一種五味子丸的制備方法及應用的制作方法
【專利摘要】本發明提供一種五味子丸的制備方法，由酒制五味子200g、酒制肉蓯蓉200g、茯苓100g、酒炒菟絲子200g、鹽制車前子250g、制巴戟天300g作為原料藥制成，采用超臨界萃取制備而成，使得含量有很大提高，服用量減少，本發明還提供了五味子丸在制備抑制大鼠乳腺癌細胞SHZ-88細胞增殖藥物中的應用。
【專利說明】一種五味子丸的制備方法及應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及中藥制劑【技術領域】，具體涉及一種五味子丸的制備方法及應用。
【背景技術】
[0002]五味子丸記載于衛生部頒藥品標準WS3-B-0035-89，處方為酒制五味子200g、酒制肉蓯蓉200g、茯苓100g、酒炒菟絲子200g、鹽制車前子250g、制巴戟天300g，以上六味，粉碎成細粉，過篩，混勻。每100g加末加煉蜜100~120g，制成大蜜丸，即得。能滋補陰氣，填精益髓。用于腎氣不足，腰膝疼痛，記憶衰退，頭暈耳鳴，四肢無力。
[0003]現有技術中，尚未有五味子丸在提取制備方面采用超臨界技術的報道，而采用打粉的方法，工藝粗糙、落后，雜質多，導致患者用量過大，不方便服用，嚴重影響了本品在臨床上應用。

【發明內容】

[0004]發明目的:為了解決上述問題，本發明的目的在于提供一種五味子丸的制備方法。
[0005]本發明的另一個目的在于提供一種五味子丸在制備抑制大鼠乳腺癌細胞SHZ-88細胞增殖藥物中的應用。
[0006]技術方案:本發明的目的是通過如下的方案實現的:
[0007]一種五味子丸的制備方法，由酒制五味子200g、酒制肉蓯蓉200g、茯苓100g、酒炒菟絲子200g、鹽制車前子250g、制巴戟天300g作為原料藥制成，所述的方法由下列步驟組成:取酒制五味子200g、酒制肉蓯蓉200g、茯苓100g、酒炒菟絲子200g、鹽制車前子250g、制巴戟天300g，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30_50°C，CO2流量l_3ml/g生藥.min，萃取時間150-180min，得超臨界萃取物粉末，粉碎成細粉，過篩，混勻，每100g加末加煉蜜100~120g，制成大蜜丸，即得。
[0008]上述五味子丸的制備方法，所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5% 。
[0009]上述五味子丸的制備方法，所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C，CO2流量2ml/g生藥.min,萃取時間160min。
[0010]上述五味子丸在制備抑制大鼠乳腺癌細胞SHZ-88細胞增殖藥物中的應用，五味子丸由酒制五味子200g、酒制肉蓯蓉200g、茯苓100g、酒炒菟絲子200g、鹽制車前子250g、制巴戟天300g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成:取酒制五味子200g、酒制肉蓯蓉200g、茯苓100g、酒炒菟絲子200g、鹽制車前子250g、制巴戟天300g，加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30_50°C，C02流量l_3ml/g生藥.min，萃取時間150_180min，得超臨界萃取物粉末，粉碎成細粉，過篩，混勻，每100g加末加煉蜜100~120g，制成大蜜丸，即得。
[0011]上述五味子丸在制備抑制大鼠乳腺癌細胞SHZ-88細胞增殖藥物中的應用，五味子丸中所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
[0012]上述五味子丸在制備抑制大鼠乳腺癌細胞SHZ-88細胞增殖藥物中的應用，五味子丸中所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C，CO2流量2ml/g生藥.min，萃取時間 160min。
[0013]現有技術中，五味子丸口服，一次I丸，一日2次，每丸重9g，采用本發明制備成的五味子丸每丸4.5g，但含有的藥材量是原來的2倍，因此每次僅需I丸，一日服用I次，在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量。
【具體實施方式】
[0014]以下通過實施例形式，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明，但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例，凡基于本發明上述內容所實現的技術均屬于本發明的范圍。
[0015]實施例1 [0016]取酒制五味子200g、酒制肉蓯蓉200g、茯苓100g、酒炒菟絲子200g、鹽制車前子250g、制巴戟天300g，加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4%，萃取壓力15MPa，溫度30°C，CO2流量lml/g生藥.min，萃取時間150min,得超臨界萃取物粉末，粉碎成細粉，過篩，混勻，每100g加末加煉蜜100g，制成大蜜丸，即得，每丸4.5g0
[0017]實施例2
[0018]取酒制五味子200g、酒制肉蓯蓉200g、茯苓100g、酒炒菟絲子200g、鹽制車前子250g、制巴戟天300g加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為6%,萃取壓力30MPa,溫度50°C,C02流量3ml/g生藥.η?η,萃取時間180min,得超臨界萃取物粉末，粉碎成細粉，過篩，混勻，每100g加末加煉蜜110g，制成大蜜丸，SP得，每丸4.5g。
[0019]實施例3
[0020]取酒制五味子200g、酒制肉蓯蓉200g、茯苓100g、酒炒菟絲子200g、鹽制車前子250g、制巴戟天300g加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%，萃取壓力20MPa，溫度40°C，C02流量2ml/g生藥.π?η，萃取時間160min，得超臨界萃取物粉末，粉碎成細粉，過篩，混勻，每100g加末加煉蜜120g，制成大蜜丸，SP得，每丸4.5g。
[0021]實施例4:五味子丸抑制SHZ-88細胞增殖的實驗研究資料
[0022]I實驗材料
[0023]1.1實驗用細胞株
[0024]大鼠乳腺癌細胞SHZ-88細胞，南京醫科大學實驗室細胞庫，DMEM+10%FBS常規培養。
[0025]1.2實驗藥物
[0026]研究藥物:本發明五味子丸:按實施例3方法制備。
[0027]藥液儲液:稱取IOOmg五味子丸，溶于5ml無水乙醇中，0.2 μ m濾器過濾，500 μ Idoff管分裝，-20°c存儲，同時0.2 μ m濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。[0028]1.3實驗試劑
[0029]DMEM (GIBC0 公司 Cat.N0.12100-061Lot.N0.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.N0.100419)；NaHC03 (上海久億化學試劑有限公司Cat.N0.11810_033Lot.N0.1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批號:2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批號:2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0 公司批號:2010242);Str 印 tomycin Su I fat e( AMRE SCO公司批號:2010382);無水乙醇(南京化學試劑有限公司批號:080310182);MTT(Biosharp批號:0793) ; PBS (實驗室自配)；1.4實驗器材
[0030]萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號:DM1L);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號:SPECTRA MAX190) ；C02培養箱(FORMA型號:3111);超凈臺(蘇凈集團安泰公司制造型號:SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號:S/N020579);精密移液器(法國吉爾森公司型號:P2);電子天平(德國賽多利斯有限公司型號:BT323S);全自動高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號:MLS-3020);臺式電熱鼓風干燥箱(上海精密實驗設備公司型號:DHG9123A);冰箱(西門子公司型號:KG18V21TI);液氮罐(CBS型號:2001);低速離心機(上海安亭科學儀器廠型號:ΚΑ-1000) ;0.2μπι濾器(MILLIP0RE型號:SLGP033RB) ;10cm培養皿(NEST公司)、96孔培養板(NEST公司)；細胞計數板；離心管、移液管、Tips若干。
[0031]2實驗方法
[0032]I) SHZ-88 細胞用 DMEM+10%FBS 于 37 °C、5%C02 進行常規培養(IOcm 培養皿)，當細胞生長至對數期時，收集細胞，棄去培養液，PBS輕洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養基中和反應，吹打細胞后將其轉入離心管中，1000rpm離心5min，調整細胞懸液濃度3X 104個/ml。
[0033]2)將細胞種入96孔培養板中，每孔加入細胞懸液180 μ I,培養板放入細胞培養箱中(37 °C，5%C02 )常規培養。
[0034]3)根據細胞生長情況，一般長至50%_70%，加入五味子丸溶液，繼續培養24h。
[0035]4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0.5%MTT)，繼續培養 4h。
[0036]5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結晶物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。6)同時設置本底(不加細胞，只加培養液)，對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培養液、MTT、二甲基亞砜)，每組設定6個復孔。
[0037]7)結果以藥物對細胞的抑制率表示:
[0038]細胞增值抑制率(％)=(對照孔OD值-給藥孔OD值)/對照孔OD值X 100%。實驗重復3次。
[0039]3統計處理
[0040]采用Microsoft Excel2003軟件中的相關分析和Student t檢驗，數據以mean+ S.D.表不。
[0041]4實驗結果
[0042]MTT法實驗后統計結果顯示，與對照組比較，當劑量達到5mg/ml時，對SHZ-88細胞增殖抑制有差異(p〈0.05)，劑量在10mg/ml時該差異具有顯著性(P〈0.01)，當劑量達到15-20mg/ml時有極顯著性差異(Ρ〈0.001)。
[0043]表1五味子丸對SHZ-88細胞增殖抑制影響研究-(X土SD)[0044]
【權利要求】
1.一種五味子丸的制備方法，由酒制五味子200g、酒制肉蓯蓉200g、茯苓100g、酒炒菟絲子200g、鹽制車前子250g、制巴戟天300g作為原料藥制成，其特征在于所述的方法由下列步驟組成:取酒制五味子200g、酒制肉蓯蓉200g、茯苓100g、酒炒菟絲子200g、鹽制車前子250g、制巴戟天300g，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30_50°C，CO2流量l_3ml/g生藥.min，萃取時間150-180min，得超臨界萃取物粉末，粉碎成細粉，過篩，混勻，每100g加末加煉蜜100~120g,制成大蜜丸，即得。
2.根據權利要求1所述一種五味子丸的制備方法，其特征在于所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
3.根據權利要求1所述一種五味子丸的制備方法，其特征在于所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa,溫度40°C, CO2流量2ml/g生藥.min,萃取時間160min。
4.根據權利要求1所述一種五味子丸在制備抑制大鼠乳腺癌細胞SHZ-88細胞增殖藥物中的應用，其特征在于五味子丸由酒制五味子200g、酒制肉蓯蓉200g、茯苓100g、酒炒英絲子200g、鹽制車前子250g、制巴戟天300g作為原料藥制成,制備方法由下列步驟組成:取酒制五味子200g、酒制肉蓯蓉200g、茯苓100g、酒炒菟絲子200g、鹽制車前子250g、制巴戟天300g，加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30_50°C，C02流量l_3ml/g生藥.min，萃取時間150-180min，得超臨界萃取物粉末，粉碎成細粉，過篩，混勻，每100g加末加煉蜜100~120g，制成大蜜丸，即得。
5.根據權利要求4所述一種五味子丸在制備抑制大鼠乳腺癌細胞SHZ-88細胞增殖藥物中的應用，其特征在于五味子丸中所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5% O
6.根據權利要求4所述一種五味子丸在制備抑制大鼠乳腺癌細胞SHZ-88細胞增殖藥物中的應用，其特征在于五味子丸中所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C，CO2流量2ml/g生藥.min,萃取時間160min。
【文檔編號】A61K36/746GK103536691SQ201310529094
【公開日】2014年1月29日 申請日期:2013年10月31日 優先權日:2013年10月31日
【發明者】張芝蓮 申請人:張芝蓮