專利名稱：尖尾芋及其提取物在制備宮頸癌藥物中的運用的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，確切地說它是抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法。
背景技術：
尖尾芋eucullatta (Dour) Schott)為天南星科植物假海芋的根莖，生于山澗陰濕處，或樹旁溝邊、河邊。分布于廣東、廣西、四川等地。該植物能清熱、解毒、活血、消腫，治疔瘡、癰腫、丹毒，跌打損傷，慢性氣管炎、鉤端螺旋體病等疾病。迄今為止，對尖尾芋的研究很少，多見于一般藥效學報道。有關尖尾芋的抗癌藥理活性很少報道，僅見侯學文從中分離得到ー個凝集素，其對肺腺癌細胞株P18僅有很少殺傷能力。癌癥是當今社會發病率高、死亡率高的ー種頑痰，目前尚無治愈率較高的藥物的報道。本發明人在尋找中草藥抗癌活性成分過程中，發現尖尾芋提取物具有很好的抗腫瘤活性，并且從中獲得多個具有抗癌活性的ニ苯こ烯、ニ苯こ烯苷、腦苷類化合物等多種骨架類型的化合物。

發明內容
本發明的目的在于提供一種抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其エ藝簡單實用，為尖尾芋的應用提供了廣泛的途徑。本發明的目的是通過如下方案實現的以尖尾芋{A locasia eucul latta (Dour) Schott)為原料,采用溶劑提取法、溶劑萃取法等エ藝中的ー種或者多種エ藝，并結舍濃縮干燥、冷凍干燥，噴霧干燥等常用干燥方法制備成尖尾芋總提取物，將制成的尖尾芋總提取物作為抗癌活性成分用于治療多種癌癥。本發明的優點是尖尾芋及其提取物エ藝簡單實用，抗癌療效好，并且無毒副作用，為尖尾芋應用提供了廣泛的途徑。
具體實施例方式I.溶劑提取法/溶劑萃取法全用提取制備尖尾芋提取物
I.2kg用50%こ醇在90°C下回流，合并提取液，濃縮得到130gこ醇提取物。2.溶劑提取法/樹脂吸附法合用提取制備尖尾芋提取物
尖尾芋I. Okg用80%こ醇在90°C下回流，合并提取液，濃縮得到130gこ醇提取物。こ醇提取物上D-IOl型吸附樹脂柱，先用水、5%こ醇/水洗脫以除去色素和雜質，而后用60%こ醇/水洗脫。其中60%こ醇/水洗脫部分減壓濃縮除こ醇，再經冷凍干燥可得到尖尾芋提取物，收率為1.0%。3.尖尾芋提取物的體外抑瘤實驗
3.I細胞株、試劑及儀器
人宮頸癌Hela細胞株購自中科院細胞庫；DMEM培養液，Gibco產品；胎牛血清，Gibco產品；胰蛋白酶，Gibco產品；DMS0溶液，sigma公司；96孔板，Corning公司；Revco 3000培養箱，Thermo 公司；Multishkan MK3 酶標儀，Thermo 公司。3. 2腫瘤細胞培養方法人宮頸癌Hela細胞株用含10%胎牛血清的DMEM培養液培養，培養條件為37°C，5% CO2濃度及飽和濕度。當細胞生長至對數生長期時，用25%胰酶消化細胞，洗滌吹散細胞稀釋至106/ml，每孔100 μ L接種于96孔板，以備MTT實驗。3.3細胞增殖實驗(MTT法)
尖尾芋提取物溶于DMSO溶液，取含1%。DMSO的尖尾芋提取物溶液，用含10%胎牛血清的DMEM溶液配成濃度分別為100、50、20、2 μ g/mL的尖尾芋提取物溶液，每孔100 μ L接種于96孔板，混勻，使尖尾芋提取物每孔終濃度分別達到50、25、10、I μ g/mL,放入培養箱繼續培養16、32、48h。每孔加入5mg/mLMTT溶液5μ L，繼續培養5h，測定各孔吸光度。以不加任何處理的培養細胞為空白対照，以單用培養細胞作為陰性對照。每個濃度梯度均設置12個平行組，分別計算細胞抑制率。按照以下公式計算抑制率
抑制率=I-(實驗組吸光度平均值/對照組吸光度平均值)X 100%
結果見表I 表I尖尾芋提取物對Hela細胞體外增殖的抑制作用
權利要求
1.尖尾芋及其提取物在制備宮頸癌藥物中的運用。
2.尖尾芋及其提取物在制備肝癌藥物中的運用。
3.一種抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其特征在于以植物尖尾芋Uhca1Siaeucullatta (Dour) Schott)為原料,采用溶劑提取法、溶劑萃取法,等工藝中的一種或者多種工藝，并結合濃縮干燥、冷凍干燥、噴霧干燥常用千燥方法制備成尖尾芋提取物，將制成的尖尾芋提取物作為抗癌活性成分，使之在癌癥治療中進行應用。
4.一種如權利要求3所述的抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其特征在于植物原料尖尾芋(XirOca1Sia eucul latta (Dour) Schott)可以是根莖，也可以是枝葉、果實等全草的任一部位，原料可以是新鮮采集的，也可以是經過炮制的。
5.—種如權利要求3所述的抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其特征在于作為抗癌活性成分的尖尾芋提取物包括其中所含的各種類型的有機酸、二苯乙烯、二苯乙烯苷、甾體皂甙類化合物以及其它骨架類型的化合物。
6.一種如權利要求3所述的抗癌新藥尖尾芋提取物制備方法，其特征在于所采用的粉碎目數，可以是粗粉，也可以是80目粉，也可以是100目粉，可以是120目細粉。
7.—種如權利要求I所述的抗癌新藥尖尾芋提取物制備方法，其特征在于所采用的溶劑提取法中，可選用水、甲醇、乙醇、正丁醇或者其它低級脂肪醇中的一種溶媒，在室溫下浸潤提取或者用超聲波振蕩儀超聲振蕩提取，或者在加熱狀態下浸潤提取或回流提取，提取次數可以是一次，也可以是多次。
8.—種如權利要求3所述的抗癌新藥尖尾芋提取物制備方法，其特征在于所采用的溶劑萃取法中，可將經水或者低級脂肪醇中的一種溶媒或者混合溶媒提取并經所獲得的提取物混懸于水中，用正丁醇或含水正丁醇直接進行萃取，或者經低極性溶媒(如石油醚、二氯甲烷、三氯甲烷等中的一種或多種)脫脂后，再用正丁醇或含水正丁醇進行萃取，萃取次數可以是一次，也可以是多次。
9.一種如權利要求3所述的抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其特征在于所采用的樹脂吸附法中，樹脂可選用D-IOl型吸附樹脂，XAD-2型吸附樹脂或者CHP-20P型吸附樹脂以及其它類型的吸附樹脂，洗脫溶媒用水、甲醇、乙醇、丙酮、含水甲醇、含水乙醇或者含水丙酮中的一種或多種，洗脫時可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
全文摘要
本發明公開一種植物尖尾芋(Alocasia eucullatta(Dour)Schott)和其提取物在制備宮頸癌藥物中的運用。
文檔編號A61P35/00GK102805789SQ201110148300
公開日2012年12月5日 申請日期2011年6月3日 優先權日2011年6月3日
發明者鄭向煒, 王源, 王碩, 馮怡, 阮克鋒 申請人:上海張江中藥現代制劑技術工程研究中心