專利名稱：異類黃酮二聚物的制作方法
專利說明異類黃酮二聚物 發明領域 本發明一般涉及具有萘并[1，2-g]

骨架的新型二聚化合物。該化合物基于3-苯基色滿(異類黃酮)環系統的二聚化。本發明還涉及所述二聚異類黃酮化合物的合成、含有該化合物的組合物以及它們作為治療劑的用途。具體地說，本發明的二聚化合物可用于治療和預防許多重要的人類疾病，其中包括癌癥、炎性疾病、自身免疫性疾病、心血管疾病及與雌激素受體活化有關的疾病。

背景技術：
已知天然產生的植物異黃酮對人類細胞具有許多基礎生物效應，其中包括抗氧化以及上調和下調許多酶和信號轉導機制。阻止有絲分裂及對人類癌細胞的細胞毒性、提高毛細管滲透性、提高細胞粘附、增強血管平滑肌細胞對血管松弛藥的反應、以及雌激素受體的激動僅使動物細胞對天然產生的異類黃酮的生物效應的反應的一些例子。一些常見的天然產生的異黃酮有大豆黃酮、染料木黃酮、芒柄花黃素、雞豆黃素A、雞豆黃素、擬雌內酯、黃豆苷、glycitin和染料木苷。
最近感興趣的是異類黃酮二聚形式的生物特性。已經報道基于染料木黃酮的二聚物是5-α-還原酶抑制劑，可用于治療前列腺肥大[JP95-224944]。一種形式中，使染料木黃酮懸垂苯基3’位的一個C-C鍵結合到第二個染料木黃酮分子苯并吡喃環6位上結合得到的二聚物如下所示
按照它們的結合位置，這些二聚化合物通常可被稱為雙-(3’→6)-異黃酮。所描述的其它化合物基于具有相同類型環結構的染料木黃酮和/或大豆黃酮基二聚物。
另一種二聚物基于雙-(2→2)-異黃酮結構，但在兩個異黃酮分子之間有接頭，如下所示，但它沒有生物學活性或治療作用[Al-Maharik NI，Kaltia SAA，Mutikainen I和Wahala K，Synthesis of C-C-Bridged Bis-Isoflavones(C-C橋連的雙-異黃酮的合成)，J.Org.Chem.，2000，65，2305]。

最近發現另一類二聚異類黃酮化合物對兩種雌激素受體都具有強結合親和力，因此顯示出顯著的生理活性[WO02/070502]。其前導二聚化合物為基于脫氫牛尿酚(dehydroequol)的雙-(4→6)-異類黃酮化合物，如下所示
所有這些現有技術的二聚異類黃酮化合物都是通過一個碳碳鍵或通過接頭或橋接分子將兩個異類黃酮環結構結合在一起形成的。
盡管已經對異黃酮及其衍生物進行了大量研究并累積了知識，但還未充分了解異類黃酮化合物及其衍生物的治療作用。此外，仍舊需要新的、改進的或者至少是可替換的活性劑以治療、預防、改善、防御和/或防止各種疾病和異常。
因此需要具有對動物、尤其是人類的健康重要的生理特性的新一代化合物并找到利用這些特性以治療、改善和預防疾病的新方法。
發明概述 本發明人意外地首次合成了新的一類基于異類黃酮化合物的二聚分子，所述異類黃酮通過兩個(2)碳碳單鍵連接。其骨架基于將兩個3-苯基色滿環系統進行雙(4→4)和(2→3)連接而得到的萘并[1，2-g]

結構，如下面的通用結構A所示。虛線標識在相應單體的二聚化過程中形成的兩個C-C鍵。

結構A 結構A′ 為保持一致，本說明書中全篇使用上面用于2，11-二氧-12a-苯基-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(結構A′)的編號系統。
本發明的二聚分子有希望被用作生理活性劑，尤其，它們對雌激素受體顯示出結合親和力。細胞系研究還突出了本發明的二聚異類黃酮化合物作為化療劑的顯著且出乎意料的效用。還發現該化合物可用作化學治療增敏劑(chemosensitiser)、輻射敏化劑(radiosensitisator)、抗炎藥并具有心血管應用(包括血管舒張)。
因此，根據本發明的第一個方面，提供了一種通式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽
式中， R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8獨立為氫、羥基、OR9、OC(O)H、OC(O)R9、OSi(R10)3、C(O)R11、CO2R12、烷基、鹵代烷基、環烷基、芳基、芳基烷基、硫醇、烷硫基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硝基、氰基或鹵素， R9是烷基、鹵代烷基、芳基、芳基烷基或烷基芳基， R10獨立為氫、烷基或芳基， R11是氫、烷基、芳基、芳基烷基或氨基酸， R12是氫、烷基、鹵代烷基、芳基或芳基烷基，和 X是O、NR12或S，優選O， 該化合物可任選取代的。
根據本發明的第二個方面，提供了一種制備式(I)的化合物的方法，該方法包括使式(II)的化合物或其藥學上可接受的鹽與偶聯劑反應的步驟
式中， R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8獨立為氫、羥基、OR9、OC(O)H、OC(O)R9、OSi(R10)3、C(O)R11、CO2R12、烷基、鹵代烷基、環烷基、芳基、芳基烷基、硫醇、烷硫基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硝基、氰基或鹵素， R9是烷基，鹵代烷基、芳基、芳基烷基或烷基芳基， R10獨立為氫、烷基或芳基， R11是氫、烷基、芳基、芳基烷基或氨基酸， R12是氫、烷基、鹵代烷基、芳基或芳基烷基， R13是氫、R9、C(O)R9、Si(R10)3、烷基磺酰基或苯磺酰基，和 X是O、NR12或S，優選O， 該化合物可任選取代的。
在優選的實施方式中，3-苯基色滿結構的懸垂(pendent)苯環為電子供體，存在至少一個鄰位氫原子以便于在二聚化過程中形成(2’→3)鍵。
基團OR13優選為選自以下的離去基團鹵素如Cl、Br或I，羥基，烷基磺酰氧基如甲磺酸基和三氟甲烷磺酰氧基，芳基磺酰氧基如甲苯磺酸基、均三甲基苯磺酰氧基、苯磺酰氧基和硝基-取代的苯磺酰氧基，酰氧基如乙酰氧基或苯酰氧基和芳氧基如芐氧基。
根據本發明的第三個方面，提供了一種治療、預防或改善疾病的方法，該方法包括給予對象治療有效量的一種或多種式(I)的化合物的步驟。
根據本發明的第四個方面，提供了一種或多種式(I)的化合物在制造用于治療疾病的藥物中的應用。
根據本發明的第五個方面，提供了一種或多種式(I)的化合物作為抗炎藥、心血管藥、化療劑、化學治療增敏劑或輻射敏化劑(radiosensitiser)的應用。
所述炎性疾病包括炎性腸病、潰瘍性結腸炎、潰瘍性直腸炎、末端結腸炎和克羅恩病。該化合物也可用于治療與炎癥相關的疼痛。在優選的實施方式中，所述炎性疾病的治療無心血管副作用、是心臟保護性的和/或是腸道保護性的。
根據本發明的第六個方面，提供了血栓烷合酶抑制劑在制造用于治療炎癥、包括與炎癥相關的疼痛的藥物中的應用。優選所述治療是心臟保護性的和/或腸道保護性的。
根據本發明的第七個方面，提供了一種治療、預防或改善疾病的藥劑，該藥劑含有一種或多種式(I)的化合物。
在優選的實施方式中，所述疾病是癌癥、腫瘤或細胞生長的有害增殖或上調。
根據本發明的第八個方面，提供了一種藥物組合物，其包含一種或多種式(I)的化合物和一種或多種藥物載體和/或賦形劑。
根據本發明的第九個方面，提供了一種飲品或食品，其包含一種或多種式(I)的化合物。
根據本發明的第十個方面，提供了一種增強或恢復癌細胞或腫瘤對化療的敏感性的方法，該方法包括使所述細胞或腫瘤接觸式(I)的異類黃酮二聚物。在一實施方式中，所述化療劑是生長受體抑制劑或死亡受體刺激劑。
根據本發明的第十一個、第十個方面，提供了一種增強或恢復癌細胞或腫瘤對放療的敏感性的方法，該方法包括使所述細胞或腫瘤接觸如下所示的式(I)的異類黃酮化合物。在另一個實施方式中，所述患者的治療方案同時包括化療和放療。
根據本發明的第十二個方面，提供了一種保護非腫瘤細胞免于化療或放療、優選化療的方法，該方法包括使非腫瘤細胞或腫瘤體接觸式(I)的異類黃酮二聚物。
在本說明書和之后的權利要求中，除非文中另有說明，詞語“包含”及其變化形式如“包括”或“含有”將被理解為是指包含所述整數或步驟或者一組整數或步驟，但不排除任何其它整數或步驟或者一組整數或步驟。
附圖簡述

圖1顯示了化合物1對與LPS一起培育的人單核細胞中PGE2合成的作用。
圖2顯示了化合物2對與LPS一起培育的人單核細胞中PGE2合成的作用。
圖3顯示了化合物1對與LPS一起培育的人單核細胞中TXB2合成的作用。
圖4顯示了化合物2對與LPS一起培育的人單核細胞中TXB2合成的作用。
圖5顯示了化合物1對與LPS一起培育的人單核細胞中TNFα合成的作用。
圖6顯示了化合物1對與LPS一起培育的人單核細胞中TNFα合成的作用。
圖7顯示了化合物1在用LPS刺激的鼠巨噬細胞(RAW 264.7)中的活性。
圖8顯示了化合物2在用LPS刺激的鼠巨噬細胞(RAW 264.7)中的活性。
圖9顯示了化合物2對去甲腎上腺素誘導的主動脈收縮的影響。
圖10顯示了化合物2和吉西他濱對HPAC(胰腺)細胞的協同作用。圖A描繪了化合物2和吉西他濱的組合，而B和C分別為24小時正序(先化合物2)和反序(先吉西他濱)。
圖11顯示了以正序(A)和反序(B)依次以化合物2(以5μM和10μM)和9倍連續稀釋的吉西他濱治療的HT-29(結腸直腸)細胞。
圖12顯示了化合物2(以1μM和2μM)和紫杉醇對HT-29(結腸直腸)細胞的協同作用。圖A描繪了化合物2和紫杉醇的組合，而B和C分別為24小時正序(先化合物2)和反序(先紫杉醇)。
圖13顯示了化合物2(以1μM和2μM)和紫杉醇對HCT-15(結腸直腸)細胞的協同作用。圖A描繪了化合物2和紫杉醇的組合，而B和C分別為24小時正序(先化合物2)和反序(先紫杉醇)。
圖14顯示了化合物2(以1μM和2μM)和阿霉素(Doxirubicin)對HT-29(結腸直腸)細胞的協同作用。圖A描繪了化合物2和阿霉素的組合，而B和C分別為24小時正序(先化合物2)和反序(先阿霉素)。
圖15顯示了化合物2(以1μM和2μM)和阿霉素對HCT-15(結腸直腸)細胞的協同作用。圖A描繪了化合物2和阿霉素的組合，而B和C分別為24小時正序(先化合物2)和反序(先阿霉素)。
圖16顯示了化合物1(以10μM)對于抑制T細胞增殖的作用。
圖17顯示了化合物1和化合物2(都以10μM)在預培育24小時后對于抑制T細胞增殖的作用。
圖18比較了腹膜內(i/p)給予化合物2(以50mg/kg/天)或載體后的體重變化。
發明詳述 本發明人已經發現通式(I)的一類異類黃酮二聚物顯示出驚人且出乎意料的生物和藥物特性。
據信，本發明的式(I)的化合物對正常細胞具有良好的毒性特征，并具有良好的生物利用度。令人驚訝的是，本發明的化合物顯示出比已知的癌癥療法明顯優秀或者至少可比的抗癌活性。
式(I)的化合物是許多人或動物來源的癌細胞的細胞抑制劑和細胞毒劑。癌細胞是指顯示出惡性特征并可通過不受調節的生長和行為與非癌細胞區分開、且除非成功治愈通常最終威脅生命的細胞。
發現能對式(I)的化合物起反應的癌細胞是上皮來源(例如，前列腺、卵巢、子宮頸、乳腺、膽囊、胰腺、結腸直腸、腎臟和非小細胞肺癌細胞)，間充質來源(例如，黑色素瘤、間皮瘤和肉瘤癌細胞)和神經來源(例如，神經膠質瘤癌細胞)。發現一組相關化合物對癌細胞顯示如此強的細胞毒性，但對非癌細胞(例如，源自人包皮的成纖維細胞)毒性低是極其罕見且令人吃驚的。這種癌細胞選擇性極其罕見且出乎意料。
式(I)的化合物的優點是對標準抗癌藥物不靈敏的熟知癌細胞顯示有細胞毒性。發現對白血病有如此強的活性極其罕見且出乎意料。
本發明還提供了式(I)的化合物通過降低腫瘤的生長速率或減小所述腫瘤大小來治療癌癥患者的應用，所述治療可單用所述化合物，和/或彼此聯用，和/或聯用其它抗癌癥藥物，和/或聯用放療進行治療。
單用本發明化合物或在上述聯合治療中使用可降低標準抗癌癥治療時患者通常經歷的不良副作用。利用本發明化合物可能意味著在這種治療中可利用較低劑量，對于癌癥患者這代表了重要進步。
本發明的二聚分子在結構上與單體異類黃酮化合物及其衍生物相關。術語“異黃酮”或“異類黃酮”在文中應作廣義理解，包括具有吡喃環3位的懸垂苯基的環稠合的色滿或苯并吡喃分子。因此，通常被稱為異黃酮、異黃烯(isoflavene)、異黃烷(isoflavan)、異黃烷酮(isoflavanone)、異黃烷醇(isoflavanol)等的多類化合物在文中一般被稱為異黃酮、異黃酮衍生物或異類黃酮。
本發明的二聚分子包含兩個連接兩個單體的碳-碳鍵。兩個異類黃酮單體吡喃環的4-位通過一個碳-碳鍵直接相連。而第二個鍵將一個單體的懸垂3-苯基的2’-位#與第二個異類黃酮單體吡喃環的3-位相連。這就是說，本發明的方法簡單且直接地提供了如上述通用結構A所示的獨特的12a-苯基萘并[1，2-g]

環系統。
#根據懸垂苯基的取代式樣，2’-位叫做6，-位也是正確的。
優選的本發明的二聚分子由通式(Ia)所示
式中， R1是氫或C1-6-烷基， R2、R3和R4獨立為氫、羥基、OR9、OC(O)R9、OSi(R10)3、C1-6-烷基、芳基、芳基-C1-6-烷基或鹵素， R5、R6、R7和R8獨立為氫、羥基、OR9、OC(O)R9、OSi(R10)3、C1-6-烷基、芳基、芳基-C1-6-烷基或鹵素， R9是C1-6-烷基，氟-C1-6-烷基或芳基-C1-6-烷基，和 R10獨立為C1-6-烷基； 或其藥學上可接受的鹽。
更優選地，它們具有以下取代基，其中 R1是氫， R2、R3和R4獨立為氫、羥基、OR9、OC(O)R9、OSi(R10)3、C1-4-烷基或鹵素， R5、R6、R7和R8獨立為氫、羥基、OR9、OC(O)R9、OSi(R10)3、C1-4-烷基或鹵素， R9是C1-4-烷基或芳基-C1-4-烷基，和 R10獨立為甲基、乙基或叔丁基， 再優選地，它們具有以下取代基，其中 R1是氫， R2、R3和R4獨立為氫、羥基、OR9、OC(O)R9、甲基、乙基或溴， R5、R6、R7和R8獨立為氫、羥基、OR9、OC(O)R9、甲基、乙基或溴，和 R9是甲基、乙基、丙基、異丙基或芐基， 或其藥學上可接受的鹽。
更加高度優選的本發明的二聚分子由通式(Ib)所示
式中， R2、R3、R5和R8獨立為氫、羥基、OR9、OC(O)R9、OSi(R10)3、甲基、乙基、丙基、異丙基、仲丁基、叔丁基、苯基或芐基， R4和R7獨立為氫、羥基、OR9、OC(O)R9或OSi(R10)3， R6是氫、羥基、OR9、OC(O)R9或OSi(R10)3， R9是甲基、乙基、丙基、異丙基、仲丁基、叔丁基、苯基或芐基，和 R10獨立為甲基、乙基或叔丁基。
最優選地，它們具有以下取代基，其中 R2、R3、R5和R8獨立為氫、羥基、OR9、OC(O)R9或甲基， R4和R7獨立為羥基、OR9或OC(O)R9， R6是氫， R8是氫、羥基、OR9、OC(O)R9或甲基，和 R9是甲基或芐基。
再優選地，R4是甲氧基；R3和R4是甲氧基；和/或R8是甲基。
最優選地，式I的新型二聚化合物是 4，9-二羥基-14，15-二甲氧基-12a-(3’，4’-二甲氧基苯基)-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(1) 4，9-二乙酰氧基-14，15-二甲氧基-12a-(3’，4’-二甲氧基苯基)-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(1-Ac) 4，9-二羥基-14，15-二甲氧基-12a-(3’，4’-二甲氧基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(2) 4，9-二乙酰氧基-14，15-二甲氧基-12a-(3’，4’-二甲氧基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(2-Ac) 化合物1和2及其乙酰氧基衍生物1-Ac和2-Ac用以下結構式表示
其它優選的化合物可用類似的起始物質通過相同方法制備。數據與所得產物一致。這些化合物的命名如下 4，9-二羥基-14-甲氧基-12a-(4’-甲氧基苯基)-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(3) 4，9-二乙酰氧基-14-甲氧基-12a-(4’-甲氧基苯基)-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(3-Ac) 4，9-二羥基-14-甲氧基-12a-(4’-甲氧基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(4) 4，9-二乙酰氧基-14-甲氧基-12a-(4’-甲氧基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(4-Ac) 4，9，14-三羥基-12a-(4’-羥基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(5) 4，9，14-三乙酰氧基-12a-(4’-乙酰氧基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(5-Ac) 4，9-二羥基-15-甲氧基-12a-(3’-甲氧基苯基)-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(6) 4，9-二乙酰氧基-15-甲氧基-12a-(3’-甲氧基苯基)-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(6-Ac) 4，9，15-三羥基-12a-(3’-羥基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(7) 4，9，15-三乙酰氧基-12a-(3’-乙酰氧基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(7-Ac) 術語“烷基”應包括直鏈或支鏈烷基，如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基等。所述烷基具有1-10個碳原子，優選1-6個碳原子，更優選1-4個碳原子，再優選為甲基、乙基、丙基、異丙基或叔丁基。所述烷基可任選被以下基團中的一個或多個取代氟、氯、溴、碘、羧基、C1-C4-烷氧基羰基、C1-C4-烷基氨基-羰基、二-(C1-C4-烷基)-氨基-羰基、羥基、C1-C4-烷氧基、甲酰氧基、C1-C4-烷基-羰氧基、C1-C4-烷硫基、C3-C6-環烷基或苯基。
術語“芳基”應包括苯基和萘基，并可任選被以下基團中的一個或多個取代C1-C4-烷基、羥基、C1-C4-烷氧基、羧基、C1-C4-烷氧基羰基、C1-C4-烷基羰氧基或鹵素。
術語“鹵素”應包括氟、氯、溴和碘，優選氟、氯和溴，更優選氟。例如，提及“鹵代烷基”時包括包括一鹵代、二鹵代與最多至全鹵代的烷基。優選的鹵代烷基是三氟甲基和五氟乙基。
本發明化合物包括所有的鹽，例如酸加成鹽、陰離子鹽和兩性離子鹽，特別包括本領域技術人員已知的藥學上可接受的鹽。術語“藥學上可接受的鹽”指帶電荷并能與藥學制劑聯合給予(例如作為鹽的抗衡陽離子或抗衡陰離子)的有機或無機部分。本領域技術人員已知藥學上可接受的陽離子，其包括但不限于鈉、鉀、鈣、鋅和季胺。本領域技術人員已知藥學上可接受的陰離子，其包括但不限于氯離子、乙酸根、甲苯磺酸根、檸檬酸根、碳酸氫根和碳酸根。
藥學上可接受的鹽包括從以下酸形成的鹽乙酸、抗壞血酸、天冬氨酸、苯甲酸、苯磺酸、檸檬酸、肉桂酸、乙磺酸、延胡索酸、谷氨酸、戊二酸、葡糖酸、鹽酸、氫溴酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、甲磺酸、萘甲酸、羥基萘甲酸、萘磺酸、萘二磺酸、萘丙烯酸、油酸、草酸、草酰乙酸、磷酸、丙酮酸、對甲苯磺酸、酒石酸、三氟乙酸、三苯乙酸、丙三羧酸、水楊酸、硫酸、氨基磺酸、磺胺酸和琥珀酸。
術語“藥學上可接受的衍生物”或“前藥”指給予受者后能直接或間接提供母體化合物或代謝物，或能顯示其自身活性的活性化合物衍生物，包括例如磷酸衍生物和磺酸衍生物。因此，衍生物包括溶劑化物、藥學上的活性酯、前藥等。也包括在生理條件下可分離的離去基團的衍生物，所述離去基團是可在體內分離而提供本發明化合物或它們的活性部分。離去基團可包括酰基、磷酸酯(基團)、硫酸酯(基團)、磺酸酯(基團)，優選單、二和全酰氧基取代的化合物，其中一個或多個垂(pendant)羥基受酰基，優選乙酰基的保護。本發明的酰氧基取代化合物通常容易切斷為相應的羥基取代化合物。
本發明的異類黃酮二聚物的合成通常從通式(II)的單體異黃烷-4-醇開始
通過本領域已知的標準方法不難獲得這些起始異黃烷-4-醇或其衍生物。公開的國際專利申請WO98/08503、WO00/49009和WO01/17986(都屬于Novogen Research PtyLtd)及其中引用的參考資料(這些文獻均全文納入本文作為參考)也提供了制備作為起始單體的異黃酮、異黃烷-4-醇和有關異類黃酮化合物的有用的合成方法。一種代表性的一般合成方法示于下面的方案1。

方案1 通過選擇相應取代的R5-R8-苯酚和R2-R4-苯乙酸起始材料，可在異黃烷-4-醇的苯并吡喃環和懸垂苯環周圍產生各種取代模式。如精通本領域的技術人員的了解，該環的環化反應可用R1-取代的甲磺酰氯反應物方便地進行。還原反應在存在氫時在醇溶劑中由Pd-C或Pd-氧化鋁進行。精通本領域的技術人員將了解，采用其它標準烷基化、環化、氫化和/或還原方法也是合適的。
異黃烷-4-醇單體是合成本發明的二聚分子的便捷的起始材料。產生萘并[1，2-g]

衍生物的二聚化反應可在存在偶聯劑/脫水劑時方便地進行。典型的一般合成方法示于下面的方案2。

方案2 不希望局限于理論，我們認為該反應通過形成富含電子的烯烴(異黃-3-烯)而進行，該烯烴可使第二單體色滿環4-位上的芐基-穩定的碳陽離子失去活性。認為重排可激活該第二色滿環3-位的第二個碳陽離子，然后可通過富含電子的懸垂苯基的2’(或6’)位使其失去活性。進一步重排后得到了本發明的二聚異類黃酮化合物。富含電子的苯基優選為具有一個或多個供電子基團的4-或2-取代的、2，4-或3，4-二取代的或2，3，4-或3，4，5-三取代的苯基。更優選3，4-二取代的富含電子的化合物。
在優選的實施方式中，所選擇的偶聯劑為五氧化二磷，但熟練的技術人員將理解，采用其它方法和試劑也是合適的。這種其它適當合成方法包括偶聯兩個異類黃酮的Friedel-Crafts烷基化。典型的Friedel-Crafts反應條件是用諸如氯化銨、三氟化硼或類似的Lewis酸催化劑等試劑獲得的。偶聯反應不限于Friedel-Crafts類型的條件，還可包括能產生“碳陽離子”種類的其它反應條件，如將仲醇轉化成亞膦酸酯或類似的容易得到的離去基團。氧化偶聯反應條件如過氧化氫、稀高錳酸鹽、上述五氧化二磷或其它氧化物也可用于合成本發明的二聚分子。
二聚反應可在非常低的溫度至室溫進行，但通常發現較低的反應溫度能得到較好的產率和較干凈的反應混合物。反應通常在-78℃通過丙酮/干冰浴進行。
適用于本發明方法的溶劑優選在非常低的溫度下為液體，包括低氯化的溶劑、THF和乙腈。所選溶劑為二氯甲烷。已發現高底物溶劑比是優選的，且為便于進行雙分子脫水/環化反應，最佳DCM∶底物比約為4∶1。
為幫助合成本發明的化合物及其起始材料，適當時也可采用精通本領域的技術人員已知的化學官能團的保護、去保護、合成子和其它技術。
本發明的化合物和衍生物上官能團的保護可由本領域已經熟知的方法進行，例如T.W.Greene，Protective Groups in Organic Synthesis(有機合成保護基)，John Wiley&Sons，紐約，1981中描述的方法。
羥基保護基團包括但不限于羧酸酯，例如乙酸酯；芳酯，例如苯甲酸酯；縮醛/縮酮，例如丙酮化合物和亞芐基；醚，例如鄰-芐基和對-甲氧基芐基醚；四氫吡喃醚和甲硅烷基醚，例如叔丁基二甲基甲硅烷基醚。
可通過，例如酸或堿催化水解或還原，如氫化來除去保護基團。甲硅烷基醚可能需要氟化氫或氟化四丁銨來斷裂。甲氧基的去甲基化可提供羥基-取代的化合物。
認為優選的起始異黃烷-4-醇單體需要異類黃酮3-苯基上的富含電子的取代基以形成本發明的2-碳鍵二聚物。例如，發現羥基(任選保護的)和烷氧基多取代的3-苯基衍生物特別優選。
本發明人還意外發現，本發明的二聚分子代表了一類在治療和預防許多重要人類疾病中具有實際藥物前景的新化合物，所述疾病包括癌癥、炎性疾病、自身免疫性疾病、心血管疾病和與雌激素受體活化有關的疾病。
具體地說，本發明的二聚化合物能夠強烈抑制癌細胞增殖并誘導凋亡，因此可用于預防和治療癌癥，任何精通本領域的技術人員都應理解，癌癥這一術語包括上皮、間充質和神經類型的體內任何或所有組織的良性和惡性特征的異常生長。其包括但不限于癌、腺癌、肉瘤、母細胞瘤、腺瘤、淋巴瘤、白血病和膠質瘤。
具體地說，本發明的二聚化合物能夠作為h-ERβ激動劑，因此能夠提供雌性支持，尤其是對于圍絕經期和絕經期的婦女，并可防止和治療通常表現為甾類雌激素急性減少的問題，如血管舒縮癥狀(熱潮紅和盜汗)和情緒癥狀(焦慮、抑郁、心境不穩)，通常表現為甾類雌激素亞急性減少的問題，如遺尿和膀胱脫垂，以及通常表現為甾類雌激素慢性減少的問題，如骨病和骨質疏松和認知障礙。
具體地說，本發明的二聚化合物能夠作為h-ERα拮抗劑，因此能夠預防或治療絕經前婦女的一些癥狀，通常認為這些癥狀與h-ERα受體的過度刺激有關并導致諸如周期性乳腺痛、子宮內膜異位、子宮內膜增生、子宮平滑肌瘤、多囊卵巢病和月經前期綜合征等癥狀。
具體地說，本發明的二聚化合物能夠誘導血管舒張和減少血管痙攣，因此可用于治療和預防通常認為與有原因的或間接的血管升壓有關的疾病，其中包括但不限于高血壓和偏頭痛。
具體地說，本發明的二聚化合物能夠抑制炎癥過程和緩解免疫過程，因此可用于預防和治療通常認為與嚴重的炎癥或免疫功能障礙有關的疾病，其中包括但不限于胃腸道的炎性癥狀包括炎性腸病(包括潰瘍性結腸炎和克羅恩病)、硬化性膽管炎，滑膜的炎性疾病包括類風濕性關節炎，呼吸系統的炎性癥狀包括哮喘，以及自身免疫性疾病包括腎小球腎炎。本發明的化合物也可用于治療與炎癥相關的疼痛。重要的是，該化合物是心臟保護性的和/或腸道保護性的，這可能是由于它們可作為選擇性的血栓烷合成抑制劑。
具體地說，本發明的二聚化合物能夠抑制雄核發育，因此可用于預防和治療通常認為與雄激素功能異常有關(有原因的或間接的)的癥狀，其中包括但不限于男性型禿發(遺傳性脫發)和前列腺瘤。
令人吃驚的是，本發明的異類黃酮(isoflavanoid)二聚化合物還能夠以各種不同作用模式增強癌細胞對許多抗癌治療(包括化療和放療)的敏感性。還發現本發明的化合物能夠恢復已經對那些藥劑和治療方法產生耐性的細胞對那些相同藥劑的敏感性。
在優選的實施方式中，在對癌癥患者進行放療或用第二種化療劑治療之前已經用式(I)的化合物處理過。然而，預計可以任何順序給予式(I)的化合物和給予放療或第二化療劑或者這兩者。
在進一步的實施方式中，在癌癥患者中觀察到對放療的固有抗性或獲得的抗性之后才給予式(I)的化合物。
在進一步的實施方式中，在癌癥患者中觀察到對化療劑的固有抗性或獲得的抗性之后才給予式(I)的化合物。
根據另一方面，提供了一種組合療法，其包括給予接受放療或打算接受放療的對象治療有效量的式(I)的化合物。給藥可依次或同時進行，或者在對象已經產生輻射抗性之后進行。
根據另一方面，提供了一種組合療法，包括給予對象治療有效量的式(I)的化合物和化療劑。給藥可依次或同時進行，或在對象已經產生化學抗性之后進行。
在優選的實施方式中，要治療的癥狀優選為顯示出惡性特征的癌癥，但也包括癌癥的早期階段如惡性前損傷(例如非典型、發育異常、表皮內瘤形成)和良性癌癥。
術語“放療”或“放射療法”應作廣義理解，包括用影響癌細胞、腫瘤或相關機制和生物過程的顆粒活化能量波進行處理或治療的方法。具體地說，放療是一種高能波或顆粒，如用于放療的X射線、電子、γ射線或質子。最優選地，所述波或顆粒是X射線。
術語“化療劑”應作廣義理解，包括影響癌細胞、腫瘤或相關機制和生物過程的所有藥物、化學物質、化合物、組合物、藥劑、藥物、聚合物、肽、蛋白質等。
本發明的二聚異類黃酮代表一類新的預防和治療癌癥的化學治療藥物。這些化合物藥理學作用的確切基礎還未完全弄懂，但結果是造成細胞郁滯和細胞毒性。對這類化合物特別感興趣的是它們對人類和動物的癌癥具有廣譜活性，且它們對癌細胞具有高度選擇性。
已知二聚異類黃酮是有效的抗癌劑，且意外發現它們與化學療法如順鉑和吉西他濱發生協同作用，盡管這兩種標準化學毒性藥物在細胞內具有非常獨特的抗癌效果。
更意外的是，本發明人發現，異黃酮或衍生物能增強或恢復癌細胞或腫瘤對放療作用的敏感性。
治療方案可包括單次處理或經歷數周的一系列處理(稱為部分)。例如，分次治療通常在周一到周五每天給予一次，在例如周末中斷以幫助正常細胞恢復。實際的治療方案在極大程度上取決于要治療的癌癥類型和要采用的放療類型。精通本領域的技術人員通過考慮包括患者的健康、疾病的進展和癌癥類型在內的各種因素可最好地確定最適合各個患者的方案。
在優選的實施方式中，異黃酮或其衍生物在放療之前給予。這種預處理的效果是使癌細胞或腫瘤對放療的影響敏感。異類黃酮預處理應恰在放療之前開始和/或在放療之間開始，以影響靶細胞抵抗放射的能力。在大多數優選的實施方式中，預處理要持續一段時間并使癌細胞或腫瘤足以接觸給予的異類黃酮。這段時間可能通常為7天，或者14天，或者至多達30天。在另一個優選的實施方式中，異類黃酮處理在放療6天前進行，或者放療5天、或3天、或2天或1天前進行。
在其它情況下，在放療當天給予異類黃酮是有益的，由于異類黃酮可除去凋亡阻斷劑或提高降解率，因此仍舊對細胞死亡有貢獻。
當治療包括分次治療時，可在第一次治療或者僅在一些輻射治療或每次輻射治療之前的規定時間給予異類黃酮。
在另一個優選的實施方式中，發現給予異類黃酮可恢復或者至少解決在放療之后可能發生的敏感性問題。這種情況下，在另一個優選的實施方式中，異類黃酮是在輻射治療后給予的。
化療劑通常可分為DNA相互作用劑，抗代謝物，微管蛋白相互作用劑，激素試劑，其它試劑如天冬酰胺酶或羥基脲。各組治療劑還可根據活性類型或化合物類型進一步劃分。與本發明的式(I)的異類黃酮化合物或其鹽組合使用的化療劑可選自這些組中的任何一組，但不限于此。有關化療劑及其施用方法的詳細討論可參見Dorr等，Cancer Chemotherapy Handbook(癌癥化療手冊)，第二版，第15-34頁，Appletonand Lang(Connecticut，1994)，其被納入本文作為參考。
DNA相互作用劑包括烷基化劑，例如順鉑、環磷酰胺、六甲密胺；DNA鏈斷裂劑斷裂劑，如博來霉素；嵌入拓撲異構酶II抑制劑，如放線菌素D和阿霉素；非嵌入拓撲異構酶II抑制劑，如依托泊甙和替尼泊甙；以及DNA小溝結合劑，如普卡霉素(plicamydin)。
烷基化劑與細胞的DNA、RNA或蛋白質分子或與較小的氨基酸、谷胱甘肽或類似化學物質形成共價化學加合物。通常，烷基化劑與細胞組分中的親核原子如核酸、蛋白質、氨基酸或谷胱甘肽中的氨基、羧基、磷酸酯基或巰基反應。這些烷基化劑在癌癥中的機制和作用還不十分清楚。
典型的烷基化劑包括，但不限于氮芥類如苯丁酸氮芥、環磷酰胺、異環磷酰胺(isofamide)、雙氯乙基甲胺、美法侖、尿嘧啶氮芥；氮丙啶如塞替派；甲磺酸酯類如白消安；亞硝基脲類如卡莫司汀、洛莫司汀、鏈佐星；鉑復合物如順鉑、卡鉑；生物還原烷化劑如絲裂霉素、丙卡巴肼、達卡巴嗪和六甲蜜胺。
DNA鏈斷裂劑包括，例如，博來霉素。
DNA拓撲異構酶II抑制劑包括，例如，以下嵌入劑，如安吖啶、放線菌素D、柔紅霉素、阿霉素(adriamycin)、伊達比星和米托蒽醌；非嵌入劑，如依托泊甙和替尼泊甙。
DNA小溝結合劑是，例如，普卡霉素。
抗代謝物以一種或兩種主要機制干擾核酸的產生。某些藥物可抑制DNA合成的直接前體脫氧核苷三磷酸的產生，因此能抑制DNA復制。某些化合物是嘌呤或嘧啶的類似物并參與核苷酸合成代謝途徑。這些類似物然后可代替它們的正常對應物取代入DNA或RNA。
這里所用的抗代謝物包括，但不限于葉酸拮抗劑如氨甲喋呤和三甲曲沙；嘧啶拮抗劑如氟尿嘧啶、氟尿嘧啶脫氧核苷、CB3717、氮雜胞苷、阿糖胞苷和氟尿苷；嘌呤拮抗劑包括巰嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、氟達拉濱、噴司他丁；以及核糖核苷酸還原酶抑制劑包括羥基脲。
微管蛋白相互作用劑通過結合微管蛋白上的特定位點而發揮作用，微管蛋白是一種可聚合形成細胞微管的蛋白質。微管是關鍵的細胞結構單元。當相互作用劑結合該蛋白質時，細胞便不能形成微管。微管蛋白相互作用劑包括例如兩種生物堿長春新堿和長春花堿以及紫杉醇(紫杉酚)。
激素試劑也可用于治療癌癥和腫瘤。它們可用于激素敏感性腫瘤且它們通常來自天然來源。激素試劑包括但不限于雌激素、偶聯雌激素和乙炔雌二醇及己烯雌酚(diethylstilbesterol)、chlortrianisen和idenestrol；孕酮如己酸羥孕酮、甲羥孕酮和甲地孕酮；以及雄激素如睪酮、丙酸睪酮；氟甲睪酮和甲睪酮。
腎上腺皮質類固醇衍生自天然腎上腺氫化可的松或氫化可的松。由于它們具有抗炎功效并能夠在一定程度上抑制有絲分裂和停止DNA合成，因此是有用的。這些化合物包括但不限于強的松、地塞米松、甲潑尼龍和潑尼松龍。
黃體化激素釋放激素藥或促性腺激素釋放激素拮抗劑主要用于治療前列腺癌。它們包括醋酸亮丙瑞林和醋酸性瑞林。它們能阻止睪丸內類固醇的生物合成。
抗激素藥包括，例如，抗雌激素藥如他莫昔芬，抗雄激素藥如氟他胺；以及抗腎上腺素藥如米托坦和氨魯米特。
其它藥劑包括以下這些羥基脲，它似乎主要通過抑制核糖核苷酸還原酶而發揮作用，以及天冬酰胺酶，這是一種將天冬酰胺轉化成沒有功能的天冬氨酸而阻斷腫瘤中蛋白質合成的酶。
優選的化療劑是順鉑、卡鉑、紫杉酚(紫杉醇)、氟尿嘧啶、氟尿苷(fluxuridine)、環磷酰胺、異環磷酰胺、六甲蜜胺、雌氮芥、絲裂霉素和泰索帝。
根據本發明進行治療性處理所需的一種或多種式I的化合物的量將取決于多種因素，其中包括具體應用、所用具體化合物的性質、要治療的癥狀、給藥模式以及患者的癥狀。可以常規實施的方式和用量給予式I的化合物。參見，例如Goodman和Gilman，The Pharmacological Basis of Therapeutics(治療學的藥理學基礎)，第七版，(1985)。所用的具體劑量取決于所治療的病癥、對象的狀態、給藥途徑和上述其它熟知的因素。總之，每位患者的日劑量可以是0.1mg-2g；通常是0.5mg-1g；優選20mg-200mg。
一般通過混合本發明化合物(為方便起見下文稱為“活性化合物”)與本領域熟知的一種或多種藥學上或獸醫學上可接受的載體和/或賦形劑來制備用于治療本文所述治療性適應癥的藥物組合物。
當然，就與制劑中的任何其它成分相容而言，載體必須是可接受的，并且必須對對象無害。載體或賦形劑可以是固體或液體，或(同時是)二者，優選與化合物配制為單位劑量，例如片劑可含有0.5-59總量％的活性化合物，或者多達100總量％的活性化合物。可將一種或多種活性化合物摻入通過任何熟知的藥學技術制備的本發明制劑中，所述技術一般包括混合諸組分(任選包含一種或多種輔助成分)構成。
本發明制劑包括適合于口服、直腸、經眼、含服(例如，舌下)、胃腸外(例如，皮下、肌肉內、真皮內或靜脈內)、透皮給藥(包括經鼻、口、陰道或直腸粘膜給藥)以及作為吸入劑的那些制劑，雖然在任何給定的情況中最合適的途徑取決于所治療疾病的性質和嚴重性以及所用具體活性化合物的性質。
適合于口服給藥的制劑可以離散單位存在，例如各含有預定含量活性化合物的膠囊、囊劑、糖錠或片劑；粉末或粒劑；水性或非水性液體配制的溶液或懸浮液；水包油或油包水乳劑。可采用任何合適的藥學方法制備這種制劑，所述方法包括混合活性化合物與合適的載體(可含有一種或多種上述輔助成分)。一般可通過均勻且緊密混合活性化合物與液體或細分級的固體載體(或二者)，然后(如果需要)使得到的混合物成形，例如形成單位劑量來制備本發明制劑。例如，可通過壓縮或模塑含有活性化合物與(任選)一種或多種其它成分的粉末或顆粒來制成片劑。可利用合適的機器壓縮自由流動的化合物，例如任選與黏合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑和/或表面活性/分散劑混合的粉末或顆粒來制成壓縮片劑。可利用合適的機器模塑用惰性液體黏合劑潤濕的粉末狀化合物來制成模塑片劑。
適合于含服(舌下)給藥的制劑包括含有用調味基(通常是蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠)配制的活性化合物的糖錠；和含有惰性基(例如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠)配制的化合物的軟錠劑。
適合于胃腸外給藥的本發明組合物可方便地含有活性化合物的無菌水性制品，所述制品宜與所需受者的血液等滲。這些制品優選靜脈內給予，雖然也可通過皮下、肌肉內或真皮內注射給予。通過混合所述化合物與水或甘氨酸緩沖液并使得到的溶液無菌并且與血液等滲不難制備這種制品。本發明的可注射制品通常含有0.1％-60％w/v的活性化合物，以0.1毫升/分鐘/千克的速率給予。
適合于直腸給藥的制劑優選以單位劑量栓劑存在。適合于陰道給藥的制劑優選以單位劑量陰道栓劑存在。可通過混合活性化合物與一種或多種常規固體載體，例如可可脂，然后使得到的混合物成形來制備這些制劑。
適合于局部給予皮膚的制劑或組合物宜采取軟膏、乳膏、洗劑、糊劑、凝膠、噴劑、氣溶膠或油的形式。可用的載體包括凡士林(Vasoline)、羊毛脂、聚乙二醇、醇類或其兩種或更多種的組合。活性化合物的濃度通常是0.1％-5％w/w，更具體地說是0.5％-2％w/w。這種組合物的實例包括化妝品護膚乳膏。
適合于透皮給藥的制劑可以離散的貼劑存在，所述貼劑適應于長期與受者表皮緊密接觸。對于所述活性化合物，這種貼劑含有的活性化合物宜是例如，0.1M-0.2M濃度的任選緩沖的水溶液。
適合于透皮給藥的制劑也可通過離子電滲遞送(參見，例如Panchagnula R等，2000)，其通常采取活性化合物的任選緩沖水溶液形式。合適的制劑包含檸檬酸或Bis/Tris緩沖液(pH6)或乙醇/水并含有0.1M-0.2M活性成分。
適合于吸入的制劑可作為溶液、懸浮液或乳液形式的噴劑組合物遞送。吸入噴劑組合物還可含有藥學上可接受的推進劑，例如二氧化碳或一氧化二氮。
本發明的組合物可以膳食補充品的形式給予人類。例如，可在制造食品時將所述組合物加入、混合入、涂布于、組合或以其它方式加入食物中以制備含有活性物質的膳食補充品。可采用任何食品，其中包括但不限于肉類如研磨肉類、乳化肉類和腌漬肉類；飲料如營養飲料、運動飲料、蛋白質強化飲料、果汁、牛奶、牛奶替代品以及減肥飲料；奶酪如干酪和軟質奶酪、奶油奶酪以及鄉村奶酪；冷凍甜品如冰淇淋、冰牛奶、低脂冷凍甜品和非乳冷凍甜品；酸奶；湯；布丁；烘焙產品；色拉調味料；以及蘸料和涂抹料如蛋黃醬、人造黃油、黃油、替代黃油和其它含有脂肪的涂抹料。選擇加入食品中的組合物的量可將所需劑量的組合物提供給食品消費者。按照標準操作不難制備含有本發明化合物的食物制品。
可給予人或其它動物這些治療方法、應用和組合物，包括哺乳動物，例如陪伴和家養動物(如狗和貓)、鳥類(如雞、火雞、鴨)、家畜(如，牛、綿羊、豬和山羊)等。
本文所用的術語“治療”可認為是其最廣的范圍。具體地說，術語“治療”不一定意味著治療某動物直至康復。因此，“治療”包括緩解某具體病癥的癥狀或嚴重性或防止或降低患某具體病癥的風險。
“藥學上可接受的載體、賦形劑、佐劑和/或稀釋劑”在文中應理解為包括任何可用于制備藥物組合物的載體、賦形劑、佐劑或稀釋劑。這種載體、賦形劑、佐劑或稀釋劑將通常是安全無毒的，且在生物學上或其它方面是不需要的。該術語還包括在獸醫應用以及人類藥物應用中可接受的載體、賦形劑、佐劑或稀釋劑。術語“藥學上可接受的載體、賦形劑、佐劑和/或稀釋劑”在文中包括一種或多種這種物質。
活性化合物或其藥學上可接受的衍生物、前藥或鹽也可與不影響所需作用的其它活性物質，或與能增加所需作用的物質，例如抗生素、抗真菌劑、抗炎藥或抗病毒化合物共同給予。所述活性藥物可包含兩種或多種異黃酮或其衍生物的組合或協同混合物。活性化合物也可與降脂藥，例如丙丁酚和煙酸；血小板凝集抑制劑，如阿司匹林；抗血栓藥物，例如酮芐香豆素；鈣通道阻斷劑，例如異搏定、地爾硫和硝苯吡啶；血管緊張肽轉化酶(ACE)抑制劑，例如開搏通和依那普利；和β-阻斷劑，例如心得胺、特布他林和拉貝洛爾聯合給予。這些化合物也可與非類固醇抗炎藥，例如布洛芬、吲哚美辛、阿司匹林、非諾洛芬、甲滅酸、氟滅酸和亞磺酰茚乙酸聯合給予。這些化合物也可與皮質類固醇或鎮吐藥，例如樞復寧聯合給予。
式(I)的化合物似乎特別適合與其它抗癌藥如吉西他濱、阿霉素、順鉑、紫杉醇(paclitaxol)和/或脫氫牛尿酚(DHE)聯用。與只用一種藥物相比，這提高了治療效果。
共同給藥可同時或依次進行。可通過在同時或相似時間在同一單位劑量中或在單獨和分開的單位劑量中同時給予化合物。依次給藥可視需要以任何順序進行，給予第二種或后面的活性藥物時，通常第一種或先給予的活性藥物正在發揮其生理作用，特別需要累積或協同作用時。
以下非限制性實施例進一步闡述了本發明。
實施例 縮合反應 實施例1.1
2-甲基間苯二酚(62.2g)和3，4-甲氧基苯乙酸(92.3g)用P2O5干燥4天。在圓底燒瓶內的固體中加入三氟化硼二乙基乙醚絡合物(etherate)(350mL)，將混合物在氮氣下攪拌并在100℃加熱100分鐘。將溶液冷卻至室溫并放置2小時，收集所得沉淀并用過量的水洗滌以得到棕色固體狀的1-(2，4-二羥基-3-甲基苯基)-2-(3，4-二甲氧基苯基)-乙基酮(93g，65％)。
實施例1.2
以類似于上述實施例1.1的方法，將間苯二酚和3，4-甲氧基苯乙酸干燥，然后與三氟化硼二乙基乙醚絡合物反應，以得到1-(2，4-二羥基苯基)-2-(3，4-二甲氧基苯基)乙基酮。采用適當取代的前體化合物可得到其它縮合產物。
環化反應 實施例2.1
在氮氣下，將1-(2，4-二羥基-3-甲基-苯基)-2-(3，4-二甲氧基-苯基)-乙基酮(92.9g)溶于DMF(140mL，用MgSO4干燥15分鐘)。用40分鐘在室溫下邊攪拌邊加入蒸餾的三氟化硼二乙基乙醚絡合物(140mL)。在52-55℃下用20分鐘加入甲磺酰氯(75mL)的DMF(190mL)溶液，期間反應混合物變為黃色。將反應物加熱回流80分鐘并通過HPLC監測，之后使其冷卻至室溫。
將深棕色溶液倒入冷水(3次，每次1250mL)同時劇烈攪拌。放置過夜(同時連續攪拌)，有黃色固體沉淀出。用水洗滌該固體并通過過濾收集。將固體干燥得到黃色固體狀的3-(3，4-二甲氧基-苯基)-7-羥基-8-甲基-色烯-4-酮(94.8g，99％)。
實施例2.2
以類似于上述實施例2.1的方法，將1-(2，4-二羥基苯基)-2-(3，4-二甲氧基-苯基)-乙基酮溶于已經加入三氟化硼二乙基乙醚絡合物的DMF，隨后加入甲磺酰氯的DMF溶液。再在反應混合物中加入水以得到3-(3，4-二甲氧基苯基)-7-羥基色烯-4-酮。
乙酰化反應 實施例3.1
在氮氣氛下將3-(3，4-二甲氧基-苯基)-7-羥基-8-甲基色烯(chromen)-4-酮(one)(94.8g)懸浮于乙酸酐(450mL)。加入吡啶(23mL)并將反應混合物加熱回流1小時。將容器在-18℃冷卻過夜，在反應混合物中產生結晶固體。將該固體濾出并用濾液和額外的水(500mL)洗滌以產生棕色固體。再用乙醇洗滌得到白色結晶固體。將該固體在干燥器中干燥過夜，得到7-乙酰氧基-3-(3，4-二甲氧基苯基)-8-甲基色烯-4-酮(44.7g，42％)。
1H NMR(CDCl3)δ2.32(s，3H，CH3)，2.39(s，3H，OCOCH3)，3.92和3.93(各s，3H，OCH3)，6.93(d，1H，J 8.3Hz，ArH)，7.06(dd，1H，J 1.9Hz 8.3Hz，ArH)，7.13(d，1H，J 8.6Hz，ArH)，7.22(d，1H，J 1.9Hz，H8)，8.07(s，1H，H2)，8.33(d，2H，J 8.6Hz，ArH)。
實施例3.2
以類似于上述實施例3.1的方式，使3-(3，4-二甲氧基苯基)-7-羥基色烯-4-酮(1.7g)與乙酸酐(10ml)和吡啶(1.9ml)反應得到無色棱柱狀的7-乙酰氧基-3-(3，4-二甲氧基苯基)色烯-4-酮(1.44g，74％)。
1H NMR(CDCl3)δ2.36(s，3H，OCOCH3)，3.92和3.93(各s，3H，OCH3)，6.93(d，1H，J 8.3Hz，ArH)，7.06(dd，1H，J 1.9Hz 8.3Hz，ArH)，7.16(d，1H，J 1.9Hz，H8)，7.20(m，1H，ArH)，7.31(d，1H，J 1.9Hz，ArH)，8.00(s，1H，H2)，8.33(d，1H，J 8.7Hz，ArH)。
氫化反應 實施例4.1
在1L 3N圓底氫化燒瓶中將7-乙酰氧基-3-(3，4-二甲氧基苯基)-8-甲基色烯-4-酮(13.9g)和Pd/Al2O3(2.8g)懸浮于無水酒精(560mL)。在系統中通入氫氣42小時直到反應結束。用Celite過濾以分離反應混合物。在真空下除去溶劑得到白色固體，將該白色固體在高真空管線上干燥過夜以得到7-乙酰氧基3-(3，4-二甲氧基苯基)-8-甲基色滿-4-醇，其為順式-和反式-異構體的混合物(9.56g，68％)。該混合物無需任何進一步的純化便可用于下面的步驟。
反式-異構體1H NMR(CDCl3)δ2.02(s，3H，CH3)，2.32(s，3H，OCOCH3)，3.10(ddd，1H，H3)，3.84和3.86(各s，3H，OCH3)，4.24(dd，1H，H2a)；4.39(dd，1H，H2b)，4.91(d，1H，J 7.9Hz，144)，6.50-6.90(m，4H，ArH)，7.32(d，1H，J 8.7Hz，H5)。
順式-異構體1H NMR(CDCl3)δ2.03(s，3H，CH3)，2.32(s，3H，OCOCH3)，3.30(dt，1H，H3)，3.86和3.87(各s，3H，OCH3)，4.31(ddd，1H，H2a)；4.54(dd，1H，H2b，4.78(bd，1H，H4)，6.50-6.90(m，4H，ArH)，7.32(d，1H，J 8.3Hz，H5)。
實施例4.2
以類似于實施例4.1的方式，將7-乙酰氧基-3-(3，4-二甲氧基苯基)色烯-4-酮(1.4g)和5％Pd-C(0.24g)懸浮于無水酒精(200mL)并在系統中通入氫氣55小時直到反應結束。過濾并蒸發得到7-乙酰氧基3-(3，4-二甲氧基苯基)色滿-4-醇的順式-和反式-混合物(1.4g，100％)。該混合物無需任何進一步的純化便可用于下面的步驟。
反式-異構體1H NMR(CDCl3)δ2.29(s，3H3OCOCH3)，3.14(ddd，1H，J 3.4Hz，J 7.9Hz，J 8.7Hz，H3)，3.87和3.88(各s，3H，OCH3)，4.24(dd，1H，H2a)；4.35(dd，1H，H2b)，4.93(d，1H，J 7.9Hz，H4)，6.66-6.87(m，5H，ArH)，7.49(d，1H，J 8.7Hz，H5)。
順式-異構體1H NMR(CDCl3)δ2.29(s，3H，OCOCH3)，3.30(dt，1H，H3)，3.87和3.88(各s，3H，OCH3)，4.31(ddd，in，H2a)；4.56(dd，1H，H2b)，4.75(d，1H，J 2.64Hz，H4)，6.66(dd，1H，J 2.3Hz，J 8.7Hz，H6)，6.66-6.87(m，5H，ArH)，7.30(d，2H，J 8.3Hz，ArH)。
二聚反應 實施例5.1
方法A 將7-乙酰氧基-3-(3，4-二甲氧基苯基)-8-甲基色滿-4-醇(1.08g)溶于二氯甲烷(4mL)并用碳酸鉀干燥。將反應混合物在-78℃(丙酮/干冰浴)冷卻10分鐘。加入五氧化二磷(0.563g)，反應受到阻止，并在-78℃放置6小時，然后在約4℃攪拌過夜。用碳酸氫鈉溶液(20mL，5％w/v)終止反應，這使得反應混合物中產生氣泡。將混合物沖洗入分離漏斗并收集二氯甲烷層。水層再用二氯甲烷(約20mL)萃取。在Rotovap上濃縮二氯甲烷層并將形成的紫色固體立即置于高真空管線上。將該固體溶于洗脫液并進行柱層析，用(60∶40)二氯甲烷/石油醚洗脫并通過TLC監測。分離產物4，9-二乙酰氧基-14，15-二甲氧基-12a-(3’，4’-二甲氧基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(2-Ac)(580mg，52％)。
1H NMR(CDCl3)；δ1.86(s，3H，CH3)，2.02(s，3H，CH3)，2.23(s，3H，OCOCH3)，2.30(s，3H，OCOCH3)，3.12(dt J 3.5Hz，J 11.4Hz，1H，CH)，3.36(d，J 12.2Hz，1H，CH)，3.74，3.83，3.87，3.87(各s，3H，OCH3)，3.93(dd，J 3.2Hz，J 10.8Hz，1H，CHa)，4.25(s，1H，CH)，4.59(d，J 11.3Hz，CHa’)，4.77(d，J 11.3Hz，CHb’)，4.88(dd，J 3.4Hz，J 10.2Hz，1H，CHb)，6.30(d，1H，J 8.7Hz，1H，ArH)，6.46-6.8(m，6H，ArH)，6.93(s，1H，ArH)，7.13(d，1H，J 8.6Hz，ArH)。13C NMR(CDCl3)；δ9.2，9.3(CH3)，20.6，20.7(CH3)，32.9(CH)，36.6(CH)，42.9(CH)，47.0(脂肪族C)，55.7，56.0，56.2，56.3(OCH3)，70.0(CH2)，72.8(CH)，108.4，111.2，111.3，112.2，113.8，113.9，120.2，123.3，125.7(Ar CH)，118.5，118.9，120.5，121.9，128.7，129.2，138.4，(ArC)，147.9，148.0，148.1，148.2，148.3，148.9，153.5，154.2(ArC)，169.2，169.3(COOCH3)。λmax285nm(ε14，310)。υmax 2932，1759，1597，1516，1428，1368，1217，1093，1024，912，805，729，587cm-1。實測值(HRESMS)m/z 703.254039；C40H40O10Na為m/z703.251343。
方法B 按照下表1將兩種固體混合然后將它們在-78℃的丙酮/干冰浴中冷卻10分鐘以建立4個20mL的反應容器。
表17-乙酰氧基-3-(3，4-二甲氧基苯基)-8-甲基色滿-4-醇單體、 P2O5和DCM的反應容器。
將二氯甲烷用碳酸鉀干燥并冷卻至-78℃，然后緩慢加入燒瓶。反應混合物在-78℃保持6-7小時，然后用碳酸氫鈉溶液(20mL，5％w/v)終止反應，這使得反應混合物中產生氣泡。將反應物合并并轉移至分離漏斗，收集二氯甲烷層。水層用二氯甲烷(約20mL)萃取。在Rotovap上濃縮二氯甲烷層并將形成的紫色固體立即置于高真空管線上。然后對該固體進行柱層析，用(60∶40)二氯甲烷/石油醚洗脫。從后面的組分中成功分離出二乙酰氧基二聚物(1085mg，26％)。
實施例5.2
以類似于實施例5.1方法A的方式，在二氯甲烷中用五氧化二磷處理7-乙酰氧基-3-(3，4-二甲氧基苯基)色滿-4-醇以得到4，9-二乙酰氧基-14，15-二甲氧基-12a-(3’，4’-二甲氧基苯基)-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(1-Ac)(54％)。
1H NMR(CDCl3)δ2.20(s，3H，OCOCH3)，2.27(s，3H，OCOCH3)，3.09(dt，J 3.8Hz，J 11.7Hz，1H，CH)，3.36(d，J 12.5Hz，1H，CH)，3.74，3.84，3.89，3.89(各s，3H，OCH3)，3.95(dd，J 3.4Hz，J 10.9Hz，1H，CHa)，4.23(s，1H，CH)，4.59(d，J 11.3Hz，CHa’)，4.73(d，11.3Hz，CHb1)，4.81(dd，J 3.4Hz，10.9Hz，1H，CHb)，6.36(dd，1H，J 2.6Hz，J 8.7Hz，1H，ArH)，6.46(d，J 2.3Hz，1H，ArH)，6.62(d，J 2.3Hz，1H，ArH)，6.62-6.69(m，4H，ArH)，6.79(d，J 9.1Hz，1H，ArH)，6.85(d，J 8.7Hz，1H，ArH)，6.91(s，1H，ArH)，7.24(d，1H，J 9.0Hz，ArH)。13CNMR(CDCl3)δ21.5，21.6(CH3)，33.5(CH)，36.8(CH)，43.1(CH)，49.9(脂肪族C)，56.2，56.3，56.4，56.5(OCH3)，70.5(CH2)，73.2(CH2)，108.7，110.7，110.8，11.5，112.4，114.4，120.8，120.9，126.9，129.2，129.3(ArCH)，122.6，128.8，138.4，148.4，148.5，148.6，149.3，150.1，150.3，155.8，156.3，169.7，169.8(ArC)。λmax284nm(ε18，000)，212(77250)。υmax2993，2833，1762，1611，1586，1516，1464，1424，1368，1248，1209，1146，1119，1027，899，810，763cm-1。實測值(HRESMS)m/z 675.219688；C38H36O10Na為m/z 675.220045。
脫乙酰化反應 實施例6.1
將4，9-二乙酰氧基-14，15-二甲氧基-12a-(3’，4’-二甲氧基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(150mg)溶于甲醇(4ml)。在反應物中逐滴加入氫氧化鉀溶液(1M水溶液)直到pH約為11。將反應物室溫攪拌90分鐘。溶液用乙酸(1M水溶液)中和并邊攪拌邊倒入水(500ml)中。將所得沉淀濾出并干燥，得到白色粉末狀的4，9-二羥基-14，15-二甲氧基-12a-(3’，4’-二甲氧基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(2)(50mg，38％)。
1H NMR(CDCl3)；δ1.94(s，3H，CH3)，2.10(s，3H，CH3)，3.02(dt J 3.5Hz，J 11.4Hz，1H，CH)，3.31(d，J 12.4Hz，1H，CH)，3.74，3.84，3.86，3.87(各s，3H，OCH3)，3.94(dd，J 3.2Hz，J 10.8Hz，1H，CHa)，4.18(s，1H，CH)，4.40(brs，1H，OH)，4.56(d，J 11.3Hz，1H，CHa’)，4.60(brs，1H，OH)，4.74(d，J 11.3Hz，1H，CHb’)，4.86(dd，J 3.4Hz，J 10.2Hz，1H，CHb)，6.10(d，J 8.7Hz，1H，ArH)，6.42(d，J 8.7Hz，1H，ArH)，6.59(d，J 8.7Hz，1H，ArH)，6.60-6.8(m，3H，ArH)，6.79(d，J 8.7Hz，1H，ArH)，6.95(s，1H，ArH)，6.96(d，J 8.6Hz，1H，ArH)。
實施例6.2
在4，9-二乙酰氧基-14，15-二甲氧基-12a-(3’，4’-二甲氧基苯基)-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(230mg)的無水酒精(8ml)懸浮于中加入咪唑(550mg)并將混合物在氬氣下回流45分鐘。減壓濃縮溶液并加入蒸餾水(10ml)以沉淀產物。混合物在冰箱內放置過夜并過濾以得到白色固體狀的4，9-二羥基-14，15-二甲氧基-12a-(3’，4’-二甲氧基苯基)-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(1)(100mg，50％)。
1H NMR(CDCl3)δ3.03(dt，J 3.4Hz，J 11.3Hz，1H，CH)，3.28(d，J 12.4Hz，1H，CH)，3.75，3.84，3.85，3.86(各s，3H，OCH3)，3.92(d，J 10.5Hz，114，CHa)，4.16(s，1H，CH)，4.56(d，J 11.3Hz，CHa’)，4.68(d，J 11.3Hz，CHb’)，4.77(dd，J 3.7Hz，J 10.5Hz，1H，CHb)，6.13(dd，1H，J 2.6Hz，J 8.3Hz，1H，ArH)，6.20(d，J 2.3Hz，1H，ArH)，6.36(d，J 2.3Hz，1H，ArH)，6.45(dd，J 2.6Hz，J 8.3Hz，1H，ArH)，6.62-6.67(m，2H，ArH)，6.72(d，J 8.3Hz，1H，ArH)，6.78(d，J 8.3Hz，1H，ArH)，6.93(s，1H，ArH)，7.09(d，J 9.0Hz，1H，ArH)，7.11(s，1H，OH)，7.70(s，1H，OH)。13C NMR(CDCl3)δ33.7(CH)，36.2(CH)，41.7(CH)，47.2(脂肪族C)，55.0，55.1，55.3，55.5(OCH3)，69.4(CH2)，72.1(CH2)，102.9(CH)，103.2(CH)，107.8(CH)，108.2(CH)，109.0(CH)，111.4(CH)，112.0(CH)，113.4(CH)，114.4，116.0(ArC)，120.8(CH)，126.8(CH)，128.8(CH)，129.1，129.4，139.0，148.1，148.3，148.5，149.3，155.6，156.4，156.6，156.9(ArC)。λmax285mm(ε13，028)，21737，743)。υmax 3322，2933，1618，1516，1463，1255，1166，1024，834，742cm-1。實測值(HRESMS)m/z 591.196772；C34H32O8Na為m/z591.198918。
用相應取代的容易獲得的起始材料通過上述方法制備了有關的類似二聚化合物。
1.抗癌活性 脫氫牛尿酚(3-(4-羥基苯基)色-3-烯-7-醇)引發對許多人癌細胞系的細胞毒效應，最近的報道顯示Phenoxodiol是一種強拓撲異構酶II抑制劑、細胞周期中斷劑，能抑制鞘氨醇激酶活化并下調血管基質金屬蛋白酶2的轉錄，并能通過調節抗凋亡機制誘導化學抗性卵巢癌細胞凋亡。
已經在睪丸腫瘤、卵巢癌、膀胱腫瘤、頭頸癌、乳腺癌、肺癌、難治性非霍奇金淋巴瘤中觀察到順鉑的抗癌活性。順鉑是一種正方平面形配位絡合物(順-二氨二氯鉑)，認為它通過跨膜通道或高容量易化轉運(high capacity facilitated transport)進入細胞。一旦順鉑進入細胞，氯化物濃度降至20μM，同時藥物經強烈水合形成帶有正電荷的活性形式，該活性形式隨后與細胞內的親核物質如DNA和蛋白質相互作用。順鉑與核DNA反應形成各種加合物，其中包括鏈間和鏈內DNA交聯以及DNA-蛋白質交聯。最常見的加成物是相鄰鳥嘌呤之間的鏈內交聯。盡管基因組DNA通常被接受作為順鉑誘導的細胞毒性的關鍵藥理學靶點，但有證據表明，被順鉑損傷的其它細胞組分(RNA、蛋白質、膜磷脂、細胞骨架微絲以及含有硫醇的分子)有助于順鉑誘導的細胞毒性。p53然后檢測到順鉑-DNA加合物(DNA損傷)，這又可能通過Bax/Bcl-2調節而引發凋亡前級聯并通常誘導G1阻滯。壞死也被證明是順鉑導致細胞死亡的一種模式。順鉑具有許多不良反應，包括難治、幾乎普遍存在的惡心和嘔吐、過敏樣反應、神經毒性、骨髓抑制、骨髓抑制、粒細胞減少以及累積性且不可逆的劑量限制性中毒性腎損害。
生物學研究和篩選數據 篩選研究證實4，9-二羥基-14，15-二甲氧基-12a-(3’，4’-二甲氧基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(2)對正常細胞有良好的體外毒性特征并具有廣譜活性，其抗癌細胞(代表性的是白血病、膠質瘤、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、結腸直腸癌和肺癌)的效應與脫氫牛尿酚或順鉑相當，在某些情況下甚至更好。
材料和方法-組織培養 新生兒包皮成纖維細胞(NFF)由Peter Parsons博士(Queensland Institute of MedicalResearch)惠贈。RK-13(兔腎)細胞獲自Miller Whalley(Macquarie University)。這兩種細胞類型都培養在添加有10％FCS(CSL，澳大利亞)、青霉素(100U/ml)、鏈霉素(100mg/ml)、L-谷氨酰胺(2mM)和碳酸氫鈉(1.2g/L)的RPMI中，并在5％CO2的加濕氣氛中于37℃培養。
人胰腺癌細胞系HPAC(CRL-2119)常規培養在含有HEPES(15mM)、胰島素(0.002mg/ml)、轉鐵蛋白(0.005mg/ml)、氫化可的松(40ng/ml)、表皮生長因子(10ng/ml)的1∶1混合的DMEM(Dulbecco改進的Eagle培養基，Sigma)加Ham F12(Sigma)培養基中。卵巢癌細胞系CP70由Gil Mor博士(耶魯大學)饋贈，培養在1∶1混合的DMEM加Ham F12培養基中，SKOV-3(卵巢癌細胞系)購自ATCC，培養在McCoys 5a培養基中。乳腺癌細胞系MDA-MB-468培養在Leibovitz L-15培養基中。
所有培養液中均補加了10％FCS(胎牛血清CSL，澳大利亞)、青霉素(100U/ml)、鏈霉素(100mg/ml)、L-谷氨酰胺(2mM)和碳酸氫鈉(1.2g/L)，在5％CO2的加濕氣氛中于37℃培養。除另有說明之處，所有細胞系均購自ATCC(馬里蘭，美國)。
增殖試驗 測定各細胞系的IC50值。將細胞以生長動力學分析測定的合適細胞密度接種于96-孔板中。NFF和RK-13在不存在和存在測試化合物時分別培養5天和24小時。在37℃，根據生產商的使用說明加入20μL3-4，5二甲基噻唑-2，5-二苯基溴化四唑(MTT，用PBS配制為2.5mg/ml，Sigma)3-4小時后，評估細胞增殖。從y軸上的對照增殖％對x軸上的log劑量的半對數圖計算IC50值。
實施例7正常細胞毒性 用脫氫牛尿酚(DHE)、實施例6.1的4，9-二羥基-14，15-二甲氧基-12a-(3’，4’-二甲氧基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(2)和順鉑進行針對NFF細胞的重復細胞毒性試驗。
表2.脫氫牛尿酚、化合物2和順鉑對新生兒包皮成纖維細胞(NFF)和兔腎細胞的相對毒性。
發現二聚物2對正常細胞的毒性低于順鉑，但強于脫氫牛尿酚。
實施例8化合物2的藥代動力學-口服 用1％CMC(m∶v，水)將實施例6.1的4，9-二羥基-14，15-二甲氧基-12a-(3’，4’-二甲氧基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]

(2)制備為均勻懸浮液。采用管飼法將化合物2制劑以50mg/kg劑量口服遞送至雌性BALB/c小鼠。各時間點(15分鐘、30分鐘、1小時、4小時和24小時)分配3只小鼠。在各時間點通過頸脫椎處死小鼠并收集血液。通過質譜分析游離的化合物2，結果見表3。
表3.脫氫牛尿酚和化合物2口服藥代動力學數據的比較。
相比脫氫牛尿酚，發現二聚物2具有高達4個小時的優秀半衰期。相比脫氫牛尿酚，發現二聚物2具有較慢的結合速率。體內毒性數據顯示，由體重減輕和生命器官組織學證實，接受50mg/kg 5063(i.p.)的小鼠連續9天未中毒。
實施例9化合物2的硫化物對癌細胞的體外細胞毒性 如表4所示，與脫氫牛尿酚或順鉑的IC50值相比，二聚物2對各種惡性細胞系和多藥物抗性細胞系顯示出相當或明顯優秀的抵抗活性。
表4.比較脫氫牛尿酚、化合物2和順鉑對代表不同惡性腫瘤的細胞系的細胞毒性 2.抗增殖活性 前列腺素類物質如PGE2和PGI2及血栓烷(TX)如TXA2是被稱為類花生酸的脂肪酸衍生物家族的成員(Penglis等，2000)。它們參與正常的生理機能和炎性應答，但對例如細胞因子釋放和血小板聚集有相反作用。花生四烯酸(AA)從膜磷脂釋放為類花生酸的合成提供了重要底物。
無論其同種型，環加氧酶(COX)的作用造成PGE2、PGI2和TXA2的通用前體中間前列腺素PGH2的合成。前列腺素類物質通過與發炎器官內的白血病和實質細胞發生復雜相互作用而在免疫應答中扮演重要調節作用。根據炎性刺激的類型、所產生的主要前列腺素類物質以及前列腺素類物質受體表達的特征，它們可產生促炎和抗炎作用(Tilley等，2001)。
抑制TX合酶導致TX形成減少，由于這會增加PG合酶的底物PGH2的可用性，因此導致PG增加(Carty等，2000；Penglis等，2000)。PGE2增加可發揮抗炎作用。例如 a.已報道PGE2會削弱一些急性炎性應答，尤其是由肥大細胞脫粒引發的應答(Raud等，1988)。
b.PGE2抑制TNFα和IL-1β而TXA2增加TNFα和IL-1β(Caughey等，1997)。抑制TXA2是一種抑制炎性細胞因子尤其是TNF產生的潛在方法。目前，用抗體或可溶性TNF受體抑制TNF水平的生物療法已成功用于治療采用其它療法難以治療或不再有效的類風濕性關節炎。抑制TNF產生并可口服的化學試劑將非常有利。抑制TXA2形成可能是抑制TNF產生的一種方法，TNF是一種與關節炎征兆和癥狀有關的細胞因子，在關節炎的長期退化階段，其表現為軟骨降解、關節腔縮小并最終導致關節損傷。
c.PGE2抑制多種T和B細胞功能，其中包括抑制T淋巴細胞活化和增殖以及Ig產生(Tilley等，2001)。相反，TXA2可能促進T細胞的活化和增殖并有助于細胞毒T細胞(CTL)發揮作用。改變這種有利于PG產生的平衡可能有助于“停止”自身免疫性疾病中發現的不適當的免疫應答。
d.在哮喘中，PGE2促進血管舒張并提高血管通透性(Tilley等，2001)。隨著炎癥的進展，由于COX-2和PGE-合酶的表達增加，巨噬細胞合成的PGE2也增加。PGE2抑制白細胞活化并促進支氣管擴張。TXA2合酶抑制劑和血栓烷前列腺素類物質(TP)受體拮抗劑已被開發作為抗哮喘藥(Shi等，1998)。
e.在腎小球腎炎中，合成PG和TX的AA COX途徑以及合成白三烯的脂肪氧化酶途徑被共活化。在腎炎性腎小球中，TXA2是合成地最多的類花生酸，TXA2合酶抑制劑(例如達美格雷)現在已被用于治療腎小球腎炎。在大鼠腎炎模型中，達美格雷增加PGE2合成，由于在腎小球腎炎中PGE2能保持腎功能因此這種藥是有用的(Lianos等，1999)。
f.血栓烷可能是導致炎性腸病(IBD)的主要病因。在發炎的粘膜和克羅恩病中未發炎的腸和分離的腸以及外周血單核細胞都過量產生TX。它們的細胞來源可能包括血小板、中性白細胞、內皮細胞和上皮細胞以及單核細胞(Rampton等，1993；McCartney等，1999；Carty等，2000；Carty等，2002)。TX的促炎效應是直接(血細胞滲出和中性白細胞活化、粘膜潰瘍、T細胞活性抑制劑減少)和間接(血管收縮、血小板活化)的(Rampton等，1993)。認為PG對胃腸粘膜有保護作用(Carty等，2000)。通常用于治療慢性IBD的化合物柳氮磺吡啶及其主要代謝物之一磺胺吡啶被證實可抑制TXB2合成同時分別增加PGF2α或PGE2的合成(Hawkey等，1985)。換句話說，它們似乎在一定程度上能抑制TX合酶。
材料和方法-組織培養 通過lymphoprep梯度分離單核細胞然后進行逆流離心淘洗從棕黃層分離人外周血單核細胞(來自3名不同個體)(Demasi等，2000)。將測試化合物溶于DMSO并加入新鮮的單核細胞中。30分鐘后加入LPS使最終濃度達到200ng/mL。在5％CO2下37℃培育18小時后除去上清液并通過放射免疫測定(RIA)測量PGE2、TXB2(TXA2的穩定水解產物)和TNFα的產量。
在添加有FCS、2mM谷氨酰胺和50U/ml青霉素/鏈霉素的DMEM中培養小鼠巨噬細胞細胞系RAW 264.7。通過溫和刮拭取出燒瓶中亞匯合(subconfluent)的細胞，以每孔5×105個細胞的密度接種于24孔平板并使其附著1小時。然后用測試化合物(溶于0.025％DMSO)或僅載體處理細胞并培育1小時。然后加入50ng/mlLPS(LPS-Sigma-Aldrich)。培育16小時后收集培養基并儲存于-80℃，采用酶免疫測定法測量類花生酸(ecosanoid)和細胞因子(PGE2和TXB2為Cayman Chemical，TNFα為Becton Dickinson)。
結果和小結 圖1-8顯示兩種二聚物化合物1和化合物2在鼠巨噬細胞(RAW 264.7)和用LPS刺激的人單核細胞中都以劑量反應性方式抑制TXB2和誘導PGE2。同時，化合物1和化合物2在人單核細胞中抑制TNFα的誘導。本發明的二聚化合物可用于治療炎性疾病和相關癥狀。
3.心血管活性 材料和方法 用80％CO2和20％O2麻醉雄性Sprague-Dawley大鼠(250±50g)。切除胸主動脈并按照描述迅速固定于器官浴槽(Chin-Dusting等，2001)。獲得了不存在和存在化合物2(1μg/ml)時去甲腎上腺素(0.1nM-10mM)的全濃度-收縮曲線。對6種不同動物的6個不同主動脈環重復進行實驗。
化合物2對去甲腎上腺素的最大收縮反應沒有影響(1.94+0.35對比2.09±0.23；p＞0.05)，但使去甲腎上腺素EC50濃度的負對數從-8.21±0.17顯著改變為-7.84±0.097(p＜0.05)，顯示出化合物2能夠拮抗(或阻斷)去甲腎上腺素的收縮作用(見圖9)。
結果和小結 證實化合物2具有抵抗去甲腎上腺素誘導的主動脈環收縮的活性。這些數據說明，化合物2具有舒血管活性并能抑制血管收縮。
4.化學治療增敏作用(Chemosensitisation) 評價了當與一系列標準化療劑聯用時本發明的二聚化合物作為化學治療增敏劑的功效。將二聚化合物2施用于不同的結腸直腸和胰腺癌癥細胞系以研究其與包括順鉑、吉西他濱、紫杉醇、阿霉素、喜樹堿和托泊替康在內的標準化療劑的協同作用。
實驗設計 該實驗按照SOP-BD011(版本A和B)進行，用來在任何“一次”實驗中篩選出三種抗給定細胞系的抗腫瘤藥(參見例如Kanzawa等，(1997))。原本的實驗設計允許以三種順序給予化合物2和抗腫瘤藥。
1)直接順序-細胞用化合物2和一種抗腫瘤藥(組合的)一起處理5天。
2)先給予化合物2的順序(正序)-細胞用化合物2處理24小時，然后用抗腫瘤藥治療24小時；然后洗凈藥物并在第5天進行處理。
3)反序-與上述實驗2的順序相反，即先給予細胞毒素。
結果和小結 如Kanzawa等(1997)所述，用結合到三維模型的理論疊加公式評價所有數據。這樣可簡單地解釋數據，即超過10％的值被定義為‘協同’(用灰色表示)，而低于-10％的值被定義為‘拮抗’(用黑色表示)。
當同時處理(A)或以24小時的順序處理(B、C)時，化合物2和吉西他濱的組合導致對HPAC細胞產生協同細胞毒性(見圖10)。在兩種24小時順序的數據中，似乎在較大濃度范圍內都觀察到這種效應。當化合物2的濃度大于5μM時未觀察到協同效應。
在正序(A)和反序(B)順序中都觀察到化合物2和吉西他濱的組合導致協同細胞毒性(見圖11)。
HT-29細胞用化合物2(以1μM和2μM)和9次連續稀釋的紫杉醇處理，當以組合(A)處理時有強烈的協同作用(見圖12)。以24小時正序(B)和反序(C)處理也觀察到不太明顯的協同作用區域。
HCT-15細胞用化合物2(以1μM和2μM)和9次連續稀釋的紫杉醇處理，當以24小時正序(B)和反序(C)依次處理時有強烈的協同作用。為進行比較，在組合處理組(A)中未觀察到協同作用。
當組合處理(A)或以正序處理(B)時化合物2和阿霉素的組合對HT-29細胞導致強烈的協同細胞毒性(見圖14)。當先用阿霉素處理細胞時未觀察到協同作用(C)。
當組合處理(A)時化合物2和阿霉素的組合對HCT-15細胞導致強烈的協同細胞毒性(見圖15)。采用正序(B)或反序(C)都未觀察到協同作用。
采用化合物2和化療藥吉西他濱、紫杉醇和阿霉素通常觀察到協同作用。數據顯示，無論以24小時正序或反序給予化合物2，化合物2都可與這些藥物產生最佳協同作用。結果顯示，本發明的二聚化合物對于腫瘤細胞的化學治療增敏和非腫瘤細胞的化學治療保護都非常有效。
5.在鼠耳炎中的抗炎活性 檢測化合物2抑制小鼠中由局部施用花生四烯酸(AA)而誘導的耳腫脹的能力。由于AA(類花生酸的立即前體)通過環加氧酶(COX)和脂肪氧化酶(LOX)途徑形成AA代謝物因而會造成炎性應答(Young等，1984)。AA先(10-15分鐘)導致PGE2和LTC4的合成增加，之后導致耳厚度增加(Opas等，1985；Chang等，1986)。
方法 以25mg/kg的劑量給15-21克重的雌性BALB/c小鼠(ARC，WA，澳大利亞)腹膜內(i/p)注射用1∶1的聚乙二醇(PEG)400∶磷酸緩沖鹽水(PBS)配制的化合物2，30分鐘后再給耳施用AA。用異氟烷麻醉小鼠并用彈簧測微計測量兩耳的基礎厚度。每只小鼠總共接受20μLAA的乙醇溶液(50mg/ml)，施用于各耳廓的內表面和外表面(即每耳0.5mgAA或2μg PMA)。再將小鼠麻醉以重新測量施用AA1小時后的耳厚度。
評價了給各耳施用AA前后耳腫脹的變化，并計算了各小鼠兩耳的平均值。用雙尾不成對t檢驗(Prism 4，GraphPad Software)計算各測試組與僅給予載體的組之間平均腫脹的差異。
結果 用化合物2治療導致與僅用載體治療的組相比耳厚度顯著降低。
表1.響應于施用AA導致的耳厚度的變化 該結果證實了化合物2的體內抗炎活性。
6.在UV輻射誘導的皮膚水腫小鼠模型中的抗炎活性 使哺乳動物皮膚急性接觸UV輻射會造成表現為紅斑和水腫的炎性反應。這種反應部分由促炎前列腺素(PGD2、PGE2、PGF2α及可能的PGI2)和白細胞三烯以及反應性自由基和反應性氧種類所介導(Sondergaard等，1985；Gonzalez和Pathak 1996；Widyarini等，2001)。
方法 用1×3MEdD(最小水腫劑量)的模擬日光的UV輻射(SSUV)照射每組4-5雌性Skhhr-1白化小鼠。模擬日光的UV輻射(SSUV)由6個UVA管(Hitachi 40W F40T10/BL，不可見光)和1個UVB管(Philips TL 40W/12RS)組成的平板提供，將輻射通過0.125mm厚的醋酸纖維素片(Eastman Chemical Products，Kingport，Term，USA)過濾以得到2.96×10-4W/cm2 UVA和1.59×10-5W/cm2 UVB。UV燈距離照射臺表面的距離約為20cm，并通過電風扇控制溫度。在照射期間，使籠子在燈下旋轉以減小不同部位輻射強度的差異。
照射后30分鐘、2小時和4小時在照射過的背部皮膚上涂敷測試化合物(0.2ml20μM的溶液)或載體(丙二醇/乙醇/水1∶2∶1)。在UV照射前及照射24和48小時后用彈簧測微計測量背部皮膚的褶皺。計算各小鼠在接觸UVR前后皮膚厚度的差異，并用不配對的雙尾t檢驗分析在測試化合物和載體對照之間檢測到的差異。
結果 在UV照射24小時后觀察到皮膚褶皺增厚，并在所測的最后時間點即48小時時達到峰值。盡管測試化合物在UV照射后僅施用了3次，且在第一次測量皮膚褶皺前20小時時便完成了給藥，但檢測出該化合物有減輕UV誘導的炎癥的作用，從下面的表和圖中可以清楚看出這一點。
化合物2在兩個時間點都顯著抑制皮膚水腫，而化合物1是24小時時顯著抑制皮膚水腫。
表2.照射24小時后背部皮膚褶皺厚度的變化 表3.照射48小時后背部皮膚褶皺厚度的變化 這些結果清楚證明了化合物1和化合物2的抗炎活性。盡管它們是在炎癥被誘導后短時間內局部給予的，但它們的功效在最多達48小時后還是明顯的。
7.在鼠脾細胞內的免疫抑制效應 方法 通過頸脫位法殺死6周齡的雄性Skh-1(無毛)小鼠。從它們的脾臟制造單細胞懸浮液并將紅血球裂解于緩沖液(0.14M NH4Cl，17mM Tris，pH 7.2)。剩余的脾細胞用添加有10％(v∶v)FBS、200mM L-谷氨酰胺、青霉素/鏈霉素和50mM 2-巰基乙醇的RPMI-1640(Gibco)培養。在含有伴刀豆球蛋白A(ConA，Sigma-Aldrich-0.4μg/孔)、脂多糖(LPS，Sigma-Aldrich-1μg/孔)或無促分裂原，以及10μM溶于DMSO的化合物1或化合物2或僅DMSO的三復孔中加入脾細胞。在5％CO2的空氣下于37℃培育3天后分析樣品。為評估細胞數，在每個孔中加入甲基噻唑四唑(MTT)，再培育4小時然后用0.04N HCl的異丙醇溶液顯色(Mosmann 1983)。在570nm和630nm閱讀平板。用不同小鼠檢測化合物數次。每次試驗時將測試化合物的功效與載體對照的功效比較，結果用斯氏t檢驗(Prism)比較。當p＜0.05時被認為在統計學上有顯著差異。
另一個試驗檢測了將未刺激的脾細胞與10μM測試化合物預培育24小時的功效，除去化合物，然后按照上一試驗的描述評價它們響應促分裂原刺激的能力。預培養24小時后用MTT評估細胞數，像平常一樣在96孔板的每個孔中接種相同數目的細胞。
結果 在6個不同試驗中檢測了與10μM化合物1一起培育的功效。在4/6的試驗中化合物1以14-19％顯著抑制T細胞增殖，但對B細胞增殖沒有任何影響。在5/6的試驗中化合物1以25-33％顯著增強未刺激的脾細胞增殖。一個代表性試驗的結果示于圖16。
在4個不同試驗中檢測了10μM的化合物2。試驗結果各不相同，因此沒有一致的趨勢(數據未顯示)。
在較高濃度時，與載體對照相比，無論是否存在促分裂原刺激，化合物1和2都降低增殖(數據未顯示)。
與10μM化合物1或2一起預培育24小時后，相比僅與載體一起培育，細胞數都有顯著且有意義地減少(化合物1-73％；化合物2-55％)。與化合物1一起預培育對于對ConA的反應沒有影響，而與化合物2一起預培育使細胞對ConA的增殖反應明顯低于僅與載體一起預培育的反應。不與任何一種化合物一起預培育影響對LPS的反應。與僅與載體預培育的那些細胞相比，在不存在促分裂原時培養3天后，脾細胞的生存力不會受到化合物1的影響，但化合物2會使其顯著降低。結果示于圖17。
這些結果提示，這兩種化合物對休眠淋巴細胞都具有細胞毒性。化合物1似乎不會阻斷處于細胞周期G0或G1期的休眠淋巴細胞，而化合物2可能影響休眠T細胞的細胞周期使它們即便在不存在化合物2時也不能響應促分裂原刺激。
在治療學上的意義是，這些化合物具有免疫調節活性，從而導致在各種靶點內具有抗炎活性和心血管活性。
8.毒性研究 在一項小規模研究中，通過i/p注射給BALB/cnu/nu小鼠施用50mg/kg化合物2(n＝2)(用6％Tween 20PBS制成溶液)或相同體積的載體(n＝2)。用臨床監測表每天測量小鼠體重并觀察毒性征兆。在第9天時，用頸脫位法殺死小鼠并收集每只小鼠的腎、脾和肝進行毒性的組織學評估。見圖18。
檢測到在給予化合物2的小鼠和僅給予載體的小鼠間體重無任何差異，無異常臨床征兆尤其是腸胃副作用，且任何器官都沒有毒性的組織學證據。
不希望受理論限制，認為本發明的化合物可調節動物細胞內的多種信號轉導過程，這些信號轉導過程參與許多對于所有動物細胞的存活和功能而言至關重要的功能。因此，這些化合物在動物包括人類中具有廣泛且重要的健康益處，尤其是具有預防和治療重要和常見人類疾病、紊亂和功能的潛能，具有基本上未曾料到的益處。
本發明的特殊益處在于(a)該化合物尋靶大多數信號轉導過程，(b)對這些不同過程的調節實際包括上調其中一些過程和下調另一些過程，以及(c)這種對信號轉導過程廣泛且可變的影響伴隨著對許多作為代謝和類固醇產生基礎的重要的酶的獨立影響。
本說明書中的參考文獻不是，也不應理解為承認或以任何形式提示現有技術構成所從事領域的公知知識。
本領域技術人員應知道，除了專門描述的那些，本文所述發明不難作出改變和改進。應知道本發明包括所有這些改變和改進。本發明也包括說明書中個別或共同提及或指出的所有步驟、特征、組合物和化合物，以及任兩個或多個所述步驟或特征的任意和所有組合。
參考文獻
Carty，E.，M.Macey，S.A.McCartney和D.S.Rampton(2000)“Ridogrel，a dualthromboxane synthase inhibitor and receptor antagonistanti-inflammatory profile ininflammatory bowel disease(血栓烷合酶抑制劑和受體拮抗劑利多格雷在炎性腸病中的抗炎作用)”。Alimentary Pharmacology&Therapeutics 14(6)807-17。
Carty，E.，C.Nickols、R.M.Feakins和D.S.Rampton(2002)“Thromboxane synthaseimmunohistochemistry in inflammatory bowel disease(血栓烷合酶在炎性腸病中的免疫組織化學)”Journal of Clinical Pathology 55(5)367-370。
Caughey，G.E.，M.Pouliot，L.G.Cleland和M.J.James(1997)“Regulation of tumornecrosis factor-alpha and IL-I beta synthesis by thromboxane A2 in nonadherent humanmonocytes(在非貼壁人單核細胞中調節血栓烷A2對腫瘤壞死因子-α和IL-1β的合成)”Journal of Immunology 158(1)351-8。
Chang，J.等，(1986)“Correlation between mouse skin inflammation induced byarachidonic acid and eicosanoid synthesis(花生四烯酸誘導的小鼠皮膚炎癥和類花生酸合成之間的相關性)”Inflammation 10(3)205-14。
Chin-Dusting，J.P.，L.J.Fisher等，(2001)“The vascular activity of some isoflavonemetabolitesimplications for a cardioprotective role(一些異黃酮代謝物的血管活性可能具有心臟保護作用)”British Journal of Pharmacology.133(4)595-605。
Demasi，M.，G.E.Caughey等，(2000)“Assay of cyclooxygenase-1 and 2 in humanmonocytes(測定人單核細胞中的環加氧酶-1和2)”Inflammation Research 49(12)737-43。
Gonzalez，S.和M.A.Pathak(1996)“Inhibition of ultraviolet-induced formation ofreactive oxygen species，lipid peroxidation，erythema and skin photosensitization bypolypodium leucotomos(用polypodium leucotomos抑制紫外線誘導的反應性氧種類的形成、脂質過氧化反應、紅斑和皮膚光敏作用)”Photodermatol PhotoimmunolPhotomed 12(2)45-56。
Hawkey，C.J.，N.K.Boughton-Smith和B.J.Whittle(1985)“Modulation of humancolonic arachidonic acid metabolism by sulfasalazine(用柳氮磺吡啶調節人結腸的花生四烯酸代謝)”Digestive Diseases&Sciences 30(12)1161-5。
Kanzawa，F.，Nishio，N.，Fukuoka，K.，Fukuda，M.，Kunimoto，T.和Saijo，N.(1997)“Evaluation of synergism by a novel three-dimensional model for the combinedaction of Cisplatin and Etoposide on the growth of a human small-cell lung-cancer cellline，SBC-3(用新的三維模型評價協同作用以了解順鉑和依托泊甙對人小細胞肺癌細胞系SBC-3生長的組合作用)”International Journal ofCancer 71311-9，1997。
Lianos，E. A.和B.A.Bresnahan(1999)“Effect of thromboxane A2 inhibition andantagonism on prostaglandin and leukotriene synthesis in glomerular immune injury(血栓烷A2的抑制和拮抗作用對腎小球免疫損傷中前列腺素和白三烯合成的影響)”Journal of Laboratory&Clinical Medicine 134(5)478-82。
McCartney，S.A.，J.A.Mitchell，P.D.Fairclough，M.J.Farthing和T.D.Warner(1999)“Selective COX-2 inhibitors and human inflammatory bowel disease(選擇性COX-2抑制劑和人炎性腸病)”Alimentary Pharmacology&Therapeutics 13(8)1115-7。
Mosmann，T.(1983)“Rapid colorimetric assay for cellular growth and survivalapplication to proliferation and cytotoxicity assays(用于增殖和細胞毒性試驗的細胞生長和存活的快速比色測定法)”Journal ofImmunological Methods.65(1-2)55-63。
Opas，E.E.等，(1985)“Prostaglandin and leukotriene synthesis in mouse earsinflamed by arachidonic acid(由花生四烯酸導致發炎的小鼠耳中前列腺素和白三烯的合成)”Journal of Investigative Dermatology 84(4)253-6。
Penglis，P.S.，L.G.Cleland，M.Demasi，G.E.Caughey和M.J.James(2000)“Differential regulation of prostaglandin E2 and thromboxane A2 production in humanmonocytesimplications for the use ofcyclooxygenase inhibitors(人單核細胞中前列腺素E2和血栓烷A2產生的差異調節環加氧酶抑制劑的用途)”Journal of Immunology165(3)1605-11。
Rampton，D.S.和C.E.Collins(1993)“Review articlethromboxanes in inflammatorybowel disease-pathogenic and therapeutic implications(回顧血栓烷在炎性腸病中的致病和治療作用)”Alimentary Pharmacology&Therapeutics 7(4)357-67。
Raud，J.，S.-E.Dahlen，A.Sydbom，L.Lindbom和P.Hedqvist(1988)“Enhancementof acute allergic inflammation by indomethacin is reversed by prostaglandin E2apparentcorrelation with in vivo modulation of mediator release(前列腺素E2能逆轉消炎痛增強急性過敏性炎癥的作用似乎與調質釋放的體內調節相關)”Proc.Natl.Acad.Sci.USA.852315-2319。
Shi，H.，A.Yokoyama，N.Kohno，Y Hirasawa，K.Kondo，K.Sakai和K.Hiwada(1998)“Effect of thromboxane A2 inhibitors on allergic pulmonary inflammation inmice(血栓烷A2抑制劑對小鼠過敏性肺炎的影響)”European Respiratory Journal11(3)624-9。
Sondergaard，J.等，(1985)“Eicosanoids in skin UV inflammation(類花生酸在皮膚UV炎癥中的作用)”Photo-Dermatology 2(6)359-66。
Tilley，S.L.，T.M.Coffman和B.H.Roller(2001)“Mixed messagesmodulation ofinflammation and immune responses by prostaglandins and thromboxanes(組合信息用前列腺素類物質和血栓烷調節炎癥和免疫應答)”Journal of Clinical Investigation108(1)15-23。
Widyarini，S.等，(2001)“Isoflavonoid compounds from red clover(Trifolium pratense)protect from inflammation and immune suppression induced by UV radiation(來自紅三葉草(Trifolium pratense)的異類黃酮化合物保護免于UV輻射誘導的炎癥和免疫抑制)”Photochemistry&Photobiology 74(3)465-70。
Young，J.M.等，(1984)“The mouse ear inflammatory response to topical arachidonicacid(局部給予花生四烯酸對小鼠耳炎的影響)”Journal of Investigative Dermatology.82(4)367-71。
權利要求
1.通式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽
式中，
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8獨立為氫、羥基、OR9、OC(O)H、OC(O)R9、OSi(R10)3、C(O)R11、CO2R12、烷基、鹵代烷基、環烷基、芳基、芳基烷基、硫醇、烷硫基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硝基、氰基或鹵素，
R9是烷基、鹵代烷基、芳基、芳基烷基或烷基芳基，
R10獨立為氫、烷基或芳基，
R11是氫、烷基、芳基、芳基烷基或氨基酸，
R12是氫、烷基、鹵代烷基、芳基或芳基烷基，和
X是O、NR12或S，優選O，
該化合物可任選取代。
2.如權利要求1所述的通式(Ia)的化合物或其藥學上可接受的鹽
式中，
R1是氫或C1-6-烷基，
R2、R3和R4獨立為氫、羥基、OR9、OC(O)R9、OSi(R10)3、C1-6烷基、芳基、芳基-C1-6烷基或鹵素，
R5、R6、R7和R8獨立為氫、羥基、OR9、OC(O)R9、OSi(R10)3、C1-6烷基、芳基、芳基-C1-6烷基或鹵素，
R9是C1-6烷基，氟-C1-6烷基或芳基-C1-6烷基，和
R10獨立為C1-6烷基。
3.如權利要求1所述的通式(Ib)的化合物或其藥學上可接受的鹽
式中，
R2、R3、R5和R8獨立為氫、羥基、OR9、OC(O)R9、OSi(R10)3、甲基、乙基、丙基、異丙基、仲丁基、叔丁基、苯基或芐基，
R4和R7獨立為氫、羥基、OR9、OC(O)R9或OSi(R10)3，
R6是氫、羥基、OR9、OC(O)R9或OSi(R10)3，
R9是甲基、乙基、丙基、異丙基、仲丁基、叔丁基、苯基或芐基，和
R10獨立為甲基、乙基或叔丁基。
4.如權利要求3所述的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，
R2、R3、R5和R8獨立為氫、羥基、OR9、OC(O)R9或甲基，
R4和R7獨立為羥基、OR9或OC(O)R9，
R6是氫，
R8是氫、羥基、OR9、OC(O)R9或甲基，和
R9是甲基或芐基。
5.如權利要求4所述的化合物，其中，R4是甲氧基。
6.如權利要求4所述的化合物，其中，R3和R4是甲氧基。
7.如權利要求4所述的化合物，其中，R8是甲基。
8.如權利要求4所述的化合物，該化合物選自
4，9-二羥基-14，15-二甲氧基-12a-(3’，4’-二甲氧基苯基)-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]
(1)
4，9-二乙酰氧基-14，15-二甲氧基-12a-(3’，4’-二甲氧基苯基)-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]
(1-Ac)
4，9-二羥基-14，15-二甲氧基-12a-(3’，4’-二甲氧基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]
(2)
4，9-二乙酰氧基-14，15-二甲氧基-12a-(3’，4’-二甲氧基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]
(2-Ac)
4，9-二羥基-14-甲氧基-12a-(4’-甲氧基苯基)-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]
(3)
4，9-二乙酰氧基-14-甲氧基-12a-(4’-甲氧基苯基)-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]
(3-Ac)
4，9-二羥基-14-甲氧基-12a-(4’-甲氧基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]
(4)
4，9-二乙酰氧基-14-甲氧基-12a-(4’-甲氧基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]
(4-Ac)
4，9，14-三羥基-12a-(4’-羥基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]
(5)
4，9，14-三乙酰氧基-12a-(4’-乙酰氧基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]
(5-Ac)
4，9-二羥基-15-甲氧基-12a-(3’-甲氧基苯基)-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]
(6)
4，9-二乙酰氧基-15-甲氧基-12a-(3’-甲氧基苯基)-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]
(6-Ac)
4，9，15-三羥基-12a-(3’-羥基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]
(7)
4，9，15-三乙酰氧基-12a-(3’-乙酰氧基苯基)-3，10-二甲基-2，11-二氧-(1H，12H)-6b，6c，12a，16b-四氫萘并[1，2-g]
(7-Ac)。
9.一種制備權利要求1所述的式(I)的化合物的方法，該方法包括使式(II)的化合物或其藥學上可接受的鹽與偶聯劑反應的步驟
式中，
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8獨立為氫、羥基、OR9、OC(O)H、OC(O)R9、OSi(R10)3、C(O)R11、CO2R12、烷基、鹵代烷基、環烷基、芳基、芳基烷基、硫醇、烷硫基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硝基、氰基或鹵素，
R9是烷基、鹵代烷基、芳基、芳基烷基或烷基芳基，
R10獨立為氫、烷基或芳基，
R11是氫、烷基、芳基、芳基烷基或氨基酸，
R12是氫、烷基、鹵代烷基、芳基或芳基烷基，
R13是氫、R9、C(O)R9、Si(R10)3、烷基磺酰基或苯磺酰基，和
X是O、NR12或S，優選O，
該化合物可任選取代。
10.一種治療、預防或改善某種疾病的方法，該方法包括給予對象治療有效量的一種或多種式(I)的化合物的步驟。
11.如權利要求10所述的方法，其中，所述疾病或異常選自癌癥、細胞生長的有害增殖或上調、炎癥或炎性疾病、自身免疫性疾病、心血管疾病及與雌激素受體活化有關的疾病。
12.如權利要求11所述的方法，其中，所述治療是治療與炎癥相關的疼痛。
13.如權利要求11或12所述的方法，其中，所述炎性疾病是炎性腸病、潰瘍性結腸炎、潰瘍性直腸炎、末端結腸炎或克羅恩病。
14.如權利要求11-13中任一項所述的方法，其中，所述炎性疾病的治療無心血管副作用和/或是腸道保護性的。
15.如權利要求14所述的方法，其中，所述治療是心臟保護性的。
16.如權利要求11所述的方法，其中，所述癌癥選自白血病，膠質瘤，黑色素瘤以及前列腺、卵巢、乳腺、結腸直腸、肺和胰腺的癌癥。
17.血栓烷合酶抑制劑在制造用于治療炎癥、包括與炎癥相關的疼痛的藥物中的應用。
18.如權利要求17所述的應用，其中，所述治療是心臟保護性的和/或腸道保護性的。
19.一種或多種式(I)的化合物在制造用于治療疾病的藥物中的應用。
20.一種或多種式(I)的化合物作為抗炎藥、心血管藥、化療劑、化學治療增敏劑或輻射敏化劑的應用。
21.一種用于治療、預防或改善某種疾病的藥劑，該藥劑包含一種或多種式(I)的化合物。
22.一種藥物組合物，其包含一種或多種式(I)的化合物以及一種或多種藥物載體和/或賦形劑。
23.一種飲品或食品，其包含一種或多種式(I)的化合物。
24.一種增強或恢復癌細胞或腫瘤對化療劑的敏感性的方法，該方法包括使所述細胞或腫瘤接觸式(I)的異類黃酮二聚物。
25.如權利要求15所述的方法，其中，所述化療劑是生長受體抑制劑或死亡受體刺激劑。
26.一種保護非腫瘤細胞免于化療或放療的方法，該方法包括使非腫瘤細胞或細胞群接觸式(I)的異類黃酮二聚物。
全文摘要
描述了基于苯基-取代的萘并[1，2-g]化合物(A)的新型化合物。該化合物是將3-苯基色滿(異類黃酮)環系統(B)二聚獲得的。還描述了合成該新型二聚化合物的方法、含有該化合物的組合物以及該二聚物作為治療劑的應用。
文檔編號C07D471/04GK101184756SQ200680018428
公開日2008年5月21日 申請日期2006年3月24日 優先權日2005年3月24日
發明者A·希頓, N·庫馬 申請人:諾沃根研究控股有限公司