專利名稱：N-磷酰小肽的制作方法
專利說明 本發明涉及一種N-磷酰小肽的結構，屬有機磷化學和生物有機化學技術領域。
生物體內大量存在著磷酰肽和磷酰蛋白質，為了研究它們的特殊生理作用，人們往往采用將生物體內的磷酰肽或磷酰蛋白質在酸性條件下水解以獲得磷酰氨基酸和磷酰小肽。但由于水解過程所用的酸通常為濃酸，加上反應時溫度較高，則磷酰基易發生分子內或分子間的遷移，使得最終產物的磷酰化位點與原始物相差甚遠，得不到磷酰蛋白的真實信息。另外，以往的研究僅局限于對磷酰肽和磷酰蛋白的研究，卻忽略了磷在蛋白質、核酸、多糖及脂類等生命物質之間相互轉化，相互調控中的作用。還有，含磷化合物經常被用作藥物(醫用、農用)，日用營養保健品等，生物工程和醫學界也對人工工具酶和基因治療藥物有極大的需求。然而以往的產品在毒性、成本、副作用、使用效能等方面難以有保證。
本發明的目的是用溫和的化學手段人工合成化合物，以模擬天然生命物質的磷酰化位點。并將蛋白質、核酸、多糖及脂類等生命物質的基本單位或寡聚體設計在一個分子中，以研究這些生命物質之間如何通過磷而相互轉化。本發明的另一目的是研制天然的類似物，沒有毒副作用，并且成本低，效益高，可廣泛應用于生物工程、醫藥、農業及日常營養保健等領域。
本化合物合成方法具體步驟為將一定量的氨基酸或氨基酸酯的含水有機溶液或純有機溶劑，如乙醇水溶液加入到含有等當量的亞磷酸酯和過量的三乙胺和四氯化碳的混合溶液中，在0-20℃下攪拌反應2-10小時，最好是5-6小時，旋去溶劑，用無機酸(如鹽酸、硫酸)或有機酸(如醋酸、檸檬酸)酸化，用一般有機溶劑(如三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮等)或混合溶劑(如三氯甲烷-甲醇、二氯甲烷-異丙醇、石油醚-叔丁醇、環己烷-丁醇、乙酸乙酯-叔丁醇、丙酮-甲醇-石油醚等)萃取、可得所保護的化合物。
所得化合物的結構如下列所示
其中n＝0～20，i＝0～30，j＝0～30 R3＝各類(天然或人工)氨基酸側鏈或其衍生物的側鏈 例如丙氨酸的側鏈為CH3，甘氨酸的側鏈為H。
本發明所指各類(天然或人工)氨基酸或其衍生物為



R4＝各類(天然或人工)氨基酸側鏈或其衍生物側鏈，各類(天然或人工)氨基酸側鏈或其衍生物的定義同R3， R3與R4可以相同，也可以不同;當n≥2時，各R4可以相同也可以不同。
R5＝H，烷基(直鏈的或帶有支鏈的或成環的)或被其它官能團(如羥基、鹵離子、羧基、羰基、硝基、磺酰基、巰基、醛基、酯基等)所取代的烷基衍生物(取代基的種類、位置及個數不限)、芳基及單或多取代芳基(如被烷基、羥基、鹵原子、羧基、羰基、硝基、磺酰基、巰基、醛基、酯基等所取代，取代基的種類、位置及數量不限)、核苷酸(其中堿基為腺嘌呤或鳥嘌呤或尿嘧啶或胞嘧啶或5-甲基胞嘧啶，被酯化的羥基位置不限，可以是2'羥基或3'羥基或5'羥基被酯化)、寡聚核苷酸(聚合度為0～20，核苷酸種類不限、被酯化的羥基位置不限)、固醇類及其衍生物、多糖類及其衍生物。
R1，R2＝H，烷基(直鏈的或帶有支鏈的或成環的)或被其它官能團(如羥基、鹵原子、羧基、羰基、硝基、磺酰基、巰基、醛基、酯基類等)所取代的烷基衍生物(取代基的種類、位置及個數不限)、芳基及單或多取代芳基(如被烷基、羥基、鹵原子、羧基、羰基、硝基、磺酰基、巰基、醛基、酯基等所取代，取代基的種類、位置及數量不限)、核苷酸(其中堿基為腺嘌呤或鳥嘌呤或尿嘧啶或胸腺嘧啶或胞嘧啶或5-甲基胞嘧啶，被酯化的羥基位置不限;可以是2'羥基或3'羥基或5'羥基被酯化)、寡聚核苷酸(聚合度為0～20，核苷酸種類不限;與氧原子的連接方式不限，亦即，寡聚核苷酸可通過氧原子直接與磷原子相連，也可以通過橋連基團與磷原子相連;橋連基團可以是烷基、酯基、氧原子、硫原子、硅原子、二硫鍵及酰胺鍵等)、固醇類及其衍生物、多糖類及其衍生物。其中R1，R2可以相互連接成環，組成環的原子種類、數量不限，環上取代基的種類、數目不限。
R1，R2可以相同，也可以不同。
實施例 示例一
合成方法 將α-丙氨酸(0.01摩爾)的乙醇水溶液共20毫升，乙醇與水的比例為1∶1加入到含有二基亞磷酸酯(0.01摩爾)和各為5當量的三乙胺和10毫升四氯化碳的混溶液中，在冰浴下攪拌4小時，旋轉蒸發除去溶劑，用5%-10%濃度的鹽酸酸化至PH＝3，再用三氯甲烷萃取，每次10ml，共三次，可得產物。
示例二
合成方法 將精氨酸乙酯(0.04摩爾)及三乙胺5當量加入到瓶中，在5℃條件下再加入二仲丁基亞磷酸酯(0.04摩爾)及6當量的四氯化碳攪拌8小時，將三乙胺鹽過濾除去，濾液分別用10%濃度碳酸氫鈉水溶液10毫升和水10毫升，在室溫下洗兩次后，用無水硫酸鎂干燥4小時，旋轉蒸發至干即可得產物。


合成方法 同示例一，用天冬氨酸代替α-丙氨酸，用二芐基亞磷酸酯代替二甲基亞磷酸酯，用二氯甲烷代替三氯甲烷. 示例五




合成方法 將谷氨酰胺甲酯(0.04摩爾)20毫升與二氧六環的溶液及5當量三乙胺加入到瓶中，在0℃條件下再加入6當量
及6當量的四氯化碳攪拌2小時，用過濾方法除去三乙胺鹽，濾液分別用10%濃度的碳酸氫鈉水溶液和水在室溫下洗兩每次用量為10毫升，用無水硫酸鎂干燥2小時，旋轉蒸發至干即得產物。






合成方法同示例一，用異亮氨酸代替α-丙氨酸，用
代替二甲基亞磷酸酯，用環己烷-丁醇代替三氯甲烷. 示例十二

合成方法同示例一，用亮氨酸代替α-丙氨酸，用
代替三甲基亞磷酸酯，用丙酮代替三氯甲烷.

示例十六
合成方法 同示例八，用絲氨酸甲酯代替谷氨酰胺甲酯，用
示例十七


代替二甲基亞磷酸酯，用石油醚-叔丁醇代替三氯甲烷.






權利要求
1、一種有機高分子化合物N-磷酰小肽，其特征在于化合物的結構式為
其中R3=各類(天然或人工)氨基酸側鏈或其衍生物的側鏈，所述的各氨基酸側鏈或其衍生物為
其中R4=各類(天然或人工)氨基酸側鏈或其衍生物側鏈，各類(天然或人工)氨基酸側鏈或其衍生物的定義同R3，
其中R5=H，烷基(直鏈的或帶有支鏈的或成環的)或被其它官能團(如羥基、鹵離子、羧基、羰基、硝基、磺酰基、巰基、醛基、酯基等)所取代的烷基衍生物(取代基的種類、位置及個數不限)、芳基及單或多取代芳基(如被烷基、羥基、鹵原子、羧基、羰基、硝基、磺酰基、巰基、醛基、酯基等所取代，取代基的種類、位置及數量不限)、核苷酸(其中堿基為腺嘌呤或鳥嘌呤或尿嘧啶或胸腺嘧啶或胞嘧啶或5-甲基胞嘧啶，被酯化的羥基位置不限，可以是2’羥基或3’羥基或5’羥基被酯化)、寡聚核苷酸(聚合度為0～20，核苷酸種類不限、被酯化的羥基位置不限)、固醇類及其衍生物、多糖類及其衍生物。
其中R1，R2=H，烷基(直鏈的帶寬有支鏈的或成環的)或被其它官能團(如羥基、鹵原子、羧基、羰基、硝基、磺酰基、巰基、醛基、酯基等)所取代的烷基衍生物(取代基的種類、位置及個數不限)、芳基及單或多取代芳基(如被烷基、羥基、鹵原子、羧基、羰基、硝基、硝基、磺酰基、巰基、醛基、酯基等所取代，取代基的種類、位置及數量不限)、核苷酸(其中堿基為原嘌呤或尿嘧啶或胸腺嘧啶或胞嘧啶或5-甲基胞嘧啶，被酯化的羥基位置不限，可以是2’羥基或3’羥基或5’羥基被酯化、寡聚核苷酸(聚合度為0～20，核苷酸種類不限；與氧原子的連接方式不限，亦即，寡聚核苷酸可通過氧原子直接與磷原子相連，也可以通過橋連基團與磷原子相連；橋連基因可以是烷基、酯基、氧原子、硫原子、硅原子、二硫鍵及酰胺鍵等)、固醇類及其衍生物、多糖類及其衍生物。
全文摘要
本發明涉及一種N-磷酰小肽的結構，屬有機磷化學和生物有機化學技術領域。N-磷酰小肽的化學結構為其中n＝0～20，i＝0～30，j＝0～30，R3、R4是各類氨基酸側鏈或其衍生物的側鏈，R1、R2、R5是H烷基或被其它宮能團所取代的烷基衍生物等。本化合物制備成本低、效益高、沒有毒副作用，可廣泛應用于生物工程、醫藥、農業及日常營養保健等領域。
文檔編號C07F9/24GK1079473SQ93100260
公開日1993年12月15日 申請日期1993年1月14日 優先權日1993年1月14日
發明者趙玉芬, 尹應武, 李艷梅 申請人:清華大學