本(ben)發明(ming)涉及(ji)(ji)(ji)免(mian)疫調節，具體涉及(ji)(ji)(ji)mir-540-3p及(ji)(ji)(ji)過(guo)表達其的bmsc外泌體在(zai)制備(bei)器(qi)官移植免(mian)疫治療藥物中的應用。

背景技術：

1、本節中的陳述僅提供(gong)與本申(shen)請公開相關的背(bei)景(jing)信息，并(bing)且(qie)可(ke)能不構成現(xian)有(you)技術(shu)。

2、免(mian)疫調節是(shi)異基因(yin)器(qi)官(guan)移植排(pai)斥反應(ying)的(de)(de)(de)關鍵因(yin)素，長(chang)期使用免(mian)疫抑制(zhi)藥(yao)物來確(que)保移植器(qi)官(guan)的(de)(de)(de)成活往往會(hui)導致患者身(shen)體的(de)(de)(de)不(bu)良反應(ying)。

3、吲哚胺2，3-二加氧酶1（ido1）在免疫(yi)(yi)(yi)(yi)調節機制中(zhong)(zhong)發揮(hui)著重(zhong)要(yao)作用(yong)，可促進色(se)氨(an)酸（trp）分解(jie)代謝。先前的(de)(de)研(yan)究表(biao)(biao)明，增強ido活化(hua)可以(yi)減(jian)少(shao)trp產(chan)物(wu)(wu)(wu)，從而(er)通過(guo)抑制樹突(tu)狀細(xi)(xi)胞(bao)（dc）功(gong)能(neng)來減(jian)弱t細(xi)(xi)胞(bao)活化(hua)和(he)(he)增殖。ido已被證實通過(guo)抑制排斥反應在器官移(yi)植(zhi)中(zhong)(zhong)發揮(hui)保(bao)護(hu)功(gong)能(neng)。研(yan)究表(biao)(biao)明，ido的(de)(de)過(guo)表(biao)(biao)達(da)(da)可以(yi)通過(guo)抑制t細(xi)(xi)胞(bao)反應和(he)(he)增強抗(kang)氧化(hua)防御(yu)系統來保(bao)護(hu)肺同種異(yi)體移(yi)植(zhi)物(wu)(wu)(wu)。此外(wai)，另外(wai)的(de)(de)研(yan)究還描(miao)述了ido表(biao)(biao)達(da)(da)在由細(xi)(xi)胞(bao)毒(du)性(xing)t淋巴細(xi)(xi)胞(bao)相關(guan)抗(kang)原4免疫(yi)(yi)(yi)(yi)球蛋白（ctla4ig）在大(da)鼠同種異(yi)體移(yi)植(zhi)模型中(zhong)(zhong)具有(you)不可或缺(que)的(de)(de)作用(yong)；而(er)ctla4ig是預防同種異(yi)體移(yi)植(zhi)物(wu)(wu)(wu)排斥和(he)(he)誘導耐(nai)受(shou)性(xing)的(de)(de)重(zhong)要(yao)因素。ido1主要(yao)在免疫(yi)(yi)(yi)(yi)細(xi)(xi)胞(bao)中(zhong)(zhong)表(biao)(biao)達(da)(da)，例如樹突(tu)狀細(xi)(xi)胞(bao)、巨噬(shi)細(xi)(xi)胞(bao)和(he)(he)單(dan)核細(xi)(xi)胞(bao)。它(ta)通過(guo)調節免疫(yi)(yi)(yi)(yi)激活和(he)(he)抑制之間的(de)(de)平衡，在免疫(yi)(yi)(yi)(yi)耐(nai)受(shou)和(he)(he)免疫(yi)(yi)(yi)(yi)逃逸機制中(zhong)(zhong)起著至關(guan)重(zhong)要(yao)的(de)(de)作用(yong)。

4、間充(chong)質干(gan)細胞(bao)作為細胞(bao)治(zhi)療(liao)的(de)寶貴資源的(de)潛(qian)力(li)已(yi)被證(zheng)明(ming)，它們具有減少炎癥和(he)抑制免疫系統(tong)的(de)顯著能力(li)，使(shi)其成為治(zhi)療(liao)移(yi)植(zhi)(zhi)物抗宿主病（gvhd）和(he)預(yu)防移(yi)植(zhi)(zhi)物排斥反應(ying)的(de)理想選(xuan)擇。然而，移(yi)植(zhi)(zhi)間充(chong)質干(gan)細胞(bao)的(de)活力(li)不(bu)足(zu)阻(zu)礙了間充(chong)質干(gan)細胞(bao)治(zhi)療(liao)的(de)療(liao)效。

5、本申請(qing)的發明人(ren)使用過(guo)表(biao)達ido1的間充質干(gan)(gan)細胞外泌(mi)體(ti)治(zhi)療大鼠異(yi)基(ji)因(yin)心臟移植(zhi)，發現間充質干(gan)(gan)細胞外泌(mi)體(ti)能夠保護移植(zhi)器官。通過(guo)生(sheng)物信息(xi)學分析差異(yi)蛋白表(biao)達發現，間充質干(gan)(gan)細胞外泌(mi)體(ti)中mir-540-3p表(biao)達顯著上調。

6、現有技(ji)術文獻認為mir-540-3p抑(yi)(yi)制(zhi)(zhi)心(xin)(xin)肌(ji)(ji)(ji)細(xi)(xi)胞(bao)成(cheng)熟(shu)。《cmarr/mir-540-3p軸通過(guo)協調dtna表(biao)達(da)促進(jin)心(xin)(xin)肌(ji)(ji)(ji)細(xi)(xi)胞(bao)成(cheng)熟(shu)轉(zhuan)變》公開(kai)了mir-540-3p抑(yi)(yi)制(zhi)(zhi)dtna表(biao)達(da)，抑(yi)(yi)制(zhi)(zhi)心(xin)(xin)肌(ji)(ji)(ji)細(xi)(xi)胞(bao)成(cheng)熟(shu)。長鏈非(fei)編碼(ma)rna-cmarr作(zuo)為一(yi)種競(jing)爭性內源性rna可阻止mir-540-3p對dtna表(biao)達(da)的(de)抑(yi)(yi)制(zhi)(zhi)，促進(jin)心(xin)(xin)肌(ji)(ji)(ji)細(xi)(xi)胞(bao)成(cheng)熟(shu)，進(jin)而(er)cmarr能夠作(zuo)為構建心(xin)(xin)肌(ji)(ji)(ji)貼(tie)片治療心(xin)(xin)肌(ji)(ji)(ji)梗死(si)的(de)功能因子(zi)。

7、本申請創造性地發現(xian)，mir-540-3p能(neng)夠抑制心臟同(tong)種異體(ti)移(yi)植(zhi)中的(de)免疫排(pai)異反應，保(bao)護同(tong)種異體(ti)移(yi)植(zhi)器官。

技術實現思路

1、本發(fa)(fa)明的(de)目(mu)的(de)在于(yu)：針(zhen)對目(mu)前移植(zhi)器(qi)官(guan)難以(yi)(yi)成活，免疫(yi)(yi)抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)(zhi)劑治(zhi)(zhi)療(liao)效果不好的(de)問題，提供了mir-540-3p及過(guo)表(biao)達(da)其(qi)的(de)bmsc外泌體(ti)在制(zhi)(zhi)備(bei)(bei)器(qi)官(guan)移植(zhi)免疫(yi)(yi)治(zhi)(zhi)療(liao)藥(yao)(yao)物(wu)中的(de)應(ying)用(yong)，公(gong)開(kai)了心臟(zang)移植(zhi)免疫(yi)(yi)抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)(zhi)的(de)新(xin)的(de)靶點(dian)mir-540-3p，為開(kai)發(fa)(fa)免疫(yi)(yi)治(zhi)(zhi)療(liao)藥(yao)(yao)物(wu)提供新(xin)的(de)可(ke)行方(fang)向，豐富心臟(zang)移植(zhi)免疫(yi)(yi)抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)(zhi)研究數據(ju)。mir-540-3p在制(zhi)(zhi)備(bei)(bei)器(qi)官(guan)移植(zhi)免疫(yi)(yi)治(zhi)(zhi)療(liao)藥(yao)(yao)物(wu)中的(de)應(ying)用(yong)例(li)如可(ke)以(yi)(yi)是(shi)：（1）使用(yong)mir-540-3p或過(guo)表(biao)達(da)其(qi)的(de)外泌體(ti)作為藥(yao)(yao)物(wu)組分(fen)進(jin)行藥(yao)(yao)物(wu)制(zhi)(zhi)備(bei)(bei)；（2）mir-540-3p作為藥(yao)(yao)物(wu)作用(yong)靶點(dian)開(kai)發(fa)(fa)與其(qi)相關的(de)免疫(yi)(yi)抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)(zhi)藥(yao)(yao)物(wu)；（3）mir-540-3p作為藥(yao)(yao)效評估因子，用(yong)于(yu)藥(yao)(yao)物(wu)開(kai)發(fa)(fa)時評估免疫(yi)(yi)抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)(zhi)藥(yao)(yao)物(wu)的(de)藥(yao)(yao)效等(deng)。

2、本(ben)發(fa)明的技術方案如下(xia)：

3、本(ben)申請一方(fang)面提供mir-540-3p在制備器官移植免(mian)疫治療(liao)藥物中的(de)應用。

4、優(you)選地，所述(shu)藥物(wu)靶向(xiang)cd74，所述(shu)藥物(wu)通過(guo)抑(yi)制cd74/nf-κb軸(zhou)促進同種異體移(yi)植器官的免(mian)疫(yi)耐(nai)受(shou)。

5、優(you)選地，所述器(qi)官(guan)移植(zhi)(zhi)(zhi)為心臟(zang)移植(zhi)(zhi)(zhi)，所述器(qi)官(guan)移植(zhi)(zhi)(zhi)為異基(ji)因心臟(zang)移植(zhi)(zhi)(zhi)。

6、本發明(ming)另一方面還提供過(guo)表達mir-540-3p的(de)bmsc細胞外泌體在制備器官移植(zhi)免疫治療藥物中的(de)應用。

7、本發明另一(yi)方面(mian)還提(ti)供mir-540-3p在(zai)評估心臟(zang)移植(zhi)免疫抑制藥物的(de)藥效和(he)個性化用藥中的(de)應用。

8、本發明另一方面還提(ti)供mir-540-3p表(biao)達(da)促進劑在制備器官移(yi)植免疫治療藥(yao)物中的應用。

9、與現有的(de)技術相比本發明(ming)的(de)有益(yi)效果是(shi)：

10、1、mir-540-3p與dc或t細胞中的(de)免(mian)疫耐受(shou)性(xing)(xing)具備相關性(xing)(xing)，mir-540-3p在(zai)dc或t細胞中的(de)過表達增強(qiang)了免(mian)疫耐受(shou)性(xing)(xing)，bmscmir-540-3p-模擬物外泌體治療心(xin)臟移植(zhi)大(da)鼠能夠增強(qiang)大(da)鼠心(xin)臟功能；

11、2、施用(yong)來自過表達(da)mir-540-3p的(de)bmsc的(de)外泌(mi)體或將mir-540-3p引入細(xi)胞(bao)會導(dao)致幾種影響(xiang)：（1）cd80、cd86和(he)(he)mhcii表達(da)降低，同(tong)時(shi)cd274在(zai)dc中(zhong)表達(da)增加；（2）cd4+和(he)(he)cd8+t細(xi)胞(bao)比例(li)降低，t調節細(xi)胞(bao)（tregs）增加；（3）促炎細(xi)胞(bao)因子水(shui)平降低，抗炎細(xi)胞(bao)因子水(shui)平升高；（4）抑制(zhi)cd74和(he)(he)nf-κb?p65表達(da)；

12、3、將mir-540-3p或(huo)過表(biao)達(da)mir-540-3p的(de)bmsc的(de)外泌體(ti)用于免疫移植(zhi)治療能夠增強(qiang)移植(zhi)器官的(de)功能，提升移植(zhi)器官和受體(ti)的(de)成活率。

技術特征：

1.mir-540-3p在制(zhi)備器(qi)官(guan)移(yi)植免疫治(zhi)療(liao)藥物(wu)中的(de)應(ying)用(yong)。

2.根據權利要求1所述(shu)的mir-540-3p在制備器官移植免疫治療藥物中的應(ying)用(yong)，其特征在于(yu)，所述(shu)藥物靶向cd74。

3.根(gen)據權利要求2所(suo)述的mir-540-3p在(zai)制(zhi)備(bei)器官移植(zhi)免(mian)疫治(zhi)療藥物中的應(ying)用，其特征(zheng)在(zai)于，所(suo)述藥物通過抑制(zhi)cd74/nf-κb軸促進同種異體移植(zhi)器官的免(mian)疫耐受。

4.根據權利要求1所(suo)述的mir-540-3p在(zai)制備器官(guan)移(yi)植(zhi)免疫治療藥(yao)物中(zhong)的應用(yong)，其特征在(zai)于，所(suo)述器官(guan)移(yi)植(zhi)為(wei)心臟移(yi)植(zhi)。

5.根據(ju)權(quan)利要(yao)求4所(suo)(suo)述(shu)的mir-540-3p在(zai)制(zhi)備器(qi)官移(yi)(yi)植(zhi)(zhi)免疫治療藥物中(zhong)的應(ying)用，其特征在(zai)于，所(suo)(suo)述(shu)器(qi)官移(yi)(yi)植(zhi)(zhi)為異基因心臟(zang)移(yi)(yi)植(zhi)(zhi)。

6.mir-540-3p表達促進劑在制備器官(guan)移植免疫(yi)治(zhi)療藥物中的應(ying)用。

7.過表達mir-540-3p的bmsc外泌體在制備器官移植免(mian)疫治療藥(yao)物中的應(ying)用。

技術總結
本發明涉及免疫調節技術領域，公開了miR?540?3p及過表達其的BMSC外泌體在制備器官移植免疫治療藥物中的應用，發現了miR?540?3p能夠抑制心臟同種異體移植中的免疫排異反應，保護同種異體移植器官。miR?540?3p在DC或T細胞中的過表達增強了免疫耐受性，將過表達miR?540?3p的BMSC分泌的外泌體注射入心臟移植大鼠體內可以抑制受體大鼠免疫排斥反應改善移植心臟心功能。

技術研發人員：李思,賀繼剛,武馨馨,嚴丹,蘭海濤
受保護的技術使用者：云南省第一人民醫院
技術研發日：
技術公布日：2024/9/19