專利名稱：含有類黃酮和植物制備產物的組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及新的組合物，尤其涉及了新的含有類黃酮和Pfaffia屬植物制備產物(下文中可簡稱為所得Pfaffia產物)的組合物。
由于西藥的顯著發展而使許多人體疾病相對變得更容易治愈。然而西藥治療并不是總能夠達到預期的作用，這是因為它們在某些情況中可能會導致不利后果并誘發嚴重的副作用。隨著近年來健康意識的增強，極其希望獲得即使在連續使用時仍能夠保持/促進健康、治療/預防人體疾病并且沒有嚴重副作用的藥物組合物。為達到此目的，作為人類已長期普遍使用的民間醫藥再次受到關注，但它們卻有著治療功效不足的缺陷。
自民間醫藥中分離出有效成分并且除去有效成分以外的其他成分是克服上述缺陷的一種有效途徑。但是事實上，民間醫藥的有效治療功效通常并不僅由一種特定組分產生，并且在多數情況中即使分離出單一的所需有效組分也不能達到預期的治療作用。
本發明的重點在于那些遍及在世界各處的使用年代久遠且是日常食用植物的民間醫藥，并從自然界篩選出能夠解決上述問題的組合物。結果發現天然生長在南美并早已用作民間醫藥的Pfaffia屬植物通常在與類黃酮共同制成組合物后顯示出比其他民間藥物更強的免疫增強作用和抗過敏活性。由于該組合物具有極低的毒性以及降低了Pfaffia的收斂作用和硬澀感，從而更易于口服給藥并用于保持/促進健康和治療/預防疾病。因此本發明人完成了本發明。
本發明的組合物含有類黃酮和Pfaffia屬植物的制備產物(下文中用“Pfaffia”表示)。本發明所用的上述制備產物包括通常那些經物理和/或化學方法處理的Pfaffia屬植物的制備產物，并且所用的材料和方法并沒有特別的限制。Pfaffia屬的植物例子有Pfaffia glomerata、Pfaffiairesinoides、Pfaffia jubata、Pfaffia paniculata、Pfaffia pulverulenta和Pfaffia spicata種的植物。本發明中采用的物理和/化學處理方法包括切碎、破碎、研磨、粉化、壓榨、發酵和/或提取植物產物。制備產物中通常含有脫皮甾酮和/或它的衍生物，例如紅莧甾酮和厥甾酮。
作為本發明中用于生產制備產物的方法的解釋，原材料可以包括選自一種或多種的上述Pfaffia屬植物或它們的突變株的植物，上述植物可通過常規的植物培育方法獲得。這些植物包括天然的和人工培養的植物或諸如組織培養物、愈傷組織培養物或細胞培養物等的培養物。當選用植物體作為原材料時可以任意使用下列部分植物全體、或一種或多種選自根、莖、葉、花冠、花瓣、花粉、雄蕊、雌蕊、種子、胚乳和小纖維的由植物體局部分離出的特定部分。原材料可以獨立地使用它們的例如新鮮、濕的和干燥的形式。特別是，Pfaffia glomerata的干燥根是本發明優選使用的。
本發明中使用的Pfaffia產物可以通過對上述原材料進行食品和藥物工業中的常規物理和/或化學處理而制得；單獨或與適宜的例如過濾、濃縮和干燥的其他技術相結合的常規處理方法，例如切碎、破碎、研磨、粉化、壓榨、發酵和提取，可以生產出作為本發明產物的切碎型、破碎型、研磨型、粉化型、壓榨型、發酵型和提取型產品。
對作為本發明Pfaffia產物的Pfaffia提取物的生產方法的更具體說明是，該方法包括的步驟是利用適宜的例如切碎、破碎、粉化等的處理方法來加工原材料；并通過常規的提取方法以及適宜溶劑來處理所得混合物。水、其它含水有機溶劑和水不溶性有機溶劑可作為優選的提取用溶劑，本發明特別優選使用水、含水有機溶劑和它們的含水體系。含水有機溶劑的例子為乙醇、甲醇、丙醇、2-丙醇、丙酮等。當作為提取溶劑時，含50v/v％或更低的有機溶劑的含水體系可用于本發明。提取溶劑可任意采用適宜的緩沖液等將pH調至適當的值。所得提取溶劑以適當的量加至原材料中，通常的用量介于0.1-30倍(重量)之間，并且若需要，提取原材料時可利用攪拌和加熱的方法處理。所得提取物經例如過濾、離心和傾析的適當方法分離出其液體部分和殘余物部分，然后收集液體部分作為本發明中使用的Pfaffia提取物。反復利用類似的提取方法處理殘余物，所得液體部分可任意地合并在本發明提取物中。在對原材料和殘余物進行至少兩次提取的情況中，各提取過程中可利用不同的提取溶劑，然后單獨收集所需液體部分或合并成本發明中使用的Pfaffia提取物。
由此所得的提取物經適當純化處理可任意地用作Pfaffia制備產物。提取物中通常含有次級代謝物，例如生物堿、類萜、甾類、酚和色素、以及糖類、蛋白質、氨基酸、核苷酸、肽和脂質。這些成分中的一種或數種可通過本領域中常用的純制方法加以純化。根據成分類型的不同可選用的適宜方法例如是過濾、濃縮、離心、結晶、溶劑分離、分離沉積、滲析、疏水色譜、反相色譜、吸附色譜、親和色譜、凝膠過濾色譜和/或離子交換色譜。
在本發明中所得Pfaffia制備產物可完整地任意地使用，并且可以進一步濃縮并干燥，或與此后將說明的適宜的生理可接受成分混合成為液體、固體、粉末、糊劑、半固體、乳液、懸浮液等。在濃縮和干燥時，可任意選用食品和藥物工業中的常用方法真空濃縮、膜過濾、反滲透膜濃縮、超濾膜過濾、真空干燥、凍干和噴霧干燥。
如上所述，本發明中使用的Pfaffia產物通常含有以干燥固體基質(d.s.b.)計的0.1-10w/w％的脫皮甾酮，并且可能含有例如紅莧甾酮和厥甾酮的脫皮甾酮衍生物。Pfaffia產物中含有的脫皮甾酮及其衍生物可以利用如高效液體色譜(縮寫為“HPLC”)進行反相色譜來檢測。產物中的固體含量是根據在日本藥典，13版，34頁(1996)中描述的干燥還原試驗和日本藥典，13版，51-55頁，(1996)(Daiichi-HokiPublishing Ltd.出版，東京，日本)中記載的Karl Fisher法中所測定的含水量來計算。
本發明所用的類黃酮包括通常的類黃酮黃烷酮，例如橙皮素、4’,5,7-三羥黃烷酮、圣草酚、枸櫞素、橙皮苷、柑桔苷、圣草苷和枸櫞苷；黃酮醇，例如槲皮素、楊梅樹皮素、蕓香苷和楊梅苷；黃酮，例如黃芩黃素、5,7,4’-三羥黃酮、黃芩苷和芹菜苷；以及異黃酮，例如染料木黃酮和染料木苷。此外，類黃酮包括它們的經水解酶和糖轉移酶作用獲得的酶處理產物。可獨立地使用不同來源的上述類黃酮。例如，可以使用任何來源于例如柑桔植物的天然原料的以及由化學合成獲得的類黃酮。
在本發明中上述類黃酮可任意地采用，并且特別是其它稱為維生素P的類黃酮例如橙皮苷、蕓香苷、柑桔苷、圣草苷、橙皮素、槲皮素、柑桔素和圣草酚，以及酶處理的橙皮苷、柑桔苷和圣草苷。在酶處理的類黃酮中，由糖轉移酶作用而獲得的那些產物通常既可以是在類黃酮整體上轉移上了例如葡萄糖、果糖和半乳糖的單糖，也可以在類黃酮整體上轉移上了寡糖或多糖而產生的。由此獲得的酶處理類黃酮適宜于本發明，這是由于它們具有類黃酮固有的滿意特性、比類黃酮整體改進了的水溶性和改善的耐光性。
制備酶處理產物的方法并沒有特定的限制。產物的制備可以是經例如環麥芽糖糊精葡聚糖轉移酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、β-呋喃果糖苷酶、和β-半乳糖苷酶等的酶作用。根據所用酶的不同，酶處理產物的制備可以包括將一種或多種的上述類黃酮和一種或多種的適宜糖類在適宜的例如水和含水有機溶劑體系的溶劑體系中混合、選擇性地將混合物的pH調至適當的值、加入任意一種上述酶、并且將混合物在適當的溫度下溫育以進行酶促反應。酶促反應中的糖類類型、pH值和溫度需隨所用酶的特性而定，即，底物的特異性，最佳pH、pH穩定性、最佳溫度、熱穩定性等。酶的特性在例如“酶手冊”，Asakura-ShotenPublisher,Tokyo,Japan(1982)中已有描述。本申請發明人在日本公開7,593/91、115,292/91、13,691/92、312,597/92和32,690/93中已對使用環麥芽糖糊精葡聚糖轉移酶的酶處理產物制備方法進行了公開。可從市場上購買到的酶處理產品，例如酶處理蕓香苷或橙皮苷、亦稱糖轉移化橙皮苷或糖轉移化維生素P，在本發明中作為酶處理產物任意使用。
本發明組合物可以包括含咖啡因和/或靛青苷的植物的制備產物。含咖啡因植物的產物一般包括通過物理和/或化學處理獲得植物體或植物細胞內存在的咖啡因的制備產物，而它們的來源和培植方法并沒有特別的限制。作為含咖啡因植物的可提及植物是泡林藤屬、咖啡屬、茶屬(Thea sinensis)和可樂果屬的植物。它們的產物中一般含有咖啡因和/或其衍生物。含靛青苷植物的產物一般包括通過物理和/或化學處理獲得植物體或植物細胞內存在的靛青苷的制備產物，而它們的來源和培植方法并沒有特別的限制。作為含靛青苷植物的可提及植物是Percicaria和木藍屬的植物。它們的產物中一般含有靛青苷和/或其衍生物。
作為對本發明所用的含咖啡因和含靛青苷植物、其產物的生產方法的解釋，一種或多種的以常規方式培植的上述植物和它們的突變株可作為原料植物舉例。所謂植物可包括天然和培養的植物或是組織、愈傷組織和細胞培養獲得的培養物。在利用植物體作為原材料時可以任意使用下列部分植物全體、一種或多種選自根、莖、葉、花冠、花瓣、花粉、雄蕊、雌蕊、種子、胚乳和小纖維的由植物體局部分離出的特定部分。所用原材料可以是新鮮的即含水的形式，也可以是干燥的形式。特別是，屬于泡林藤屬屬植物的瓜拉那的干種子優選作為含咖啡因植物，屬于Percicaria屬植物的靛藍植物(此后簡稱為“indigo”)的新鮮葉和/或莖優選作為含靛青苷的植物。
本發明中的含咖啡因植物和/或含靛青苷植物的制備產物可以通過對上述原材料進行食品和藥物工業中的常規物理和/或化學處理而制得。例如，將如切碎、破碎、研磨、粉化、壓榨、發酵和提取的常規處理方法及其它處理方法例如過濾、濃縮和干燥適宜地結合而獲得的切碎型、破碎型、研磨型、粉化型、壓榨型、發酵型和提取型形式的制備產物。
對作為本發明含咖啡因和/或靛青苷植物的產物的植物提取物的生產方法的更具體說明是，通常，原材料首先經過例如切碎、破碎、粉化等的處理方法來加工；然后用適宜溶劑來進行常規提取。水、除水以外的其它含水有機溶劑和水不溶性有機溶劑可作為提取溶劑任意使用，本發明特別優選使用水、含水有機溶劑和有機溶劑的含水體系。含水有機溶劑的例子包括乙醇、甲醇、丙醇、2-丙醇、丙酮等。在以有機溶劑的含水溶液作為提取溶劑時，本發明可任意使用它們的70v/v％或更低的以體積計的含水溶劑而不隨有機溶劑的濃度而定。提取溶劑可任意采用適宜的緩沖液等將pH調至適當的值。所得提取溶劑以適當的量加至原材料中，通常的用量介于0.1-50倍(重量)之間，并且若需要還可利用攪拌和加熱的方法處理。所得提取物經例如過濾、離心和傾析的適當方法分成液體部分和/或殘余物部分，然后收集液體部分作為本發明的含咖啡因和/或靛青苷植物的提取物。反復利用類似的提取方法任意處理殘余物，然后將收集的液體部分合并在所需提取物中。當對原材料和殘余物進行兩次的提取時，可利用不同的提取溶劑以僅僅收集所需的液體部分，并且選擇性地可將液體部分合并在本發明的有用提取物中。
由此所得的提取物在使用前可再經純化處理制成含咖啡因和/或靛青苷植物的制備產物。提取物中常含有次級代謝物，例如生物堿、類萜、甾類、酚和色素、以及糖類、蛋白質、氨基酸、核苷酸、肽和脂質。這些化合物中的一種或數種成分可通過本領域中常用的純化方法加以純化。根據所需成分類型的不同，純化方法適宜選自過濾、濃縮、離心、結晶、溶劑分離、分離沉積、滲析、疏水色譜、反相色譜、吸附色譜、親和色譜、凝膠過濾色譜和/或離子交換色譜。
在本發明中所得的含咖啡因和/或靛青苷植物的制備產物可完整地任意地使用，并且如果需要，可進一步濃縮并干燥，或與此后將說明的適宜的生理可接受成分混合成為液體、固體、粉末、糊劑、半固體、懸浮液等所需形式。濃縮和干燥的方法可任選自食品和藥物工業中的常用方法真空濃縮、膜過濾濃縮、反滲透膜濃縮、超濾膜過濾、真空干燥、凍干和噴霧干燥等。
如上所述，本發明的含咖啡因植物的制備產物通常包含0.1-20w/w％的咖啡因和/或其衍生物d.s.b.。咖啡因和/或其衍生物可利用如HPLC進行反相色譜來檢測。產物中的固體含量是根據在干燥還原試驗或日本藥典，13版，51-55頁(1996)(Daiichi-Hoki Publishing Ltd.出版，東京，日本)中記載的Karl Fisher法中所測定的含水量來計算。
本發明組合物的制備是將上述Pfaffia產物和類黃酮進行混合，并且可選擇性地摻入一種或多數選自含咖啡因和/或靛青苷植物的產物的成分。為此所用的混合方法并沒有特別限制并且優選采用任何在食品和藥物工業中的技術。雖然對各組分的比例并無特別規定，但當加入Pfaffia產物中的類黃酮優選是Pfaffia產物重量的0.001-1倍(d.s.b.)時，本發明組合物能夠顯示出所有下述有效特性。當進一步在本發明組合物中摻入含咖啡因和含靛青苷植物的制備產物時，它們基本是隨意混入而沒有特別的限制，它們與Pfaffia產物混合時的優選量分別是Pfaffia產物重量的0.01-10倍和0.0001-0.1倍(d.s.b.)，并且使本發明組合物具有更有效的活性。
以相對于Pfaffia產物重量0.0005-0.05倍混入類黃酮的本發明組合物在所有下列活性中免疫增強作用和精神治療作用更為顯著。當組合物中的類黃酮混入量是Pfaffia產物重量的0.01-2倍d.s.b.時，組合物特別表現出抗過敏的活性。當摻入到Pfaffia產物中的含咖啡因植物產物為Pfaffia產物重量的1-10倍.d.s.b.時，本發明組合物所具有的強壯作用更加突出。
如上所述，本發明組合物通常含有的類黃酮和脫皮甾酮分別是0.01-20w/w％和0.0001-2w/w％(d.s.b.)。當組合物含有含咖啡因植物產物時，咖啡因的含量通常是0.001-4w/w％(d.s.b.)。組合物根據摻入組分的類型和形式以及它們的制備方法的不同可制成液體、粉末、固體、半固體、糊狀、或懸浮液的形式，顯然所有形式都是任意采用的。
由此獲得的本發明組合物顯示出很強的免疫增強、抗過敏、精神治療和強壯作用。當然組合物還表現出其中摻有的Pfaffia產物的原有活性，例如強化作用，輕瀉作用和對痔瘡、腹瀉、腸道炎癥、皮膚損傷和潰瘍的治療作用，如Goro Hashimoto在“巴西藥用植物說明全書”，24-27頁，ABOC-SHA Ltd.出版，Kanagawa，日本(1996)中記載的。由于改善了Pfaffia固有的苦味和粗澀感，本發明組合物可隨意作為保持和促進健康并對疾病具有滿意的治療和預防功效的口服用組合物。上述活性功能協同并不相互抑制，并且本發明組合物具有極低的毒性。因此，該組合物優選作為強壯劑用于提高身體和/或精神的活性。在含有例如糖類的營養物的情況下，本發明組合物特別可用作營養劑和強壯劑。由于具有這些良好的作用，本發明組合物可任意用作治療和預防疾病的免疫增強劑、抗過敏藥、精神治療劑和/或強壯劑。
在本發明中，所謂免疫增強活性是指對溫血動物和人的免疫活性細胞的生長促進、擴散、分化和活化的一種或多種作用。可提到下列的一種或多種活性(1)促進吞噬細胞如巨噬細胞的生長和/或擴散，促進干細胞分化為免疫活性細胞，促進由免疫活性細胞吞噬的外部物質的消化作用，(2)增強天然殺傷細胞對腫瘤細胞和病毒感染細胞的致死作用，(3)促進B-細胞的生長，促使干細胞分化為B-細胞，促進B-細胞的抗體生成作用，(4)對細胞毒性T細胞的促生長作用，促進干細胞分化為T細胞，增強T細胞對腫瘤細胞和病毒感染細胞的致死作用，(5)對輔助T細胞的促生長作用，促使干細胞分化為T-細胞，或，通過提高細胞因子的生成而加強免疫系統。
抗過敏作用在本發明中是指一種或多種對Ⅰ-Ⅳ型過敏的抑制作用，即下列功能中的一種或多種(1)通過對IgE抗體生成的抑制，抑制IgE受體與抗體間的結合，抑制結合后產生的例如組胺釋放的生理反應而對Ⅰ型過敏產生抑制作用，(2)通過抑制靶細胞在巨噬細胞和殺傷細胞作用下的溶胞而對Ⅱ型過敏產生抑制作用，(3)通過抑制活體中免疫復合物與補體結合，抑制結合后引起的例如過敏毒素的補體系統的活化而對Ⅲ型過敏產生抑制作用，(4)通過抑制T-細胞抗原的敏化，抑制致敏T-細胞導致的炎癥細胞因子生成而對Ⅳ型過敏產生抑制作用。在這些抗過敏作用中，本發明組合物對Ⅰ型過敏具有特別突出的抑制功效。
精神治療作用在本發明中是指一種或多種改善和治療精神神經病不穩定和精神神經疾病的作用。例如，本發明組合物緩解焦慮和緊張或顯示出安定作用，并且改善抑郁感或表現出抗抑郁-和/或精神興奮作用。特別是，組合物可有效地改善或抑制人群恐怖(例如紅色恐怖)癥狀。
強壯活性在本發明中是指改善人和溫血動物兩性的生殖潛能。例如，本發明組合物改善交媾不能、精液活力和精液形成，并且促進或誘發一性或兩性的動情期以獲得預期效果。
如上所述，本發明組合物增強免疫系統、抑制過敏反應、穩定精神性癥狀、和/或提高性能力以強壯身體；并且組合物的滿意功效還在于治療和/或預防絕經綜合癥或由由下列原因引起的疾病或易感疾病外界物質(例如細菌、病毒和真菌)侵入，腫瘤細胞和病毒感染細胞的內部形成，過敏反應例如鼻炎、過敏癥、花粉病、飲食變應性、特異性皮炎、氣喘、自身免疫溶血性貧血、Goodpasture氏綜合癥、血清疾病、過敏性肺炎、接觸性皮炎、風濕病、和潰瘍性結腸炎；精神和神經性疾病例如精神不穩定、人群恐怖癥、紅色恐怖癥；以及伴隨生殖能力減褪(例如交媾不能)的疾病。
本發明組合物包括常規的口服給藥產物；糖果、錠劑、凍膠、樹膠、口香糖、巧克力、果汁、軟飲料、酒、乳酸飲料、運動飲料、果醬、奶油、曲奇餅、餅干、senbei(日式克力架)、udon(小麥細面條)、soba(蕎麥細面條)、香腸、火腿、Kamaboko(蒸煮的魚糊)、chikuwa(一種魚糊)、hanpen(搗碎魚餅)、tsukudani(在醬油中蒸煮的食物)、速溶果汁和速溶湯。
除了上述產物，本發明組合物包括其他類型的含有一種或多種生理可接受載體、賦形劑、稀釋劑、輔劑、穩定劑以及選擇性的至少一種其他生理活性物質在內的組合物。例如，穩定劑是包括血清白蛋白和明膠的蛋白質；包括葡萄糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖和海藻糖的糖類；糖醇，例如山梨糖醇、麥芽糖醇、甘露糖醇和乳糖醇；主要包括檸檬酸或磷酸鹽在內的緩沖劑。其他生理活性物質的例子是環孢菌素、FK506、環磷酰胺、氮芥、三亞乙基硫代磷酰胺、白消安、pheramine mustard、苯丁酸氮芥、硫唑嘌呤、6-巰嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、6-氮鳥嘌呤、8-氮鳥嘌呤、氟尿嘌呤、阿糖胞苷、氨甲喋呤、氨喋呤、絲裂霉素C、鹽酸柔紅霉素、放線霉素D、色霉素A3、鹽酸博來霉素、鹽酸阿霉素、環孢菌素A、L-天冬酰胺酶、長春新堿、長春堿、羥基脲、鹽酸丙卡巴肼、皮質類甾醇、lumin(1-1’-1”-trihepthyl-11-chinolyl(4)·4·4’-penthamethinchynocyanin-1,1”-diiodide)、維生素A、B、C、D、E和K、氨基酸、放射金膠體、溴化鉀、乳酸鈣、甘油磷酸鈣、碘化鉀、還原鐵、肝素鈉、水合氯醛、甲丙氨酯、噁唑侖、苯妥英、痂囊腔菌聚糖、煙酰胺、小球藻提取物、蘆薈提取物、蜂膠提取物、海龜提取物、牡蠣提取物、人參提取物、乳酸菌、酵母、王漿、和選擇性含有干擾素、TNF-α、促紅細胞生成素、白細胞介素、細胞因子受體和其拮抗劑。
本發明組合物包括劑量單位形式的藥物以及易于給藥的物理整體形式，其中該劑量單位形式是指含有一定量Pfaffia產物和類黃酮，例如一至數倍并最高至四整數倍的劑量，或低至1/40量的劑量。這些藥物例子是注射劑、液體、粉劑、顆粒劑、片劑、膠囊、舌下劑、眼用溶液、噴霧劑、栓劑、外用藥等。本發明組合物是經過口服或腸胃外給予患者并且對易感疾病具有滿意的治療和預防作用而并不隨給藥途徑而改變。根據易感疾病的類型和癥狀以及免疫療法用組合物中的組分，組合物可口服給藥，或是例如皮內、皮下、肌內、或靜脈內的腸胃外給藥，Pfaffia產物和類黃酮的給藥劑量是約0.1mg-約10g/劑/成人，并且優選是約1mg-約1g/劑/成人(d.s.b.),1-4劑/天或1-5劑/周，持續1天至1年。
下列實施例1-5描述本發明組合物的功能、口感和毒性試驗方案實施例1產物的制備制備例1-1Paffia提取物將3千克來源于巴西的Pfaffia glomerata的干燥結節狀根碎片和45L去離子水置于100L的不銹鋼大缸中，將混合物放置在火上，然后在沸騰條件下保持40分鐘。將所得混合物放在筐內過濾得到28.8千克的濾液。殘余物收集在同一大缸中并混合20L去離子水，將混合物放置在火上，然后在沸騰條件下保持30分鐘。將所得混合物放在筐內過濾得到19.6千克的濾液，然后將其與上述濾液合并。合并的溶液用籃式離心機(購自Hitachi Tekkosho Co.Ltd.Tokyo，日本)處理以除去不溶性物質，然后用“HOROCEP HR5155F1”，一種反滲透膜(購自Toyobo.Co.Ltd.,Tokyo，日本)以大約30L/小時的滲透速度進行濃縮，得到10.7kg的濃縮物。所得濃縮物在帶夾套不銹鋼罐中在80℃下保溫21.5小時以進一步濃縮，得到2,770g液體Pfaffia提取物作為Pfaffia產物。Pfaffia提取物的濃度約為50w/w％(d.s.b.)。
利用N.NISHIMOTO等人在Phytochemistry，第32卷，1,527-1,530頁(1993)中公開的脫皮甾酮純化方法處理部分Pfaffia提取物以得到針狀晶體。晶體常規分析測得該晶體的熔點為240-242℃并且旋光力為+890(=[α]D+890)。基于上述數據與N.NISHIMOTO等人在Phytochemistry，第26卷，2,505頁(1987)中公開的脫皮甾酮的物理化學特性相一致，本申請發明人認為該晶體是膠皮甾酮。
將1mg該晶體溶解于乙腈和水的混合液(體積比=15∶85)中使總體積達到2ml。該溶液用孔徑為0.45μm的過濾膜進行膜過濾。濾液用同樣的溶劑稀釋，以500μg/ml、200μg/ml、100μg/ml和50μg/ml脫皮甾酮溶液作為標準溶液。用下列HPLC分析20μl每份的標準溶液。選用的條件和儀器是“CAPCELL PAK C18 AG120”柱(購自Shiseido Co.,Ltd.,Tokyo,Japan；)，以乙腈和水的混合溶液(體積比=15∶85)作為洗脫液，柱溫度為35℃，流速為0.5ml/min。使用可見-紫外分光光度儀“MODEL 875-UV”(購自Nippon Bunko Kogyo Co.Ltd.,Tokyo.Japan)對樣品溶液在240nm的波長下進行監測。數據用“CR-4A”的數據處理器處理(購自Shimadzu Techno-Research,Inc.Kyoto,Japan)。結果是，所有標準溶液在相應的洗脫時間為17分鐘處有一個主峰。該峰是脫皮甾酮。基于各峰的面積可繪制標準曲線。
將由上述方法制得的1g Pfaffia提取物稱重、與乙腈和水(體積比=15∶85)的混合液相混合以使總體積為25ml、用孔徑為0.45μm的膜過濾該溶液得到一濾液。用類似純化脫皮甾酮樣品的方法，取20μl濾液在HPLC中進行分析，檢測保留時間與上述標準溶液峰值相符的峰，然后將所得峰面積通過內插法在標準曲線上求得Pfaffia提取物含有約1w/w％(d.s.b)的脫皮甾酮。制備例1-2粉末瓜拉那取“粉末瓜拉那”(購自ONOBRAS Co.Ltd.Sao Paulo，巴西的粉化瓜拉那產物)作為瓜拉那產物。瓜拉那產物中的咖啡因在下述HPLC中檢測制備1mg/ml的無水咖啡因(購自Wako Pure ChemicalIndustries Ltd.,Tokyo，日本)并稀釋成250μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml和10μg/ml的標準溶液。將20μl等份的標準溶液加樣到“TSKGEL ODS-80TM”，直徑為4.6mm、長度為15cm的色譜柱(購自TosohCorporation,Tokyo，日本)中進行HPLC，并且以甲醇和含有5mM辛烷磺酸鈉的50mM磷酸緩沖液(pH6.5)(體積比=1∶4)的混合溶液洗脫。流速為1.0ml/min并且柱溫度為40℃。洗脫物在270nm下利用可見-紫外分光光度儀“MODEL 875-UV”(購自Nippon Bunko KogyoCo.Ltd.,Tokyo.Japan)監測吸收值。數據用“CR-4A”的數據處理器(購自Shimadzu Techno-Research,Inc.Kyoto,Japan)處理。結果是，所有標準溶液在洗脫時間約為7分鐘處相應地有一主峰。該峰為咖啡因。基于各個峰面積可繪制出一條標準曲線。同時，將75mg上述瓜拉那粉末放在試管中并與約10ml的蒸餾水混合，混合液沸騰15分鐘、冷卻、并摻入蒸餾水以得到總體積為25ml。以10,000rpm的轉速離心該溶液5分鐘，收集上清液、用孔徑為0.45μm的膜過濾該溶液。以與處理標準溶液相似的方法，取20μl濾液在HPLC上進行檢測并得到其保留時間與上述標準溶液一致的峰，然后將所得峰面積通過內插法在標準曲線上求粉末瓜拉那中含有約4w/w％(d.s.b)的咖啡因。制備例1-3靛藍提取物收割約10千克濕重的新鮮靛藍植物的包括莖和葉在內的地上部分。除去枯葉和雜草后將地上部分用流水沖洗、脫水、用“MODEL OMC-12”切碎機(購自Daido Sangyo Co.Ltd.,Tokyo，日本)處理得到約10千克的粉化靛藍。將370g粉化產物用555g去離子水混合并將混合物用“TRIOBLENDER”混合器(購自Torio Science Co.,Ltd.,Tokyo，日本)處理2分鐘。所得混合物離心過濾，收集688g的上清液并放在不銹鋼大杯中、在121℃下壓熱10分鐘、冷卻、在4℃和15,000rpm下離心20分鐘。隨后收集到619克上清液。上清液的固體濃度約為1.9％。向該上清液中加入去離子水得到約1％的靛藍提取物(d.s.b.)。實施例2免疫增強活性以適宜的量將制備例1-1中方法制得的Pfaffia提取物、作為類黃酮的“αG HESPERIDIN PA”的酶處理橙皮苷(購自Toyo Sugar RefiningCo.Ltd.Tokyo日本)、和“αG RUTIN PS”的酶處理蕓香苷(購自Toyo Sugar Refining Co.Ltd.Tokyo日本)混合。混合物用精制水稀釋、用膜過濾器滅菌，得到表1中所列的5種類型的樣品No.1-5。
表1
附注表中的數字表示每克樣品中的組分固體重量*:“Pf”、“HG”和“RG”分別表示Pfaffia提取物、酶處理橙皮苷和酶處理蕓香苷。
5個樣品的免疫增強活性按下列方法測定從BALB/c小鼠腹膜中收集巨噬細胞并接種在96孔的微量板上進行粘附。分別將用100倍RPMI1640培養基稀釋的5種樣品的稀釋物以0.1ml/孔的量加至微量板中，RPMI1640培養基含有10v/v％胎牛血清和10mM Hepes緩沖液(pH7.4)，然后在37℃5v/v％CO2培養箱培養5小時。對各孔進行照相，隨后計算擴展巨噬細胞數量相對于巨噬細胞總數的百分比。作為空白對照，將含有10v/v％胎牛血清和10mM Hepes緩沖液(pH7.4)的RPMI1640培養基體系加至微量板中代替上述樣品稀釋物。所得數據如表2所示。
表2
附注符號“+”和“-”分別表示本發明和參考物表2中的數據中，當評估樣品對巨噬細胞的活化作用時，樣品1-5體系的值與空白對照體系值的差值說明Pfaffia提取物和類黃酮具有很強的巨噬細胞活化作用并且該作用是結合使用的Pfaffia提取物和類黃酮產生的協同作用。這說明作為本發明組合物的樣品4和5的組合物具有很強的免疫增強活性。在該試驗中所用的類黃酮酶處理產物能夠在體內通過葡糖苷酶的作用轉化為游離類黃酮。上述數據表示不同于其酶處理產物的完整類黃酮也可用于本發明。
將制備例1-1中所得的Pfaffia提取物、制備例1-2所得的粉化瓜拉那、制備例1-3中得到的靛藍提取物、酶處理橙皮苷“αG HESPERIDINPA”(購自Toyo Sugar Refining Co.Ltd.Tokyo日本)和酶處理蕓香苷“αG RUTIN PS”(購自Toyo Sugar Refining Co.Ltd.Tokyo日本)以適宜的量進行混合、用精制水稀釋、并過濾滅菌，得到10種樣品，如表3中所列的樣品6-15。
表3
附注表中的數字表示每克樣品中的組分固體重量*:“Pf”、“HG”、“RG”、“Gr”和“Id”分別表示Pfaffia提取物、酶處理橙皮苷、酶處理蕓香苷、瓜拉那提取物和靛藍提取物。用與上述相似的方法測定這10種樣品的免疫增強活性，然后類似于上述方法基于樣品和空白對照間的差別進行評估。數據如表4所示。
表4
附注符號“+”和“-”分別表示本發明和參考物。
在樣品4和5中加入靛藍提取物和/或粉化瓜拉那產生了協同的巨噬細胞活化作用，這說明本發明的這些組合物具有很強的免疫增強作用。
用屬于異味多年生三白草科的銀杏和小球藻的通過常規方法獲得的提取物代替制備例2中所用Pfaffia提取物并按照上述方法測定它們的活性。這些提取物雖然是在很多地方都已使用的民間藥物，當它們并不顯示出類黃酮、粉化瓜拉那和靛藍所固有的巨噬細胞活化增強作用。上述數據表明作為民間藥物和天然物質的混合物，本發明組合物具有很高的功效。實施例3抗過敏作用將制備例1-1中制得的Pfaffia提取物、作為類黃酮的酶處理橙皮苷“αG HESPERIDIN PA”(購自Toyo Sugar Refining Co.Ltd.Tokyo日本)、制備例1-2中制得的粉化瓜拉那和制備例1-3中制得的日本靛藍提取物混合。并將混合物用精制水稀釋、膜過濾滅菌，得到8種樣品，如表5所示的樣品16-23。
表5
附注表中的數字表示每克樣品中的組分固體重量*:“Pf”、“HG”、“Gr”和“Id”分別表示Pfaffia提取物、酶處理橙皮苷、瓜拉那提取物和靛藍提取物。
對比它們對試驗動物的被動皮膚過敏性的影響而測定8種樣品的抗過敏作用。如Hideomi FUKUDA等人在Zoku-Iyakuhin-no-kaihatsu(藥物發展，第2系列)，題目名為“疾病的動物模型”，2卷，95-96頁(1993)中所述，被動皮膚過敏可作為用于篩選抗過敏藥物的技術，因此它可用作研究上述待測樣品的抗過敏活性。
首先以常規方式飼養30只wister雄性6周齡大鼠(購自CharlesRiver Japan,Inc.,Toyko，日本)1周。然后將它們的背部脫毛并通過以每個脫毛處0.1ml等份的抗2,4-二硝基苯基化蛔蟲提取物血清(此后將簡稱為“抗DNP-AS”)(由LSL Ltd.Tokyo Japan生產)，在3個位置進行皮內注射以達到致敏。致敏47小時后，將這8個樣品中任意一種以每頭大鼠1g的劑量口服給藥。作為空白對照，用滅菌精制水代替樣品經口服給大鼠。各樣品的相同標本以三等份按照同樣的給予方案口服給予3只大鼠。致敏48小時后，從大鼠的尾靜脈將1ml含有0.5mg/ml 2,4-二硝基苯基化蛔蟲提取物(此后簡稱為“DNP-AS”)(由LSL Ltd.Tokyo Japan生產)和0.5w/v％Evans藍的生理鹽水注射給大鼠以誘發被動皮膚過敏。DNP-AS給藥30分鐘后將大鼠放血處死。然后剝落它們的背部皮膚、按所需大小切除色素斑，并且按照S.KATAYAMA等人在微生物免疫，22卷，89-101頁(1978)中公開的方法測定從藍染色部分滲出的色素量；在各皮膚碎片中加入1ml的1.2N氫氧化鉀，混合物在37℃下保溫15小時以溶解皮膚組織，然后在所得混合物中加入9ml的0.6N磷酸鹽和丙酮(體積比=5∶13)的混合液以提取色素。提取物以常規方式離心，在620nm波長下測定所得上清液的吸收值并根據該測定結果計算滲出色素的量。表6中列出了各給藥樣品中滲出色素量的平均值。
表6樣品編號16 17 18 19 20 21 22 23 空白滲出的色素量 4.3 3.3 4.8 4.9 2.3 2.0 2.0 1.8 5.0(μg/ml)標記物*----++++-附注符號“+”和“-”分別表示本發明和參考物如表6所示，Pfaffia提取物和類黃酮對大鼠被動皮膚過敏中的色素滲出有顯著的抑制作用。Pfaffia提取物和類黃酮的結合使用使上述抑制作用協同性增強，并且在加入靛藍提取物和/粉化瓜拉那時更高。用“αG RUTIN PS”的酶處理蕓香苷(購自Toyo Sugar Refining Co.Ltd.Tokyo日本)作為本實施例中類黃酮代替酶處理橙皮苷可以得到類似的結果。由于在本試驗中類黃酮的酶處理產物在體內已知會在葡糖苷酶的作用下轉化為游離的類黃酮，上述結果表明作為非酶處理產物的完整類黃酮也可在本發明中發揮類似于酶處理類黃酮的作用。上述結果證明本發明組合物具有很強的抗過敏活性。
用屬于帶異味的、多年生三白草科的銀杏和小球藻的通過常規方法獲得的提取物代替實施例3中的Pfaffia提取物并按照上述方法進行試驗。這些提取物雖然是在很地方都已使用的民間藥物，當它們并不顯示出對類黃酮、粉化瓜拉那和靛藍提取物固有的抗過敏作用的增強活性。上述數據表明雖然是由民間藥物和天然物質制成的組合物，本發明組合物仍具有很高的功效。實施例4精神治療作用以適宜的量將制備例1-1中制得的Pfaffia提取物、作為類黃酮的酶處理橙皮苷“αG HESPERIDIN PA”(購自Toyo Sugar Refining Co.Ltd.Tokyo日本)、制備例1-2中制得的粉化瓜拉那和制備例1-3中制得的日本靛藍提取物混合。并將混合物用精制水稀釋、膜過濾滅菌，得到8種樣品，如表7所示的樣品24-31。
表7
附注表中的數字表示每克樣品中的組分固體重量*:“Pf”、“HG”、“Gr”和“Id”分別表示Pfaffia提取物、酶處理橙皮苷、瓜拉那提取物和靛藍提取物。
按照Shigeru MORIMOTO等人在Nichi-Yakuri-Shi(FoliaPharmacol.日本)，104卷，39-49頁(1994)中公開的旋轉棒(rotarod)試驗方法對上述樣品的精神治療作用進行測定。使5周齡的Sprague-Dawley雄性大鼠騎在直徑為1.2cm并且轉速為6轉/分鐘的木桿上并且對每只大鼠旋轉5-6次。此后，測定大鼠在旋轉停止后從木桿落下的時間(此后在實施例3中稱為“反應時間”)，選用在2-3次試驗中具有基本恒定反應時間的大鼠并將上述樣品口服給藥。劑量是1g/大鼠，并且以滅菌蒸餾水通過類似的給藥方式建立空白對照組。同樣的樣品要以相同的給藥方案給予3只大鼠。給藥l小時后測定各大鼠的反應時間，然后計算各樣品的平均值。將各樣品給藥前的反應時間假定為1，則各樣品給藥后的反應時間以相對值表示并與空白對照比較。表8中列出了樣品給予大鼠后的相對平均值。
表8樣品編號24 25 26 27 28 29 30 31 空白反應時間1.7 1.6 1.3 1.1 2.3 2.4 2.4 2.7 1.3(相對值)標記物*----++++-附注符號“+”和“-”分別表示本發明和參考物如表8所示，給予Pfaffia提取物和類黃酮的大鼠的反應時間比空白對照要明顯延長。由于Pfaffia提取物和類黃酮的結合使用而顯著增加了相對于空白對照所延長的反應時間的程度，并且在加入靛藍提取物和/或粉化瓜拉那后進一步增強。在本實施例中用酶處理蕓香苷“αGRUTIN PS”(購自Toyo Sugar Refining Co.Ltd.Tokyo日本)作為類黃酮代替酶處理橙皮苷可以得到類似的結果。由于在本試驗中類黃酮的酶處理產物在體內已知會在葡糖苷酶的作用下轉化為游離的類黃酮，上述結果表明作為非酶處理產物的完整類黃酮也可在本發明中發揮類似于酶處理產物的作用。上述結果證明本發明組合物具有很強的精神治療活性。實施例5強壯作用通過比較試驗小鼠的精液形成能力來測定實施例3制備的、在表5中給出組分的8種樣品16-23的強壯作用。以任一樣品對18周齡的ICR雄性小鼠以0.5g/劑/小鼠的劑量口服給藥。1周內按時給藥5劑并連續3周，使每只小鼠共接受15劑。以滅菌蒸餾水以相同的方式給予小鼠作為空白對照系統。各樣品的相同樣品分別給予3只小鼠。在最后1次給藥的第二天，將封裝在細胞生長檢測試劑盒(購自AmershamCorp.,Div.,Amersham International,Arlington Heights USA)中的標記溴脫氧尿苷以0.5ml/鼠的劑量腹膜內給藥。給藥后2小時，切除下睪丸并浸泡在10％的緩沖福爾馬林液中2天。浸泡后，將睪丸制成嵌有石蠟的片斷，隨后通過檢測和計算細胞內攝入的溴脫氧尿苷來對增殖細胞的數量進行計數，即，各樣品的精子形成能力，采用了使用抗溴脫氧尿苷單克隆抗體的免疫組織化學染色法，按照附在細胞-生長-檢測試劑盒(購自Amersham Corp.,Div.,Amersham International,ArlingtonHeights USA)中的給藥方式進行。對增殖細胞中的可在100放大倍顯微鏡下顯現的染色細胞進行計數并測定相應樣品中的染色細胞的平均值，并表示成為相對于為1的空白對照值的相對值。結果如表9所示。
表9樣品編號16 17 18 19 20 21 22 23 空白反應時間1.7 1.2 1.6 1.1 2.2 3.0 2.4 3.3 1(相對值)標記物*----++++-附注符號“+”和“-”分別表示本發明和參考物如表9所示，給予Pfaffia提取物和類黃酮使染色細胞的數量明顯增多，并且這種增多是由Pfaffia提取物和類黃酮結合使用而協同性導致的，并且在加入靛藍提取物和/或粉化瓜拉那后進一步增強。用酶處理蕓香苷“αG RUTIN PS”(購自Toyo Sugar Refining Co.Ltd.Tokyo日本)作為類黃酮代替酶處理橙皮苷可以得到類似的結果。由于在本試驗中類黃酮的酶處理產物在體內已知會在葡糖苷酶的作用下轉化為游離的類黃酮，上述結果表明作為非酶處理產物的類黃酮也可在本發明中使用。上述結果證明本發明組合物具有很強的強壯作用。實施例6組合物的味感以適宜的量將制備例1-1中制得的Pfaffia提取物、作為類黃酮的酶處理橙皮苷“αG HESPERIDIN PA”(購自Toyo Sugar Refining Co.Ltd.Tokyo日本)、酶處理蕓香苷“αG RUTIN PS”(購自Toyo SugarRefining Co.Ltd.Tokyo日本)和蔗糖混合。混合物用精制水稀釋、用膜過濾法滅菌，得到表10中所列的7種樣品No.32-38。
表10
附注表中的數字表示每克樣品中的組分固體重量*:“Pf”、“HG”、“RG”和“Sc”分別表示Pfaffia提取物、酶處理橙皮苷、酶處理蕓香苷和蔗糖。
通過評估小組的試驗來評價上述7種樣品的味感。將樣品保存在室內24℃下并將約1匙的各樣品讓由10位男性和6位女性組成的評估小組喝下。此后，評估小組將基于下列3個級別來對樣品進行評價；(A)輕易地服下(B)幾乎輕易地服下但有苦味和澀感(C)因強烈的苦味和澀感而難以口服。對每個樣品，把評估小組的分數相加。結果如表11所示。
表11
>附注符號“+”和“-”分別表示本發明和參考物如表11所示，Pfaffia本身的味道已經由于摻入了Pfaffia提取物和類黃酮而得到極滿意的改善。同樣，評估小組對加入了粉化瓜拉那和靛藍提取物的樣品36和37作出的結論是它們同樣易于口服。數據表明，本發明組合物的Pfaffia固有苦味和澀感在很大程度上都有效地降低了。實施例7急性毒性試驗冷凍干燥后，將實施例2中的樣品8-15和實施例3中的樣品20-23對7周齡且體重約為19-21g的dd-小鼠進行口服給藥以測定急性毒性。在高達0.5g/鼠的劑量下沒有出現死亡而更高劑量的試驗是不可能的。這些數據表明本發明組合物具有滿意的低毒性。
下列制備例將進一步具體說明本發明組合物制劑例1粉末組合物向2,770g的制備例1-1中制備的約50％液體Pfaffia提取物(d.s.b.)中添加6,879g“TREHAOSE”，即一種海藻糖產品(購自HayashibaraShoji,Inc.,Ltd,Okayama，日本)，將混合物分成5份并用“5DM”混合器(購自Dalton Co.,Tokyo,日本)處理5次，在60℃下保存在“DK83”干燥器(購自Yamato Co.,Tokyo，日本)中17小時，并在真空干燥器(購自Yamato Co.,Tokyo，日本)中在60℃下真空干燥4.5小時。用“POWER-MIL P3”粉磨機(購自Dalton Co.,Tokyo，日本)處理得到含有Pfaffia提取物的粉末。
將100g酶處理橙皮苷“αG HESPERIDIN PA”(購自Toyo SugarRefining Co.Ltd.Tokyo日本)和900g“TREHAOSE”海藻糖產品(購自Hayashibara Shoji,Inc.,Ltd,Okayama，日本)用“5DM”混合器(購自Yamato Co.,Tokyo，日本)混合，并以“POwER-MIL P3”粉磨機(購自Yamato Co.,Tokyo，日本)粉化得到含有類黃酮的粉末。
向619g在制備例1-3中制得的固體濃度約為1.9％的液體靛藍提取物中加入8,636g“TREHAOSE”海藻糖產品(購自HayashibaraShoji,Inc.,Ltd,Okayama,日本)，然后將混合物在室溫下保持15小時并用“POWERMIL P-3”粉磨機(購自Dalton Co.,Tokyo,日本)粉化得到9,141g靛藍提取物粉末。
將700g上述粉末Pfaffia提取物、100g粉狀類黃酮、100g粉狀靛藍提取物和100g在制備例1-2中制得的粉化瓜拉那用“5DM”混合器(購自Dalton Co.,Tokyo，日本)混合，得到本發明組合物。按照制備例1-1和1-3中的方法對組合物進行分析，證實該組合物中含有約0.05w/w％脫皮甾酮和約0.4w/w％的咖啡因(d.s.b.)。
由于Pfaffia固有的苦味和澀感得到滿意的降低并且保留了海藻糖的柔和甜味，因此產物適宜口服。由于產物具有良好的免疫增強作用、抗過敏作用、精神治療作用和強壯作用，還由于這些作用相互不發生抑制，所以該產物能夠賦予活體以身體和精神上的活力。該產物還是營養物，這是由于它含有海藻糖并毒性很低。具有上述良好特性的本發明組合物可任意用在食品和醫藥工業中以保持和促進健康，治療和預防易感疾病(例如免疫治療、精神神經疾病和/或性能力)并使身體復原。制劑例2片劑組合物將制劑例1中制得的粉末組合物和“LUMIN”細胞激活劑(日本光敏染料研究院有限公司，Okayama，日本)混合，并將混合物用直徑為12mm的20R沖壓機壓片得到作為本發明組合物的含有約2％LUMIN d.s.b.的片劑。該產物具有良好的免疫增強作用、抗過敏作用、精神治療作用和強壯作用，具有細胞激活活性，該產物能夠賦予活體以身體和精神上的活力。該產物還是營養物，這是由于它含有海藻糖并毒性很低。具有上述良好特性的本發明組合物可任意用在食品和醫藥工業中以保持和促進健康，治療和預防易感疾病(例如免疫治療、精神神經疾病和/或性能力)并使身體復原。制劑例3乳液組合物將1千克制備例1-1中制得的約50％的液體Pfaffia提取物(d.s.b.)和50g酶處理蕓香苷“αG RUTIN PA”(購自Toyo Sugar Refining Co.Ltd.Tokyo日本)混合均勻并冷凍干燥。向100g該凍干產物中加入250g“TREHAOSE”海藻糖產品(購自Hayashibara Shoji,Inc.,Ltd,Okayama，日本)、50g聚氧乙烯二十二醇醚、100g聚氧乙烯山梨糖醇四油酸酯、50g油溶硬脂酸單甘油酯、50g二十二醇、100g鱷梨油和適量的維生素E和防腐劑。將混合物通過常規的加熱方式溶解，摻入500g 1,3-丁二醇、10g羧乙烯聚合物和8.5kg精制水，并在勻質器中乳化成作為本發明組合物的乳液。當將該組合物涂敷在皮膚和粘膜上時，產物表現出良好的免疫增強作用。由于組合物具有抗過敏作用，因此患者在涂敷后不會產生副作用。此外，該產物可在化妝品和醫藥工業中任意用于治療/預防皮膚癌以及用作防曬劑和皮膚增白劑。制劑例4硬糖向300g“TREHASTER”-含有海藻糖的淀粉糖漿(HayashibaraShoji,Inc.,Okayama，日本)中加入800g水分含量為25w/w％的氫化麥芽糖漿并混合溶解。將該溶液在真空下濃縮以使含水量低于2w/w％，濃縮物與10g檸檬酸和適量的檸檬調味劑和著色劑進一步混合并與10g制劑例3中的凍干產物進行捏和。所得混合物以常規方式成型為本發明硬糖產品。硬糖具有較高的甜味感、適當的苦味、較低的吸濕性和熔融性以及良好的咀嚼特性。由于該產物具有強的免疫增強、抗過敏、精神治療和/或強壯作用并且這些作用彼此協同而不是相互抑制，因此給藥時它們能夠給予活體以身體和精神上活力。所以，該產物對過度勞動、寒冷條件和營養不足導致的生物機能衰褪具有有效的滋養和強壯作用，并且在其他治療中能夠加強治療效果。制劑例5軟飲料將100g制劑例1中的粉末組合物、50g異構化蔗糖、0.5g檸檬酸和0.5g L-抗壞血酸與水混合成含有本發明組合物、總重為1千克的軟飲料。產物具有柔和的甜味、適當的苦味、涼爽感和良好的香味和味道。由于該產物具有強的免疫增強、抗過敏、精神治療和/或強壯作用并且這些作用彼此協同而不是相互抑制，因此給藥時它們能夠給予活體以身體和精神上活力。所以，該產物對過度勞動、寒冷條件和營養不足導致的生物機能衰褪具有有效的滋養和強壯作用，并且在其他治療中能夠加強治療效果。制劑例6人工日本清酒將6518g的30v/v％酒精水溶液、600g的70％葡萄糖水溶液、50g“TETRUP”即含麥芽四糖的糖漿(Hayashibara Shoji,Inc.,Okayama,日本)、11.1g琥珀酸、3.66g的75％乳酸水溶液、2.3g谷氨酸鈉、1.2g甘氨酸、1.2g丙氨酸、2.22g琥珀酸鈉、1.6g氯化鈉、1.4g天然鹽、200g制劑例1中的本發明粉末組合物和2500g水混合得到清酒原料。將該清酒原料用水稀釋成15-16v/v％的酒精溶液，制得含本發明組合物的人工清酒。該產物是一種酒精飲料并具有柔和的甜味、適當的苦味、良好的香味和味道。由于該產物具有強的免疫增強、抗過敏、精神治療和/或強壯作用并且這些作用彼此協同而不是相互抑制，因此給藥時它們能夠給予活體以身體和精神上活力。所以，該產物對過度勞動、衰老、寒冷條件和營養不足導致的生物機能衰褪具有有效的滋養和強壯作用，并且在其他治療中能夠加強治療效果。制劑例7口香糖含有2重量份的制劑例1中所得的粉末組合物、6重量份的葡萄糖、2重量份的通過加熱熔融達到軟化程度的樹膠基質和適量的薄荷調味劑的混合物通過碾壓捏和并成型為含有本發明組合物的口香糖。該產品具有柔和的甜味、適當的苦味、涼爽感和滿意的質地。由于該產物具有強的免疫增強、抗過敏、精神治療和/或強壯作用并且這些作用彼此協同而不是相互抑制，因此給藥時它們能夠給予活體以身體和精神上活力。所以，該產物對過度勞動、寒冷條件和營養不足導致的生物機能衰褪具有有效的滋養和強壯作用，并且在其他治療中能夠加強治療效果。制劑例8栓劑將1千克的由制備例1-1所得的約50％液體Pfaffia提取物和5g酶處理蕓香苷“αG RUTIN PA”(購自Toyo Sugar Refining Co.Ltd.Tokyo日本)混合均勻并冷凍干燥。向100g該凍干產物中加入720g聚乙二醇#1000和180g聚乙二醇#4000，將該混合物以常規方式制成栓劑作為本發明組合物。由于該栓劑具有良好的免疫增強活性，當將該產物向患者給藥時，它在治療和預防中十分有效，并且能夠促進機體從大腸和直腸內和周圍的致癌性疾病(例如大腸癌和結腸癌)復原。
如上所述，本發明是基于一個全新的發現，即含有Pfaffia產物和類黃酮的組合物表現出很強的免疫增強、抗過敏、精神治療和/或強壯活性，這些活性足以在保持和促進健康以及治療和預防疾病中產生有效的效果。當向活體給藥時，這些活性作用彼此協同而且相互不發生抑制，能夠給予活體以身體和精神上活力。組合物還降低了Pfaffia固有的苦味和澀感并且具有滿意的低毒性。因此，本發明組合物特別適宜作為口服給藥的增強劑。含有例如糖類的營養物的其他類型的本發明組合物也特別適宜作為營養劑和增強劑。具有這些顯著功效和活性的本發明組合物尤其適宜作為治療和預防易感疾病的藥物。
具有上述突出功效和作用的本發明組合物是所屬領域中的一個極重要的創造。
權利要求
1．一種組合物，該組合物含有類黃酮和Pfaffia屬植物的制備產物。
2．權利要求1中的組合物，其中該制備產物是進行了切碎、破碎、研磨、粉化、壓榨、發酵和/提取的該植物的根。
3．權利要求1中的組合物，其中該植物提取物是用水和/或醇提取該植物的根而獲得的。
4．權利要求1中的組合物，其中該制備產物含有脫皮甾酮和/或它的衍生物。
5．權利要求4中的組合物，其中該組合物含有0.0001-2w/w％的脫皮甾酮和/或它的衍生物，以干燥固體基質計。
6．權利要求1中的組合物，其中該類黃酮是維生素P。
7．權利要求6中的組合物，其中該維生素P是一種或多種選自橙皮苷、蕓香苷、柑桔苷、圣草苷、橙皮素、槲皮素、4’,5,7-三羥基黃烷酮、圣草酚、酶處理橙皮苷、酶處理蕓香苷、酶處理4’,5,7-三羥基黃烷酮和酶處理圣草苷的物質。
8．權利要求1中的組合物，其中含有的類黃酮是該制備產物的0.001-1倍，以干燥固體基質計。
9．權利要求1中的組合物，其含有0.01-20w/w％類黃酮，以干燥固體基質計。
10．權利要求1中的組合物，其在含有Pfaffia屬植物的制備產物之外，還包含含咖啡因植物的制備產物和/或含靛青苷植物的制備產物。
11．權利要求10中的組合物，其中該含咖啡因植物的制備產物是切碎、破碎、研磨、粉化、壓榨、發酵和/或提取的植物種子；并且該含靛青苷植物的制備產物是切碎、破碎、研磨、粉化、壓榨、發酵和/或提取的植物葉和/或莖。
12．權利要求11中的組合物，其中該含咖啡因植物的提取物是用水和/醇提取其種子而獲得的，該含靛青苷植物的提取物是用水和/醇提取其葉和/或莖而獲得的。
13．權利要求10中的組合物，其中該含咖啡因植物是泡林藤屬、咖啡屬、茶屬或可樂果屬的植物；該含靛青苷植物是Percicaria或木藍屬植物。
14．權利要求13中的組合物，其中該含咖啡因植物是泡林藤屬的瓜拉那，并且含靛青苷植物是Percicaria屬的靛藍植物。
15．權利要求10中的組合物，該組合物包含的含咖啡因植物的制備產物是該Pfaffia屬植物制備產物的0.01-10倍。
16．權利要求10中的組合物，該組合物包含的含靛青苷植物的制備產物是該Pfaffia屬植物制備產物的0.0001-0.1倍。
17．權利要求10中的組合物，該組合物含有0.0001-4w/w％咖啡因和/或它的衍生物，以干燥固體基質計。
18．權利要求1中的組合物，該組合物含有糖類。
19．權利要求18中的組合物，其中的糖類是一種或多種選自海藻糖、無水結晶海藻糖、麥芽糖和無水結晶麥芽糖的糖類。
20．權利要求1中的組合物，該組合物是液體、固體、粉末、半固體、糊劑或懸浮液的形式。
21．權利要求1中的組合物，該組合物是口服給藥的組合物。
22．權利要求1中的組合物，該組合物用于恢復體力。
23．權利要求1中的組合物，該組合物用于免疫增強、抗過敏、精神治療和/或強壯制劑中。
全文摘要
一種含有類黃酮和Pfaffia屬植物制備產物的組合物。該組合物可有效地保持和增強健康,治療和預防疾病,并具有免疫增強、抗過敏、精神治療和/或強壯活性。
文檔編號A61K36/70GK1212882SQ9811748
公開日1999年4月7日 申請日期1998年7月30日 優先權日1997年7月31日
發明者谷孝, 有尾武司, 福田惠溫 申請人:株式會社林原生物化學研究所