專利名稱：一種新的化合物異甘草酸鎂及其生產方法和用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種可應用于肝病治療的一種新的化合物異甘草酸鎂及其生產方法和用途。
異甘草酸鎂為五環三萜類化合物的鎂鹽，化學名為18α，20β-羧基-11-氧化-正齊墩果烷-12-烯-3β-基-2-o-β-D-葡萄吡喃糖醛酸基-α-D-葡萄吡喃苷醛酸鎂，化學結構為 異甘草酸鎂可以通過異甘草酸經過化學反應而獲得，在天然優質甘草根莖中含有痕量的異甘草酸，但含量極微，不宜直接提取制作。
異甘草酸可通過甘草酸異構化反應而獲得，由于異甘草酸與天然甘草酸的理化性質酷似，在以往的制備工藝常存在著大量的雜質(色素、鞣質、黃酮及甘草酸同系物)和天然甘草酸，不易除去，給制備單一異甘草酸帶來很大的困難。采用合理的工藝，有效地除去雜質，并提高天然甘草酸的轉化率，是制備異甘草酸的關鍵。
現有技術中一般是通過堿催化異構化反應使天然甘草酸發生構象轉化形成異甘草酸，轉化率為60～70％，再用己醇提取，甲醇重結晶，所得到的產品為甘草酸立體異構體的混合物，在混合物中除含有未轉化的天然甘草酸外，尚帶有堿催化反應中的分解產物。反復進行堿催化反應可獲得純度較高的異甘草酸，轉化率約90％，但產品收率很低。由于該工藝不能得到單一異甘草酸，工藝中又使用了大量己醇、甲醇，工藝復雜，存在著三廢污染，成本昂貴等問題，給工業化生產帶來了不少困難。
本發明的目的是為了提供一種新的化合物異甘草酸鹽及其解決上述需用到的生產環節中的現有技術的不足而提供一種提高天然甘草酸的轉化率，獲得更經濟實用、工藝簡單、高質量的異甘草酸鎂的生產方法及其用于肝病治療。
為了達到上述目的，本發明提供的一種異甘草酸鎂為五環三萜類化合物的鎂鹽，化學名為18α，20β-羧基-11-氧化-正齊墩果烷-12-烯-3β-基-2-o-β-D-葡萄吡喃糖醛酸基-α-D-葡萄吡喃苷醛酸鎂，化學結構為 其生產方法是根據異甘草酸在甲醇中易形成甲酯而析出的特性，將堿催化異構化反應產品投入甲醇中，加少量脫水劑，異甘草酸甲酯很快析出，過濾，即得到高純度異甘草酸甲酯。天然甘草酸與雜質在母液中不會析出，從而使異甘草酸與未轉化的甘草酸和雜質幾乎完全分離。再根據異甘草酸甲酯易水解的性質，在堿液中水解，加酸中和，用正丁醇提取的方法制得異甘草酸精品，最后加計算量的堿式碳酸鎂形成異甘草酸鎂。
這種異甘草酸鎂可用于肝病治療。
本發明提供的異甘草酸鎂，經大量的藥理、生化研究證明，其在動物不同肝毒劑引起肝損傷的模型中，能明顯阻止動物血清轉氨酶升高，減輕肝細胞變性、壞死及炎癥細胞浸潤，并促進肝細胞再生作用，異甘草酸鎂的抗肝損傷作用明顯優于天然甘草酸。
用本方法制造異甘草酸鎂，工藝簡單、提高了天然甘草酸的轉化率，降低了生產成本、提高了產品質量和收率，它對人類肝病的治療具有十分積極的現實意義。
下面通過實施例對本發明作進一步的描述實例1稱取氫氧化鈉640g投入反應罐內，加水4200ml溶解成濃堿液(4mol/L)，加入甘草酸單銨840g(1mol)攪拌溶解，常壓加熱回流8小時，反應液冷至室溫，加鹽酸調pH2～3，沉淀過濾，水洗至pH4～5，干燥，得甘草酸立體異構體混合物672g。
取“混合物”672g(0.82mol)，加甲醇5L，在室溫攪拌下，小心加入氯化乙酰250ml(3.2mol)，繼續攪拌30分鐘，室溫放置過夜，過濾，晾干，即為異甘草酸甲酯，收率為55％。
取異甘草酸甲酯370g，加氫氧化鉀溶液(3mol/L)900ml。加熱回流至溶液變清(約3小時)，放冷，加稀硫酸至pH3.0，用正丁醇萃取。正丁醇回收后，殘留物加90％冰醋酸熱溶，室溫放置，過濾，干燥后得精制異甘草酸315g，收率為85％。
將精制異甘草酸溶于70％異丙醇中，加計算量的堿式碳酸鎂，沸水浴回流至無CO2產生，稍冷后濾去少量不溶物，濾液放置過夜，過濾，用異丙醇洗結晶，抽干，晾干，產率295g(94％)。 (50％C2H5OH，1％)E1cm119.1(50％C2H5OH，1％)元素分析 測定值(％) 計算值(％)C54.84 54.88H7.737.62Mg 2.637 2.640實例2稱取堿異構化反應得到的甘草酸立體異構體混合物412g(0.5mol)，加甲醇1.0L，氯仿2.0L，濃硫酸16ml(0.3mol)，加熱回流4小時，冷后分出有機層，用水洗至pH4～5，加無水硫酸鈉干燥過夜，蒸餾，得殘余物173g，收率為42％。
取以上殘余物，加氫氧化鉀溶液(3mol/L)500ml。加熱回流至溶液變清，放冷，加稀硫酸至pH3.0，用正丁醇萃取。回收正丁醇，殘留物加90％冰醋酸熱溶，室溫放置，過濾，干燥，得精制異甘草酸151g，收率為87％。
取精制異甘草酸溶于70％異丙醇中，加計算量的堿式碳酸鎂，沸水浴回流至無CO2產生，稍冷后濾去少量不溶物，濾液放置過夜，過濾，用異丙醇洗結晶，抽干，晾干，產率140g(93％)。 (50％C2H5OH，1％)E1cm120.5(50％C2H5OH，1％)元素分析 測定值(％) 計算值(％)C54.80 54.88H7.747.62Mg 2.657 2.640以下是本發明的藥效學和毒性試驗表1為異甘草酸鎂對D-氨基半乳糖引起大鼠急性肝損傷的有效性。試驗表明，劑量為小鼠iv LD50的1/23(表6)能明顯抑制血清轉氨酶增高和肝細胞壞死，呈劑量依賴，并優于相同劑量的天然甘草酸。
表2、表3為異甘草酸鎂對四氯化碳引起大鼠慢性肝損傷的治療作用。試驗表明，劑量為小鼠iv LD501/39(表6)能明顯抑制慢性肝損傷的進展，使血清轉氨酶降低，白蛋白增高，并抑制血清唾液酸、透明質酸及肝組織羥脯氨酸的水平，且呈劑量依賴。從組織學纖維化程度(S)可以說明本品對慢性肝損傷具有保護作用，對慢性肝損傷而發生的肝纖維化有抑制作用，這些作用明顯優于相同劑量的天然甘草酸。
表4、表5為異甘草酸鎂對D-氨基半乳糖(Gal)聯用福氏全佐劑(FCA)誘發黑小鼠免疫性肝損傷的治療作用。試驗表明，本品劑量為iv LD50的1/11(表6)能明顯降低黑小鼠的死亡率，抑制血清轉氨酶增高、γ-球蛋白水平及血漿一氧化氮濃度，并能改善肝細胞代謝障礙，促進白蛋白合成，且呈劑量依賴。試驗提示，本品對宿主免疫反應形成的慢性肝炎具有良好療效，也優于相同劑量的天然甘草酸。
表1、異甘草酸鎂對D-氨基半乳糖引起大鼠急性肝損傷的治療作用試驗組 劑量 動物 血清轉氨酶 肝組織(mg/kg) 數 AlaAT(IU/L) AspAT(IU/L) 肝細胞壞死數ΔΔ(只) x±s x±s x±s-正常對照PSSΔ10 85±19287±440中毒對照PSSΔ10 6931±913 8003±1379 84±42異甘草酸鎂 25 10 4320±1036***5521±1943***55±20**50 10 3273±1347***3267±1369***44±16***100 10 2104±1080***2804±1416***40±15***天然甘草酸ΔΔΔ50 10 4507±1019***5257±1477***69±17*Δ生理鹽水ΔΔ每個高倍視野平均肝細胞壞死數，每個高倍視野正常肝細胞數為300只ΔΔΔ甘草酸單銨*P＞0.05；**P＜0.05；***P＜0.01，與中毒對照組比較。AlaAT谷丙轉氨酶；AspAT谷草轉氨酶表2 異甘草酸鎂對四氯化碳致大鼠慢性肝損傷的治療作用試驗組 劑量 動物數 血清酶血清蛋白(mg/kg) (只)AlaAT(IU/L) AspAT(IU/L)白蛋白(g/L)x±sx±s x±s正常對照PSSΔ10 82±19 299±3445±4.9模型對照PSSΔ10 5002±1801 8603±2153 28±1.3異甘草酸鎂 15 10 3100±1501**6053±2410**32±1.1***30 10 2847±1380***4390±1867***34±2.7***60 10 1536±829***3505±1778***36±2.1***天然甘草酸 60 10 2893±1299***5171±1826***32±1.5***Δ生理鹽水**P＜0.05；***P＜0.01與中毒對照組比較表3 異甘草酸鎂對四氯化碳致大鼠肝硬化的治療作用試驗組 劑量 動物數 血清 肝組織(mg/kg) (只) NANA HAHypS(μmol/L) (ng/ml) (μmol/g) (平均期數)x±s x±s x±s正常對照PSSΔ10 14.90±3.4696±157 1.95±0.89 0中毒對照PSSΔ10 58.78±6.71482±74 11.68±2.224.0異甘草酸鎂 15 10 47.02±7.0**1315±141**6.16±1.72***3.4***30 10 41.08±6.8***1101±275***6.58±2.10***3.1***60 10 31.57±2.3***1057±263***3.59±0.93***2.8***天然甘草酸 60 10 43.53±4.7**1306±100**4.76±1.78***3.6**Δ生理鹽水**P＜0.05；***P＜0.01與中毒對照組比較NANA唾液酸；HA透明質酸；Hyp羥脯氨酸；S纖維化程度表4 異甘草酸鎂對Gal/FCA誘發黑小鼠免疫性肝損傷的治療作用試驗組 劑量 動物數 血清轉氨酶 血清蛋白(mg/kg) (只)AlaAT(IU/L) AspAT(IU/L) 白蛋白(g/dl) γ-球蛋白(g/dl)-x±s-x±s-x±s-x±s正常對照PSSΔ10 62.6±14 111.7±13 4.19±0.9 0.35±0.04中毒對照PSSΔ10 122.1±48256.4±96 2.69±0.9 0.73±0.12異甘草酸鎂 50 10 86.4±19**150.2±54***3.96±0.8***0.53±0.11***100 10 77.8±15**148.2±51***4.08±0.8***0.49±0.10***150 10 72.7±21***124.5±37***4.02±1.0***0.41±0.08***天然甘草酸 100 10 79.2±19**150.5±70**3.97±0.8***0.54±0.11***Δ生理鹽水**P＜0.05；***P＜0.01與中毒對照組比較表5 異甘草酸鎂對Gal/FCA誘發黑小鼠免疫性肝損傷的治療作用試驗組劑量 動物數 血漿NO(mol/L) 脾重(mg)死亡率(％)(mg/kg) (只)x±s x±s正常對照 PSSΔ10 12.4±375±11 0中毒對照 PSSΔ10 36.1±11 179±23 66.7(20/30)異甘草酸鎂50 10 26.5±5**132±21**40.0(12/30)**100 10 21.4±4***117±17***23.3(7/30)***150 10 19.5±6***90±21***10.0(3/30)***天然甘草酸100 10 24.7+5**122+18***367(11/30)**Δ生理鹽水 NO一氧化氮**P＜0.05；***P＜0.01與中毒對照組比較表6 異甘草酸鎂的急性毒性藥物動物 給藥途徑 LD50(mg/kg) 95％可信限異甘草酸鎂 ICR小鼠 iv586.5521.4～651.6天然甘草酸 ICR小鼠 iv540.0
權利要求
1.一種新化合物異甘草酸鎂，其特征是它是五環三萜類化合物的鎂鹽，化學名為18α，20β-羧基-11-氧化-正齊墩果烷-12-烯-3β-基-2-o-β-D-葡萄吡喃糖醛酸基-α-D-葡萄吡喃苷醛酸鎂，化學結構為
2.一種新化合物異甘草酸鎂的生產方法，其特征是根據異甘草酸在甲醇中易形成甲酯而析出的特性，將堿催化異構化反應產品投入甲醇中，加少量脫水劑，異甘草酸甲酯很快析出，過濾，即得到高純度異甘草酸甲酯。天然甘草酸與雜質在母液中不會析出，從而使異甘草酸與未轉化的甘草酸和雜質幾乎完全分離。再根據異甘草酸甲酯易水解的性質，在堿液中水解，加酸中和，用正丁醇提取的方法制得異甘草酸精品，最后加計算量的堿式碳酸鎂形成異甘草酸鎂。
3.一種新化合物異甘草酸鎂的用途，其特征是這種異甘草酸鎂用于肝病治療藥物。
全文摘要
本發明公開了一種可用于肝病治療的一種新的化合物異甘草酸鎂及其生產方法和用途,化學名為:18α,20β－羧基－11－氧化－正齊墩果烷－12－烯－3β－基－2－o－β－D－葡萄吡喃糖醛酸基－α－D－葡萄吡喃苷醛酸鎂,其生產方法是將堿催化異構化反應產品投入甲醇中,加少量脫水劑,異甘草酸甲酯很快析出,過濾,即得到高純度異甘草酸甲酯。從而使異甘草酸與未轉化的甘草酸和雜質幾乎完全分離。再在堿液中水解,加酸中和,用正丁醇提取的方法制得異甘草酸精品,最后加計算量的堿式碳酸鎂形成異甘草酸鎂。用本方法制造異甘草酸鎂,工藝簡單、提高了天然甘草酸的轉化率,降低了生產成本、提高了產品質量和收率,它對人類肝病的治療具有十分積極的現實意義。
文檔編號C07J63/00GK1381463SQ0211169
公開日2002年11月27日 申請日期2002年5月16日 優先權日2002年5月16日
發明者吳錫銘, 王佩 申請人:吳錫銘, 王佩