MicroRNA-4454和MicroRNA-7975在制備檢測銀屑病試劑或試劑盒中的應用【
技術領域：
】[0001]本發明設及醫學生物檢測
技術領域：
，是microRNAs在制備早期篩查或診斷銀屑病試劑或試劑盒中的應用。【
背景技術：
】[0002]銀屑病（Psoriasis,Pso)，俗稱牛皮癖，又名白疵。是一種常見的慢性炎癥性炎癥性皮膚病，病程較長，易復發，少數病例幾乎終生不愈。該病發病W青壯年為主，對患者身體健康和精神狀況影響較大。臨床變現W紅斑，鱗屑為主，全身均可發病，W頭皮，四肢伸側較為常見。發病機制目前尚未完全闡明，普遍認為與免疫，遺傳，環境，屯、理等因素有著密切的關聯。美國皮膚病協會報道，美國銀屑病患者約占人口總數的2%，中國患者發病率約為0.123%，北方高于南方（參見文獻A.B.Gottlieb,A.W.Armstrong.Psoriasisoutcomemeasures:areportfromtheGRAPPA2012annualmeeting.JRheumatol,40(2013)，pp.1428-1433)。當前治療原則僅W局部藥物治療及紫外線治療為主，缺乏有效根治的方法，僅能控制或減少病患復發。銀屑病已嚴重的危害了人類健康和精神狀況，如何早期發現，早期治療銀屑病，成為了當今重要的課題。[0003]目前Pso的研究主要針對Pso的流行病學研究和誘發因素研究，但對其發生機制的研究探討設及很少。由于目前Pso的診斷主要依靠臨床表現，而缺乏特異性實驗室指標，因此為臨床工作帶來很多不便，增加了誤診與漏診。對患者而言，面臨著經濟與精神雙方面的負擔。因此，從預防和治療角度，急需尋找較明確的Pso生物學標記物。[0004]microRNAOiiiRNA)是一類長度約19~25堿基的非編碼蛋白質單鏈小分子RNA，廣泛存在于多細胞生物和病毒體內，主要通過核酸序列互補匹配結合到特定的祀mRNA上，抑制祀mRNA翻譯過程或降解祀mRNA，是一種起負調控作用的分子。miRNA調控至少30%W上的基因表達，參與多種病理生理過程。在多個組織中，例如，正常與皮膚疾患組織中表達差異。因此，通過表達譜分析尋找疾病相關miRNA并進行發病機理研究，最終應用于皮膚疾患的診斷和治療，已經成為目前miRNA研究的重要方向（參見文獻JinninM.VariousapplicationsofmicroRNAsinskindiseases.JDermatolSci.74(1):3-8.2014)。[0005]已有實驗證實，miRNA在血漿和血清中非常穩定，它們被有效保護W免接觸RNases，在嚴酷環境條件下仍能保持穩定。但是，關于指甲中miRNA研究很少有報道，與血清及血漿miRNA相比，指甲中miRNA更加容易獲取，對患者而言創傷小，更容易被接受。[0006]目前，對于miRNA的早期診斷作用的研究主要集中在腫瘤方面，與銀屑病相關的microRNAs主要為：在銀屑病患者皮膚中高表達的miRNA-203(參見文獻SonkolyE，WeiΤ,JansonPC,SaafΛ,LundebergL,Tengvall-LinderM,NorstedtG,AleniusH,HomeyB,ScheyniusA,StableM,PivarcsiA.MicroRNAs:novelregulatorsinvolvedinthepathogenesisofpsoriasis?PLoSOne.2(7):e610.2007)，銀屑病患者外周血中低表達的miRNA-424和miRNA-1266(參見文獻IchiharaA,JinninΜ,YamaneΚ,F'ujisawaA,SakaiK,MasuguchiS,etal.microRNA-mediatedkeratinocytehyperproliferationinpsoriasisvulgaris.BrJDermatol.65:1003-10.2011；IchiharaA,JinninM,OyamaR,YamaneK,FujisawaA,SakaiK,etal.IncreasedserumlevelsofmiR-1266inpatientswithpsoriasisvulgaris.EurJDermatol22:68-71.20。），U及在銀屑病患者發根中高表達的miRNA-19A(參見文獻HiraoΗ,JinninΜ,IchiharaA,F'ujisawaA,MakinoK,KajiharaI,etal.DetectionofhairrootmiR-19aasanoveldiagnosticmarkerforpsoriasis.EurJDermatol[inpress].2014)都具有對銀屑病的診斷價值。W上研究均提示，miRNAs與銀屑病有著密切的關系，角質細胞、血清及發根中miRNA可成為早期特異性潛在標記物。[0007]hsa-mir-4454(MI0016800)與hsa-mir-7975(MI0025751)目前尚無文獻報道與銀屑病的發生和診斷相關聯。[0008]目前尚未見從指甲中獲取microRNAs作為銀屑病生物學標記物的報道.[0009]更未見一種用于檢測指甲中的hsa-mir-4454,hsa-mir-7975含量來早期預測銀屑病的檢測方法的報道。【
發明內容】[0010]本發明的目的在于尋找到與銀屑病相關的新的分子標記物，本發明的另一目的在于提供某一種microRNA在制備早期篩查或臨床診斷銀屑病試劑或試劑盒中的應用。[0011]由于采血及生檢等有創檢查容易對患者造成屯、理負擔等問題，所W本發明的另一發明目的在于提供一種檢測指甲中的hsa-mi;r-4454,hsa-mi;r-7975含量的試劑或試劑盒，W及相關的檢測方法。[0012]本發明人為了尋找參與銀屑病相關的指甲miRNA,利用miRNA忍片技術篩選了與銀屑病相關的miRNA。結果發現與正常人指甲MicroRNA-4454，MicroRNA-7975的表達具有顯著差異。[0013]臨床上Pso有相對明確的發病時間，為了尋找參與Pso相關的指甲miRNAs，我們利用miRNA的微陣列技術篩選了與Pso相關的miRNA(表1)并進行了qPCR驗證檢巧U。結果發現與正常人相比，Pso患者指甲中MicroRNA-4454,MicroRNA-7975的表達水平明顯降低（如表1、圖2、圖4、圖5所示）。本發明人認為通過實時定量巧光PCR(Real-timePCR)為基礎技術，通過檢測Pso患者中指甲中MicroRNA-4454,MicroRNA-7975的表達來實現早期診斷Pso是完全可行的。同時檢測了其它實驗室從外周血和皮膚中檢測發現的若干microRNAs,其中miR-424-5p發生了顯著下調，與文獻報道的銀屑病患者外周血中檢測到的miR-424-5p改變情況一致，但目前為止并沒有直接證據表明銀屑病患者外周血的microRNAs表達譜與指甲中的microRNAs表達譜具有相關性。表l:miRNAs表達微陣列（microRNAmicroArray)技術對正常人群和銀屑病[0014]患者指甲中microRNAs表達譜進行檢測的數據結果[0015][0016][0017][0018][0019][0020][0021][0022][0023][0024][00巧]本發明的第一方面，提供了MicroRNA-4454和/或MicroRNA-7975作為診斷銀屑病的分子標記物的應用。[0026]本發明的第二方面，提供了MicroRNA-4454和/或MicroRNA-7975在制備檢測銀屑病試劑或試劑盒中的應用，該應用也即早期篩查或臨床診斷銀屑病。[0027]MicroRNA-4454和/或MicroRNA-7975在制備檢測銀屑病試劑或試劑盒中的應用，所述的試劑，為檢測生物樣品中MicroRNA-4454表達量的寡聚核巧酸和/或MicroRNA-7975表達量的寡聚核巧酸。[0028]所述的試劑盒，包含上述試劑，即包含檢測生物樣品中MicroRNA-4454表達量的寡聚核巧酸和/或MicroRNA-7975表達量的寡聚核巧酸。[0029]在本發明的一個優選實施例中，所述的生物樣品為指當前第1頁1 2 3 4