專利名稱：一種注射用含大分子水凝膠的透明質酸或其鹽的混懸液及其制備方法
技術領域：
本發明屬于醫藥領域，涉及一種注射用含大分子水凝膠的透明質酸或其鹽的混懸液以及 它的制備方法。更具體的說，本發明涉及一種可注射于皮膚軟組織、以及關節腔的含大分子 水凝膠的透明質酸或其鹽混懸液，其產品，及其在美容和醫療領域的應用。
背景技術：
透明質酸(hyalouronicacid， HA)是構成皮膚、玻璃體、關節滑液和軟骨組織的重要成 分，具有良好的潤滑性、黏彈性和非免疫原性(Laurent TC等，1995， 54: 429 432)。至今有大量的HA臨床產品，包括眼科黏彈劑和骨科的黏彈性補充劑，治療骨 性關節炎(OA)、類風濕性關節炎(RA)的關節腔注射劑，以及術后粘連的防治劑等(凌沛學和 賀艷麗等，中國生化藥物雜志，1998， 19:200 204)，高分子的HA溶液也被用于注入面部皮 膚，減輕皺紋，改進皮膚外觀和結構(RU2272634、 RU2194512)或改進唇部形狀，阻止皮 膚衰老(RU2159111)。但是，天然的HA容易被肌體組織中的酶降解，良好的水溶性使其在 組織中容易被擴散，因此它在動物組織局部存留的時間并不令人滿意。
已有研究證明關節疾病與滑液黏彈性降低密切相關，外源性HA對骨關節炎的治療作用 主要基于對滑液黏彈性的提高，即所謂"黏彈性補充療法"(Balazs等， J.Rheumatol,l993,20:3-9)。當外源性HA在關節腔中長時間存在，依靠軟骨組織的自身修復 作用，使骨關節炎得以痊愈，而以往的產品(日本生化學工業株式會社的Artz 、加 拿大Bioniche公司的Suplazyn⑧和中國山東博士倫福瑞達的施沛特@)由于代謝較快，需 要多次注射，多次注射又增加了刺激反應和感染的機會。
為了得到效果持久的產品，多種材料如聚四氟乙烯、牛膠原蛋白、硅膠、羥基磷灰石和 聚丙烯酰胺等曾作為組織填充劑，但由于較多的副作用或潛在的過敏反應使這些產品趨于淘 汰。現在，已有技術得到交聯的HA產物(US4713448、 US4582865、 WO卯09401 、 W09515168、 US2003114406、 EP1265U6等)克服了天然HA易分散、易降解的缺陷，而保留了其良好的 生物相容性和非免疫原性，是目前較為理想的組織填充材料。如二乙烯基砜交聯的HA凝膠 hylan系列產品(美國Allergan的Hylaform , Biomatrix公司的Synvisc )，現已廣泛用作粘連 性手術植入物、骨關節病治療首選生物醫學材料、藥物緩釋基質、軟組織增大替代物、美容 整形材料等；縮水甘油醚交聯的HA凝膠Restylai^系列和Durolane②(由瑞士Q-MedAB公 司生產)，前者應用于隆唇、改善面部皺紋和褶皺，后者應用于關節腔注射治療關節炎。它們在體內的存留時間可達到4 6個月或更長時間，安全性好于其它合成聚合物和牛膠原蛋白。
此外， 一些聚合物生物材料如聚乳酸(polylactic acid， PLA)、聚乙醇酸(polyglycolic acid, PGA)、聚甲基丙烯酸甲酯(polymethylmethacrylate, PMMA)或聚天門冬氨酸(Polyaspartic add, PAA)也陸續應用于組織填充，通過特殊的聚合、分散技術獲得適宜大小的聚合物顆粒， 可應用于注射除皺，如荷蘭Hafod Bioscience B.V公司的愛貝芙@(八11"011@)，為含有直徑為 32 40nm的PMMA微球體的牛膠原蛋白懸浮液，是一種高效，持久的塑形材料，但由于含 有牛膠原蛋白，存在過敏反應和感染動物傳染病的危險，限制了使用人群。
為了防止填充物從局部植入位點的遷移和能夠方便的從局部植入位點取出，具有黏彈性 的凝膠被制成粒徑1 5 mm的顆粒，分散在生理鹽溶液中，用于制備軟組織填充注射劑 (WO2005097218、 CN1950039)。
本發明采用HA或其鹽的等滲溶液作載體，添加特定比例的水不溶性的、在等滲溶液中 充分溶脹的交聯多糖化合物和/或聚合物的含水凝膠顆粒。HA等滲溶液提供了一個潤滑、富 有彈性的空間，使懸浮其中的、具有一定剛性的凝膠顆粒更易于注射，同時，由于HA與組 織細胞良好的親和性及其對炎癥因子的調節作用，可以改善凝膠顆粒的組織相容性，減少局 部炎癥反應。
本發明由于含有一定比例的HA或其鹽的溶液，注射于關節腔，可即刻加強關節滑液的 潤滑作用，其中的含水凝膠顆粒使關節滑液對外力的緩沖作用增強，二者的混合體作為一種 有效的隔離、潤滑墊，可長時間的存在于關節腔，使損傷的軟骨獲得充分的修復，消除炎癥 產生的根源。
本發明中加入的凝膠顆粒尺寸為平均粒徑1 1000pm，適用于制備長時間存留于植入位 點、不需要從局部植入位點取出的軟組織填充注射劑。如面部美容注射劑和關節腔注射劑。 與大顆粒相比，較小的顆粒填充于皮膚更有利于塑型，可以達到自然、柔和地消除皺紋，如 前所述Restylai^系列產品均是采用10000 200000個/ml的顆粒；在組織有限的空間中，如 關節腔，較小的顆粒對周圍組織的機械性刺激和損傷也比較小；注射大顆粒填充劑需要使用 較大的注射針頭，如前所述粒徑1 5 mm的黏彈性顆粒(WO2005097218、 CN1950039)在 生理鹽水溶液中，使用15 50N的壓力，需要用20號或更大的針頭才能推出，Durolane⑧的 說明書中建議使用18 22G (內徑0.7 1.2pm)的針頭，而本發明1 1000 pm的黏彈性顆 粒僅需要23G (內徑0.6pm)或更細的針頭即可推出，使用較細小針頭可減少對注射部位肌 體組織的損傷和降低感染的機會。
此外，大顆粒填充劑為了滿足可注射的要求，必須降低顆粒的硬度，使其具有充分的流 動性，這就限制了顆粒的交聯程度，即限制了顆粒在體內的存留時間，本發明采用較小顆粒，同時以未交聯的、高潤滑性的HA或其鹽溶液作載體，既避免了對顆粒交聯程度的限制，又 滿足了便于注射的要求。根據本發明制備的以透明質酸鈉(sodiumhyaluronate, SH)溶液為 載體、以縮水甘油醚交聯SH的凝膠顆粒產品，單次注射對關節炎的治療作用可達到與4次 注射未交聯SH溶液類似的效果，本發明可調節SH的交聯程度，延長其在關節腔的作用時間， 且局部刺激作用較小。
綜上所述，本發明含大分子水凝膠的HA或其鹽的混懸液具有易于注射、局部作用時間 長、可塑性強、生物相容性好等特點，注射于關節腔治療關節炎的效果好，維持時間長。

發明內容
本發明的目的是提供一種注射用含大分子水凝膠的HA或其鹽的混懸液及其制備方法， 以及使用該大分子水凝膠的HA或其鹽混懸液用于制備美容或醫療用途的注射劑，如制備用 于消除面部皺紋的皮內或皮下注射劑和用于治療關節炎的關節腔注射劑。
本發明注射用含大分子水凝膠的HA或其鹽的混懸液，特征在于本混懸液以HA或其鹽 的等滲溶液作為載體，添加水不溶性的、在等滲溶液中充分溶脹的大分子化合物含水凝膠顆 粒構成。其中所述HA或其鹽的等滲溶液與水不溶性、在等滲溶液中充分溶脹的大分子化合
物含水凝膠顆粒的體積比為3 : 1 1 : 3，優選3 : 2 2 : 3，更優選1:1。
本發明含大分子水凝膠的HA或其鹽混懸液，其中所述大分子化合物含水凝膠顆粒的平 均粒徑為1 1000jim，優選10 500(im，更優選50 250 pm。具體描述，在顯微鏡下觀察， 測量所述含水凝膠顆粒的最大徑長，其中50%以上的顆粒徑長范圍在1 1000nm，優先選擇 50%以上的顆粒徑長范圍在10 400 pm，更優先選擇50%以上的顆粒徑長范圍在50 200
本發明含大分子水凝膠的HA或其鹽混懸液，其中所述的HA或其鹽可以是SH、透明質 酸鉀(potassium hyaluronate, KH)、透明質酸轉(calcium hyaluronate, CaH)、透明質酸鎂 (magnesium hyaluronate, MgH)、透明質酸銨(ammonium hyaluronate, NH4H)、透明質酸 四丁基銨(tetrabutyl ammonium hyaluronate, TBuAH)、透明質酸鉍(bismuth hyaluronate, BiH)和透明質酸鋅(zinc hyaluronate, ZnH)中的一種HA鹽，也可以是其中任意兩種或兩 種以上的HA鹽的混合物，優先選用SH。
本發明含大分子水凝膠的HA或其鹽混懸液，其中所述的大分子化合物可以是交聯多糖 化合物也可以是聚合物。所述的交聯多糖化合物來源于HA、硫酸軟骨素(chondroitin sulfate, CS)、肝素(heparin, HP)、纖維素(cellulose, CL)、淀粉(starch, ST)、葡聚糖(dextran， DX)、海藻酸(alginicacid， AA)或殼聚糖(chitosan， CT)以及它們的其衍生物中的一種，
6經過交聯后得到的產物；也可以是其中任意兩種或兩種以上的多糖混合后，經過交聯后得到 的產物，例如HA和CS的混合交聯產物，HA和CT混合的交聯產物，HA、 HP和CS三種 多糖混合的交聯產物等等；還可以選擇它們的交聯產物中任意兩種或兩種以上的混合物，例 如交聯HA和交聯CS的混合物，交聯HA、交聯去硫酸HP和交聯CS三種交聯產物的混合 物，HA和CT混合的交聯產物和交聯CS的混合物等等；優先選擇HA的交聯產物，更優選 采用1,4-丁二醇二縮水甘油醚(l,4-Bis(2，3-epoxypropoxy)butane， BDDE)交聯的HA產物。 所述的聚合物可以是PLA、乙交酯-丙交酯共聚物[Poly(DL-lactide-co-glycolide)， PLGA]、聚 乙二醇-聚丙交酯嵌段共聚物[poly(DL- lactide)-poly (ethylene glycol), PLA-PEG或PELA]、 PMMA、 PAA或PGA中的任意的一種，也可以是其中任意兩種或兩種以上的混合物。
由于一些交聯多糖，如交聯的HA、 CS等，其水凝膠幾乎可以是無色透明的，用這樣的 水凝膠顆粒制備本發明混懸液外觀為無色透明的黏稠體；另一些交聯多糖或聚合物，如交聯 ST、 CL、 PAA等，其水凝膠帶有乳光，不透明，用這樣的水凝膠顆粒制備本發明混懸液外觀 為帶有乳光的黏稠體；還有一些交聯多糖或聚合物，如交聯CT、 PLA、 PMMA等，其水凝 膠為白色，不透明，用這樣的水凝膠顆粒制備本發明混懸液外觀為乳白色的黏稠體。
本發明含大分子水凝膠HA或其鹽混懸液可用于制備美容或醫療用途的注射劑，例如制 備改善面部皺紋、減少皮膚褶皺的、局部注射于皮下或皮內的美容注射劑和制備治療關節炎 的關節腔注射劑。
本發明注射用含大分子水凝膠的HA或其鹽的混懸液的制備方法，包括如下步驟
① 制備大分子化合物凝膠顆粒；
② 將①所得凝膠顆粒在等滲溶液中充分溶脹、平衡，得到水不溶性的、在等滲溶液中 充分溶脹的大分子化合物含水凝膠顆粒；
③ 將②所得水不溶性的、在等滲溶液中充分溶脹的大分子化合物含水凝膠顆粒與HA 或其鹽的等滲溶液混合均勻。
本發明所述的制備方法，其中所述的HA或其鹽選自SH、 KH、 CaH 、 MgH、 NH4H、 TBuAH、 BiH和ZnH中的一種，也可以選擇其中任意兩種或兩種以上的HA鹽的混合物，優 選SH。
本發明所述的制備方法，其中所述的大分子化合物為交聯多糖化合物、聚合物或它們的 混合物。所述的交聯多糖化合物為HA、 CS、 HP、 CL、 ST、 DX、 AA或CT及其衍生物中的 一種的交聯產物、任意兩種或兩種以上混合的交聯產物，或它們的交聯產物任意兩種或兩種 以上的混合物，優選HA的交聯產物，更優選采用BDDE交聯的SH產物。所述的聚合物為 PLA、 PLGA、 PELA、 PMMA、 PASP或PGA中的任意的一種，也可以是其中任意兩種或種以上的混合物。
本發明所述的制備方法，其中所述的等滲溶液為250 350 mOsmol/L的氯化鈉溶液或磷 酸鹽緩沖溶液(PBS)，優選250 350 mOsmol/L、pH 6.5 7.5的PBS。例如0.9 %氯化鈉溶液(生 理鹽水)，或含有0.3 mM磷酸二氫鈉、1.6mM硫酸氫二鈉、146.5 mM氯化鈉、用鹽酸調節 pH 6.5 7.5的緩沖溶液。
本發明制備方法工藝簡單、產品質量易于控制；制備獲得的含大分子水凝膠的HA或其 鹽混懸液無菌、無熱原，水凝膠顆粒大小適宜且均勻細膩，易于注射。
本發明含大分子水凝膠的HA或其鹽的混懸液適合用于制備美容和醫療用途的注射劑， 具有易于注射、局部作用時間長、可塑性強、生物相容性好等特點，尤其是用于制備治療關 節炎的關節腔注射劑，在關節腔可長時間的作為一種隔離、潤滑墊，對外力的具有足夠的緩 沖作用，使軟骨組織獲得充分的修復的，具有注射次數少、局部刺激少而療效好的特點。
具體實施例方式
以下實施例是為了更好地說明本發明，不是限制本發明。 實施例一
由BDDE交聯的SH凝膠顆粒和1 %SH溶液組成的混懸液。制備方法如下
將10 g SH (平均分子量70萬道爾頓)與含有0.5 g BDDE的65 ml l%NaOH溶液混合， 于5(TC反應3h，用去離子水于7CTC純化10h，為了便于比較，將反應得到的凝膠平均分成 兩份， 一份擠壓使凝膠通過60目篩(A)，另一份擠壓使凝膠通過20目篩(B)，分別收集凝 膠顆粒，加入等體積2倍等滲濃度的PBS (每1000 ml含有NaH2P04 2H20 90 mg， Na2HP04 12H20 1.12g， NaCl 17 g)， 65。C保溫4h， 200目篩網過濾，分別得到兩份SH凝 膠，平均粒徑約250pm的顆粒380ml (A)和平均粒徑約1200 pm的顆粒375 ml (B)。
另取2.5g SH (平均分子量180萬道爾頓)，溶解于250 ml等滲PBS (每1000 ml含有 NaH2P04 2H20 45 mg， Na2HP04 12H20 0.56 g， NaCl 8.5 g， pH 7.2)，得到等滲SH溶液。
將上述得到兩份凝膠顆粒分別和125mlSH溶液混合，用IO(TC流通蒸汽滅菌兩次，每次 30min，無菌分裝于一次性注射器，即得樣品A和B。
在15 50N的壓力下，樣品A用6號針頭可以容易地推出，樣品B需要用12號的針頭 才能推出。使用較小針頭可減少對注射部位肌體組織的損傷和降低感染的機會。 實施例二
由BDDE交聯的SH凝膠顆粒和1 %SH溶液組成的混懸液。制備方法如下
將10 g SH (平均分子量120萬道爾頓)溶解于80 ml含有0.5 g BDDE的l%NaOH溶液中。于5(TC反應4h，用去離子水于7(TC純化10h,擠壓使凝膠通過80目篩，收集凝膠顆粒，
加入等體積2倍等滲濃度的PBS， 65'C保溫4h， 2000 rpm離心15 min，收集凝膠沉淀，得
到平均粒徑150 nm的SH凝膠顆粒約780 ml。
另取7.8gSH (平均分子量120萬道爾頓)，溶解于780ml等滲PBS，得到等滲SH溶液。 將上述得到的凝膠顆粒和SH溶液混合，按實施例一描述的方法滅菌、包裝，即得。 在15 50N的壓力下，該樣品用5號針頭可以容易地推出。
實施例三
由PLA微球和1XSH溶液組成的混懸液。制備方法如下
按文獻[胡一橋等，中國藥學雜志，1999， 34 (12) :822 826]方法制備PLA微球取PLA (相對分子量20KD)，溶于3 5倍二氯甲烷，加入含1%司盤一80 (Span—80)的液體石蠟 溶液(二氯甲垸的3 5體積)，于15'C攪拌乳化(200 500卬m)，形成穩定乳劑，于15。C將 溶劑揮發干凈，用無水乙醇和去離子水洗滌數次，過濾，減壓干燥并過150目篩，制得平均 粒徑50 80pmPLA微球，環氧乙烷滅菌后投入事先濕熱滅菌的等滲PBS，平衡24h。
取0.6gSH (平均分子量180萬道爾頓)，溶解于60ml等滲PBS，得到等滲SH溶液。 用IO(TC流通蒸汽滅菌兩次，每次30min。
于無菌條件下取上述制備的PLA微球40 ml和SH溶液混合均勻，包裝，即得。
在15 50N的壓力下，該樣品用5號針頭可以很容易推出。 實施例四
由PELA微球和1 %SH溶液組成的混懸液。制備方法如下
按文獻[任杰等，同濟大學學報，2003， 31 (2) :191 195]方法制備PELA微球取丙交酯、 聚乙二醇和氧化鋅(催化劑)混合均勻，充氮、抽真空后進行聚合反應。取反應冷卻后的共 聚物，加入IO倍量乙酸乙酯溶解，離心棄沉淀，向溶液中加入l/2乙酸乙酯體積的正庚烷， 棄去上層清液，加蒸餾水使底部油狀物沉淀，抽濾，蒸餾水洗多次，收集沉淀物，室溫干燥， 取干燥物溶于3 5倍二氯甲烷中，在l /3二氯甲烷體積的水溶液中加入PEG—6000和Span— 80，使其濃度分別達10%和0.05%，于250rpm攪拌混合均勻，然后將共聚物溶液逐滴加入， 500rpm攪拌約10 40min， 3500rpm離心，去離子水洗滌數次，過濾，減壓干燥并過80目篩， 制得平均粒徑80 100pmPELA微球，環氧乙垸滅菌后投入事先濕熱滅菌的等滲PBS，平衡 24h。
取0.5gSH (平均分子量180萬道爾頓)，溶解于50ml等滲PBS，得到等滲SH溶液。 用IOO'C流通蒸汽滅菌兩次，每次30min。
于無菌條件下取上述制備的PELA嵌段共聚物微球50ml和SH溶液混合均勻，包裝，即
9得。
在15 50N的壓力下，該樣品用5號針頭可以容易地推出。實施例五
由PMMA微球和1 %SH溶液組成的混懸液。制備方法如下
參考文獻(胡杰等，高分子學報，2003， 4: 540 545)方法，采用乙醇/水混合溶劑作為分散介質制備PMMA微球，改變聚合反應的條件和配比可以得到適宜的粒徑。將2.5g聚乙烯吡咯烷酮(PVP)溶于55X乙醇溶液60ml，投入10g甲基丙烯酸甲酯(MMA)、 1 g丙烯酸(MAA)和0.15 g偶氮二異丁腈(AIBN)，通氮氣，預分散30 min，將溫度升至70。C反應50 min，然后降溫至55'C反應24h，結束反應，降溫收集分散液，用乙醇/水反復清洗后離心沉降，循環反復3次，再用等滲PBS反復浸泡、清洗后，離心沉降得到平均粒徑約10 50pm的PMMA微球。
取0.4gSH (平均分子量180萬道爾頓)，溶解于40ml等滲PBS，得到等滲SH溶液。取上述制備的PMMA微球10 ml和上述SH溶液混合，按實施例一描述的方法滅菌、包裝，即得。
在15 50N的壓力下，該樣品用5號針頭可以容易地推出。實施例六
由PASP凝膠顆粒和1 %SH溶液組成的混懸液。制備方法如下
參考文獻方法[①方莉和譚天偉，化學反應工程與工藝，2003， 19 (4) : 295 299;②CN1814650]制備PASP:以天門冬氨酸(L-ASP)為原料、磷酸作為催化劑、環丁砜作為溶劑，常壓下加熱至180 20(TC，反應4.5h，反應過程中將所生成的水份除去。反應完成后，將反應生成物依次用甲醇和水反復沖洗至中性，4CTC條件下減壓干燥，制得分子量約40 50萬的反應中間體聚琥珀酰亞胺(PSI)。粉碎PSI，過140 150目篩，加入30倍去離子水，持續攪拌8 10h，間隔時間加入交聯劑己二胺至濃度達0.5%，攪拌結束后加入3 4倍乙醇，放置3天，收集沉淀于25。C減壓干燥，粉碎干燥品，過140 150目篩，加入20倍50%乙醇溶液，攪拌30min，攪拌過程中滴加20XNaOH溶液至反應液呈膠體狀態，加入3 5倍乙醇，放置3 d，收集沉淀于4(TC減壓干燥，得PASP固體。將5gPASP分散于去離子水中，充分溶脹后過60目篩，加入等體積2倍等滲濃度的PBS， 65'C保溫4h， 200目篩網過濾，得到平均粒徑200nm的PASP水凝膠顆粒約450 ml。
取0.45gSH (平均分子量180萬道爾頓)，溶解于50ml等滲PBS，得到等滲SH溶液。取上述制備的PASP水凝膠顆粒和上述SH溶液混合，按實施例一描述的方法滅菌、包裝，即得。在15 50N的壓力下，該樣品用5號針頭可以容易地推出。動物實驗研究
1. 顆粒對軟骨組織的刺激(兔關節腔局部刺激性實驗)
取本發明實施例一中A、 B兩個樣品，分別注入兔膝關節，注射2次，0.2 ml/次，間隔一周，第二次注射48h后取標本作組織學檢查，比較兩個樣品對關節組織的刺激性。
兩個樣品注入兔膝關節后均未發現明顯發紅、腫漲現象。軟骨和滑膜組織學檢查表明，注射A樣品的關節滑膜有少量炎癥細胞浸潤，注射B樣品的關節滑膜出現輕度增生及大量炎癥細胞浸潤，炎癥較前者重；二者關節軟骨組織未見明顯異常。
試驗表明，含有大凝膠顆粒的B樣品對關節組織的刺激性較含有小凝膠顆粒的A樣品嚴重。 '
2. 對關節炎的治療效果
通過考察單次注射本發明樣品對退化過程中兔膝關節面軟骨的保護作用研究本發明對關節炎的治療效果。
用文獻方法(鬼頭康彥等)在兔膝關節腔內注入木瓜蛋白酶造成骨關節病變模型，取本發明實施例一 A的樣品與高分子SH溶液(1 % )作為試驗樣品分別注入病變關節。給藥方法于木瓜蛋白酶末次注射的第7d， 一次性注射本發明樣品0.21111，為給藥I組；注射1% SH4次，每次0.2 1111，隔周注射一次，為給藥II組。于首次給藥第28d處死動物，打開關節進行大體觀察后，取標本作組織學檢查，對軟骨和滑膜作Mankin's評分。
造模后病變動物關節出現腫脹，約一周后消失，用藥動物關節未見明顯腫脹，處死動物的關節腔打開后，發現空白對照組關節軟骨表面顏色較正常關節明顯變淡，用藥組關節軟骨表面顏色也有改變，Mankin's評分結果見表1:
表l 各組動物的Mankin's評分
評分(x土力
組別 -
軟骨 滑膜
空白對照(n二6) 10.86±2.3' 12.03 ±1.9*
給藥1組(11=7) 6.21±1.5 5.83±1.1
給藥II組(『8) 6.54 ±1.4 5.62 ±1.3
*:給藥i、 n組與空白對照組相比具有顯著性差異，P<o.oi試驗表明，單次注射本發明實施例二的樣品對退化過程中兔膝關節面軟骨的保護作用與
4次注射高分子1% SH溶液的效果相同，達到了減少注射次數而維持治療效果的目的。
113.在體內存留的時間
通過大鼠皮下植入試驗考察本發明在體內的存留時間。
取本發明實施例二和實施例四的樣品分別注射植入大鼠背部皮下，間隔時間處死動物，打開背部皮膚觀察植入部位情況。2個月后觀察，兩個植入樣品均未發生擴散、變色，植入物周圍形成了較薄的包囊，周圍組織無粘連、無血管增生，4、 6個月后觀察植入物的包囊稍加厚，周圍組織無異常變化，12個月后觀察，個別動物背部植入物完全吸收，包囊消失，周圍組織與正常組織無異。實施例二樣品在皮下的存留時間約10 14個月；實施例四樣品在皮下的存留時間約8 12個月。
權利要求
1、種注射用含大分子水凝膠的透明質酸或其鹽的混懸液，特征在于由透明質酸或其鹽的等滲溶液作為載體，添加水不溶性的、在等滲溶液中充分溶脹的大分子化合物含水凝膠顆粒構成。
2、 權利要求1所述的混懸液，其中所述透明質酸或其鹽的等滲溶液與水不溶性、在等滲溶液中充分溶脹的大分子化合物含水凝膠顆粒的體積比為3 : 1 1 : 3，優選3 : 2 2 : 3，更 優選l : 1。
3、 權利要求1或2所述的混懸液，其中所述大分子化合物含水凝膠顆粒的平均粒徑為1 1000 Hm，優選10 500 pm，更優選50 250 pm。
4、 權利要求1或2所述的混懸液，其中所述大分子化合物為交聯多糖化合物或聚合物。
5、 權利要求1或2所述的透明質酸或其鹽為透明質酸鈉、透明質酸鉀、透明質酸鈣、透明質 酸鎂、透明質酸銨、透明質酸四丁基銨、透明質酸鉍和透明質酸鋅中的一種、任意兩種或 兩種以上的混合物，優選透明質酸鈉。
6、 權利要求4所述的混懸液，其中交聯多糖化合物為透明質酸、硫酸軟骨素、肝素、纖維素、 淀粉、葡聚糖、海藻酸或殼聚糖及其衍生物中的一種的交聯產物、任意兩種或兩種以上混 合的交聯產物，或它們的交聯產物任意兩種或兩種以上的混合物，優選透明質酸的交聯產 物，更優選采用1，4-丁二醇二縮水甘油醚交聯的透明質酸鈉產物。
7、 權利要求4所述的混懸液，其中聚合物為聚乳酸、乙交酯-丙交酯共聚物、聚乙二醇-聚丙 交酯嵌段共聚物、聚甲基丙烯酸甲酯、聚天門冬氨酸或聚乙醇酸中的一種、任意兩種或兩 種以上的混合物。
8、 權利要求l、 2、 6或7任一所述的混懸液在制備用于美容或醫療用途的注射劑中的應用。
9、 一種注射用含大分子水凝膠的透明質酸或其鹽的混懸液的制備方法，包括如下步驟① 制備大分子化合物凝膠顆粒；② 將①所得凝膠顆粒在等滲溶液中充分溶脹、平衡，得到水不溶性的、在等滲溶液中 充分溶脹的大分子化合物含水凝膠顆粒；③ 將②所得水不溶性的、在等滲溶液中充分溶脹的大分子化合物含水凝膠顆粒與透明 質酸或其鹽的等滲溶液混合均勻。
10、 權利要求9所述的制備方法，其中所述大分子化合物為交聯多糖化合物或聚合物。
11、 權利要求9所述的制備方法，其中所述透明質酸或其鹽選自透明質酸鈉、透明質酸鉀、 透明質酸鈣、透明質酸鎂、透明質酸銨、透明質酸四丁基銨、透明質酸鉍和透明質酸鋅中 的一種、任意兩種或兩種以上的混合物，優選透明質酸鈉。
12、 權利要求9所述的制備方法，其中所述等滲溶液為250 350 mOsmol/L的氯化鈉溶液 或磷酸鹽緩沖溶液，優選250 350 mOsmol/L、 pH 6.5 7.5的磷酸鹽緩沖溶液。
13、 權利要求10所述的制備方法，其中交聯多糖化合物為透明質酸、硫酸軟骨素、肝素、纖維素、淀粉、葡聚糖、海藻酸或殼聚糖及其衍生物中的一種的交聯產物、任意兩種或兩 種以上混合的交聯產物，或它們的交聯產物任意兩種或兩種以上的混合物，優選透明質酸 的交聯產物，更優選采用1，4-丁二醇二縮水甘油醚交聯的透明質酸鈉產物。
14、 權利要求10所述的制備方法，其中聚合物為聚乳酸、乙交酯-丙交酯共聚物、聚乙二 醇-聚丙交酯嵌段共聚物、聚甲基丙烯酸甲酯、聚天門冬氨酸或聚乙醇酸中的一種、任意 兩種或兩種以上的混合物。
15、 權利要求9-14任一所述的制備方法制得的含大分子水凝膠的透明質酸或其鹽混懸液。
16、 權利要求15所述的混懸液在制備用于美容或醫療用途的注射劑中的應用。
17、 權利要求15所述的混懸液在制備用于治療關節炎的關節腔內注射制劑中的應用。
全文摘要
本發明涉及一種注射用含大分子水凝膠的透明質酸或其鹽的混懸液及其制備方法。本發明混懸液的特征在于由透明質酸或其鹽的等滲溶液作為載體，添加水不溶性的、在等滲溶液中充分溶脹的大分子化合物含水凝膠顆粒構成。本發明混懸液的制備步驟包括制備交聯高分子化合物或聚合物顆粒，使其在等滲溶液中充分溶脹形成凝膠顆粒，然后與溶解于等滲溶液的透明質酸或其鹽溶液混合。本發明含大分子水凝膠的透明質酸或其鹽的混懸液用于制備美容或醫療用途的注射劑，具有易于注射、局部作用時間長、可塑性強、生物相容性好等特點，在注射局部作為一種隔離、潤滑墊，使周圍組織獲得充分的修復，這一特點在應用于骨關節腔注射治療關節炎時表現尤其突出。
文檔編號C08J3/03GK101502675SQ200810009190
公開日2009年8月12日 申請日期2008年2月4日 優先權日2008年2月4日
發明者凌沛學, 杰 劉, 敏 汪, 勤 王, 榮曉花, 賀艷麗, 趙成如, 郭學平, 陳建英 申請人:山東省藥學科學院