一株具有抗氧化活性的副干酪乳桿菌及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于生物技術領域，具體涉及一株具有抗氧化活性的副干酪乳桿菌。
【背景技術】
[0002] 益生菌是指一類對宿主產生有益作用的活性微生物，通過定植于宿主腸道、生殖 系統內，能夠對宿主產生確切的健康功效，從而改善宿主體內微生態平衡、發揮有益作用的 活性微生物的總稱。乳酸菌作為益生菌中最具代表性的菌屬，具有幫助消化、促進營養物質 的吸收、緩解乳糖不耐癥、預防和治療腹瀉、調節腸道菌群和緩解便秘、調節機體免疫功能、 降低血液總的膽固醇、改善食物引起的過敏性疾病、延緩衰老及抗腫瘤等生理活性。
[0003] 氧化是生命必需的過程，氧化過程中產生的活性氧自由基對生理平衡是必需的， 但是過量的自由基在體內會產生危害。人體自身的抗氧化能力隨年齡的增長而不斷下降， 所以通過輔助手段來清除體內產生的氧自由基是非常必要的。大量試驗研究表明，副干酪 乳桿菌具有抗氧化作用。然而，目前中國市場的乳酸菌產品使用的菌株多為國外供應商提 供的菌株，如丹麥科漢森公司的動物雙歧桿菌BB12、芬蘭維利奧公司的鼠李糖乳桿菌LGG 等，國內研發的具有自主知識產權的抗氧化的菌株少之又少，能夠成功上市的菌株更是鳳 毛麟角。
[0004] 目前，國內外研究比較多的有雙歧桿菌、干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、 瑞士乳桿菌等菌株。然而，由于乳酸菌的益生活性具有菌株特異性，不同菌株之間的益生活 性差別較大。因此，需要更有針對性的篩選具有特殊生理活性的菌株，特別是我國有大量的 傳統發酵食品，其中有大量的乳酸菌亟待研究與開發。

【發明內容】

[0005] 本發明的目的是提供一株具有抗氧化活性的副干酪乳桿菌（Lactobaci I Ius paracasei)NCU622,以便解決中國市場上乳酸菌產品使用的菌株的國產化問題。
[0006] 本發明所述的菌株為副干酪乳桿菌（Lactobacillus paracasei)NCU622,該菌株 具有抗氧化活性，已于2015年12月16日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生 物中心（地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所），其簡稱為 CGMCC，保藏編號為 CGMCC 11886。
[0007] 本發明同時提供了一種組合物，該組合物包含所述副干酪乳桿菌NCU622。
[0008] 本發明所述的組合物可以是食品。
[0009] 本發明所述的副干酪乳桿菌NCU622為活菌或滅活菌或該菌株的衍生物。
[0010] 所述的食品可以是發酵果蔬、發酵乳、乳酪、含乳飲料、乳粉或其他含有該菌株或 該菌株衍生物的食品的任何一種。
[0011] 本發明所提供的菌株及其組合物具有抗氧化活性。具體包括：
[0012] 具有一定的DPPH自由基的清除能力、輕自由基的清除能力、總還原能力及抗脂質 過氧化能力。
[0013] 在發明所提供的體外試驗證實，副干酪乳桿菌NCU622具有較好的胃腸道環境耐 受性及較強的黏附性能，對革蘭氏陽性及陰性致病菌均具有較好的抑制作用，具有一定的 抗氧化活性。
[0014] 本發明所屬領域技術人員根據上述說明即可利用本發明至最廣的程度。因此，以 下說明僅作為示例說明，并非以任何方式限制其余的揭露內容。若本文所述及的明確完整 事物已在與本發明有關的相關技術中出現已知的同等物時，這些已知的同等物將視為獨立 事項并入本文中。
[0015] 本發明提供了一株具有抗氧化活性的副干酪乳桿菌NCU622,該菌株或其組合物具 有一定的抗氧化活性。此外，副干酪乳桿菌NCU622還具有較好的胃腸道環境耐受性及較強 的黏附性能，對革蘭氏陽性及陰性致病菌均具有較好的抑制作用。本發明菌株可以是食品 形式的組合物，并能發酵大宗果蔬產生酸鮮可口、營養豐富、天然果蔬味濃郁并具有良好保 健功能的益生菌高效發酵果蔬產品（泡菜、飲料、漿料），產品中無需添加任何香精香料、色 素、酸味劑、穩定劑、防腐劑等食品添加劑，所有風味由益生菌發酵果蔬原料產生。
【附圖說明】
[0016] 圖1為本發明分離菌株副干酪乳桿菌NCU622在MRS液體培養基中發酵的過程中， 發酵液的pH值、酸度的變化情況。
[0017] 圖2為本發明分離菌株副干酪乳桿菌NCU622在MRS液體培養基中發酵的過程中， 發酵液中葡萄糖、乳酸及乙酸含量的變化情況。
[0018] 圖3為本發明分離菌株副干酪乳桿菌NCU622對Caco-2細胞的黏附情況，（a)為 空白圖，（b)為黏附圖。
[0019] 圖4為本發明分離菌株副干酪乳桿菌NCU622對DPPH自由基清除率的測定情況。
[0020] 圖5為本發明分離菌株副干酪乳桿菌NCU622對羥自由基清除率的測定情況。
[0021] 圖6為本發明分離菌株副干酪乳桿菌NCU622總還原力的測定情況。
[0022] 圖7為本發明分離菌株副干酪乳桿菌NCU622抗脂質過氧化能力的測定情況。
【具體實施方式】
[0023] 下面將結合附圖和實施例對本發明進行進一步詳細的說明。
[0024] 實施例1 :菌株的篩選和鑒定。
[0025] 本發明分離菌株副干酪乳桿菌NCU622是自中國自然發酵酸牛奶中分離篩選獲 得，具體分離鑒定步驟如下：
[0026] (1)菌株的分離與培養。
[0027] 取來源不同的中國自然發酵酸牛奶，采用10倍梯度稀釋法，選擇適宜稀釋度，涂 布在初篩平板培養基（添加有溴甲酚紫的MRS固體培養基）上，37°C靜置培養24~48h，比 較培養皿中菌落形態，選擇生長快、菌落大、黃色菌圈大的菌株。將初篩挑選得到的菌株轉 接到復篩平板培養基上，37°C厭氧培養。挑選在平板上鈣圈較大、較明顯和變黃色較快的菌 株，分別轉接到牛膽鹽含量為1. 〇%、PH值為2. 0的復篩液體培養基中，37°C培養20h。分 別取上述復篩液體培養基，采用平板梯度稀釋法，涂布在復篩平板培養基上重復篩選，37°C 厭氧培養約48h，選擇培養基上黃色、菌圈較大的單菌落，經過劃線、分離后得到純化的乳酸 菌株 NCU622。
[0028] (2)菌株的初步鑒定。
[0029] 形態學鑒定：將菌種活化后涂布于MRS固體平板上培養，取單菌落和革蘭氏染色 后的菌落樣品鏡檢。
[0030] 表1平板培養基上的菌落形態和鏡檢結果
[0032] 生理生化特性鑒定：用乳酸菌微量發酵管對菌株進行生化鑒定，根據菌株NCU622 的形態特征和生理生化特征，并參照伯杰氏細菌鑒定手冊中有關乳酸菌的鑒定標準對其進 行分析，這株菌初步鑒定為干酪乳桿菌（Lactobacillus casei)。
[0033] 表2菌株NCU622微量發酵管鑒定結果
[0035] (3)菌株的分子生物學鑒定。
[0036] 取NCU622菌株培養物，離心得到菌體用于基因組的提取。利用細菌16s rDNA通 用引物 27f: 5'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3'和 1492r: 5'-TAC GGC TAC CTT GTT ACG ACT T-3'進行PCR擴增，擴增產物測序得到的結果與Gene Bank中相關序列比對，結果確定 NCU622為副干酪乳桿菌。
[0037] 實施例2 :副干酪乳桿菌NCU622生長代謝分析。
[0038] 將副干酪乳桿菌NCU622接種于MRS液體培養基中，置于37°C恒溫培養箱中培養， 分別于 0、2、