本發明(ming)涉(she)及(ji)用于制備抗(kang)(kang)腫瘤(liu)抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)倍癌(ai)霉素(su)(duocarmycin)前藥(yao)的(de)(de)方法的(de)(de)改進。這樣的(de)(de)前藥(yao)可通過(guo)抗(kang)(kang)體(ti)定向的(de)(de)酶(mei)前藥(yao)療法(antibody-directed enzyme prodrug therapy，ADEPT)用于選擇性(xing)治(zhi)療癌(ai)癥。該化合物是基于細胞(bao)毒性(xing)抗(kang)(kang)生(sheng)素(su)(+)-CC-1065、(+)-倍癌(ai)霉素(su)A和(+)-倍癌(ai)霉素(su)SA。
通常由DNA烷基化部(bu)(bu)分(fen)和(he)DNA結(jie)合部(bu)(bu)分(fen)組成的(de)CC-1065和(he)倍癌霉素(su)類似物因(yin)其(qi)有效的(de)抗腫瘤性(xing)質(zhi)而眾所周知，但由于其(qi)極高的(de)毒性(xing)通常不單獨使用(yong)。現在(zai)，正在(zai)探索其(qi)作為抗體-藥(yao)物綴合物(ADC)中的(de)細胞毒性(xing)藥(yao)物。
ADC似乎有可能通過直接將高(gao)效細(xi)胞毒(du)性(xing)藥物特異性(xing)地導(dao)向癌細(xi)胞來解決癌癥(其(qi)仍然是死亡的(de)(de)主要原因)中有效新(xin)治(zhi)療(liao)未滿足的(de)(de)巨大需求。因此，倍(bei)癌霉素前藥的(de)(de)工業規模合成是包(bao)含倍(bei)癌霉素類似物的(de)(de)ADC之未來商業成功的(de)(de)關鍵方面之一。
用于制備倍癌霉素類似物及其(qi)中間體，特別是用于制備這(zhe)樣類似物的(de)(de)DNA烷基化部分的(de)(de)多(duo)種方(fang)法在現(xian)有技術中是已知的(de)(de)。
L.F.Tietze等在(zai)Chem.Eur.J.2008，14，895-901中描述了通過環(huan)(huan)氧化(hua)(hua)物開環(huan)(huan)基于倍癌霉素(su)的(de)前藥(yao)的(de)對(dui)映(ying)和非對(dui)映(ying)選擇性合成。對(dui)于化(hua)(hua)合物(1)的(de)金屬(shu)介導的(de)環(huan)(huan)化(hua)(hua)以得到化(hua)(hua)合物(2)，必(bi)須(xu)探索幾種(zhong)不同(tong)的(de)反應條(tiao)件以得到合理的(de)結果。
為了實現立體選擇性反應，作者集中研究使用含鋰的銅酸鹽，因為已知鋰傾向于與環氧化物的氧配位以使得形成空間上固定的過渡態，這示于所述參考文獻的方案5中。通過使用有機銅(copper organyl)Li2Cu(CN)Me2(78％產率)和有機鋅Li2Zn(SCN)Me3(72％產率)實現(xian)環(huan)化反應的最佳結(jie)果，而采用正丁基鋰幾乎僅提供具有僅7％的所(suo)期望五元環(huan)產物(2)的(47％產率)脫(tuo)鹵產物。參(can)見所(suo)述(shu)參(can)考文獻中的表(biao)2。
L.F.Tietze等在Eur.J.Org.Chem.2010，6909-6921的方(fang)案6和7中描述了使用正丁基(ji)(ji)鋰(li)將環(huan)(huan)氧(yang)化(hua)物(8-氰基(ji)(ji)-4-(芐(xia)氧(yang)基(ji)(ji))-1-溴-萘-2-基(ji)(ji))(環(huan)(huan)氧(yang)乙烷(wan)-2-基(ji)(ji))氨(an)基(ji)(ji)甲酸(suan)(suan)叔丁酯金屬誘(you)導閉環(huan)(huan)轉化(hua)為所(suo)期望(wang)的對(dui)映體純的五元環(huan)(huan)產物，但(dan)產率僅(jin)為12％。其(qi)進一步提(ti)到通過鋅酸(suan)(suan)鹽或銅酸(suan)(suan)鹽引(yin)發環(huan)(huan)化(hua)的所(suo)有(you)其(qi)他嘗試均失敗。
因此，雖然倍癌霉(mei)素類(lei)似(si)物(wu)(wu)和制備其關(guan)鍵中間(jian)體的(de)方(fang)(fang)法(fa)在現有技(ji)術中是已知的(de)，但仍(reng)然需要(yao)改進。特(te)別地，需要(yao)一種對映選擇性方(fang)(fang)法(fa)，其提供(gong)這樣的(de)倍癌霉(mei)素類(lei)似(si)物(wu)(wu)中間(jian)體：具有良好(hao)純(chun)度、可接受產(chan)率(lv)和非(fei)常適(shi)合于(yu)下一步轉化(hua)為具有DNA烷基化(hua)部分(fen)以(yi)及DNA結合部分(fen)的(de)倍癌霉(mei)素類(lei)似(si)物(wu)(wu)和相應的(de)抗(kang)體-藥物(wu)(wu)綴合物(wu)(wu)的(de)形(xing)式，該方(fang)(fang)法(fa)不(bu)需要(yao)使用金(jin)屬間(jian)試劑(intermetal reagent)，如上述(shu)昂貴、難以(yi)處理且不(bu)容易獲得的(de)銅酸鋰和鋅酸鋰。
技術實現要素：
本發明涉及一種(zhong)用于制備倍(bei)癌霉素類似(si)物的改進方(fang)法(fa)，該方(fang)法(fa)在工藝(yi)條件(jian)方(fang)面簡單并且在可(ke)接受的產率(lv)內提(ti)供所期(qi)望的5元閉環(huan)產物。
在第一方面，本(ben)發明提供了(le)一種包括通過與有機(ji)鋰試(shi)劑反應將式(I)化(hua)合物轉化(hua)為式(II)化(hua)合物的方法，
其中P和P’獨立地為保護基(ji)，
R1為CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、CF3、OCF3、Cl或F，
R2、R3、R4獨立地為H或C1-6烷基或者
R1和R2一起形成5元(yuan)或6元(yuan)(雜)環烷基(ji)并且X為鹵素。
在本(ben)發明方(fang)法的一個優選(xuan)實施方(fang)案中(zhong)，所述有機鋰試劑選(xuan)自(zi)：正丁(ding)基(ji)(ji)鋰、叔丁(ding)基(ji)(ji)鋰和甲基(ji)(ji)鋰。
在本發明的一個實施方案中，R1為CH3、CH2CH3、OCH3或OCH2CH3；R2、R3、R4獨立地為H或C1-6烷基；或者R1和R2一起形成5元(雜)環烷基。有利地，R2、R3、R4獨立地為H或CH3。
X有利地為溴或碘。
在(zai)第二方面，本發明提(ti)供(gong)了還包(bao)括(kuo)通過(guo)與氯(lv)化試劑的一步或(huo)兩步反應(ying)將式(shi)(II)化合(he)物(wu)轉(zhuan)化為式(shi)(III)化合(he)物(wu)的方法
其中R1、R2、R3、R4、P和P，具(ju)有以上(shang)限定(ding)的含義。
在本發明方法的一個優選實施方案中，所述氯化試劑是LiCl或PPh3/CCl4。
在第(di)三方面，本發明提供了還包括通(tong)過以下(xia)步驟將式(III)化(hua)合(he)物轉化(hua)為式(IV)化(hua)合(he)物的方法，
a)除去P保護(hu)基，和
b)在偶聯劑的(de)存在下(xia)，與式(shi)(V)化合物反應，
之后，
c)消(xiao)除P’保護基，
其中R1、R2、R3、R4、P和P’具有以上限定的含義，P”獨立地為保護基，并且X1、X2、X3獨立地為C或N。
在本(ben)發明方法的一個優選實施(shi)方案中，所述偶聯(lian)劑是(shi)BOP、EDC、HATU或(huo)TBTU。
在本發明的一個實施方案中，X1是N并且X2和X3是C。
在第四方(fang)面(mian)，本(ben)發明提供了由式(IV)化合物開始(shi)制備相應的(de)抗體-藥物綴合物(antibody-drug conjugates，ADC)。
具體實施方式
提供以下(xia)詳(xiang)細描述以使得倍癌霉素(su)前藥領域的技術人員可以更充分(fen)地(di)理解本發明。
定義
除非(fei)另有定義，否則本(ben)文使用的(de)所有技(ji)術(shu)術(shu)語(yu)和科學術(shu)語(yu)具有與本(ben)領域普通技(ji)術(shu)人員通常理解的(de)相同的(de)含義。
整個本說明書中使用的術語(yu)“有(you)(you)機鋰(li)(li)(li)(li)試劑(ji)(ji)”是在(zai)碳和鋰(li)(li)(li)(li)之間含有(you)(you)鍵的任何(he)化(hua)合(he)物。該定義不(bu)包括金(jin)(jin)屬(shu)(shu)間試劑(ji)(ji)，例(li)如上(shang)面現有(you)(you)技術參考文獻中使用的銅酸(suan)鋰(li)(li)(li)(li)和鋅酸(suan)鋰(li)(li)(li)(li)。根據(ju)本發明，有(you)(you)機鋰(li)(li)(li)(li)試劑(ji)(ji)是單(dan)金(jin)(jin)屬(shu)(shu)有(you)(you)機鋰(li)(li)(li)(li)試劑(ji)(ji)。有(you)(you)利地，單(dan)金(jin)(jin)屬(shu)(shu)有(you)(you)機鋰(li)(li)(li)(li)試劑(ji)(ji)選(xuan)自：正丁基(ji)鋰(li)(li)(li)(li)、叔丁基(ji)鋰(li)(li)(li)(li)和甲基(ji)鋰(li)(li)(li)(li)。正丁基(ji)鋰(li)(li)(li)(li)是特別優(you)選(xuan)的單(dan)金(jin)(jin)屬(shu)(shu)有(you)(you)機鋰(li)(li)(li)(li)試劑(ji)(ji)。
整個本(ben)(ben)說明書中(zhong)使(shi)用的(de)(de)術語“保(bao)(bao)護(hu)(hu)基(ji)(ji)”不限于(yu)為(wei)了(le)在隨后的(de)(de)化(hua)學(xue)反(fan)應中(zhong)獲得化(hua)學(xue)選(xuan)擇性通過官能團的(de)(de)化(hua)學(xue)改性引入(ru)分子中(zhong)的(de)(de)任(ren)何(he)基(ji)(ji)團。根據(ju)(ju)本(ben)(ben)發(fa)明，使(shi)用醇保(bao)(bao)護(hu)(hu)基(ji)(ji)(即，P’和(he)P”)和(he)胺(an)保(bao)(bao)護(hu)(hu)基(ji)(ji)(即，P)。優選(xuan)的(de)(de)醇保(bao)(bao)護(hu)(hu)基(ji)(ji)是(shi)(shi)芐基(ji)(ji)和(he)甲氧基(ji)(ji)甲基(ji)(ji)醚基(ji)(ji)。優選(xuan)的(de)(de)胺(an)保(bao)(bao)護(hu)(hu)基(ji)(ji)是(shi)(shi)叔丁氧基(ji)(ji)羰(tang)基(ji)(ji)。但(dan)是(shi)(shi)，許(xu)多其他合(he)適的(de)(de)醇和(he)胺(an)保(bao)(bao)護(hu)(hu)基(ji)(ji)是(shi)(shi)本(ben)(ben)領域技術人(ren)員已知的(de)(de)，如Peter G.M.Wuts和(he)Theodora W.Greene在Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis，第四版，2006(ISBN：978-0-471-69754-1)中(zhong)說明的(de)(de)，并且(qie)這(zhe)些中(zhong)的(de)(de)許(xu)多可用于(yu)根據(ju)(ju)本(ben)(ben)發(fa)明的(de)(de)方(fang)法(fa)中(zhong)。本(ben)(ben)領域技術人(ren)員將能夠從所(suo)述參考文獻中(zhong)選(xuan)擇根據(ju)(ju)本(ben)(ben)發(fa)明的(de)(de)方(fang)法(fa)使(shi)用的(de)(de)合(he)適的(de)(de)保(bao)(bao)護(hu)(hu)基(ji)(ji)。
整個本說明書中使用的術語“5元或6元(雜)環烷基”是由R1和R2以及這些取代基所連(lian)接的碳(tan)原子(zi)形成的環(huan)戊烷或環(huan)己烷環(huan)，其中任選地一個(ge)或更多個(ge)碳(tan)原子(zi)是雜原子(zi)，優選O。
整個本說明(ming)書中使用的(de)(de)術語“氯(lv)化試(shi)劑”不限于能夠在一(yi)步或多步中用氯(lv)原子取代羥基的(de)(de)任何試(shi)劑。合適的(de)(de)氯(lv)化試(shi)劑的(de)(de)實例可(ke)見于Comprehensive Organic Transformations，A Guide to Functional Group Preparations，第(di)二(er)版，1999，第(di)690-693頁(ISBN 0-471-19031-4)，作(zuo)者Richard C.Larock。
有利地，在將羥基轉化為離去基團L(參見下面的方案1，途徑A)之后進行取代的情況下，所述氯化試劑選自：LiCl、KCl、NaCl、NH4Cl、HCl和在濃HCl中的AlCl3。優選的氯化試劑是LiCl。或者，在直接對羥基進行取代的情況下(參見下面的方案1，途徑B)，所述氯化試劑有利地選自：PPh3/CCl4、PPh3/NCS、SOCl2和PCI3/PCl5。優選的氯化試劑是PPh3/CCl4。
整(zheng)個(ge)本說明書中(zhong)使用的(de)(de)術語“偶(ou)(ou)聯劑(ji)”是不限于(yu)本領域技術人員(yuan)已知(zhi)的(de)(de)任何肽(tai)偶(ou)(ou)聯劑(ji)。合適的(de)(de)實例由Ayman El-Faham和Fernando Albericio在Peptide Coupling Reagents，more than a Letter Soup in Chem.Rev.2011，111，6557-6602中(zhong)進行了描述(shu)(shu)。有利(li)地，所述(shu)(shu)偶(ou)(ou)聯劑(ji)選(xuan)自：BOP、DCC、DIC、EDC、HATU、TBTU和T3P。在本發明方法的(de)(de)一個(ge)優選(xuan)實施方案(an)中(zhong)，所述(shu)(shu)偶(ou)(ou)聯劑(ji)是BOP、EDC、HATU或(huo)TBTU。更優選(xuan)的(de)(de)肽(tai)偶(ou)(ou)聯劑(ji)是EDC。
以下縮寫在本文中使用并具有所示的定義：Bn：芐基；DCM：二氯甲烷；DIPEA：N，N-二異丙基乙胺；DMA：N，N-二甲基-乙酰胺；DMF：N，N-二甲基甲酰胺；DMSO：二甲基亞砜；NMP：1-甲基-2-吡咯烷酮；HMPA：六甲基磷酰胺；NCS：N-氯代琥珀酰亞胺；BOP：苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)膦六氟磷酸鹽；DIC：N，N’-二異丙基碳二亞胺；DCC：N，N’-二環己基碳二亞胺；EDC：1-[(3-二甲基氨基丙基)]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽；EtOAc：乙酸乙酯；HATU：O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸鹽；TBTU：O-(苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸鹽；T3P：1-丙烷膦酸酐溶液，2，4，6-三丙基-1，3，5，2，4，6-三氧雜三磷雜環己烷-2，4，6-三氧化物溶液；Ms：甲磺酰基；RT：室溫；TFA：三氟乙酸；THF：四氫呋喃；p-TsOH：對甲苯磺酸；NH4HCO2：甲酸銨。
根據本(ben)發(fa)明，意(yi)外地發(fa)現(xian)(xian)盡管有(you)(you)現(xian)(xian)有(you)(you)技術(shu)中的(de)(de)教導，但是可以通過在(zai)合適(shi)的(de)(de)溶(rong)劑(ji)中與有(you)(you)機鋰試劑(ji)反(fan)應在(zai)可接受的(de)(de)產(chan)率內(nei)由式(shi)(I)化合物有(you)(you)利地制備(bei)式(shi)(II)化合物。在(zai)本(ben)發(fa)明的(de)(de)一(yi)個優(you)選實施方(fang)案中，將(jiang)強堿如甲醇鈉或硼(peng)氫化鈉添加到合適(shi)的(de)(de)溶(rong)劑(ji)中。
用于將式(I)化(hua)合(he)物(wu)對(dui)映選擇性(xing)閉環為式(II)化(hua)合(he)物(wu)的合(he)適溶劑(ji)不限于有機溶劑(ji)，優選非質子溶劑(ji)。優選的溶劑(ji)是醚溶劑(ji)，特別優選的溶劑(ji)是THF。
根據本發明的多個方面的方法在下面的方案1中示出，其中P和P’獨立地為保護基；R1為CH3、CH2CH3、OCH3、OCH2CH3、CF3、OCF3、Cl或F；R2、R3、R4獨立地為H或C1-6烷基；或者R1和R2一起(qi)形成5元(yuan)或6元(yuan)(雜)環烷基；并且X為鹵素(su)。
在本發明的一個優選實施方案中，R1為CH3、CH2CH3、OCH3或OCH2CH3；R2、R3、R4獨立地為H或C1-6烷基；或者R1和R2一起形(xing)成(cheng)5元(雜)環烷基。X有利地為溴或碘。
方案1
可(ke)通(tong)過或類似于(yu)現有技術中已知的(de)任何合適的(de)方(fang)法(fa)制(zhi)備本發明的(de)起始原料，即式(I)化(hua)合物，例(li)如，由L.F.Tietze等在Eur.J.Org.Chem.2010，6909-6921在方(fang)案3至6中描述的(de)方(fang)法(fa)。
優選的(de)式(I)起始原料(liao)化合(he)物是(shi)以下化合(he)物：
其中(zhong)P是叔丁氧羰(tang)基，P’是芐基，且X是溴或碘。
雖然上述(shu)的(de)式(shi)(I)、(II)、(III)和(he)(IV)化合(he)物(wu)對應(ying)于單一對映(ying)異構體(即，具有100％光學純度(du)(du))，但應(ying)理解(jie)只要相關，本發明還涵蓋光學純度(du)(du)低于100％的(de)化合(he)物(wu)。然而，優(you)選式(shi)(I)、(II)、(III)和(he)(IV)化合(he)物(wu)的(de)光學純度(du)(du)為至少95％或更高(gao)，優(you)選98％或更高(gao)，最優(you)選99％或更高(gao)。
如果期望的(de)或者有利的(de)，式(II)化合(he)物可以(yi)從反應混合(he)物中(zhong)本身作為單一對映異構體分離，并且任選(xuan)地可以(yi)被純(chun)化。
在本(ben)發明的一(yi)個具體(ti)實施方案(an)中，式(II)化(hua)(hua)合物在式(I)化(hua)(hua)合物與有機鋰試劑(ji)反應后不進(jin)行純(chun)化(hua)(hua)，而(er)是(shi)直接進(jin)一(yi)步轉(zhuan)化(hua)(hua)為式(VI)化(hua)(hua)合物，其中OH基(ji)團(tuan)(tuan)有利地轉(zhuan)變(bian)為離(li)去(qu)基(ji)團(tuan)(tuan)L(參見方案(an)1)。L是(shi)本(ben)領域技術人員已(yi)知(zhi)的任何合適(shi)的離(li)去(qu)基(ji)團(tuan)(tuan)。有利地，L是(shi)磺(huang)酸(suan)(suan)類(lei)基(ji)團(tuan)(tuan)，例(li)如甲磺(huang)酸(suan)(suan)類(lei)、甲苯磺(huang)酸(suan)(suan)類(lei)或苯磺(huang)酸(suan)(suan)類(lei)。優選地，L是(shi)甲磺(huang)酸(suan)(suan)類(lei)。
隨后，式(VI)化(hua)合物通過在合適的(de)溶(rong)劑中(zhong)與(yu)氯化(hua)試劑反應轉化(hua)為式(III)化(hua)合物。
有利地，所述氯化試劑選自：LiCl、KCl、NaCl、NH4Cl、HCl和在濃HCl中的AlCl3。將式(shi)(II)化(hua)合物(wu)優選的兩步(bu)轉(zhuan)化(hua)為式(shi)(III)化(hua)合物(wu)的優選氯(lv)化(hua)試劑(ji)是LiCl。
用于氯化反(fan)應的合適的溶(rong)(rong)劑(ji)是(shi)有機溶(rong)(rong)劑(ji)，優(you)選極性非質子溶(rong)(rong)劑(ji)。優(you)選的溶(rong)(rong)劑(ji)是(shi)DMF。
優選(xuan)式(III)化(hua)合物是以下(xia)化(hua)合物：
或者，式(II)化合物可通過與選自PPh3/CCl4、PPh3/NCS、SOCl2和PCl3/PCl5的氯化劑反應直接被轉化為式(III)化合物。用于將式(II)化合物一步轉化為式(III)化合物的優選氯化試劑是PPh3/CCl4。
在(zai)(zai)本發(fa)明(ming)的(de)(de)(de)另一個具體實(shi)施方(fang)案(an)中，在(zai)(zai)制備(bei)根據本發(fa)明(ming)的(de)(de)(de)式(VII)化(hua)合(he)(he)物(wu)的(de)(de)(de)有利方(fang)式中，如方(fang)案(an)1所示，首先用酸(suan)處理式(III)化(hua)合(he)(he)物(wu)以除(chu)去P保(bao)護(hu)基，然后在(zai)(zai)合(he)(he)適(shi)的(de)(de)(de)溶劑(ji)(ji)中在(zai)(zai)偶聯劑(ji)(ji)存在(zai)(zai)下使產物(wu)與式(V)化(hua)合(he)(he)物(wu)反應提供式(VII)化(hua)合(he)(he)物(wu)。在(zai)(zai)一個實(shi)施方(fang)案(an)中，將堿添加(jia)到(dao)合(he)(he)適(shi)的(de)(de)(de)溶劑(ji)(ji)中。合(he)(he)適(shi)的(de)(de)(de)堿是叔胺。特別合(he)(he)適(shi)的(de)(de)(de)堿是DIPEA。
有利(li)地，所述酸(suan)是無(wu)機礦物酸(suan)，例如HCl。
用于肽(tai)偶(ou)聯(lian)反應的(de)合適的(de)溶(rong)劑是(shi)(shi)有(you)機溶(rong)劑，優選極性非質(zhi)子溶(rong)劑。有(you)利地，所(suo)述(shu)合適的(de)溶(rong)劑選自：DMA、DMF、DMSO、NMP、HMPA、甲(jia)基乙基酮、乙腈、THF、DCM、丙酮、EtOAc和2-丁酮。優選的(de)溶(rong)劑是(shi)(shi)DMA。
有利地，所述(shu)偶(ou)聯(lian)劑是在(zai)肽(tai)偶(ou)聯(lian)中常用的偶(ou)聯(lian)劑。優(you)選(xuan)地，所述(shu)偶(ou)聯(lian)劑選(xuan)自：BOP、DCC、DIC、EDC、HATU、TBTU和T3P，更優(you)選(xuan)BOP、EDC、HATU或TBTU。特(te)別優(you)選(xuan)的偶(ou)聯(lian)劑是EDC。
隨后，通(tong)(tong)過在合適的溶(rong)劑中消除保護基(ji)P’(在P’是芐基(ji)的情況下(xia)優選(xuan)通(tong)(tong)過氫解)將式(VII)化合物(wu)轉化為式(IV)化合物(wu)。
有利(li)地，所述氫解在氫化金(jin)屬催化劑，優選(xuan)鈀碳和(he)氫源(yuan)的存在下催化進行。
有利地，所述氫源是氫氣或(huo)甲酸銨。用于(yu)氫解的優選氫源是甲酸銨。
式(IV)化合(he)物(wu)通(tong)常是(shi)固體產(chan)物(wu)，并且(qie)分離的產(chan)物(wu)是(shi)穩定的材料，其可以在(zai)常規儲存(cun)條件(jian)下儲存(cun)，并且(qie)有利地用于(yu)使用本領(ling)域技術人員已知的且(qie)如WO2010/062171A和(he)WO2011/133039A中描述(shu)的方法和(he)設備(bei)合(he)成相應(ying)的抗體-藥物(wu)綴合(he)物(wu)(ADC)。
以下實(shi)施例(li)旨(zhi)在說明本發明的范圍，但不限(xian)于此。
實施例
實施例1
用于制備式(II)化(hua)合物(wu)的一(yi)般方法
將式(I)化合物溶于無水THF中并在氬氣氛下冷卻至-20℃。接著，在-20℃下添加正丁基鋰(1.1當量)，并攪拌直至反應完全。然后使用飽和氯化銨水溶液淬滅反應。將所得反應混合物用EtOAc萃取兩次，并合并有機層。然后，選擇1，使用干燥劑將有機層干燥并濃縮，任選地隨后使用例如硅膠色譜法純化以得到式(II)的產物化合物。或者，選擇2，向有機層中添加一定量(例如0.15當量)的p-TsOH和水，并將混合物攪拌60分鐘。副產物降解并更容易與所期望的式(II)化合物分離。這之后用1M Na2CO3水溶液(ye)、飽和NaCl溶液(ye)進行萃取，干燥(zao)有機層(ceng)，隨后濃縮以得到式(shi)(II)的(de)粗制產(chan)物。任選地，可通過(guo)例如硅(gui)膠色譜法純(chun)化所述粗制產(chan)物。
實施例2a
根據(ju)以下反應方案由化合物(3)和(4)制備化合物(12)，即式(II)的化合物：
在65-80℃下，在甲醇(約4L)中甲醇鈉甲醇溶液(1.3當量)的存在下，使2-甲基苯甲醛(3)(1.5kg)與琥珀酸二甲酯(4，1.75當量)反應1小時。然后，將混合物冷卻至20℃，過量的堿用HCl中和，用水稀釋，并通過用DCM萃取除去未反應的琥珀酸二甲酯。將混合物用過量HCl酸化，并在DCM中萃取產物。將該萃取物經MgSO4干(gan)燥。在旋轉蒸(zheng)發器上在真(zhen)空(kong)(80毫(hao)巴，40-60℃水(shui)浴)下將溶(rong)劑從(cong)DCM變為THF，提(ti)供粗(cu)制(E)-3-(甲氧(yang)基(ji)(ji)羰基(ji)(ji))-4-(鄰甲苯基(ji)(ji))丁-3烯酸(5)的THF(10L)溶(rong)液。
然后將化合物(5)的溶液與三氟乙酸酐(2.49kg)在回流溫度下反應以完全轉化為4-羥基-8-甲基-2-萘甲酸甲酯(6)。用K2CO3水溶液中和反應混合物。產物用EtOAc萃取，用MgSO4干燥，濃縮(suo)并(bing)通過冷卻(que)至-5℃結(jie)晶。過濾晶體(白(bai)色/黃色)，用(yong)乙腈(jing)洗滌并(bing)在48-53℃下(xia)干燥16小時(shi)，得到(dao)量為1119g(產率41.4％，純(chun)度(du)99.8％)的化(hua)合(he)物(6)。
在50-80℃下，在K2CO3(1.4當量(liang))存在下，用(yong)在DMF(3.3L)中的芐(xia)基(ji)氯(1.05當量(liang))處理4-羥基(ji)-8-甲(jia)(jia)基(ji)-2-萘甲(jia)(jia)酸甲(jia)(jia)酯(6)。
當反應完成時(shi)(shi)，將混合物(wu)(wu)冷(leng)卻至(zhi)50℃，用DCM稀(xi)釋，冷(leng)卻至(zhi)20℃并(bing)添(tian)加水(shui)。分(fen)(fen)離有機層，并(bing)在(zai)(zai)(zai)大氣(qi)壓下(xia)(xia)通過(guo)(guo)蒸餾(liu)(liu)濃縮濕的(de)(de)萃(cui)取物(wu)(wu)，然(ran)后在(zai)(zai)(zai)真(zhen)空下(xia)(xia)濃縮以除去DMF。用甲(jia)(jia)苯(ben)(ben)(5L)和MeOH(6.6L)稀(xi)釋包含中(zhong)間物(wu)(wu)4-(芐氧基(ji)(ji))-8-甲(jia)(jia)基(ji)(ji)-2-萘(nai)甲(jia)(jia)酸甲(jia)(jia)酯(7)的(de)(de)殘余物(wu)(wu)，并(bing)在(zai)(zai)(zai)回流(liu)下(xia)(xia)用NaOH水(shui)溶液(ye)(ye)(在(zai)(zai)(zai)7.6L水(shui)中(zhong)1.24kg(約8當量))處理2小(xiao)時(shi)(shi)。分(fen)(fen)幾份逐步(bu)添(tian)加水(shui)(291)，通過(guo)(guo)蒸餾(liu)(liu)除去甲(jia)(jia)醇和甲(jia)(jia)苯(ben)(ben)。在(zai)(zai)(zai)溶劑轉換(huan)為(wei)水(shui)后，溶液(ye)(ye)的(de)(de)體積(ji)為(wei)約32-33L。通過(guo)(guo)添(tian)加過(guo)(guo)量的(de)(de)4M HCl(3.32L)沉淀(dian)粗制4-(芐氧基(ji)(ji))-8-甲(jia)(jia)基(ji)(ji)-2-萘(nai)甲(jia)(jia)酸(8)，將懸浮液(ye)(ye)冷(leng)卻至(zhi)10℃并(bing)濾出沉淀(dian)，用水(shui)(30L，10℃)洗(xi)滌，并(bing)在(zai)(zai)(zai)70℃下(xia)(xia)干燥(zao)(zao)16小(xiao)時(shi)(shi)。通過(guo)(guo)從(cong)甲(jia)(jia)苯(ben)(ben)(29.4L)結(jie)晶獲得(de)為(wei)灰白色晶體的(de)(de)純(chun)(chun)的(de)(de)4-(芐氧基(ji)(ji))-8-甲(jia)(jia)基(ji)(ji)-2-萘(nai)甲(jia)(jia)酸(8)。過(guo)(guo)濾沉淀(dian)的(de)(de)晶體，用甲(jia)(jia)苯(ben)(ben)洗(xi)滌并(bing)在(zai)(zai)(zai)103-108℃下(xia)(xia)干燥(zao)(zao)16小(xiao)時(shi)(shi)(956g，產率92.5％，純(chun)(chun)度99.9％)。
在82-88℃下，在Et3N(1.1當量)的存在下在含有過量的叔丁醇(2.6當量)的甲苯(5L)中，使4-(芐氧基)-8-甲基-2-萘甲酸(8)(1kg)與二苯基磷酰疊氮化物(1.16當量)反應約3小時。冷卻至30℃后，將反應混合物在EtOAc和水之間分配。分離有機層，用Na2CO3水溶液、鹽水洗滌，經硫酸鎂干燥。蒸餾出(chu)EtOAc并(bing)用(yong)(yong)異丙醇研磨(mo)粗制產物。過濾磨(mo)碎(sui)的晶體，用(yong)(yong)異丙醇洗滌，并(bing)在62-68℃下干燥16小時，得到量為1096g的純的(4-(芐氧基(ji))-8-甲(jia)基(ji)萘-2-基(ji))氨基(ji)甲(jia)酸叔(shu)丁酯(9)(產率92.8％，純度(du)99.6％)。
在-10℃下，用1.05當量在THF(17.6L)中的N-溴代琥珀酰亞胺溶液處理(4-(芐氧基)-8-甲基萘-2-基)氨基甲酸叔丁酯(9)(1.05kg)。通過添加Na2SO3水溶液隨后添加1M氫氧化鈉溶液淬滅反應。添加乙酸乙酯并將產物(10)萃取到有機層中。將萃取物用鹽水洗滌，用MgSO4干燥并在真空下在旋轉蒸發器上蒸干。將粗制中間物(4-(芐氧基)-1-溴-8-甲基萘-2-基)氨基甲酸叔丁酯(10)溶于THF(3.3L)中，在約10℃下用叔丁醇鉀(1.3當量)脫質子化，并在約25℃下用(S)-縮水甘油基硝基苯磺酸酯(1.2當量)烷基化3小時。通過添加NH4Cl水(shui)溶液(ye)淬滅反(fan)應，并用EtOAc萃取反(fan)應混(hun)合物。用水(shui)和鹽(yan)水(shui)洗滌EtOAc層。在蒸發溶劑(ji)后(hou)得(de)到(dao)粗制(S)-4-(芐氧(yang)(yang)基(ji)(ji))-1-溴-8-甲(jia)基(ji)(ji)萘(nai)-2-基(ji)(ji))(環氧(yang)(yang)乙烷(wan)-2-基(ji)(ji)甲(jia)基(ji)(ji))氨基(ji)(ji)甲(jia)酸(suan)酯叔丁酯(11)。從庚烷(wan)中結晶(jing)得(de)到(dao)呈(cheng)米色晶(jing)體狀(zhuang)的(de)1185g純(chun)(S)-(4-(芐氧(yang)(yang)基(ji)(ji))-1-溴-8-甲(jia)基(ji)(ji)萘(nai)-2-基(ji)(ji))(環氧(yang)(yang)乙烷(wan)-2-基(ji)(ji)甲(jia)基(ji)(ji))氨基(ji)(ji)甲(jia)酸(suan)叔丁酯(11)，產率(lv)82.3％(純(chun)度96.09％)。
將(jiang)(S)-(4-(芐氧(yang)基)-1-溴-8-甲基萘(nai)-2-基)(環氧(yang)乙烷-2-基甲基)-氨(an)基甲酸(suan)叔丁(ding)酯(11)(1034g)溶于THF(10.4L)中(zhong)。將(jiang)該(gai)溶液(ye)在(zai)(zai)干(gan)燥氮氣(qi)氣(qi)氛下(xia)(xia)冷(leng)卻至(zhi)-25℃。然(ran)后，逐漸添加正丁(ding)基鋰(li)(1L；在(zai)(zai)己烷中(zhong)2.5M)，溫度保持在(zai)(zai)-25至(zhi)-20℃，并再攪拌(ban)10分(fen)鐘。將(jiang)反應(ying)混(hun)合物用(yong)(yong)飽(bao)和氯(lv)化銨水(shui)(shui)溶液(ye)(366g，在(zai)(zai)1.1L中(zhong))淬滅，用(yong)(yong)乙酸(suan)乙酯(2×4.8L)萃取水(shui)(shui)層。將(jiang)合并的(de)有機層在(zai)(zai)真空(kong)下(xia)(xia)攪拌(ban)20分(fen)鐘。隨后，添加p-TsOH的(de)水(shui)(shui)溶液(ye)(在(zai)(zai)520ml水(shui)(shui)中(zhong)121g PTSA一水(shui)(shui)合物)，將(jiang)反應(ying)混(hun)合物攪拌(ban)1小時。通過添加1M碳酸(suan)鈉(na)溶液(ye)淬滅反應(ying)。將(jiang)水(shui)(shui)層排出。有機層用(yong)(yong)鹽(yan)水(shui)(shui)洗滌，用(yong)(yong)硫酸(suan)鎂(mei)干(gan)燥并蒸發至(zhi)干(gan)。
將一半的(de)粗(cu)制(S)-5-(芐氧(yang)(yang)基(ji))-1-(羥甲(jia)基(ji))-9-甲(jia)基(ji)-1H-苯(ben)并[e]吲(yin)哚(duo)-3(2H)-羧(suo)酸叔丁(ding)(ding)酯(zhi)(12)溶于2.13L的(de)DCM中，并經(jing)2.4kg粒徑0.063-0.1mm的(de)硅膠過(guo)濾。用(yong)(yong)DCM(11L)，然后(hou)用(yong)(yong)DCM/乙(yi)(yi)酸乙(yi)(yi)酯(zhi)(9∶1；13.4L)和DCM/乙(yi)(yi)酸乙(yi)(yi)酯(zhi)(8∶2；12L)洗脫(副)產(chan)物。用(yong)(yong)剩余的(de)一半粗(cu)制化(hua)合(he)物重復該步驟，合(he)并含有化(hua)合(he)物(12)的(de)級(ji)分，濃縮，真空(kong)干燥(zao)，并在(zai)DCM/戊烷(每克4ml/60ml的(de)殘余物)中結晶，在(zai)35-40℃下真空(kong)干燥(zao)12-16小時以(yi)得(de)到米色(se)至白色(se)固體(S)-5-(芐氧(yang)(yang)基(ji))-1-(羥甲(jia)基(ji))-9-甲(jia)基(ji)-1H-苯(ben)并[e]吲(yin)哚(duo)-3(2H)-羧(suo)酸叔丁(ding)(ding)酯(zhi)(12)，(347g，產(chan)率39.9％，純度96.3％，(R)-5-(芐氧(yang)(yang)基(ji))-1-(羥甲(jia)基(ji))-9-甲(jia)基(ji)-1H-苯(ben)并[e](2H)-羧(suo)酸叔丁(ding)(ding)酯(zhi)產(chan)率5.14％)。
實施例2b
根(gen)據實施例2a的方案(an)由化(hua)合物(9)制備(bei)化(hua)合物(12)，即(ji)式(shi)(II)的化(hua)合物：
在(zai)-10℃下，用(yong)1.01當量在(zai)THF(31.5g)中的N-溴琥珀酰亞胺(5.20g)處(chu)理(4-(芐氧基(ji)(ji))-8-甲(jia)基(ji)(ji)萘-2-基(ji)(ji))氨(an)基(ji)(ji)甲(jia)酸(suan)叔丁(ding)酯(zhi)(9)(10.5g)。通過添加(jia)氫氧化鈉水(shui)溶液(0.75g NaOH和7.5g水(shui))淬滅(mie)反應。用(yong)飽(bao)(bao)和NaCl水(shui)溶液(15g)洗(xi)滌萃(cui)取(qu)物，并用(yong)乙酸(suan)乙酯(zhi)(11.25g)萃(cui)取(qu)水(shui)層。合(he)并有機層，用(yong)飽(bao)(bao)和NaCl水(shui)溶液(15g)洗(xi)滌并在(zai)真空下濃縮(suo)以得到(4-(芐氧基(ji)(ji))-1-溴-8-甲(jia)基(ji)(ji)萘-2-基(ji)(ji))氨(an)基(ji)(ji)甲(jia)酸(suan)叔丁(ding)酯(zhi)(10)(14.36g，產率112.36％)。
將粗制中間物(10)(14.36g)溶于THF(15g)和甲苯(10g)中，用在10℃分兩部分添加(1×4.30和1×0.20g，總共1.39當量)的叔丁醇鉀脫質子化，并在約25℃下用(S)-縮水甘油基硝基苯磺酸酯(8.80g，1.19當量)烷基化2小時。將反應用甲苯(37.5g)稀釋，并用活性炭(0.75g)在KieselguhrTM上過(guo)濾。用甲苯(30g)洗(xi)滌固體(ti)殘余物，并用飽和NaCl水溶液(ye)(ye)(2×15g)洗(xi)滌濾液(ye)(ye)，在真(zhen)空(kong)下濃縮以得到為油(you)狀物(11)(13.75g，產率95.49％)。
將油狀物(11)(13.75g)溶于THF(135g)中。將該溶液在干燥氮氣氣氛下冷卻至-10℃。然后，在-10℃下在攪拌下逐漸添加甲醇鈉(1.50g，1.06M)和正丁基鋰(8.40g，在己烷中1.16M，2.5M)。在另外攪拌80分鐘后，用飽和NaCl水溶液(15g)和水(9.75)淬滅反應混合物。使用乙酸水溶液(0.30g乙酸和2.70g水)和飽和NaCl溶液(15g溶液)的混合物對有機層進行酸性洗滌。然后用飽和NaHCO3水溶(rong)(rong)液(ye)(11.25g溶(rong)(rong)液(ye))和(he)飽和(he)NaCl水溶(rong)(rong)液(ye)(11.25g溶(rong)(rong)液(ye))的(de)混合物進行堿性洗滌。
在碳過濾(lv)(lv)后，用EtAc(15g)洗(xi)滌過濾(lv)(lv)器上的活性炭(1.12g)。將(jiang)濾(lv)(lv)液(ye)蒸干(11.20g)并(bing)溶(rong)于(yu)熱(55℃)的甲(jia)基(ji)叔丁基(ji)醚(mi)(33.75g)中(zhong)。將(jiang)溶(rong)液(ye)冷(leng)卻至約(yue)45℃。將(jiang)懸浮液(ye)用甲(jia)基(ji)叔丁基(ji)醚(mi)(22.5g)稀釋(shi)并(bing)逐漸冷(leng)卻至-15℃，過濾(lv)(lv)，用甲(jia)基(ji)叔丁基(ji)醚(mi)(2×5g)洗(xi)滌，并(bing)在真空下干燥，得到(12)(5.40g，來自化(hua)合物(wu)(11)的產率為49.35％，純度99.56％)。
實施例3a
根據(ju)以下方(fang)案由化合物(12)制備化合物(14)
在0-5℃下，在Et3N(2.6當(dang)量(liang)(liang))的(de)存在(zai)(zai)(zai)(zai)下(xia)，用在(zai)(zai)(zai)(zai)DCM(1.4L)中(zhong)(zhong)的(de)甲(jia)(jia)磺(huang)酰(xian)氯(lv)(1.3當(dang)量(liang)(liang))將(S)-5-(芐(xia)氧(yang)基(ji)(ji)(ji))-1-(羥甲(jia)(jia)基(ji)(ji)(ji))-9-甲(jia)(jia)基(ji)(ji)(ji)-1H-苯并(bing)(bing)[e]吲(yin)哚-3(2H)-羧(suo)酸叔(shu)丁酯(12)(170g；405mmol)處(chu)(chu)理(li)(li)(li)90分(fen)(fen)鐘(zhong)。用鹽(yan)酸、水(shui)和(he)鹽(yan)水(shui)洗(xi)滌(di)反應混合物(wu)。萃取物(wu)經硫酸鎂(mei)(mei)干(gan)燥并(bing)(bing)蒸(zheng)(zheng)(zheng)干(gan)。在(zai)(zai)(zai)(zai)溶劑蒸(zheng)(zheng)(zheng)發后，將包含中(zhong)(zhong)間物(wu)(S)-5-(芐(xia)氧(yang)基(ji)(ji)(ji))-9-甲(jia)(jia)基(ji)(ji)(ji)-1-((甲(jia)(jia)基(ji)(ji)(ji)磺(huang)酰(xian)基(ji)(ji)(ji))氧(yang)基(ji)(ji)(ji))甲(jia)(jia)基(ji)(ji)(ji))-1H-苯并(bing)(bing)[e]吲(yin)哚-3(2H)-羧(suo)酸叔(shu)丁酯(13)溶于(yu)DMF(1.2L)中(zhong)(zhong)，并(bing)(bing)在(zai)(zai)(zai)(zai)約80℃下(xia)用氯(lv)化(hua)鋰(5當(dang)量(liang)(liang))處(chu)(chu)理(li)(li)(li)90分(fen)(fen)鐘(zhong)。在(zai)(zai)(zai)(zai)DMF(8-4毫巴(ba))蒸(zheng)(zheng)(zheng)發后，將殘余物(wu)在(zai)(zai)(zai)(zai)DCM和(he)水(shui)之間分(fen)(fen)配。分(fen)(fen)離下(xia)層，用鹽(yan)水(shui)洗(xi)滌(di)并(bing)(bing)經硫酸鎂(mei)(mei)干(gan)燥。然后蒸(zheng)(zheng)(zheng)發DCM，將殘余物(wu)溶于(yu)熱的(de)庚烷(wan)(3.5L)中(zhong)(zhong)，用活(huo)性炭處(chu)(chu)理(li)(li)(li)并(bing)(bing)過(guo)濾(lv)到(dao)4L夾套反應器中(zhong)(zhong)。用另一(yi)份庚烷(wan)洗(xi)滌(di)過(guo)濾(lv)器上(shang)的(de)活(huo)性炭。將粗產(chan)(chan)物(wu)的(de)溶液冷卻(que)至(zhi)約50℃，結(jie)晶，并(bing)(bing)在(zai)(zai)(zai)(zai)該溫度(du)下(xia)保持1小(xiao)時。在(zai)(zai)(zai)(zai)2小(xiao)時內將懸浮液冷卻(que)至(zhi)7℃，在(zai)(zai)(zai)(zai)該溫度(du)下(xia)再(zai)攪拌(ban)1小(xiao)時，過(guo)濾(lv)，用庚烷(wan)洗(xi)滌(di)，并(bing)(bing)在(zai)(zai)(zai)(zai)真空下(xia)干(gan)燥。使用上(shang)述方法(fa)從庚烷(wan)中(zhong)(zhong)重結(jie)晶干(gan)燥的(de)晶體(135g；76％)以(yi)得到(dao)(S)-5-(芐(xia)氧(yang)基(ji)(ji)(ji))-1-(氯(lv)甲(jia)(jia)基(ji)(ji)(ji))-9-甲(jia)(jia)基(ji)(ji)(ji)-1H-苯并(bing)(bing)[e]吲(yin)哚-3(2H)-羧(suo)酸叔(shu)丁酯(14)(111g；82％，光學純度(du)99.99％；總產(chan)(chan)率(lv)63.0％)。
實施例3b
根據實(shi)施(shi)例3a的方案由化合物(wu)(12)制備化合物(wu)(14)
在0-5℃下，在Et3N(3.3g，1.37當量)存在下，用在THF(50g)中的甲磺酰氯(3.0g，1.1當量)將化合物(12)(10g)處理90分鐘。通過添加鹽酸水溶液(1.70g HCl，36％和10g水)淬滅反應混合物。用飽和NaHCO3水(shui)溶液(5g)和飽和NaCl水(shui)溶液(5g)洗(xi)滌(di)有機層(ceng)，用乙(yi)酸乙(yi)酯(13.3g)萃取水(shui)層(ceng)。合并有機層(ceng)，并用飽和NaCl水(shui)溶液(10g)洗(xi)滌(di)，然后(hou)在真空下濃縮以得到(13)(13.10g)。
將包(bao)含中間物(13)的殘余物溶于DMF(20g)中，并在約80℃下(xia)用(yong)氯化鋰(2.40g，2.38當量)處(chu)理180分鐘。冷卻(que)至40℃后，將反應混(hun)合(he)物用(yong)甲苯(30g)和水(50g)稀釋。分離有機(ji)層，向有機(ji)層中添加水(50g)，并用(yong)甲苯(2×15g)萃取該混(hun)合(he)物。合(he)并的有機(ji)層用(yong)飽和NaCl水溶液(25g)洗滌，然后用(yong)水(25g)洗滌。
在(zai)碳過(guo)濾(lv)后(hou)，用(yong)甲苯(11.7g)洗滌過(guo)濾(lv)器上的(de)活(huo)性炭(0.83g)。將(jiang)濾(lv)液(ye)(ye)蒸干(8.3g)，并(bing)溶于熱(60℃)的(de)庚烷(wan)(33.3g)和乙(yi)醇(chun)(33.3g)的(de)混合(he)物(wu)中。將(jiang)溶液(ye)(ye)逐漸冷卻至-15℃，過(guo)濾(lv)，用(yong)庚烷(wan)(2×8g)洗滌并(bing)在(zai)60℃下在(zai)真空(kong)下干燥(1h)，得(de)到(14)(7.60g，相對于化合(he)物(wu)(12)為72.80％，純度99.36％，光學純度99.99％)。
實施例4
制備(bei)用于實施例5中的(de)4-(甲(jia)氧基甲(jia)氧基)苯甲(jia)酸
在氮氣氣氛下，將1g(6.6mmol)的4-羥基苯甲酸甲酯溶于25ml DCM中。接著，將溶液冷卻至0℃，然后添加600μl(7.9mmol)氯甲基甲基醚和3.25ml(19.7mmol)DIPEA。攪拌混合物并溫熱至室溫過夜。第二天，添加水(100ml)，并用DCM(100ml)兩次萃取混合物。用鹽水(100ml)洗滌合并的DCM層，用Na2SO4干燥并在真空下濃(nong)縮以得(de)到(dao)4-(甲(jia)氧(yang)基(ji)甲(jia)氧(yang)基(ji))苯(ben)甲(jia)酸甲(jia)酯(zhi)。
將粗制4-(甲氧基甲氧基)苯甲酸甲酯溶于10ml MeOH中，然后添加4ml 4M NaOH溶液。將混合物在70℃下加熱4小時。TLC表明完全轉化。將混合物冷卻至0℃，添加100ml 0.5M KHSO4溶液(pH＝3)并用EtOAc(2×75ml)萃取。將合并的EtOAc層用Na2SO4干燥并在真空下濃縮，得到1g(84％)為白色固(gu)體的4-(甲(jia)氧基(ji)甲(jia)氧基(ji))苯甲(jia)酸。
實施例5
根據以下反應方案由(you)化合物(18)和(19)制備化合物(15)：
將5-硝(xiao)基吡啶(ding)-2-胺(19，50g，359mmol)懸浮于(yu)乙醇(700ml，99+％)中并(bing)用氬氣鼓泡。接著，添(tian)加(jia)1.1當量的(de)溴丙(bing)酮(tong)酸(suan)乙酯(18，79ml，503mmol)并(bing)攪拌45分鐘。然(ran)后，在85℃下(xia)將反應混(hun)合物加(jia)熱6小(xiao)時，添(tian)加(jia)另外0.3當量的(de)溴丙(bing)酮(tong)酸(suan)乙酯(79ml，503mmol)，并(bing)溫熱至85℃保持(chi)16小(xiao)時。
然后，濃縮反應混合物，添加水(300ml)并過濾所得懸浮液。用Et2O(600ml)洗滌固體殘余物并(bing)干燥以得到為沙色固體的(de)6-硝基咪唑并(bing)[1，2-a]吡啶-2-羧酸乙酯(20)(75g，319mmol，89％產率(lv))。UPLC-MS證實獲(huo)得了期望的(de)產物。
將(jiang)在MeOH(200ml)中的6-硝基咪唑并[1，2-a]吡(bi)啶-2-羧(suo)酸乙酯(zhi)(20)(20g，85mmol)的懸浮液冷(leng)卻至0℃，逐滴添(tian)加12M氯(lv)化氫(70ml，850mmol)，然后逐份添(tian)加鋅(22.3g，340mmol)。將(jiang)反應混(hun)合(he)物攪拌30分(fen)鐘(zhong)。
接著，添加MeOH(140ml)，用濃NH3(15當量)淬滅反應并過濾。用MeOH(2×25ml)洗滌固體殘余物。將濾液濃縮并重懸浮于CHCl3(700ml)、H2O(300ml)和濃NH3(300ml，35％溶液)中。攪拌該混合物直到所有都溶解。分離各層，用CHCl3萃取水層一次。合并有機層，用飽和NaCl水溶液(50ml)洗滌，用MgSO4干燥，過濾(lv)并真空濃縮以得到為灰色(se)/綠(lv)色(se)固體的6-氨基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-羧酸乙酯(21)(11.8g，68％)。UPLC-MS證實獲得了所需(xu)的產(chan)物(wu)。
向6-氨基咪唑并[1，2-a]吡啶-2-羧酸乙酯(21)(13.29g，64.8mmol)的DMA(200ml)溶液中添加4-(甲氧基甲氧基)苯甲酸(11.8g，64.8mmol)mmol)和EDC(14.90g，78mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌18小時。然后，將反應混合物濃縮，隨后添加水(250ml)和DCM(250ml)。分離各層，并將有機層用水(100ml)洗滌，在MgSO4上干燥并在真(zhen)空下(xia)濃縮。將所得固體(ti)材料轉移(yi)至過濾器并用(yong)EtOAc(200ml)沖洗。將產物(wu)(wu)6-(4-(甲氧(yang)(yang)基甲氧(yang)(yang)基)苯(ben)甲酰氨基)咪唑并[1，2-a]吡啶-2-羧(suo)酸乙(yi)酯(22)在真(zhen)空下(xia)干燥。將化合(he)物(wu)(wu)(22)(22.16g，60mm0l)溶于1，4-二氧(yang)(yang)六環(huan)(50ml)和水(shui)(50ml)中，然(ran)后添加(jia)2M NaOH水(shui)溶液(100ml，200mmol)。將混合(he)物(wu)(wu)在70℃下(xia)攪(jiao)拌30分鐘。
接著(zhu)，將混(hun)合物(wu)冷卻至室溫，并(bing)在添加水(50ml)后酸化(使用4M HCl溶液)。過濾所(suo)得(de)懸(xuan)浮液，并(bing)干燥固體物(wu)質(zhi)以得(de)到為黃色/棕色固體的6-(4-(甲氧基(ji)甲氧基(ji))苯甲酰氨(an)基(ji))咪唑(zuo)并(bing)[1，2-a]吡(bi)啶-2-羧(suo)酸(15)(12.1g，35.5mmol，產(chan)率(lv)59.1％)。UPLC-MS證實(shi)形成了(le)正確的產(chan)物(wu)。
實施例6a
根據(ju)以(yi)下方案由(14)和(15)制備化合物(wu)(17)：
將(jiang)(S)-5-(芐(xia)氧基(ji)(ji))-1-(氯(lv)甲(jia)基(ji)(ji))-9-甲(jia)基(ji)(ji)-1H-苯并[e]吲哚(duo)-3(2H)羧酸叔丁酯(14)(4.5g，10.27mmol)溶于HCl/二氧六環(huan)(4M，30ml)中(zhong)并在20℃下(xia)攪拌(ban)4小時。將(jiang)所得懸浮液濃縮并在真空下(xia)干燥以得到白色/灰色固體。
然后，將所得(de)HCl-鹽(yan)溶(rong)于DMA(80ml)中，冷(leng)卻至0℃，添加6-(4-(甲(jia)氧(yang)基(ji)甲(jia)氧(yang)基(ji))苯甲(jia)酰氨基(ji))咪唑并[1，2-a]吡啶(ding)-2-羧酸(15)(3.86g，11.30mmol)和(he)EDC(5.91g，30.8mmol)并攪拌18小(xiao)時使(shi)混合(he)物溫熱至20℃。
然后，在真空下濃縮反應混合物，將粗制產物溶于DCM/水(1200ml，1∶1，v/v)中并分離各層。將有機層在MgSO4上(shang)干燥，過濾并(bing)濃縮(suo)。通過硅膠色(se)譜(用0至2.5％梯度(du)的MeOH洗脫DCM)純化粗產物。合并(bing)具(ju)有產物的級分并(bing)濃縮(suo)以得(de)到(dao)為白色(se)/灰(hui)色(se)固體(ti)的(S)-N-(2-(5-(芐氧(yang)(yang)基(ji))-1-(氯甲(jia)基(ji))-9-甲(jia)基(ji)-2，3-二氫-1H-苯并(bing)[e]吲哚-3-羰基(ji))咪(mi)唑并(bing)[1，2-a]吡啶-6-基(ji))-4-(甲(jia)氧(yang)(yang)基(ji)-甲(jia)氧(yang)(yang)基(ji))苯甲(jia)酰胺(16)(6.3g，9.53mmol，93％產率(lv))。UPLC-MS表(biao)明(ming)獲得(de)了所期望的產物。
將具有10當(dang)量甲(jia)酸(suan)銨的(de)在(zai)MeOH(20ml)中的(de)Pd/C(0.507g，0.476mmol)懸浮(fu)液加(jia)熱(re)至(zhi)95℃保持(chi)5分(fen)鐘。然(ran)后(hou)，使混(hun)合物冷卻(que)至(zhi)RT(20℃)。接著，添加(jia)10當(dang)量的(de)甲(jia)酸(suan)銨，隨(sui)后(hou)添加(jia)在(zai)THF(100ml)中的(de)(S)-N-(2-(5-(芐氧基(ji))-1-(氯(lv)甲(jia)基(ji))-9-甲(jia)基(ji)-2，3-二氫-1H-苯(ben)并[e]吲哚-3-羰基(ji))咪唑并[1，2-a]吡啶(ding)-6-基(ji))-4-(甲(jia)氧基(ji)甲(jia)氧基(ji))苯(ben)甲(jia)酰胺(16)(6.3g，9.53mmol)。將所(suo)得混(hun)合物在(zai)20℃下(xia)攪拌3小時(shi)。100分(fen)鐘后(hou)，添加(jia)另外200mg的(de)Pd/C。
當反應完成時(shi)，其經Hyflo助(zhu)濾器過(guo)濾并(bing)用THF(50ml)漂洗，然后濃縮。將(jiang)粗(cu)制產(chan)物(wu)通過(guo)硅(gui)膠(jiao)柱色譜(在二(er)氧化硅(gui)上(shang)預包裝的)純化，用DCM以MeOH(2.5至(zhi)10％)梯度洗脫。將(jiang)合(he)并(bing)的產(chan)物(wu)級分濃縮并(bing)在真空下干燥(zao)以得到為(wei)深(shen)黃色固體(ti)的(S)-N-(2-(1-(氯甲(jia)基(ji))-5-羥基(ji)-9-甲(jia)基(ji)-2，3-二(er)氫-1H-苯(ben)并(bing)[e]吲(yin)哚(duo)-3-羰基(ji)-咪唑并(bing)[1，2-a]吡(bi)啶-6-基(ji))-4-(甲(jia)氧基(ji)甲(jia)氧基(ji))苯(ben)甲(jia)酰(xian)胺(17)(4.9g，8.58mmol，產(chan)率90％)。UPLC-MS表明獲得了(le)所期望的產(chan)物(wu)。
實施例6b
根據實施例(li)6a的方案由(14)和(he)(15)制備(bei)化(hua)合物(wu)(17)
在(zai)(zai)夾套(tao)反應器(qi)中(zhong)將(jiang)化(hua)合物(wu)(14)(183g，0.418mol)懸浮(fu)于HCl/二(er)氧六環(4M，2.08L)溶(rong)液中(zhong)，并(bing)在(zai)(zai)28-32℃下攪拌3小時。將(jiang)形成的(de)懸浮(fu)液冷卻至(zhi)18-22℃，然后添(tian)加甲(jia)基-異(yi)丁(ding)基醚(0.76L)。濾出形成的(de)固體，用甲(jia)基-叔丁(ding)基醚(0.64L)洗(xi)滌并(bing)在(zai)(zai)40℃下在(zai)(zai)旋轉蒸發器(qi)中(zhong)干(gan)燥，得到HCl-鹽(yan)[(S)-5-(芐氧基)-1-(氯甲(jia)基)-9-甲(jia)基-2，3-二(er)氫-1H-苯并(bing)[e]吲哚(duo)鹽(yan)酸鹽(yan)]152.3g(產率97.4％)(HPLC純度為98.08％)。
在夾(jia)套反(fan)應器中(zhong)將(jiang)(jiang)所獲得的HCl-鹽(76.1g，0.203mol)懸浮(fu)(fu)于DMA(1.25L)中(zhong)并(bing)(bing)添(tian)(tian)加化(hua)合(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(15)(74.3g，0.218mol)。將(jiang)(jiang)反(fan)應混(hun)合(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)的溫(wen)(wen)度調(diao)節至18-22℃，添(tian)(tian)加EDC(58.5g，0.305mol)，然后添(tian)(tian)加DMA(0.2L)。將(jiang)(jiang)反(fan)應混(hun)合(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)在18-22℃下攪(jiao)(jiao)拌(ban)1小時(shi)。將(jiang)(jiang)夾(jia)套中(zhong)的溫(wen)(wen)度改為10℃，向(xiang)反(fan)應混(hun)合(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)中(zhong)添(tian)(tian)加氫氧化(hua)銨(6.8ml)。向(xiang)反(fan)應混(hun)合(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)中(zhong)逐漸添(tian)(tian)加水(200ml)，產物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)開始結(jie)晶(jing)。過濾固體產物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)并(bing)(bing)用(yong)(yong)甲(jia)(jia)醇(chun)(2×0.6L)洗滌。將(jiang)(jiang)產物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)在甲(jia)(jia)醇(chun)(1.2L)中(zhong)重新漿化(hua)并(bing)(bing)將(jiang)(jiang)懸浮(fu)(fu)液攪(jiao)(jiao)拌(ban)2小時(shi)。過濾產物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)并(bing)(bing)用(yong)(yong)甲(jia)(jia)醇(chun)(0.2L)洗滌，并(bing)(bing)將(jiang)(jiang)其在45-50℃下干燥，得到(dao)化(hua)合(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(16)(122g，產率(lv)89％)。
在(zai)(zai)(zai)氫(qing)化(hua)反應(ying)(ying)器中將(jiang)(jiang)(jiang)化(hua)合物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)16(240g，0.363mol)懸(xuan)浮于THF(3.9L)中。同時，通過(guo)將(jiang)(jiang)(jiang)5％Pd/C(86.5g，濕膏約50％)催化(hua)劑(ji)懸(xuan)浮于甲(jia)(jia)醇(chun)(chun)和甲(jia)(jia)酸(suan)銨(257.5g)中來活化(hua)Pd/C催化(hua)劑(ji)。將(jiang)(jiang)(jiang)混(hun)合物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)加熱至(zhi)(zhi)35℃，并(bing)(bing)在(zai)(zai)(zai)該溫度下(xia)(xia)攪(jiao)(jiao)拌(ban)(ban)(ban)15分鐘。將(jiang)(jiang)(jiang)混(hun)合物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)冷卻(que)至(zhi)(zhi)20℃。向氫(qing)化(hua)反應(ying)(ying)器中添加催化(hua)劑(ji)懸(xuan)浮液(ye)。用氮(dan)氣(qi)沖洗(xi)反應(ying)(ying)器并(bing)(bing)開啟攪(jiao)(jiao)拌(ban)(ban)(ban)。在(zai)(zai)(zai)20℃下(xia)(xia)將(jiang)(jiang)(jiang)反應(ying)(ying)混(hun)合物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)攪(jiao)(jiao)拌(ban)(ban)(ban)2.5小(xiao)時。在(zai)(zai)(zai)氮(dan)氣(qi)下(xia)(xia)濾出催化(hua)劑(ji)并(bing)(bing)用THF(2×1L)洗(xi)滌。在(zai)(zai)(zai)減(jian)壓下(xia)(xia)在(zai)(zai)(zai)旋轉(zhuan)蒸(zheng)發器上蒸(zheng)發濾液(ye)，得(de)到(dao)固體(ti)殘余物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)。向固體(ti)殘余物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)中添加二氯甲(jia)(jia)烷(1.15L)，并(bing)(bing)將(jiang)(jiang)(jiang)混(hun)合物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)攪(jiao)(jiao)拌(ban)(ban)(ban)以形成結晶懸(xuan)浮液(ye)。過(guo)濾產(chan)(chan)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)并(bing)(bing)用二氯甲(jia)(jia)烷(0.5L)和甲(jia)(jia)醇(chun)(chun)(0.2L)洗(xi)滌。將(jiang)(jiang)(jiang)產(chan)(chan)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)在(zai)(zai)(zai)甲(jia)(jia)醇(chun)(chun)(1L)中重新漿化(hua)并(bing)(bing)添加DMA(50mL)，將(jiang)(jiang)(jiang)懸(xuan)浮液(ye)在(zai)(zai)(zai)20℃下(xia)(xia)攪(jiao)(jiao)拌(ban)(ban)(ban)2小(xiao)時。過(guo)濾產(chan)(chan)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)，用甲(jia)(jia)醇(chun)(chun)(250mL)洗(xi)滌并(bing)(bing)干燥。得(de)到(dao)化(hua)合物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(17)167g(產(chan)(chan)率80.6％)。