專利名稱：一種從土荊皮中提制土荊皮乙酸的方法
技術領域：
本發明涉及天然產物化學領域，特別是涉及一種從土荊皮中提制土荊皮乙酸的方法。
背景技術：
土荊皮(Pcsudolaricis cortcx)系松科植物金錢松(Pseudolarix amabilis (Nelson)Rchd.)的干燥根皮或近根樹皮。具有殺蟲、療癬、止癢的功效，廣泛用于疥癬瘙癢。金錢松的化學成分主要有二萜類化合物、三萜類化合物、木脂類化合物、倍半萜類化合物以及其他類型化合物(聞志慧，朱全飛，李萍，等.土荊皮化學成分研究[J].現代醫藥衛生，2010，26 (4) :507. )。土荊皮的抗真菌有效成分為土荊皮酸，為一混合物，其中土荊皮乙酸含量最高(陳樺，馮柏康，李艷園，等.高效液相色譜法測定上荊皮藥材中上荊皮乙酸的含量·中藥材，2006，29 (5) :452)。土荊皮乙酸(pseudolaric acid B, PAB),又名土槿皮乙酸,分子式是C23H28O8,是土荊皮中一種二萜類化合物。現代藥理研究表明，土槿皮乙酸具有抗腫瘤、抗生育、抗血管生成、抗真菌、可激活過氧化物酶增殖物激活受體(PPAR)等作用。王偉成等研究發現土荊皮乙酸對大鼠、倉鼠、兔及狗，經ig，im，sc給藥都具有明顯的抗生育作用，通過給妊娠大鼠ig 上荊皮乙酸，應用氫清除率技術，測得子宮肌層及內膜層血流量皆較正常對照組為低，證明 PAB使早孕大鼠子宮血流量減少是造成胚胎死亡的重要原因。宗志紅等發現其具有明顯的細胞毒作用，通過PI3K/AKT途徑激活Caspase-3誘導胃癌細胞凋亡，抑制細胞增殖。譚文福等的實驗表明PAB通過抑制VEGF促內皮細胞生存信號轉導通路中的KDR、AKT及ERK的磷酸化逆轉VEGF促內皮細胞生存、誘導內皮細胞凋亡為PAB抑制血管生成的作用機制之一。 PAB具有廣泛的抗腫瘤活性，不僅阻斷VEGF途徑，還可以促進HIF的降解，這就抑制了與腫瘤血管生成相關的關鍵途徑。PAB也可以通過PPAR配體途徑抑制血管生成，同時PAB還具有促進腫瘤細胞凋亡，抑制細胞骨架及抑制端粒酶活性等藥理作用，因此，PAB可以避免單一抑制血管藥物的不足。天然產物中尋找新的抗癌有效成分是目前新藥開發的主要途徑， PAB作為一種對活體無明顯毒性的天然產物，對其藥理機制進行深入研究，有望促進PAB成為新型的抗腫瘤藥物。現有文獻中多采用乙醇或苯提取，這些方法存在提取雜質多或毒性大的缺點。因此，提供一種簡單易行、毒性小、專屬性強、純度高的提取方法具有重要意義。

發明內容
本發明的目的是提供一種從土荊皮中提制土荊皮乙酸的方法。本發明的目的是通過下述方案實現的一種從上荊皮中提制上荊皮乙酸的方法，其特征在于包括下列步驟(I)提取以土荊皮為原料，用丙酮提取數次，得到提取液；(2)除雜步驟(I)中得到的提取液中加入活性炭回流脫色，趁熱過濾，回收溶劑至適量，再經石油醚脫除脂溶性雜質，得到脫脂浸膏，將其熱溶于氯化鈉溶液，混懸均勻后用乙醚萃取，所得萃取液濃縮后得到乙醚浸膏；(3)分離將步驟(2)中得到的乙醚浸膏，拌樣烘干，上中壓氧化鋁柱或中壓氧化鎂柱層析，得到土荊皮乙酸粗品；(4)重結晶步驟(3)中的土荊皮乙酸粗品用二氯甲烷-乙醚重結晶得到土荊皮乙酸純品。
步驟(I)中所述提取方法為加熱回流提取、滲漉提取或超聲提取法。步驟(2)中所述氯化鈉溶液濃度為0-1. 5mol/L。步驟(3)中所述氧化鋁為中性氧化鋁，所述氧化鎂為中性氧化鎂，目數為100-300目。
步驟(3)中所述柱層析洗脫條件為采用氯仿-乙醇(9 1、2 1、1 3)梯度二氯甲烷-甲醇(20 : 1、10 1、5 I)梯度洗脫。本發明的優點是土荊皮在我國分布廣泛，藥源豐富；本方法操作簡單、專屬性強，所得產品純度高；所用溶劑毒性小，基本都可回收重復使用，對環境污染小，適合工業規模化生產。
具體實施例方式以下通過實施例進一步說明本發明，但不作為對本發明的限制。實施例I取上荊皮500g粉碎成粗粉，加1500ml丙酮反復加熱回流提取2次，提取液合并后得2400ml提取液,加入106g活性炭回流脫色,趁熱過濾，回收乙醇至1000ml,用石油醚反復除去脂溶性雜質，得到脫脂浸膏，將脫脂浸膏溶解于500ml0. 8mol/LNaCl溶液中，混懸均勻后用乙醚反復萃取，所得萃取液合并后減壓濃縮得到乙醚浸膏。乙醚浸膏與100gl00-200 目氧化鋁拌樣烘干，上中壓氧化鋁柱層析，以氯仿-乙醇(9 1、2 1、1 3)梯度洗脫， TLC跟蹤監測，收集上荊皮乙酸洗脫液，真空濃縮至干，二氯甲烷-乙醚重結晶3次，得到
O.85g上荊皮乙酸純品，得率O. 17%。實施例2取土荊皮500g粉碎成粗粉，加4000ml丙酮反復超聲提取2次，提取液合并后得 5500ml提取液,加入265g活性炭回流脫色,趁熱過濾，回收乙醇至1000ml,用石油醚反復除去脂溶性雜質，得到脫脂浸膏，將脫脂浸膏溶解于500mll. Omol/L NaCl溶液中，混懸均勻后用乙醚反復萃取，所得萃取液合并后減壓濃縮得到乙醚浸膏。乙醚浸膏與100gl50-250目氧化鎂拌樣烘干，上中壓氧化鎂柱層析，以二氯甲烷-甲醇(20 : 1、10 1、5 I)梯度洗脫，TLC跟蹤監測，收集土荊皮乙酸洗脫液，真空濃縮至干，二氯甲烷-乙醚重結晶3次，得到O. 75g 土荊皮乙酸純品，得率O. 15%。實施例3取土荊皮Ikg粉碎成粗粉，加適量丙酮滲漉提取至滲漉液二萜反應為陰性，得到 IOL滲漉液,加入430g活性炭回流脫色,趁熱過濾，回收乙醇至2000ml,用石油醚反復除去脂溶性雜質，得到脫脂浸膏，將脫脂浸膏溶解于IOOOmlO. 5mol/LNaCl溶液中，混懸均勻后用乙醚反復萃取，所得萃取液合并后減壓濃縮得到乙醚浸膏。乙醚浸膏與200gl00-200目氧化鋁拌樣烘干，上中壓氧化鋁柱層析，以二氯甲烷-甲醇(20 : 1、10 1、5 I)梯度洗脫，TLC跟蹤監測，收集土荊皮乙酸洗脫液，真空濃縮至干，二氯甲烷-乙醚重結晶3次，得到I. 9g 土荊皮乙酸純品，得率O. 19%。實施例4取土荊皮5kg粉碎成粗粉，加30L丙酮反復加熱回流提取2次，提取液合并后得 50L提取液，加入2kg活性炭回流脫色，趁熱過濾，回收乙醇至5L，用石油醚反復除去脂溶性雜質，得到脫脂浸膏，將脫脂浸膏溶解于5L1. 5mol/LNaCl溶液中，混懸均勻后用乙醚反復萃取，所得萃取液合并后減壓濃縮得到乙醚浸膏。乙醚浸膏與1000g200-300目氧化鎂拌樣烘干，上中壓氧化鎂柱層析，以氯仿-乙醇(9 1、2 1、1 3)梯度洗脫，TLC跟蹤監測， 收集土荊皮乙酸洗脫液，真空濃縮至干，二氯甲烷-乙醚重結晶3次，得到9g 土荊皮乙酸純品，得率O. 18%。
權利要求
1.一種從土荊皮中提制土荊皮乙酸的方法，其特征在于包括下列步驟(1)提取以土荊皮為原料，用丙酮提取數次，得到提取液；(2)除雜步驟(I)中得到的提取液中加入活性炭回流脫色，趁熱過濾，回收溶劑至適量，再經石油醚脫除脂溶性雜質，得到脫脂浸膏，將其熱溶于氯化鈉溶液，混懸均勻后用乙醚萃取，所得萃取液濃縮后得到乙醚浸膏；(3)分離將步驟(2)中得到的乙醚浸膏，拌樣烘干，上中壓氧化鋁柱或中壓氧化鎂柱層析，得到土荊皮乙酸粗品；(4)重結晶步驟(3)中的土荊皮乙酸粗品用二氯甲烷-乙醚重結晶得到土荊皮乙酸純品。
2.如權利要求I所述的提制土荊皮乙酸的方法，其特征在于步驟(I)中所述提取方法為加熱回流提取、滲漉提取或超聲提取法。
3.如權利要求I所述的提制土荊皮乙酸的方法，其特征在于步驟(2)中所述氯化鈉溶液濃度為 O. 5-1. 5mol/L。
4.如權利要求I所述的提制上荊皮乙酸的方法，其特征在于步驟(3)中所述氧化鋁為中性氧化鋁，所述氧化鎂為中性氧化鎂，目數為100-300目。
5.如權利要求I所述的提制土荊皮乙酸的方法，其特征在于步驟(3)中所述柱層析洗脫條件為采用氯仿-乙醇(9 1、2 1、1 3)梯度洗脫，或二氯甲烷-甲醇(20 : I、 10 1、5 I)梯度洗脫。
全文摘要
本發明公開了一種從土荊皮中提制土荊皮乙酸的方法，包括先以溶劑提取，活性炭回流脫色，經石油醚脫除脂溶性雜質，將其熱溶于氯化鈉溶液，乙醚萃取，將乙醚萃取液減壓濃縮得乙醚浸膏，上中壓氧化鋁柱或中壓氧化鎂柱層析，得土荊皮乙酸粗品，用二氯甲烷-乙醚重結晶得到上荊皮乙酸純品。本發明方法簡單易行，專屬性強，可獲得高純度的上荊皮乙酸，適合工業規模化生產。
文檔編號C07D311/94GK102603700SQ201110026218
公開日2012年7月25日 申請日期2011年1月25日 優先權日2011年1月25日
發明者劉東鋒, 李法慶 申請人:蘇州寶澤堂醫藥科技有限公司