食品和餐飲具中大腸菌群快速檢測紙片的制備與應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種食品和餐飲具中大腸菌群快速檢測紙片，是一種專門用于食品和餐飲具中快速檢測大腸菌群的定性和定量檢測試紙。
【背景技術】
[0002]大腸菌群分布較廣，在溫血動物糞便和自然界廣泛存在。調查研究表明，大腸菌群細菌多存在于溫血動物糞便、人類經常活動的場所以及有糞便污染的地方。人、畜糞便對外界環境的污染是大腸菌群在自然界存在的主要原因。糞便中多以典型大腸桿菌為主，而外界環境中則以大腸菌群其他型別較多。大腸菌群是評價食品衛生質量的重要指標之一，目前已被國內外廣泛應用于食品衛生工作中。大腸菌群是人畜糞便中的主要細菌，因而被用來作為反映食品中是否被糞便污染或污染程度的指示菌。大腸菌群數的高低，表明了食品被糞便污染的程度，故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛生質量，推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。大腸菌群作為評價食品衛生質量的主要指標之一，我國已將其納入“國家標準”。檢測大腸菌群傳統的方法是試管發酵法，需要配制新鮮培養基，操作方法繁瑣，成本較高，檢測時間長，達不到快速一步法，大腸菌群的檢測結果無法定量分析。因此，業內一直希望能有一種經濟、簡便、易行、快速、準確的方法和產品。
[0003]紙片法是上世紀80年代發展起來的一種快速檢測食品及食品接觸的物體表面、餐具、茶具中大腸菌群污染情況的方法。目前，國內外對大腸菌群快速檢測紙片法研究較多，如中國發明專利食品中大腸菌群快速檢測紙片(200710013010.9)、濕式大腸菌群快檢紙片(200420059068.9)、液體食品中大腸菌群快檢紙片(200610069663.4)，上述專利可以用于大腸菌群的檢測，但這些專利檢測紙片沒有冷水凝膠成分，因此菌落形成不清晰，菌落計數較難。中國發明專利一種快速檢測微生物的測試片及其制備方法和應用(200910007917.3)，該專利中添加了冷水凝膠成分，但該專利只能用于食品中大腸菌群的檢測，不能用于餐飲具大腸菌群的檢測。本專利彌補了上述發明專利的不足，是一種能克服已有方法和產品不足，提供一種專用于食品和餐飲具快速檢測大腸菌群并可定性、定量分析的冷水凝膠試紙片。

【發明內容】

[0004]本發明的目的在于提供一種能克服已有方法和產品不足，提供一種專用于食品和餐飲具快速檢測大腸菌群并可定性、定量分析的冷水凝膠試紙片。該紙片不僅適合于多種食品中大腸菌群的檢測，也可用于餐飲具中大腸菌群的快速檢測。紙片操作簡便易行、快速準確(一步法)，特異性強，敏感性高，成本低廉，便于基層單位特別是邊沿地區及條件差的基層試驗室使用。
[0005]為實現本發明的目的，發明人通過大量試驗研究和不懈探索，最終獲得了如下技術方案:
一種大腸菌群快速檢測冷水凝膠紙片，該紙片中含有混合培養基，其特征在于:混合培養基由基礎培養基和冷水凝膠混合配置。
[0006]如上所述的一種大腸菌群快速檢測冷水凝膠紙片，其特征在于:基礎培養基中的抑菌劑為脫氧膽酸鈉，指示劑為溴甲酚紫、紅四氮唑；基礎培養基由乳糖胰蛋白胨、牛肉膏、氯化納、磷酸氫二鉀、乳糖配置；冷水凝膠由聚丙烯酸鈉、黃原膠、卡拉膠和魔芋膠配置。
[0007]如上所述的一種大腸菌群快速檢測冷水凝膠紙片，其特征在于:該紙片的制備具有如下步驟:
(1)載體紙片制備:將層析濾紙剪切成5cmX5cm規格，經輻照或高壓滅菌，高壓滅菌后于50°C恒溫真空干燥后備用；
(2)內包裝袋:將耐高溫的聚丙烯塑料薄膜袋，按試驗要求壓合成5.2cmX5.2cm規格的聯袋；
(3)基礎培養基配置:每升培養基中含有胰蛋白胨10.0-15.0g、牛肉膏3.0-5.0 g、氯化納5.0-6.0 g、磷酸氫二鉀4.0-5.0 g、乳糖15.0-20.0 g ;溴甲酚紫含量為60.0-70.0mg;脫氧膽酸的含量為1.0-1.5 g ；20.0 g/L紅四氮唑(TTC)溶液5_7mL，培養基的pH6.3~6.5 ；
(4)冷水凝膠配置:0.2-0.4%聚丙烯酸鈉、0.1-0.3%黃原膠、0.1-0.2%卡拉膠和0.1-0.2%魔芋膠；
(5)混合培養基配置:將基礎培養基和冷水凝膠混合均勻，加去離子水定容至1000mL,于115°C高壓滅菌15 min,調節pH至6.3-6.5 ；
(6)試紙片制作:將滅菌載體紙片依次放入滅菌的燒杯中，加入500C_55°C的混合培養基使之淹沒紙片，浸泡5-10 min，使培養基充分吸附于紙片，擺放于無菌不銹鋼絲網上，50°C恒溫真空干燥；
(7)試紙片包裝:將浸潰烘干的紙片，無菌操作裝入無菌的塑膜袋內，其中5cmX5 cm的紙片，每袋I張，再裝入鋁鈾袋，封口后室溫以下保存備用。
[0008]如上所述的一種大腸菌群快速檢測冷水凝膠紙片，其特征在于:該紙片可同時適用于食品和餐飲具中大腸菌群的定量、定性檢測。
[0009]與現有技術相比，本發明具有以下優點:
1、本發明適用于食品和餐飲具中大腸菌群定量和定性檢測分析，本發明利用冷水凝膠以層析濾紙為載體，將培養基成分和冷水凝膠混合，均勻的負載到層析濾紙上，樣品可均勻分布于冷水凝膠，在其表面形成鮮明的菌落特征，使大腸菌群的檢測達到快速準確定量。可以用于大腸菌群菌落的計數，用于定量分析。
[0010]2、本發明適用于食品和餐飲具中大腸菌群快速檢測，目前現有技術只有適用于食品或餐飲具的大腸菌群快速檢測試紙，沒有同時適合食品和餐飲具的大腸菌群快速檢測試紙。
[0011]3、大腸菌群快檢紙片含有抑菌劑，在檢測中可減少微生物因素的干擾影響，產品的敏感性高、特異性強、結果準確。
[0012]4、本發明成本低廉，操作方法簡便，檢測時間只需16-24 h，比常規發酵法縮短了4天，使繁瑣的發酵培養和證實試驗技術簡化到一步法即可完成，一般人員都能掌握操作。
【附圖說明】
[0013]附圖1為冷水凝膠紙片的成品。
[0014]附圖2為冷水凝膠紙片檢測呈陰性時的效果圖。
[0015]附圖3為冷水凝膠紙片檢測呈陽性時的效果圖。
[0016]附圖4為本發明冷水凝膠紙片檢測大腸菌群的效果圖。
[0017]附圖5為其他廠家試紙片檢測大腸菌群的效果圖。
【具體實施方式】
[0018]以下實施例用于說明本發明，但不用于限制本發明的范圍，如未特別說明，本發明所用方法為常規技術，所用試劑均購自生化商店。
[0019]實施例1:快速檢測試紙片的制備方法
(I)載體紙片制備:將層析濾紙切成5cmX5cm規格，經輻照或高壓滅菌(高壓后于50°C恒溫真空干燥)后備用。
[0020](2)內包裝袋制備:將耐高溫的聚丙烯塑料薄膜袋，按試驗要求壓合成
5.1cmX 5.1cm規格的聯袋。
[0021](3)基礎培養基配置(IL):胰蛋白胨10.0-15.0g;牛肉膏3.0-5.0g;氯化納
5.0-6.0g 磷酸氫二鉀(K2HPO4.2H20)4.0-5.0 g ;乳糖 15.0-20.0 g;溴甲酚紫含量為60.0-70.0 mg ;脫氧膽酸的含量為1.0-1.5 g ；20.0g/L紅四氮唑(TTC)溶液5_7 mL。
[0022](4)冷水凝膠配置(質量百分比):0.2-0.4%聚丙烯酸鈉、0.1-0.3%黃原膠、
0.1-0.2%卡拉膠和0.1-0.2%魔芋膠。
[0023](5)混合培養基配置:將基礎培養基和冷水凝膠混合均勻，加去離子水定容至1000ml，于115°〇高壓(1父10午&)滅菌15min，調節pH至6.3-6.5。
[0024](6)試紙片制作:將滅菌載體紙片依次放入滅菌的燒杯中，加入50_55°C的混合培養基使之淹沒紙片，浸泡5-10 min，使培養基充分吸附于紙片，擺放于無菌不銹鋼絲網上，50°C恒溫真空干燥。
[0025](7)試紙片包裝:將浸潰烘干的紙片，無菌操作裝入無菌的塑膜袋內，其中5cmX 5cm的紙片，每袋I張，再裝入鋁鈾袋，封口后室溫以下保存備用，如圖1。
[0026]實施例2:快速檢測試紙片的特異性試驗
將枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、副溶血性弧菌、單增李斯特菌搖瓶過夜培養，將ImL菌懸液8000 r/min離心5min,將菌體重懸于ImL無菌水中，按照十倍稀釋，稀釋到一定倍數(13-1O4)后，將ImL菌懸液滴加至檢測紙片上，36°C ±1°C培養16_24h，觀察紙片上菌落的生長情況，研究試紙片的特異性。設置5個平行組，試驗重復3次。
[0027]試驗結果表明，只有當大腸桿菌存在時，試紙片才會變黃并在黃色背景上呈現紅色斑點菌落或片狀紅暈；而枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、副溶血性弧菌、單增李斯特菌存在時，試紙片保持紫藍色不變，或有紅色斑點但斑點周圍無黃暈。
[0028]實施例3:快速檢測試紙片的干擾性試驗
同時將大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、副溶血性弧菌、單增李斯特菌搖瓶過夜培養，將0.5mL菌懸液