一種人類白細胞抗原基因的檢測試劑盒的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于生物醫藥和試劑檢測領域，涉及檢測人類白細胞抗原基因的試劑盒； 具體而言，涉及人類白細胞抗原基因一HLA-B*59:01基因，該基因與醋甲唑胺所致的兩型 皮膚藥物不良反應（Stevens-Johnson綜合征和中毒性表皮壞死松解癥）發病相關。
【背景技術】
[0002] 皮膚藥物不良反應即藥疹，指藥物通過各種途徑進入人體后引起的皮膚黏膜炎癥 反應。Stevens-Johnson 綜合征（Stevens-Johnson syndrome，SJS)和中毒性表皮壞死松 解癥（Toxic epidermal necrolysis,TEN)屬于重癥皮膚藥物不良反應的同一病譜，其主要 臨床特征為廣泛的表皮及皮膚黏膜的剝脫及壞死，并伴有嚴重的肝腎功能損害等系統并發 癥（Bastuji-Garin S, Rzany B,Stern RS,Shear NH, Naldi L and Roujeau JC. Clinical classification of cases of toxic epidermal necrolysis, Stevens-Johnson syndrome, and erythema multiforme. Arch Dermatol1993;129:92-96. )〇 據統 計，TEN 和 SJS 的年發病率分別為 0.4-1. 2/1000000andl· 2-6/1000000 (Roujeau JC and Stern RS.Severe adverse cutaneous reactions to drugs. N Engl J Medl994;331:1272-1285·)，但死亡率分別高達 1-5% 和 20-30% (Roujeau JC and Stern RS. Severe adverse cutaneous reactions to drugs. N Engl J Medl994;331:1272-1285. Rzany B，Mockenhaupt M，Baur S，Schroder Wj Stocker U，Mueller J，Hollander N，Bruppacher R and Schopf E.Epidemiology of erythema exsudativum multiforme majus,Stevens-Johnson syndrome,and toxic epidermal necrolysis in Germany(1990-1992): structure and results of a population-based registry. J Clin Epidemioll996;49:769-773.)〇
[0003] 醋甲唑胺為磺胺類碳酸酐酶抑制劑，臨床上主要用于降低青光眼及其他疾病引起 的目艮壓升高（Fritsch PO and Sidoroff A. Drug-induced Stevens-Johnson syndrome/ toxic epidermal necrolysis. Am J Clin Dermatol2000;1:349-360. Mockenhaupt Mj Viboud C，Dunant A，Naldi Lj Halevy Sj Bouwes Bavinck JN，Sidoroff A，Schneck J，Roujeau JC and Flahault A. Stevens-Johnson syndrome and toxic epidermal necrolysis:assessment of medication risks with emphasis on recently marketed drugs. The EuroSCAR-study. J Invest Dermatol2008; 128:35-44·)。研究顯不，醋甲唑胺 為引起 SJS 和 TEN 的常見藥物（Sud RN and Grewal SS. Stevens Johnson syndrome due to Diamox. Indian J 0phthalmoll981;29:101-103. Flach AJjSmith RE and Fraunfelder FT. Stevens-Johnson syndrome associated with methazolamide treatment reported in two Japanese-American women. 0phthalmologyl995;102:1677-1680. )〇
[0004] 人類白細胞抗原（Human leukocyte antigen，HLA)基因的表達產物為人類白 細胞抗原，后者在免疫反應中擔任至關重要的角色。已有研究發現包括卡馬西平、阿巴 卡韋、別嘌呤醇等在內的數種藥物引起的藥疹與HLA等位基因相關（Bharadwaj iM.，et al., Drug hypersensitivity and human leukocyte antigens of the major histocompatibility complex. Annu Rev Pharmacol Toxicol, 2012. 52:p. 401-31. Cao, Z. H. , et al. , HLA-B*58:Olallele is associated with augmented risk for both mild and severe cutaneous adverse reactions induced by allopurinol in Han Chinese. Pharm acogenomics, 2012. 13(10):p. 1193-201. Roujeau, J. C.,et al. , Genetic susceptibility to toxic epidermal necrolysis. Arch Dermatol, 1987. 123(9):p. 1171-3.)〇 Shirato 等人對四例醋甲唑胺所致SJS的日本患者的研究中發現，其中三例均攜帶HLA-B*59 (Shirato S, Kagaya F,Suzuki Y and Joukou S. Stevens-Johnson syndrome induced by methazolamide treatment.Arch 0phthalmoll997;115:550_553·)。在韓國人的研 究中，Kim等人對五例醋甲唑胺引起的SJS行HLA-A, -B and-C分型，發現HLA-B*59:01 與醋甲唑胺引起的 SJS 高度相關（ρ〈0· 001;odds ratio:249. 8;95%CI: 13. 4 - 4813. 5)。 (Kim SH1Kim M1Lee Kff1Kim SH1Kang HR1Park HW and Jee YK. HLA-B*5901is strongly associated with methazolamide-induced Stevens-Johnson syndrome/toxic epidermal necrolysis. Pharmacogenomics2010;11:879-884.)
[0005] 經對現有技術文獻的檢索發現，在中國大陸漢族人群中至今未見關于 HLA-B*59:01基因與醋甲唑胺引起SJS和TEN的發病相關，可作為基因標記用于篩選該型藥 疹的相關報道。

【發明內容】

[0006] 本發明目的是提供一種檢測人類白細胞抗原基因一HLA-B*59:01基因的試劑盒 及其使用方法。
[0007] 本發明的進一步目的是提供上述試劑盒用于篩查醋甲唑胺所致皮膚藥物不良反 應中的應用，具體而言，是通過檢測HLA-B*59:01基因的存在來評估患者服用醋甲唑胺后 是否具有患SJS和TEN的潛在可能。同時可以據此指導臨床用藥，從而減少醋甲唑胺所致 SJS和TEN的發生。
[0008] -方面，本發明提供了一種人類白細胞抗原基因的檢測試劑盒。
[0009] 所述的人類白細胞抗原基因是HLA-B*59:01基因；
[0010] 所述的試劑盒中含有檢測人類白細胞抗原基因的核酸或者蛋白的試劑。
[0011] 所述的試劑盒中含有人類白細胞抗原基因的擴增引物；或者標記探針。
[0012] 或者，所述的試劑盒中含有人類白細胞抗原基因的特異性抗體。
[0013] 本發明所述醋甲唑胺所致SJS和TEN的相關HLA等位基因-HLA-B*59:01基因的 核酸序列如SEQ NO. 1所示：
[0014] (a)序列特征：
[0015] *長度：3333堿基對
[0016] *類型：核酸
[0017] *鏈型：雙鏈
[0018] *拓撲結構：線形
[0019] (b)分子類型：基因組DNA(gDNA文庫）
[0020] (c)假設：否
[0021] (d)反義：否
[0022] (e)最初來源：人
[0023] (f) SEQ NO. 1核酸序列描述如下：
[0024] gatcaggacgaagtcccatgtcccggacggggctctcagggtctcaggct50ccgagggccgcgtctgc
[0025] attggggaggcgcagcgttggggattccccact
[0026] lOOcccacgagtttcacttcttctcccaacctatgtcgggtccttcttccagg
[0027] I50atactcgtgacgcgtccccatttcccactcccattgggtgtcgggtgtct
[0028] 200agagaagccaatcagtgtcgccggggtcccagttctaaagtccccacgca
[0029] 250cccacccggactcagagtctcctcagacaccgagatgcgggtcacggcac
[0030] 300cccgaaccctcctcctgctgctctggggggccctggccctgaccgagacc350
[0031] tgggccggtgagtgcgggtcgggagggaaatggcctctgtggggaggagc
[0032] 400gaggggaccgcaggcgggggcgcaggacccggggagccgcgccgggagga
[0033] 450gggtctggcgggtctcagcccctcctcgcccccaggctcccactccatga
[0034] 500ggtatttctacaccgccatgtcccggcccggccgcggggagccccgcttc
[0035] 550atcgcagtgggctacgtggacgacacgcagttcgtgaggttcgacagcga
[0036] 600cgccgcgagtccgagagaggagccgcgggcgccgtggatagagcaggagg
[0037] 650ggccggagtattgggaccggaacacacagatcttcaagaccaacacacag
[0038] 700acttaccgagagaacctgcggatcgcgctccgctactacaaccagagcga
[0039] 750ggccggtgagtgaccccggcccggggcgcaggtcacgactccccatcccc
[0040] 800cacgtacggcccgggtcgccccgagtctccgggtccgagatccgcctccc
[0041] 850tgaggccgcgggacccgcccagaccctcgaccggcgagagccccaggcgc
[0042] 900gtttacccggtttcattttcagttgaggccaaaatccccgcgggttggtc950
[0043] ggggcggggcggggctcgggggacggggctgaccgcggggccggggccag
[0044] lOOOggtctcacacttggcagacgatgtatggctgcgacctggggccggacggg
[0045] 1050cgcctcctccgcgggcataaccagttagcctacgacggcaaggattacat
[0046] 1100cgccctgaacgaggacctgagctcctggaccgcggcggacaccgcggctcll50
[0047] agatcacccagcgcaagtgggaggcggcccgtgtggcggagcagctgagal200
[0048] gcctacctggagggcacgtgcgtggagtggctccgcagatacctggagaal250
[0049] cgggaaggagacgctgcagcgcgcgggtaccaggggcagtggggagccttl300
[0050] ccccatctcctataggtcgccggggatggcctcccacgagaagaggaggal350
[0051] aaatgggatcagcgctagaatgtcgccctcccttgaatggagaatggcat1400
[0052] gagttttcctgagtttcctctgagggccccctcttctctctaggacaattl450
[0053] aagggatgacgtctctgaggaaatggaggggaagacagtccctagaatacl500
[0054] tgatcaggggtcctctttgacccctgcagcagccttgggaaccgtgacttl550
[0055] ttcctctcaggccttgttctctgcctcacactcagtgtgtttggggctctl600
[0056] gattccagcacttctgagtcactttacctccactcagatcagg