增加羥基肉桂酸類的生物利用度的制作方法
【專利摘要】本發明總體涉及營養、衛生和健康領域。例如，本發明涉及羥基肉桂酸類以及其健康益處。本發明公開了可以使羥基肉桂酸類的生物利用度和/或生物功效增加的組合物。根據本發明，其可以通過與羥基肉桂酸類共同施用至少一種類黃酮的糖苷結合物來完成。
【專利說明】增加羥基肉桂酸類的生物利用度
[0001]本發明總體涉及營養、衛生和健康領域。例如，本發明涉及羥基肉桂酸類以及其健康益處。本發明公開了可以使羥基肉桂酸類的生物利用度和/或生物功效增加的組合物。根據本發明，其可以通過與羥基肉桂酸類共同施用至少一種類黃酮的糖苷結合物來完成。
[0002]羥基肉桂酸類是在我們飲食中十分豐富的酚類，并且發現它們在水果、蔬菜和咖啡中廣泛存在。估計羥基肉桂酸類的日攝取量可能很高(500-1000mg/d)，喝咖啡的人尤其如此。體外和體內研究已經表明，羥基肉桂酸類的消耗具有一些有益效果，這些有益效果與它們的抗氧化能力有關[Natella F等，J Agric Food Chem2002 ；50:6211-6 ；Natella F等，Am J Clin Nutr2007 ；86:604-9 ；Poquet L等，Arch Biochem Biophys2008 ；476:196-204]。
[0003]但是，對于人類而言，羥基肉桂酸類的首過代謝在限制其生物利用度方面起著主要作用。特別是II相酶，其通過形成硫酸酯、葡萄糖醛酸苷或氨基酸結合物而直接參與飲食性輕基肉桂酸類的滅活[Poquet L 等，Biochem Pharmacol2008 ;75:1218-29]。一些人類和體外機理研究表明，所吸收的羥基肉桂酸鹽類在小腸和肝中被廣泛代謝，并且確定了磺基轉移酶(SULT)是參與代謝的主要代謝酶類。因此，羥基肉桂酸類的硫酸酯結合物是在人血漿和尿中檢測到的主要形式，而發現的游離酸的水平很低。在人體內，細胞溶質的SULT由催化低分子量的內源性化合物和外源性物質硫酸化的11個成員組成[BlanchardRL等，Pharmacogenetics2004 ；14:199-211]。輕基肉桂酸硫酸酯是人類肝和腸勻衆中形成的主要產物，表明這兩種器官有助于人體內羥基肉桂酸的硫酸化。硫酸化靶向于酚羥基，該酹輕基是輕基肉桂酸強抗氧化能力的主要決定因子[Giacomelli C等，Redox Rep2004 ；9:263-9]。因此，羥基肉桂酸類的硫酸化對其生物利用度有顯著影響并降低了其生物效力。
[0004]然而，因為游離的羥基肉桂酸類表現出有益的抗氧化能力，因此，希望可獲得一種可以使得羥基肉桂酸類的生物利用度增加的組合物。
[0005]本發明的發明人解決了這種需求。
[0006]因此，本發明的目的是改善現有技術狀態并提供一種可以使得羥基肉桂酸類的生物利用度增加并因此表現出改善的抗氧化能力的天然組合物。
[0007]本發明的發明人出人意料地發現，獨立權利要求的主題可實現這一目的。從屬權利要求進一步發展了本發明的思想。
[0008]發明人已經證明了類黃酮以及其結合物對五種主要的飲食性羥基肉桂酸(咖啡酸、二氫咖啡酸、二氫阿魏酸、阿魏酸和異阿魏酸)硫酸化的抑制作用。
[0009]用人類的小腸和肝勻漿證實了十一種飲食性類黃酮苷元對羥基肉桂酸類硫酸化的抑制作用。用人肝勻漿證實了槲皮素-3-葡萄糖醛酸苷、槲皮素-7-葡萄糖醛酸苷和槲皮素-3’-硫酸酯(人血漿中主要的槲皮素結合物)對硫酸化的影響。
[0010]還用人肝細胞瘤細胞系H印G2作為人肝臟模型證實了木犀草素、槲皮素和槲皮素結合物對羥基肉桂酸類硫酸化的抑制作用。
[0011]根據這些發現，發明人確信抑制SULT是一種可能的改善未結合的羥基肉桂酸類的生物利用度的策略，并由此導致其生物功效增加。特別地，因為類黃酮在腸中的局部濃度比在血漿中高很多，因此，可以用飲食劑量的類黃酮來抑制人腸中的SULT[Manach C等，AmJ Clin Nutr2005 ；81:230S-42S]?
[0012]人的肝臟是羥基肉桂酸硫酸化的另一個重要部位。但是，這些類黃酮在體內被廣泛代謝為結合物。
[0013]發明人現在發現，類黃酮結合物也是腸吸收后羥基肉桂酸類硫酸化的有效抑制劑。
[0014]由于類黃酮具有通過抑制人小腸和肝臟中的SULTlA而調節羥基肉桂酸類生物利用度的潛能，因此，同時消耗羥基肉桂酸類與類黃酮使得可以增加循環中未結合的羥基肉桂酸的濃度，并因此增加羥基肉桂酸類在攝入后的生物功效。 [0015]因此，本發明部分涉及一種用于治療、減輕或預防與氧化性應激、炎性過程和/或免疫應答降低有關的病癥的包含至少一種飲食性羥基肉桂酸的組合物，其中向該包含羥基肉桂酸的組合物中加入至少一種類黃酮和/或其結合物。
[0016]本發明還部分涉及一種用于治療、減輕或預防與氧化性應激、炎性過程和/或免疫應答降低有關的病癥的包含至少一種飲食性羥基肉桂酸的組合物，該組合物包含至少一種類黃酮的糖苷結合物和羥基肉桂酸。可以將該至少一種類黃酮的糖苷結合物加入到天然包含至少一種羥基肉桂酸的組合物中。
[0017]因此，與組合物中天然的類黃酮糖苷結合物和/或羥基肉桂酸類的含量相比，本發明的組合物可能在至少一種類黃酮的糖苷結合物和/或至少一種羥基肉桂酸方面的含
量更豐富。
[0018]例如，至少一種類黃酮的糖苷結合物和/或至少一種羥基肉桂酸類的含量富集因子可以為 1.2、1.5、1.7、2、5 或 10。
[0019]本發明還涉及至少一種飲食性羥基肉桂酸與至少一種類黃酮和/或其結合物聯合在制備用于治療、減輕或預防與氧化性應激、炎性過程和/或免疫應答降低有關的病癥的組合物中的用途。
[0020]本發明還涉及至少一種類黃酮和/或其糖苷結合物在制備用于治療、減輕或預防與氧化性應激、炎性過程和/或免疫應答降低有關的病癥的組合物中的用途。然后，該至少一種類黃酮將增加日常營養消耗的羥基肉桂酸類的生物利用度和生物功效。
[0021]因此，本發明還部分涉及一種用于治療、減輕或預防與氧化性應激、炎性過程和/或免疫應答降低有關的病癥的包含至少一種類黃酮和/或其糖苷結合物的組合物。這種組合物可以在消耗天然包含羥基肉桂酸類的食物或飲料之前、之后或期間進行施用。
[0022]發明人發現，該至少一種類黃酮和/或其結合物至少部分抑制了飲食性羥基肉桂酸類的硫酸化。
[0023]所述類黃酮可選自芹菜素、木犀草素、山奈酚、異鼠李素、槲皮素、橙皮素、染料木素、黃豆苷元、(+)_兒茶素、(-)_表兒茶素、根皮素或其組合。
[0024]發明人發現，染料木素、黃豆苷元、芹菜素、根皮素、木犀草素和/或槲皮素在測試條件下特別有效。
[0025]重要的是，發明人發現，不僅類黃酮可用于本發明的目的，其糖苷結合物也可用于本發明的目的。
[0026]就結合物而言，可以使用糖苷結合物。[0027]就糖苷而言，可以使用鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、海藻糖或這些糖苷的組合，例如蕓香糖苷。
[0028]類黃酮糖苷結合物的實例可以是蘆丁(槲皮素-3-0-蕓香糖苷)和/或黃豆苷(黃豆苷元-7-0-葡萄糖苷)。
[0029]在治療應用中，組合物以足以至少部分治愈或阻止疾病及其并發癥的癥狀的量進行施用。足以實現這一目的的量被定義為“治療有效劑量”。對于該目的有效的量將取決于許多本領域技術人員已知的因素，如疾病的嚴重程度和患者的體重以及一般狀況。
[0030]在預防應用中，本發明的組合物以足以至少部分降低形成疾病風險的量被施用給易患或者有患特定疾病風險的患者。該數量被定義為“預防有效量”。準確的量也取決于許多特定的患者因素如患者的健康狀態和體重。
[0031]在本申請中，羥基肉桂酸和/或類黃酮和/或其糖苷結合物以治療或預防有效量進行施用。本領域技術人員可準確地確定該劑量。
[0032]例如，本發明的組合物每份可包含至少Img羥基肉桂酸、至少IOmg羥基肉桂酸、或至少50mg輕基肉桂酸。
[0033]例如，本發明的組合物每份可包含至少10mg、至少lOOmg、或至少IOOOmg類黃酮和
/或其結合物。
[0034]例如，存在于該組合物中的類黃酮和/或其結合物和羥基肉桂酸類的摩爾比可以在100:1至約1:1，或100:1至約10:1的范圍內。雖然更多的類黃酮將以劑量依賴性方式防止羥基肉桂酸類通過形成硫酸酯結合物而失活，但是，發現對于大多數應用而言，上面的比例通常是理想的。
[0035]該至少一種類黃酮和/或其結合物可以以任何形式，例如化學合成化合物或由天然來源精制的化合物的形式被提供。
[0036]然而，優選以天然食品或其提取物的形式將該至少一種類黃酮和/或其結合物加入到所述組合物中。
[0037]這將突出組合物的天然性。
[0038]至少一種類黃酮和/或其結合物的天然來源可選自紅茶或綠茶、酸豆(capers)、拉維紀草(1vage)、蘋果、洋蔥(特別是紅洋蔥)、紅葡萄、柑橘類水果、西紅柿、西蘭花、覆盆子、篤斯越桔(bog whortleberry)、越橘、蔓越莓、野樓桃、甜山梨(sweet rowan)、花楸衆果(rowanberry)、沙棘衆果(sea buckthorn berry)、紅莓苔子、仙人球仙人掌果實(prickly pear cactus fruit)或其組合。
[0039]同樣，羥基肉桂酸也可以以任何形式，例如化學合成化合物或由天然來源精制的化合物的形式被提供。羥基肉桂酸也優選以天然食品或其提取物的形式提供。
[0040]例如，羥基肉桂酸類可得自或以咖啡、可可、植物或水果的形式被提供。
[0041]該羥基肉桂酸優選是一種飲食性羥基肉桂酸并且可選自咖啡酸、二氫咖啡酸、二氫阿魏酸、阿魏酸、異阿魏酸或其組合。
[0042]飲食性羥基肉桂酸類的優選實例是咖啡酸、阿魏酸或其組合。
[0043]本發明的組合物可用于治療、預防或減輕與氧化性應激、炎性過程和/或免疫應答降低有關的病癥。
[0044]這些病癥可選自高血糖癥、2型糖尿病、心血管疾病、急性免疫和/或炎性反應、由紫外線(UV)輻射造成的皮膚細胞損害、細胞加速老化及其組合。
[0045] 本發明的組合物還可用于美容目的，例如用作攝食的美容組合物。
[0046]就此而言，本發明還涉及包含至少一種飲食性羥基肉桂酸和至少一種類黃酮和/或其結合物的組合物用于治療或預防氧化性損害的美容用途，其中所述組合物被口服施用。
[0047]該組合物可以是適于人或動物使用的任何組合物。例如，該組合物可選自食品、飲料、寵物食品、營養品、食品添加劑或美容產品。
[0048]就此而言，該組合物可以被施用于人或動物，例如寵物如貓或狗。
[0049]該組合物可以在一天的任何時間被消費。但是，優選在早晨施用本發明的組合物以為身體迎接一天的挑戰做準備。
[0050]為了確保身體在每一天都得到良好的保護，還優選在每天當中例如與膳食一起消費本發明的組合物。就此而言，本發明的組合物可以在早晨、午餐時間和晚上進行消費。
[0051]本領域技術人員將理解，可在不脫離所公開的本發明范圍的情況下對本文所記載的所有特征進行組合。具體地講，可將關于本發明應用所述的特征應用于本發明的組合物并且反之亦然。
[0052]本發明的其它優點和特征將由下面的實施例和附圖而變得顯而易見。
[0053]圖1A和B顯示了木犀草素、槲皮素和槲皮素結合物在HepG2細胞中對咖啡酸(A)和阿魏酸(B)硫酸化的抑制作用。將咖啡酸和阿魏酸(10 μ M)在存在木犀草素、槲皮素或槲皮素結合物的情況下培養4小時。
[0054]實施例:
[0055]1.1.在人肝臟和小腸S9中類黃酮對羥基肉桂酸類硫酸化的抑制作用
[0056]培養混合物(終體積為50 μ L)由IOOmM磷酸鉀緩沖液(pH7.4) UOOyM維生素C、100 μ M PAPS和ImM DTT組成。將人肝S9和小腸S9勻漿分別以lmg/mL和0.4mg/mL的濃度使用。類黃酮以5mM溶解于DMSO中的儲備液的形式加入，DMSO終濃度等于0.2 %。將槲皮素-3-葡萄糖醛酸苷、槲皮素-7-葡萄糖醛酸苷和槲皮素-3’ -硫酸酯溶解于水中。在進行15min預培養后，通過由位于DMSO中的50mM儲備液加入10 μ M肉桂酸和25 μ M 二氫肉桂酸來引發反應。為了抑制槲皮素葡萄糖醛酸苷的水解，在一些分析中，加入5mM葡糖二酸單內酯。將其在37°C水浴中培養30min后，通過加入10 μ L包含500mM HCl的冰冷的乙腈來終止反應。在相同的條件下對對照進行處理，且對照由加入到緩沖液中的含有0.2%DMSO(終濃度)的樣品組成。將樣品儲存在_70°C下直至進行分析。
[0057]1.2.H印G2細胞培養
[0058]將!fepG2細胞(ATCC)在75cm2細胞培養瓶中在37°C下在潮濕的5% C02/02氣氛下進行常規培養。培養基由補加有10%胎牛血清(Sigma-Aldrich)和100U/ml青霉素-鏈霉素的伊格爾最低基礎培養基(EMEM)組成。所有的實驗都是用第80至95代之間的H印G2細胞進行的。為了進行代謝研究，將H印G2細胞以每孔2xl05的細胞密度接種到12-孔板中。在用于實驗前，使細胞單層生長96小時以上。羥基肉桂酸代謝實驗在調至pH6.5的含有100μΜ維生素C和1.8mM CaCl2的無血清培養基中進行。由位于DMSO中的50mM儲備液加入肉桂酸(10 μ M)和二氫肉桂酸(25 μ Μ)。將槲皮素和木犀草素(5mM)也溶解于DMSO中并將其加入到培養基中至0.25%的DMSO終濃度。向該!fepG2細胞中加入0.4mL含或不含抑制劑的羥基肉桂酸類并將其在37°C下培養4小時。然后，收集培養基，用ImM維生素C對其進行酸化并將其真空干燥。通過超聲5min和渦旋Imin來對殘余物進行萃取，首先用500 μ L乙腈，然后用500 μ L甲醇進行萃取。將萃取物合并并將其在17，OOOg下離心lOmin。將上清液真空蒸發。在進行HPLC分析前，將干燥了的殘余物重新溶解于100 μ L初始流動相中。
[0059]1.3.羥基肉桂酸類的HPLC法
[0060]用Agilentl200系列液相色譜系統來進行HPLC分析。對于咖啡酸、阿魏酸、異阿魏酸、二氫阿魏酸及其結合物的分析而言，色譜法是用Zorbax XDB-C18柱(4.6x150mm, 5 μ m)進行的。流動相組成為20mM甲酸銨，pH2.8(A)和甲醇(B)。對于咖啡酸及結合物的分析而言，以lmL/min的流速，用20min內5%至25% B，然后2min80% B和再回到5% B洗脫3min來對樣品進行洗脫。對于阿魏酸和異阿魏酸及其結合物的分析而言，梯度為10分鐘內10%至20% B，15分鐘內至60% B，然后80% B2min和恢復至10% B洗脫3min，流速為lmL/min。二氫阿魏酸及結合物的分析是以lmL/min的流速,在15min內從10%至20% B,IOmin內至60% B, 2min高至80% B和最后至10% B洗脫3min的方式進行的。對于二氫咖啡酸及結合物而言，用Zorbax XDB-C18柱(4.6x50mm, 1.8 μ m)進行分析，用20mM甲酸銨，pH4.5㈧和甲醇⑶作為流動相。梯度由3%⑶開始并保持15min，然后在5min內增至40% B，然后回到3% B洗脫5min。將樣品離心并將25 μ L上清液注射到柱中。UV檢測是在280nm和310nm下用光電二極管陣列檢測器進行的。咖啡酸、阿魏酸和異阿魏酸在31Onm下進行定量，二氫阿魏酸和二氫咖啡酸在280nm下進行定量。
[0061]2.結果
[0062]在表1、2和3中給出了類黃酮及其結合物的抑制作用(IC5tl)。
[0063]表1.類黃酮在人小腸S9中對咖啡酸和阿魏酸硫酸化的抑制作用
【權利要求】
1.用于治療、減輕或預防與氧化性應激、炎性過程和/或免疫應答降低有關的病癥的包含至少一種飲食性羥基肉桂酸的組合物，其中向該包含羥基肉桂酸的組合物中加入至少一種類黃酮的糖苷結合物。
2.權利要求1的組合物，其中所述至少一種類黃酮的糖苷結合物至少部分抑制了飲食性羥基肉桂酸類的硫酸化。
3.前述權利要求之一的組合物，其每份包含至少Img羥基肉桂酸。
4.前述權利要求之一的組合物，其以100:1至10:1的摩爾比包含類黃酮的糖苷結合物和輕基肉桂酸。
5.前述權利要求之一的組合物，其中以天然食品或其提取物的形式向所述組合物中加入所述至少一種類黃酮的糖苷結合物。
6.權利要求5的組合物，其中所述天然食品選自紅茶或綠茶、酸豆、拉維紀草、蘋果、洋蔥、特別是紅洋蔥、紅葡萄、柑橘類水果、西紅柿、西蘭花、覆盆子、篤斯越桔、越橘、蔓越莓、野櫻桃、甜山梨、花楸漿果、沙棘漿果、紅莓苔子、仙人球仙人掌果實或其組合。
7.前述權利要求之一的組合物，其中所述飲食性羥基肉桂酸得自咖啡、可可、蔬菜或水果O
8.前述權利要求之一的組合物，其中所述飲食性羥基肉桂酸選自咖啡酸、二氫咖啡酸、二氫阿魏酸、阿魏酸、異阿魏酸或其組合。
9.前述權利要求之一的組合物，其中所述類黃酮的糖苷結合物選自槲皮素的糖苷結合物。
10.前述權利要求之一的組合物，其中所述與氧化性應激、炎性過程和/或免疫應答降低有關的病癥選自高血糖癥、2型糖尿病、心血管疾病、急性免疫和/或炎性反應、由紫外線(UV)輻射造成的皮膚細胞損害、細胞加速老化及其組合。
11.前述權利要求之一的組合物，其中該組合物選自食品、飲料、寵物食品、營養品、食品添加劑或美容產品。
12.用于在早晨進行施用的前述權利要求之一的組合物。
13.包含至少一種飲食性羥基肉桂酸和至少一種類黃酮的糖苷結合物的組合物用于治療或預防氧化性損傷的美容應用，其中該組合物被口服施用。
【文檔編號】A61P39/06GK103974630SQ201280058454
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2012年11月22日 優先權日:2011年11月28日
【發明者】M·勒努夫, G·威廉森, F·迪歐尼斯, L·波蓋 申請人:雀巢產品技術援助有限公司