Zd55-tis在抑制胰腺癌細胞增殖中的用圖
【技術領域】
[0001 ]本發明屬于生物制藥領域，具體涉及ZD55-TIS在抑制胰腺癌細胞增殖的中的用途。
【背景技術】
[0002]胰腺癌是惡性程度很高的消化系統腫瘤，近年來其發病率在我國呈現逐年升高的趨勢。胰腺癌臨床表現隱匿，發展迅速，具有高度侵襲性，預后極差。近幾十年來，國內外學者利用不斷提高的外科手術技能和現代醫療手段，不斷擴大手術切除范圍和加大淋巴結清除的徹底性，以期達到根治的目的。盡管胰腺癌的切除率有所提高，但5年生存期仍低于3%，主要原因是大多數胰腺癌難以早期發現，確診時多數已屬中晚期，失去了根治性手術切除的最佳時機。同時對化療、放療等綜合治療的敏感性較差也是導致胰腺癌患者高死亡率的重要因素。因此，發展新型安全有效的治療方法以提高胰腺癌患者生存期具有非常重要的意義。
[0003]溶瘤腺病毒(Oncolytic Adenovirus)是近年來發展起來的一種腫瘤治療新方法，其優點在于能特異性識別腫瘤細胞，而對正常組織細胞不會產生影響。2005年，溶瘤腺病毒HlOl在國內獲得治療頭頸部腫瘤的上市批準，從而使中國成為世界上首個批準將溶瘤腺病毒正式用于腫瘤臨床治療的國家。然而，盡管在體外實驗和動物實驗中取得了令人振奮的結果，在臨床研究中，大多數溶瘤腺病毒的療效卻不理想。原因是多方面的，包括腫瘤、微環境、病毒和宿主免疫反應及其之間的交互作用。因此，設計安全有效的藥物組合方案，提高溶瘤腺病毒抗胰腺癌的作用效應，是當前亟待解決的問題。
[0004]細胞周期蛋白依賴性激酶(cyclin-dependent-kinase，Q)K)是參與細胞周期調控和基因轉錄的關鍵分子之一。CDK是一組絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，包括⑶K2、CDK4、⑶Κ6、CDK7和CDK9等一系列重要的細胞周期調控蛋白，該酶通過與細胞周期蛋白相結合產生活性，促進細胞周期中Gl期到S期和G2期到M期的轉變，是細胞周期啟動、形成和結束的主導力量。由于CDK在調控惡性腫瘤細胞的增殖與凋亡中起關鍵性作用，理論上來講，對其進行抑制可導致肺瘤細胞的增殖受到抑制，進而誘導細胞調亡。與正常細胞不一樣，肺瘤細胞中常有活性異常，因此可以作為惡性腫瘤治療的新點。細胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)在調控細胞周期和基因轉錄中起重要作用，胰腺癌常有⑶K活性異常增高，因此⑶K抑制劑可能在治療胰腺癌中發揮重要作用。SNS-032是一種新型選擇性⑶K2抑制劑，可抑制調控RNA轉錄的⑶K2，同時抑制⑶K7和CDK9的活性。已有研究表明SNS-032對多種惡性腫瘤有顯著抗腫瘤作用。

【發明內容】

[0005]為了更好的治愈胰腺癌，提高患者的預后或者生活質量，本發明的發明人經過大量、堅持不懈的篩選，發現ZD55-TIS和SNS-032的組合對胰腺癌或胰腺癌細胞的增殖具有協同的治療或者抑制作用，進而為治療胰腺癌或抑制胰腺癌細胞的增殖提供了新的療法或手段。
[0006]本發明采用ZD55-TIS和SNS-032聯合抑制胰腺癌細胞增殖作用影響進行體外實驗，結果顯示在(I?16)M0I ZD55-TIS:(5?80)ng/ml SNS-032的選定劑量范圍內，兩者聯合應用具有協同抑制骨髓瘤細胞增殖的作用，隨著作用濃度的增高，協同抑制胰腺癌細胞增殖的作用逐漸增強。
[0007]本發明對ZD55-TIS和SNS-032聯合應用藥物組合抑制胰腺癌增殖進行相關作用機理研究，結果顯示該組合藥物能顯著抑制胰腺癌細胞BxPC-3抗凋亡蛋白Mcl-1、XIAP和Bcl-2的表達水平，上調線粒體凋亡通路標記蛋白剪切型Caspase 9(半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9)、Caspase 3(半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9)和PARP的表達水平。因此，ZD55-TIS和SNS-032組合物能有效誘導胰腺癌線粒體凋亡發生，在制備抑制胰腺癌增殖藥物中具有廣闊的應用開發前途。
[0008]本發明所述的ZD55-TIS(WangSB,Tan Y,Lei ff,ffang YG,Zhou XM,Jia XY,LiuXY,Qian WB.Complete eradicat1n of xenograft hepatoma by oncolytic adenovirusZD55harboring TRAIL-1ETD-Smac gene with broad antitumor effect.Hum GeneTher.2012;23(9):992-1002.)為同時攜帶抗癌基因TRAIL和Smac的復制型溶瘤腺病毒，具有腫瘤復制特異性，并對正常細胞無毒性。ZD55-TIS和SNS-032結構式或基因組結構見圖5。
[0009]因此，本發明一方面提供了ZD55-TIS在制備用于在受試者中治療胰腺癌或抑制胰腺癌細胞增殖的藥物組合物或藥盒中的用途，其中所述藥物組合物或藥盒含有ZD55-TIS和SNS-032，任選地，所述藥物組合物或藥盒還含有用于治療胰腺癌或抑制胰腺癌細胞增殖的其他藥物活性成分，例如吉西他濱、普樂沙福(AMD3100)或紫杉醇等。任選地，所述的藥物組合物或藥盒中的ZD55-TIS和SNS-032分別在分開的容器中存放或者ZD55-TIS和SNS-032在同一容器中存放。
[0010]本發明還提供了ZD55-TIS在制備用于在受試者中上調胰腺癌細胞中的剪切型caspase3、caspase9和PARP的表達水平的藥物組合物或藥盒中的用途，其中所述藥物組合物或藥盒含有ZD55-TIS和SNS-032，任選地，所述藥物組合物或藥盒還含有用于治療胰腺癌或抑制胰腺癌細胞增殖的其他藥物活性成分，例如吉西他濱、普樂沙福(AMD3100)或紫杉醇等。任選地，所述的藥物組合物或藥盒中的ZD55-TIS和SNS-032分別在分開的容器中存放或者ZD55-TIS和SNS-032在同一容器中存放。
[0011]本發明還提供了ZD55-TIS在制備用于在受試者中下調胰腺癌細胞中的抑凋亡蛋白Mcl-1、XIAP和Bcl-2的蛋白表達水平的藥物組合物或藥盒中的用途，其中所述藥物組合物或藥盒含有ZD55-TIS和SNS-032，任選地，所述藥物組合物或藥盒還含有用于治療胰腺癌或抑制胰腺癌細胞增殖的其他藥物活性成分，例如吉西他濱、普樂沙福(AMD3100)或紫杉醇等。任選地，所述的藥物組合物或藥盒中的ZD55-TIS和SNS-032分別在分開的容器中存放或者ZD55-TIS和SNS-032在同一容器中存放。
[0012]本發明還提供了ZD55-TIS在制備用于在受試者中下調胰腺癌細胞中的抑凋亡蛋白Mcl-1、XIAP和Bcl-2的蛋白表達水平和/或在受試者中上調胰腺癌細胞中的剪切型caspase3、caspase9和PARP的表達水平的藥物組合物或藥盒中的用途，其中所述藥物組合物或藥盒含有ZD55-TIS和SNS-032，任選地，所述藥物組合物或藥盒還含有用于治療胰腺癌或抑制胰腺癌細胞增殖的其他藥物活性成分，例如吉西他濱、普樂沙福(AMD3100)或紫杉醇等。任選地，所述的藥物組合物或藥盒中的ZD55-TIS和SNS-032分別在分開的容器中存放或者ZD55-TIS和SNS-032在同一容器中存放。
[0013]本發明提供了在受試者中治療胰腺癌或抑制胰腺癌細胞增殖的方法，其包括向所述受試者同時或依次施用ZD55-TIS和SNS-032。任選地，在本發明的方法中，可以同時或者依次施用其他的治療胰腺癌或抑制胰腺癌細胞增殖的藥物活性成分，例如吉西他濱、普樂沙福(AMD3100)或紫杉醇等。
[0014]對于本發明所述的受試者，其優選為哺乳動物，更優選為人。
[0015]對于本發明的ZD55-TIS和SNS-032，本領域技術人員可以對其作出任何修飾，前體是所述修飾不負面影響其活性。例如，可以對化合物進行修飾或裝載在其他載體上，以提高其在體內的半衰期;或者可以與已知的穿透肽連接，以促進本發明化合物的透皮吸收或者越過血腦屏障等。總之，本領域技術人員可對本發明的化合物進行各種修飾以提高遞送效率或用于其他目的并保持其活性。對于病毒的修飾，例如，本領域技術人員可以進行基因修飾，以使其表達其他的抵抗癌癥的活性成分。這類修飾也是在本發明的范圍之內的。
[0016]本發明的作為活性成分的ZD55-TIS和SNS-032可以連同藥學上可接受的載體一起使用。除活性成分外，本發明的方法、用途和產品還可以包含合適的藥學上可接受的載體，包括促進活性成分加工成制劑(例如適于注射或輸注的制劑)的賦形劑和助劑。
[0017]適于注射或輸注的制劑可包括水性和非水性無菌注射液和水性和非水性無菌混懸劑，所述無菌注射液可任選地包含抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和能使制劑與目的接收者的血液等壓的溶質，所述無菌混懸劑可包括懸浮劑和增稠劑。所述制劑可存在于單位劑量或多劑量容器中，例如密封的安瓿，并且可以保存在凍結干燥的(凍干)條件，在立即使用前僅需要加入無菌液體載體，例如注射用水。
[0018]本發明的活性成分任選地可與固體賦形劑相組合，且任選地磨碎所得到的混合物，并且需要時，在加入合適的助劑后，加工顆粒的混合物，以獲得所需劑型。合適的賦形劑特別是填充劑例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇;纖維素或淀粉制劑、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。需要時，可以加入崩解劑，例如交聯聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或海藻酸或其鹽例如海藻酸鈉。
[0019]在本發明中施用ZD55-TIS和SNS-032的量可為能協同治療受試者中胰腺癌或抑制胰腺癌細胞增殖的任何量，其可以是相當于約0.l-15mg SNS-032，優選0.0l-20mg SNS-032和1-100M0IZD55-TIS的劑量。更優選地，劑量單位包括約l-4mg的SNS-032和5-80M0IZD55-TIS。最優選地，劑量單位包括約2-3mg的SNS-032和10-60M0IZD55-TIS。有效量的測定在本領域技術人員的能力內，特別是根據本文提供的公開內容的啟示下。
[0020]根據本發明，本發明的藥學產品(藥物、藥劑)或藥物組合物可以以任意有效劑量施用給藥受試者。優選地，本發明的藥學產品(藥物、藥劑或藥盒)或藥物組合物可以以多次劑量給藥，例如從約2至約15次劑量，更優選從約4-10次劑量，最優選約6次劑量。在特別優選的實施方案，在給藥過程中，以每三周給藥約一次的頻率將本發明的藥學產品(藥物、藥劑)或藥物組合物給藥至受試者，例如注射、輸注或口服。在特別優選的實施方案，給藥為通過靜脈注射施用SNS-032，通過腹腔注射ZD55-TIS。
[0021]應當理解本發明的藥學產品(藥物、藥劑或藥盒)或藥物組合物可以按用于通過任意適宜的途徑給藥的任意適宜的方式配制。
[0022]本發明的藥學產品(藥物、藥劑)或藥物組合物的劑量單位是基于常規進行給藥受試者。例如，劑量單位可以給藥多于每日一次、每周一次、每月一次等。劑量單位可以是以兩次/周為基礎給藥，即每周兩次，例如每三天一次。
[0023]如本文所使用的，“包含”與“包括”、“含有”或“特征在于”同義，并且是包括在內的或開放性的，并且不排除另外的未陳述的元件或方法步驟。術語“包含”在本文中的任何表述，特別是在描述本發明的方法、用途或產品時，應理解為包括基本上由所述組分或元件或步驟組成和由所述組分或元件或步驟組成的那些產品、方法和用途。本文示例性描述的本發明適當地可以在不存在本文未具體公開的任何一種或多