAV-cTNT- EGFP-2A-MCS-3Flag的Spel和ΚρηΙ識別序列間的DNA片段替換為序列2所示的DNA分子得到 的重組載體。
[0041] 為解決上述技術問題，本發明還提供了與AAV-肝H-2相關的生物材料，所述生物材 料為下述E1)至E5)中的任一種：
[0042] E1)成套DNA分子，由所述R邱編碼基因、所述化P編碼基因、所述E4編碼基因、所述 VARM編碼基因、所述E1A編碼基因、所述E1B編碼基因、所述E2A編碼基因與所述 Juncto地ilin-2編碼基因組成；
[0043] E2)含有AAV-肝H-2的微生物；
[0044] E3)含有AAV-肝H-2的動物細胞系；
[0045] E4)含有AAV-肝H-2的動物組織；
[0046] E5)含有AAV-肝H-2的動物器官。
[0047]上述生物材料中，所述動物細胞系、所述動物組織和所述動物器官均不包括繁殖 材料。
[004引上述生物材料中，E2)所述微生物、E3)所述動物細胞系、E4)所述動物組織和E5)所 述動物器官均可為腺相關病毒的寄主。
[0049] 為解決上述技術問題，本發明還提供了治療和/或預防屯、功能不全或屯、力衰竭藥 物，所述藥物包括AAV-肝H-2。
[0050] 上述藥物可僅WAAV-JPH-2作為其活性成分，還可WAAV-JPH-2與其他具有治療 和/或預防屯、功能不全或屯、力衰竭作用的物質一起作為其活性成分。
[0051] 為解決上述技術問題，本發明還提供了下述任一應用：
[0052] KAAV-JPH-2、所述產品、所述生物材料或所述治療和/或預防腫瘤藥物在制備治 療和/或預防屯、功能不全或屯、力衰竭藥物中的應用；
[0053] n、AAV-JPH-2、所述產品、所述生物材料或所述治療和/或預防腫瘤藥物在治療 和/或預防屯、功能不全或屯、力衰竭中的應用；
[0054] m、AAV-肝H-2、所述產品、所述生物材料或所述治療和/或預防腫瘤藥物在制備提 高屯、臟射血分數藥物中的應用；
[0055] IV、AAV-肝H-2、所述產品、所述生物材料或所述治療和/或預防腫瘤藥物在提高屯、 臟射血分數中的應用。
[0056] 為解決上述技術問題，本發明還提供了治療和/或預防屯、功能不全或屯、力衰竭的 方法，所述方法包括對動物施用AAV-肝H-2或所述治療和/或預防腫瘤藥物，對所述動物進 行屯、功能不全或屯、力衰竭的治療和/或預防。
[0057] 上述方法中，所述動物可為陸生動物，如哺乳動物。
[0058] 本發明中，所述治療和/或預防屯、功能不全或屯、力衰竭具體可提現在提高屯、臟射 血分數上。
[0059] 實驗證明，本發明的重組病毒--AAV-JPH-2對動物屯、功能不全和屯、力衰竭具有 治療作用，可W提高動物的屯、臟射血分數:未施用的對照組動物的屯、臟射血分數為73.53± 2.84%，施用AAV-JPH-2的實驗組動物的屯、臟射血分數為82.86 ± 4.65 %，實驗組動物的屯、 臟射血分數比對照組增加了 12%，兩組動物的屯、臟射血分數具有顯著性差異，P值<0.05。表 明，AAV-肝H-2可W通過提高動物的屯、臟射血分數來治療動物屯、功能不全和屯、力衰竭，可應 用于先天性屯、肌病的治療，也可用于漸行性屯、肌收縮能力不足致屯、衰的預防和治療。
【附圖說明】
[0060] 圖1為轉染效率。
[0061 ] 圖2為SDS-PAGE檢測病毒純度。
[0062] 圖3為實驗組和對照組大鼠的屯、臟射血分數。其中AAV-肝肥表示AAV-肝H-2。
【具體實施方式】
[0063] 下面結合【具體實施方式】對本發明進行進一步的詳細描述，給出的實施例僅為了闡 明本發明，而不是為了限制本發明的范圍。
[0064] 下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。
[0065] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。
[0066] 實施例1、AAV-肝H-2可W提高SD大鼠的屯、臟射血分數化F)
[0067] 本發明提供了一種表達化ncto地ilin-2(JPH-2)的重組腺相關病毒，重組腺相關 病毒的名稱為AAV-肝H-2,肝H-2的氨基酸序列如序列表中序列1所示。
[006引1、重組載體的構建
[0069] 將載體pAAV-cTNT-EGFP-2A-MCS-3Flag(和元生物技術有限公司）的Spe巧日ΚρηΙ識 別序列間的DNA片段替換為序列2所示的DNA分子，得到重組載體，將該重組載體命名為 pAAV-EGFP-2A-JPH-2〇
[0070] 其中，序列2由2079個核巧酸組成，序列2所示的DNA分子QPH-2基因）編碼序列1所 示的肝H-2,序列2的第1位為5/端，最后一位為y端。PAAV-EGFP-2A-肝H-2中，Spel的識別序 列與序列2的5/端相連，ΚρηΙ的識別序列與序列2的y端相連。
[0071] 2、重組腺相關病毒的捶救 [007^ 轉染；
[0073] 將步驟1的PAAV-EGFP-2A-JPH-2與pADeltaF6 (賓夕法尼亞大學病毒載體中屯、）、 pAAV2/9(賓夕法尼亞大學病毒載體中屯、）（pAAV2/9為pAAV R/C中的一種)Ξ質粒按照摩爾 tkl: 1:1等量混合后加入10化轉染試劑(PEI ,polyscience公司）中室溫作用lOmin，共轉染 到肥K293T細胞(clontedi公司K肥K293T可W提供E1A，E1BW及E2A運Ξ種輔助因子）中，于 37°C、5 % C〇2下培養48小時，監測轉染效率，48小時的轉染效率見圖1，結果顯示，轉染效率 比較高。
[0074] 病毒的提取：
[0075] 轉染120小時后收集細胞，將得到的細胞用緩沖液1(緩沖液1由溶質和溶劑組成， 溶劑為水，溶質及其濃度分別為50mM化is、150mM化Cl、2mM MgCl2,用鹽酸調節pH至8.0) 重懸后，在液氮與37°C中反復凍融Ξ次后離屯、取上清液，向上清液中加入12.5U/ml的 Benzonase (貨號為70746，Mi 11 ipore公司）37 °C消化1小時，得到反應液，向該反應液中加入 病毒沉淀劑(病毒沉淀劑由水、化C1和陽G 8000組成，其中，化C1的濃度為0.5mM，PEG 8000 的質量百分比濃度為8%)冰浴2小時，離屯、收集沉淀，將得到的沉淀用緩沖液1重懸，即得到 AAV-肝H-2粗提液。
[0076] 病毒純化：
[0077] 將AAV-JPH-2粗提液進行純化，密度梯度離屯、下層介質為1.5g/cm3、上層介質為 1.3邑八111化3(：1溶液，離屯、條件為104,000旨，20°(：，2祉。通過離屯、管壁側面穿刺取出病毒條 帶，隨后進行第二步密度梯度離屯、，梯度離屯、介質為1.4g/cm3CsCl溶液，離屯、條件為182， OOOg，20°C離屯、2地，分層收集4條密度梯度條帶，進行SDS-PAGE電泳銀染檢測，電泳結果見 圖2,圖2中的泳道1-4分別為4條密度梯度條帶的結果，泳道Μ為蛋白分子量標準。結果顯示， 純化的病毒有且僅含有Ξ條條帶，分別對應于AAV外殼蛋白￥?1，￥?2，￥?3。4條密度梯度條帶 中均含有AAV-肝Η-2的Ξ種蛋白質。SDS-PAGE電泳銀染檢測運4條梯度條帶純度后合并，得 到AAV-肝Η-2精提液。
[0078] 透析除鹽：
[0079] 對AAV-肝Η-2精提液進行透析除鹽。透析袋的截留大小為3W)a，透析換液2次，每次 透析使用化PBS緩沖液，總共透析2地，透析后樣品用lOOMa的超濾管進行濃縮，得到AAV- 肝 H-2。
[0080]病毒滴度測定：W腺相關病毒ITR序列為模板設計定量PCR引物口 R-F (GACCTTTGGTCGCCCG)和ITR-R(GAACCCCTAGTGATGGAGTTG)。
[00川將步驟1的重組載體PAAV-EGFP-2A-肝H-2用PBS緩沖液稀釋至拷貝數在109~106拷 貝/μ1間的不同濃度的PAAV-EGFP-2A-肝H-2溶液，不同濃度的PAAV-EGFP-2A-肝H-2溶液中 的重組載體為模板用口 R-F和ITR-R進行定量PCR，繪制Ct和拷貝數之間的線性函數。將AAV- JPH-2用PBS緩沖液依次進行10倍梯度的稀釋，配審Ij3個濃度梯度的AAV-肝H-2懸液，每個濃 度梯度20μ1。而后分別向不同濃度的AAV-肝H-2懸液中加入蛋白酶K (蛋白酶K在AAV-JPH-2 懸液中的濃度為5mg/ml)，55 °C解育30min，95 °C變性lOmin釋放出AAV-肝Η-2基因組，共得到 Ξ個濃度的AAV-肝H-2基因組溶液，每個AAV-肝H-2基因組溶液取化1，作為模板，用口R-F和 ITR-R進行定量PCRdS個不同稀釋比AAV-JPH-2懸液的滴度分別為1.5 XE12、1.5 XE11和 1.5XE10。
[0082] 按照上述方法，將 PAAV-EGFP-2A-肝 H-2 替換為 pAAV-cTNT-EGFP-2A-MCS-3Flag，其 他步驟均不變，得到作為對照的腺相關病毒，將其命名為AAV-EGFP。
[0083] 3、AAV-肝H-2可W提高SD大鼠的屯、臟射血分數化F)
[0084] 實驗重復Ξ次，每次重復實驗的具體步驟如下：
[0085] 將6只40克左右的雄性SD大鼠（北京維通利華實驗動物技術有限公司）隨機分為兩 組，每組Ξ只，分別為實驗組和對照組。
[0086] 對實驗組每只大鼠的尾靜脈注射步驟2的AAV-JPH-2 (滴度為1.5 X E13的AAV-肝H- 2懸液），對對照組每只大鼠的尾靜脈注射步驟2的AAV-EGFP(滴度為7 X E12的AAV-EGFP懸 液），AAV-肝H-2和AAV-EGFP的注射劑量均為5 X 10 iiyg。將注射當天記為注射第1天，在注射 第30天將各組大鼠送超聲屯、動檢測屯、功能，M-mode模式下進行數據采集。結果（圖3)顯示， 對照組大鼠的屯、臟射血分數為73.53 ± 2.84 %，實驗組大鼠的屯、臟射血分數為82.86 ± 4.65%，與對照組相比，實驗組大鼠的屯、臟射血分數提高了12%，s化dent's t檢驗顯示P值 <0.05,兩組大鼠的屯、臟射血分數具有顯著性差異。
【主權項】
1. 重組腺相關病毒，其特征在于:所述重組腺相關病毒表達Junctophi 1 in-2蛋白。2. 根據權利要求1所述的重組腺相關病毒，其特征在于:Junct〇philin-2為下述A1)或 A2)或A3)的蛋白質： A1)氨基酸序列是序列1的蛋白質； A2)在序列1所示的氨基酸序列中經過取代和/或缺失和/或添加一個或幾個氨基酸殘 基得到的具有相同功能的由A1)衍生的蛋白質； A3)在A1)或A2)的N端或/和C端連接標簽得到的融合蛋白質。3. 根據權利要求1或2所述的重組腺相關病毒，其特征在于:所述重組腺相關病毒包括 下述1)、2)和3): 1) 腺相關病毒的Rep編碼基因與Cap編碼基因； 2) 腺病毒的E4編碼基因、VARNA編碼基因、E1A編碼基因、E1B編碼基因與E2A編碼基因； 3. Junctophilin_2 編碼基因。4. 根據權利要求3所述的重組腺相關病毒，其特征在于:所述Junctophi 1 in-2編碼基因 為如下bl)或b2)或b3)所示的核酸分子： bl)編碼序列是序列表中序列1的DNA分子； b2)與bl)限定的核苷酸序列具有75%或75%以上同一性，且編碼Junctophilin-2的 DNA分子； b3)在嚴格條件下與bl)限定的核苷酸序列雜交，且編碼Junctophi 1 in-2的DNA分子。5. 權利要求1-4中任一所述重組腺相關病毒的構建方法，其特征在于:所述方法包括將 含有權利要求1-4中任一所述重組腺相關病毒中所述Rep編碼基因的重組載體、含有所述 Cap編碼基因的重組載體、含有所述E4編碼基因的重組載體、含有所述VARNA編碼基因的重 組載體和含有所述Junctophi 1 in-2編碼基因的重組載體導入包裝細胞中，得到重組腺相關 病毒;所述包裝細胞含有權利要求1-4中任一所述重組腺相關病毒中所述E1A編碼基因、所 述E1B編碼基因與所述E2A編碼基因。6. 下述任一產品： P1、權利要求1-4中任一所述重組腺相關病毒的基因組； P2、含有權利要求1-4中任一所述Junctophilin-2編碼基因的重組載體； P3、含有權利要求1-4中任一所述Junctophi 1 in-2編碼基因的表達盒。7. 與權利要求1-4中任一所述重組腺相關病毒相關的生物材料，為下述E1)至E5)中的 任一種： E1)成套DNA分子，由權利要求1-4中任一所述Rep編碼基因、所述Cap編碼基因、所述E4 編碼基因、所述VARNA編碼基因、所述E1A編碼基因、所述E1B編碼基因、所述E2A編碼基因與 所述Junctophilin-2編碼基因組成； E2)含有權利要求1-4中任一所述重組腺相關病毒的微生物； E3)含有權利要求1-4中任一所述重組腺相關病毒的動物細胞系； E4)含有權利要求1-4中任一所述重組腺相關病毒的動物組織； E5)含有權利要求1-4中任一所述重組腺相關病毒的動物器官。8. 治療和/或預防心功能不全或心力衰竭藥物，包含權利要求1-4中任一所述重組腺相 關病毒。9. 下述任一應用： I、權利要求1-4中任一所述重組腺相關病毒、權利要求6所述產品、權利要求7所述生物 材料或權利要求8所述治療和/或預防腫瘤藥物在制備治療和/或預防心功能不全或心力衰 竭藥物中的應用； Π 、權利要求1-4中任一所述重組腺相關病毒、權利要求6所述產品、權利要求7所述生 物材料或權利要求8所述治療和/或預防腫瘤藥物在治療和/或預防心功能不全或心力衰竭 中的應用； ΙΠ 、權利要求1-4中任一所述重組腺相關病毒、權利要求6所述產品、權利要求7所述生 物材料或權利要求8所述治療和/或預防腫瘤藥物在制備提高心臟射血分數藥物中的應用； IV、權利要求1-4中任一所述重組腺相關病毒、權利要求6所述產品、權利要求7所述生 物材料或權利要求8所述治療和/或預防腫瘤藥物在提高心臟射血分數中的應用。10. 治療和/或預防心功能不全或心力衰竭的方法，包括對動物施用權利要求1-4中任 一所述重組腺相關病毒或權利要求8所述治療和/或預防腫瘤藥物，對所述動物進行心功能 不全或心力衰竭的治療和/或預防。
【文檔編號】C12N15/864GK106011085SQ201610330603
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月18日
【發明人】項斌, 王世強
【申請人】北京大學