一種眼用荷正電納微球藥物載體及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于藥物載體領域，具體涉及一種眼用荷正電納微球藥物載體及其制備方法，實現眼內定向轉運藥物。
技術背景
[0002]眼底疾病是極具視覺損傷和致盲風險的眼部病變，并且病種多樣，既包括老年黃斑變性、糖尿病視網膜病變、視網膜靜脈阻塞、早產兒視網膜病變等常見的視網膜/脈絡膜血管性疾病，也包括巨細胞病毒性視網膜炎、急性視網膜壞死等感染性疾病。由于人口老齡化、艾滋病的傳播、不健康生活習慣和早產兒的救護水平提升等多種因素，近年來眼底疾病的發病率不斷上升，據北京市最新的流行病學調查數據顯示，各類眼底疾病的總發病率在1.4%以上，需要通過藥物治療的眼底疾病保守估計在1.2%以上。
[0003]玻璃體腔注射藥物是臨床治療眼底疾病的重要方式，盡管如此，玻璃體注射給藥在臨床應用上仍存在許多缺陷:(I)半衰期短，需要頻繁的重復注射;(2)藥物在眼內自由彌散，無特異性；(3)無法調控藥物進入視網膜的不同亞層。
[0004]眼球存在生理性電勢差，有如天然電池，前端為正極，后端為負極。如圖1所示，同中性或帶負電荷的粒子相比，帶正電荷的粒子將更趨向于被眼后段的視網膜表面吸附；同時，帶正電的高分子如殼聚糖還被證明可以可逆地打開細胞間的緊密連接，便于進一步進入視網膜深層。因此，如能巧妙利用眼內微電場這一生理特性，通過制備粒徑尺寸和表面電荷可調控的納微球，研究帶電粒子在眼內微電場中的運動行為，系統評價納微球的荷/質比對視網膜定向及進入視網膜不同層次的影響，就有可能篩選出能夠用于玻璃體腔注射、可定向視網膜、并能調控進入視網膜不同亞層的納微球，在此基礎上進一步包埋藥物，實現對于藥物的緩慢釋放，解決眼內藥物注射存在的一系列問題。因此，開發兼具多級定向和緩釋功能的藥物載體系統無疑會很大程度上減少玻璃體腔注射藥物的頻率和副作用，提升治療效果，無論在醫療價值、社會效益還是市場應用上，都前景廣闊。

【發明內容】

[0005]針對現有技術的不足，本發明提供一種可眼內定向轉運藥物的藥物載體，該載體需具有一定的正電荷，經過玻璃體腔注射后可以在眼內微電場的作用下富集于眼底;進一步通過調節電荷量，可以進一步調控載體滲透進入眼底的不同亞層，從而實現對眼底亞層病變部位的多級靶向作用，解決藥物生物利用度低，毒副作用大等問題，顯著提高治療效果O
[0006]為達到此發明目的，本發明采用如下技術方案:
一種荷正電納微球藥物載體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟:
步驟一、稱取一定量的油溶性高分子溶解于有機溶劑中作為油相，與水相混合后制備水包油型乳液；
步驟二、將步驟一的水包油型乳液在室溫下攪拌過夜至有機溶劑揮發完畢，用蒸餾水離心洗滌若干次，得到納微球；
步驟三、將上述制得的納微球懸浮于不同濃度的親水性正荷電高分子溶液中，在垂直混懸儀上孵育，進行正電荷修飾；
步驟四、微球的電荷量可以通過高分子的濃度或者電荷基團的取代度來調節；
至此，荷正電納微球藥物載體的制備完成。
[0007]其中，進行藥物包埋時，若藥物為疏水性藥物，則在步驟一中將藥物與油溶性高分子一起溶解于油相中進行包埋;若藥物為親水性藥物，則先將其溶解為內水相，再采用復乳的形式進行負載，或在步驟三或步驟五中與荷電高分子一起吸附在納微球上。
[0008]作為本發明的優選技術方案，所述步驟一中，水包油型乳液的制備方法為攪拌法、超聲法、沉淀法、均質乳化或微孔膜乳化法，優選能夠制備出均一乳液的微孔膜乳化技術。
[0009]優選的，所述步驟三中，采用的電荷修飾方法為吸附法或化學偶聯法。
[0010]所述步驟一中，油溶性高分子可以為聚乳酸類高分子或聚酯類高分子。
[0011 ] 所述步驟二中得到的納微球的粒徑范圍為Inm?ΙΟμπι，優選10?500nm的納米球。
[0012]所述步驟三中，其中正電荷的高分子可以為殼聚糖、季銨化殼聚糖、聚乙烯亞胺或聚賴氨酸。
[0013]本發明還保護一種荷正電納微球藥物載體，其特征在于:其利用權利要求1?5任意一項所述的方法制備形成，粒徑范圍為Inm?ΙΟμπι，優選1nm?500nm;電荷范圍為0.1?2 O Omv，優選 5 ?50mv。
[0014]此外，還保護上述荷正電納微球藥物載體作為眼內疾病治療用藥物定向轉運載體的應用。其中，所述眼內疾病為老年黃斑變性、糖尿病視網膜病變、視網膜靜脈阻塞、早產兒視網膜病變、巨細胞病毒性視網膜炎或急性視網膜壞死。
[0015]所述眼內疾病治療用藥物是小分子化學藥物、蛋白質多肽類藥物、抗體藥物或基因藥物等其中的一種或者多種聯用。
[0016]與現有技術相比，本發明的技術優勢在于:
1、本發明藥物載體帶正電荷，可以實現在眼內的定向轉運，經過玻璃體腔注射后，在眼內微電場作用下富集于眼底;通過調節載體的荷電量，可以進一步調控載體滲透進入眼底的不同亞層，從而實現對眼底亞層病變部位的多級靶向作用，解決藥物生物利用度低，毒副作用大等問題，顯著提高治療效果；
2、本發明藥物載體可使用的原料來源廣泛，可針對不同眼底疾病裝載不同的藥物，具有普適性。
【附圖說明】
[0017]圖1是不同荷正電納微球藥物載體在眼內微電場作用下的運動及分布示意圖；
圖2是不同荷電NP的制備不意圖；
圖3是NP++的掃描電鏡圖；
圖4是NP—、NP-、NPO、NP+、NP++不同的荷電NP置于稀釋的凝膠中在體外模擬微電場作用下的運動情況；
圖5a是體外滲透模擬裝置示意圖；
圖5b是不同荷電的NP滲透單層RF/6A視網膜血管內皮細胞的定量數據； 圖5c是不同荷電的NP滲透單層RF/6A細胞的激光共聚焦照片；
圖5d是不同荷電的NP對離體豬眼視網膜的滲透情況；
圖6a是注射不同荷電NP(熒光標記)后的離體眼球熒光成像；
圖6b是不同荷電NP的眼內滯留時間；
圖6c不同荷電NP在眼底的滲透情況；
圖7a為眼底血管造影圖片；
圖7b脈絡膜新生血管鋪片；
圖7c脈絡膜新生血管面積分析；
圖7d治療后眼壓數據。
【具體實施方式】
[0018]以下通過【具體實施方式】來進一步說明本發明的技術方案，所述實施例僅是幫助理解本發明，不應視為對本發明的具體限制。如圖1所示，是不同荷正電納微球藥物載體在眼內微電場作用下的運動及分布示意圖理論上，本發明藥物載體帶正電荷，可以實現在眼內的定向轉運，經過玻璃體腔注射后，在眼內微電場作用下富集于眼底;通過調節載體的荷電量，可以進一步調控載體滲透進入眼底的不同亞層，從而實現對眼底亞層病變部位的多級靶向作用，解決藥物生物利用度低，毒副作用大等問題，顯著提高治療效果。理論上，只要是正電荷的藥物載體均具備上述多級靶向的潛力，制備方法和所用材料并不局限于上述內容。
[0019](I)稱取一定量的油溶性高分子溶解于二氯甲烷中作為油相，1#%聚乙烯醇(polyvinyl alcohol，PVA)為水相，混合后制備0/W(水包油)型乳液，室溫攪拌過夜至二氯甲烷揮發完畢后，用蒸餾水離心洗滌5次，即可得到納微球。其中油溶性高分子可以為聚乳酸類高分子、聚酯類高分子等;其中制備乳液的方法可以是通過攪拌、超聲、均質乳化或者微孔膜乳化的技術，優選能夠制備出均一乳液的微孔膜乳化技術;其中納微球的粒徑范圍在Inm?ΙΟμπι，考慮到小粒徑具有更高的荷質比，有利于在微電場中的運動，優選10?500nm的納米球(Nanopart icle，NP)。
[0020](2)將上述制得的NP懸浮于不同濃度親水性的正荷電高分子溶液中，在垂直混懸儀上孵育后，高分子將借助靜電作用吸附于負電荷的NP上，用去離子水離心洗滌既得帶不同程度正電荷的NP。其中正電荷的高分子可以為殼聚糖、季銨化殼聚糖、聚乙烯亞胺、聚賴氨酸等;其中載體電荷范圍在0.1?200mv，優選5-50mv，以兼顧荷電量和生物安全性。
[0021](3)作為對照組，(2)中的NP可以進一步懸浮于不同濃度親水性的負荷電高分子溶液中，在垂直混懸儀上孵育后，高分子將借助靜電作用吸附于正電荷的納微球上，用去離子水離心洗滌即得帶不同程度