一種五味子抑菌提取物的制備方法
【專利摘要】本發明特別公開了一種五味子抑菌提取物的制備方法。該五味子抑菌提取物的制備方法，包括如下步驟：（1）向五味子中加入蒸餾水，水煎，過濾提取液；（2）將提取液濃縮至使每1毫升提取液中含五味子1克，得濃縮液；（3）加入乙醇，攪拌，過濾，減壓濃縮；（4）用氯仿萃取，保留水相；（5）用乙酸乙酯萃取，保留水相；（6）用正丁醇萃取，保留水相；（7）將水相萃取液過D101大孔吸附樹脂柱，洗脫，減壓濃縮，即得五味子抑菌提取物。本發明的有益效果是：制備工藝簡單，制得的五味子抑菌提取物中含有大量的有機酸類成分，其中莽草酸的含量高達13.98%，具有明顯的體內外抑菌活性、廣譜性和高效性，抗菌活性不產生耐藥性。
【專利說明】一種五味子抑菌提取物的制備方法
(-)【技術領域】
[0001]本發明特別涉及一種五味子抑菌提取物的制備方法。
(二)【背景技術】
[0002]傳染病是危害人類健康的首要原因，也是導致人類死亡的重要原因，而細菌感染則是傳染病的重要組成部分，細菌感染是危害人類健康的大敵。目前，治療細菌感染的藥物主要依賴于抗生素，然而，由于人類抗菌藥物的廣泛應用，尤其是不合理使用，使得許多細菌在抗菌藥物的強大壓力下逐漸進化，產生對抗菌藥物的強力抗藥性，致使抗菌藥物對耐藥菌株的療效不斷減弱甚至無效，此外細菌的耐藥機制多種多樣，現在幾乎每種有效的抗生素都發現了其相應的耐藥菌。這種情況下，在中醫藥中尋求新的抗菌藥物已成為解決細菌耐藥性的一種有效途徑。
[0003]五味子為木蘭科植物五味子(Schisandra chimesmsis (Turcz.) Baill.)的干燥成熟果實，收載于《中國藥典》2000版，俗稱北五味子。北五味子是生長于中國東北，遍布小興安嶺、伊春、桃山、延邊等地的一種道地藥材。目前對五味子的藥理活性研究主要集中于其木質素成分，還沒有發現五味子的其他藥理活性的研究，因此也沒有相關的五味子提取物的制備方法的介紹。
(三)
【發明內容】

[0004]本發明為了彌補現有技術的不足，提供了一種制備工藝簡單、制備時間短、制得的五味子抑菌提取物具有明顯的體內外抑菌活性、廣譜性和高效性、抗菌活性不產生耐藥性的五味子抑菌提取物的制備方法。
[0005]本發明是通過如下 技術方案實現的:
[0006]一種五味子抑菌提取物的制備方法，包括如下步驟:
[0007](I)向五味子中加入蒸餾水，五味子與蒸餾水的重量比為1:2.5，在100°C下水煎兩次，每次2小時，合并兩次水煎的提取液，經藥典9號篩過濾；
[0008](2)將過濾后的提取液在37°C下濃縮至使每I毫升提取液中含五味子I克，得濃縮液；
[0009](3)向濃縮液中緩慢加入體積分數為95%的乙醇，快速攪拌該混合藥液，直到混合藥液中乙醇的體積分數達到75%-80%，然后過濾，過濾后將濾液在壓力為200Pa、溫度為50°C的條件下減壓濃縮至無醇味，再加蒸餾水補足至使每I毫升濃縮液中含五味子I克；
[0010](4)然后用1/2體積的氯仿萃取3-5次，保留水相；
[0011](5)再用1/2體積的乙酸乙酯萃取水相3-5次，繼續保留水相；
[0012](6)最后用1/2體積的正丁醇萃取水相3-5次，繼續保留水相；
[0013](7)將萃取后得到的水相萃取液過DlOl大孔吸附樹脂柱，用5倍DlOl大孔吸附樹脂體積的純水洗脫，收集洗脫液，然后在壓力為70Pa、溫度為55°C的條件下將洗脫液減壓濃縮至使每I毫升洗脫液中含五味子I克，即得五味子抑菌提取物。[0014]五味子具有收斂固澀、益氣生津、寧心安神的功效，主治久咳虛喘，夢遺滑精，尿頻遺尿，久瀉不止，自汗盜汗，津傷口渴，心悸失眠。
[0015]本發明五味子抑菌提取物的制備方法的有益效果是:制備工藝簡單，制備時間短，制得的五味子抑菌提取物中含有大量的有機酸類成分，該有機酸類成分為以莽草酸為主的抗菌活性成分,其中莽草酸的含量高達13.98%，通過動物體內和體外抗菌試驗表明，使用本發明五味子抑菌提取物的制備方法制得的五味子抑菌提取物具有明顯的體內外抑菌活性、廣譜性和高效性，且其抗菌活性不產生耐藥性。
(四)【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]下面結合附圖對本發明作進一步的說明。
[0017]圖1為莽草酸標準品(2mg/ml)的液相色譜圖；
[0018]圖2為使用本發明五味子抑菌提取物的制備方法制備的五味子抑菌提取物(20倍稀釋)的液相色譜圖。
(五)【具體實施方式】
[0019]下面結合實施例對本發明作進一步說明，但本發明并不局限于此，實施例中的制備方法均為常規制備方法，不再詳述。
[0020]實施例1:
[0021]該五味子抑菌提取物的制備方法，采用如下步驟:
[0022](I)向2千克五味子中加入5千克蒸餾水，在100°C下水煎兩次，每次2小時，合并兩次水煎的提取液，經藥典9`號篩過濾；
[0023](2)將過濾后的提取液在37°C下濃縮至2升，得濃縮液；
[0024](3)向濃縮液中緩慢加入體積分數為95%的乙醇，快速攪拌該混合藥液，直到混合藥液中乙醇的體積分數達到78%，然后過濾，過濾后將濾液在壓力為200Pa、溫度為50°C的條件下減壓濃縮至無醇味，再加蒸餾水補足至2升；
[0025](4)然后用1/2體積的氯仿萃取4次，保留水相；
[0026](5)再用1/2體積的乙酸乙酯萃取水相4次，繼續保留水相；
[0027](6)最后用1/2體積的正丁醇萃取水相4次，繼續保留水相；
[0028](7)將萃取后得到的水相萃取液過DlOl大孔吸附樹脂柱，用5倍DlOl大孔吸附樹脂體積的純水洗脫，收集洗脫液，然后在壓力為70Pa、溫度為55°C的條件下將洗脫液減壓濃縮至2升，即得五味子抑菌提取物。制得的該五味子抑菌提取物具有明顯的體內外抑菌活性、廣譜性和高效性，且其抗菌活性不產生耐藥性，五味子抑菌提取物中的成分含莽草酸(HPLC法)，莽草酸含量達13.98%。
[0029]實施例2:
[0030]該五味子抑菌提取物的制備方法，采用如下步驟:
[0031](I)向3千克五味子中加入7.5千克蒸餾水，在100°C下水煎兩次，每次2小時，合并兩次水煎的提取液，經藥典9號篩過濾；
[0032](2)將過濾后的提取液在37°C下濃縮至3升，得濃縮液；
[0033](3)向濃縮液中緩慢加入體積分數為95%的乙醇，快速攪拌該混合藥液，直到混合藥液中乙醇的體積分數達到75%，然后過濾，過濾后將濾液在壓力為200Pa、溫度為50°C的條件下減壓濃縮至無醇味，再加蒸餾水補足至3升；
[0034](4)然后用1/2體積的氯仿萃取3次，保留水相；
[0035](5)再用1/2體積的乙酸乙酯萃取水相3次，繼續保留水相；
[0036](6)最后用1/2體積的正丁醇萃取水相3次，繼續保留水相；
[0037](7)將萃取后得到的水相萃取液過DlOl大孔吸附樹脂柱，用5倍DlOl大孔吸附樹脂體積的純水洗脫，收集洗脫液，然后在壓力為70Pa、溫度為55°C的條件下將洗脫液減壓濃縮至3升，即得五味子抑菌提取物。制得的該五味子抑菌提取物具有明顯的體內外抑菌活性、廣譜性和高效性，且其抗菌活性不產生耐藥性，五味子抑菌提取物中的成分含莽草酸(HPLC法)，莽草酸含量達13.98%。
[0038]實施例3:
[0039]該五味子抑菌提取物的制備方法，采用如下步驟:
[0040](I)向4千克五味子中加入10千克蒸餾水，在100°C下水煎兩次，每次2小時，合并兩次水煎的提取液，經藥典9號篩過濾；
[0041](2)將過濾后的提取液在37°C下濃縮至4升，得濃縮液；
[0042](3)向濃縮液中緩慢加入體積分數為95%的乙醇，快速攪拌該混合藥液，直到混合藥液中乙醇的體積 分數達到80%，然后過濾，過濾后將濾液在壓力為200Pa、溫度為50°C的條件下減壓濃縮至無醇味，再加蒸餾水補足至4升；
[0043](4)然后用1/2體積的氯仿萃取5次，保留水相；
[0044](5)再用1/2體積的乙酸乙酯萃取水相5次，繼續保留水相；
[0045](6)最后用1/2體積的正丁醇萃取水相5次，繼續保留水相；
[0046](7)將萃取后得到的水相萃取液過DlOl大孔吸附樹脂柱，用5倍DlOl大孔吸附樹脂體積的純水洗脫，收集洗脫液，然后在壓力為70Pa、溫度為55°C的條件下將洗脫液減壓濃縮至4升，即得五味子抑菌提取物。制得的該五味子抑菌提取物具有明顯的體內外抑菌活性、廣譜性和高效性，且其抗菌活性不產生耐藥性，五味子抑菌提取物中的成分含莽草酸(HPLC法)，莽草酸含量達13.98%。
[0047]試驗1:
[0048]通過體外抑菌試驗比較五味子水煎提取、醇提、超聲提取三種提取方法的抑菌活性:
[0049]1.本發明水煎提取:向五味子中加入蒸餾水，五味子與蒸餾水的重量比為1:2.5，在100°c下水煎兩次，每次2小時，合并兩次水煎的提取液，經藥典9號篩過濾，將過濾后的提取液在37°C下濃縮至使每I毫升提取液中含五味子I克，得濃縮液；
[0050]2.體積分數為80%的乙醇提取:向五味子中加入體積分數為80%的乙醇，五味子與乙醇的重量比為1:2.5，煮沸保溫提取2次，每次2小時，經藥典9號篩過濾，合并提濾液，將過濾后的濾液濃縮至使每I毫升濾液中含五味子I克；
[0051]3.超聲提取:向五味子中加入水，五味子與水的重量比為1:2.5，超聲提取2次，每次2小時，經藥典9號篩過濾，合并提濾液，將過濾后的濾液濃縮至使每I毫升濾液中含五味子I克。
[0052]試驗結果表明本發明水煎提取可獲得對大腸桿菌最好的體外抑菌效果，見表1:[0053]表1不同提取方法所得提取物對大腸桿菌標準菌株CMCC44102的抑菌圈大小(x ± S.D.n=3)
[0054]
【權利要求】
1.一種五味子抑菌提取物的制備方法，其特征是:包括如下步驟: (1)向五味子中加入蒸餾水，五味子與蒸餾水的重量比為1:2.5，在100°C下水煎兩次，每次2小時，合并兩次水煎的提取液，經藥典9號篩過濾； (2)將過濾后的提取液在37°C下濃縮至使每I毫升提取液中含五味子I克，得濃縮液； (3)向濃縮液中緩慢加入體積分數為95%的乙醇，快速攪拌該混合藥液，直到混合藥液中乙醇的體積分數達到75%-80%，然后過濾，過濾后將濾液在壓力為200Pa、溫度為5(TC的條件下減壓濃縮至無醇味，再加蒸餾水補足至使每I毫升濃縮液中含五味子I克； (4)然后用1/2體積的氯仿萃取3-5次，保留水相； (5)再用1/2體積的乙酸乙酯萃取水相3-5次，繼續保留水相； (6)最后用1/2體積的正丁醇萃取水相3-5次，繼續保留水相； (7)將萃取后得到的水相萃取液過DlOl大孔吸附樹脂柱，用5倍DlOl大孔吸附樹脂體積的純水洗脫，收集洗脫液，然后在壓力為70Pa、溫度為55°C的條件下將洗脫液減壓濃縮至使每I毫升洗脫液中含五味子I克，`即得五味子抑菌提取物。
【文檔編號】A61K36/57GK103751279SQ201410059700
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2014年2月21日 優先權日:2014年2月21日
【發明者】林樹乾, 閆紹悅, 宋敏訓, 趙增成, 李桂明, 傅劍, 黃中利, 馮敏燕 申請人:山東省農業科學院家禽研究所