專利名稱：土茯苓皂甙、黃酮類提取物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥提取物的制備方法，具體指從土茯苓中提取皂甙和黃 酮類化合物的制備方法。
背景技術：
土茯苓為百合科植物光葉菝葜Smilax glbra Roxb.的干燥根莖，但本發明 所指的土茯苓也包括白土茯苓，即肖菝葜的干燥根莖，是一種常用中草藥，分 布于長江流域以南等地，味甘、性平。土茯苓及其提取物具有除濕，解毒，通利關 節等功效,主要用于濕熱淋蟲，癰腫，疥癬及汞中毒所致的肢體拘攣、筋骨疼痛。
土茯苓及其提取物的主要有效成分為皂甙和黃酮類化合物，因此，開發土
茯苳皂甙和黃酮類化合物的提取技術，對于提高土茯苓生藥材的利用度，開拓 土茯苓提取物市場，促進中藥產業現代化具有重要意義。
在土茯苓提取物方面，《植物研究》2006年26巻第3期的論文《土茯苓中 提取總黃酮的工藝研究》公開了一種從土茯苓中提取總黃酮的方法，但此文研 究層次較淺，僅對溫度、乙醇濃度等因子對提取率的影響做了探討，且收率也 不高;專利(《土茯苓總苷提取物及其制備方法和用途》申請號:200510095149. 3)
公開了一種土茯苓總苷提取物及其制備方法和用途，但此法僅對總苷提取物進 行了研究，收率較低，無法適應中藥產業化的要求。《今日藥學》2008年18巻 3期的'《大孔吸附樹脂富集純化土茯苓總黃酮的研兔》和《中國中藥雜志》2008 年33巻10期的《大孔吸附樹脂分離純化土茯苓總黃酮》分別公開了一種從土 茯苓醇提液中分離純化總黃酮的方法，但這兩種方法均存在成本高，無法大批 量生產的問題。
另一方面，酶制劑已應用于植物提取及中藥領域(如銀杏、人參等)，在中 藥產業化方面發揮了重要作用，但大多使用單一酶制劑，效果也不盡如人意。

發明內容
為解決上述從土茯苳中提取皂甙和黃酮類化合物的現有技術存在的問題， 本發明人經過大量的生產實踐，終于發明出一種提高了原料藥材的利用度、低 能耗低成本、操作簡便且收率高的從土茯苓中同時提取皂甙和黃酮類化合物的 生產方法。
本發明包括以下幾個步驟
(1) 原料藥材的處理，包括對原料藥材進行真空干燥、粉碎和酶解。將原 料藥材真空干燥至水分含量為5% — 10%，干燥溫度50—80度，粉碎至10—20 目，然后加入3 — 12倍量的酶解液在35 — 55度的溫度下酶解3 —IO小時。酶解 液制備方法為將1一15克植物提取酶(酶活為10000—30000單位)溶于500ml pH值為4一7的緩沖液中即得。其中的植物提取酶組成為纖維素酶含量30—50 %、果膠酶含量為20—40%、蛋白酶含量5—20%、木聚糖酶5—25%。用酶 處理后可提高皂甙和黃酮類化合物的提取率。
(2) 土茯苓皂甙和黃酮類化合物的提取。用5—12倍于土茯苓重量的，濃 度為60—95%的乙醇進行回流提取2.5—6小時，重復三次、合并提取液，濃 縮成膏狀，石油醚脫脂后用氯仿萃取2次后合并萃取液，濃縮并真空干燥得黃 酮類提取物；再用乙酸乙酯萃取2次并合并萃取液，濃縮真空干燥得皂甙類提 取物。
利用本發明得到的土茯苓黃酮類提取物，其中含黃酮類化合物30—80%; 得到的土茯苓皂甙類提取物，其中含皂甙類化合物20—70%，均按提取物重量 計。黃酮類和皂甙類提取物廣泛應用于原料藥、中間體和保健食品^域，市場 前景廣闊。
本發明的制備方法是將復合酶制劑應用于土茯苓提取物領域，再配以超聲 波輔助萃取技術，較之現有的直接提取技術，不僅提高了原料藥材的利用度， 還提高了皂甙和黃酮類化合物的收率(較常規提取法提高10—40%),具有能 耗低、提取條件溫和的特點，同時也大大提高了可操作性，用酶處理后的提取 液具有容易過濾的特點，降低了能耗、節省了成本，保證提取物的質量更好。
具體實施例方式
以下對土茯苓皂甙、黃酮類提取物的具體制備方法進行詳細說明。 實施例h
1、 將土茯苓原料藥材真空干燥至水分含量為5.5%,干燥溫度50度，粉 碎至10目，加入3倍量的酶解液在35度的溫度下酶解9.5小時。酶解液制備 方法為將1. 5克植物提取酶(酶活為19000單位)溶于500mlpH值為4. 2的 緩沖液。其中的植物提取酶組成為纖維素酶含量30%、果膠酶含量為40%、蛋 白酶含量10%、木聚糖酶20%。
2、 用5倍于土茯苓重量的，濃度為60%的乙醇進行回流提取3小時，重 復三次、合并提取液，濃縮成膏狀，石油醚脫脂后用氯仿萃取2次后合并萃取 液，濃縮并真空干燥得黃酮類提取物；再用乙酸乙酯萃取2次并合并萃取液， 濃縮真空干燥得皂甙類提取物。
經過上述處理得到的土茯苓黃酮類提取物，按提取物重量計含黃酮類化合 物34%;得到的土茯苓皂甙類提取物，按提取物重量計含皂甙類化合物41%。 實施例2
1、 將土茯苓原料藥材真空干燥至水分含量為7%，干燥^S度55度，粉碎 至18目，加入8倍量的酶解液在45度的溫度下酶解4.5小時。酶解液制備方 法為將8克植物提取酶(酶活為21000單位)溶于500mlpH值為5. 0的緩沖 液。其中的植物提取酶組成為纖維素酶含量47%、果膠酶含量為21%、蛋白酶 含量8%、木聚糖酶24%。
2、 用8倍于土茯苓重量的，濃度* 85%的乙醇進行回流提取2. 5小時， 重復三次、合并提取液，濃縮成膏狀，石油醚脫脂后用氯仿萃取2次后合并萃 取液，濃縮并真空干燥得黃酮類提取物；再用乙酸乙酯萃取2次并合并萃取液， 濃縮真空干燥得皂甙類提取物。
經過上述處理得到的土茯苓黃酮類提取物，按提取物重量計含黃酮類化合 物40%;得到的土茯苓皂甙類提取物，按提取物重量計含皂甙類化合物36%。 實施例31、 將土茯苓原料藥材真空干燥至水分含量為9%，干燥溫度65度，粉碎 至11目，加入10倍量的酶解液在48度的溫度下酶解5小時。酶解液制備方法 為將3克植物提取酶(酶活為30000單位)溶于500mlpH值為7的緩沖液。 其中的植物提取酶組成為纖維素酶含量48%、果膠酶含量為25%、蛋白酶含量 17%、木聚糖酶10%。
2、 用5倍于土茯苓重量的，濃度為78%的乙醇在超聲波輔助下進行回流 提取3.6小時，重復三次、合并提取液，濃縮成膏狀，石油醚脫脂后用氯仿萃 取2次后合并萃取液，濃縮并真空干燥得黃酮類提取物；再用乙酸乙酯萃取2 次并合并萃取液，濃縮真空干燥得皂甙類提取物。
經過上述處理得到的土茯苓黃酮類提取物，按提取物重量計含黃酮類化合 物51%;得到的土茯苓皂甙類提取物，按提取物重量計含皂甙類化合物47%。 實施例4
1、 將土茯苓原料藥材真空干燥至水分含量為7.5%,干燥溫度79度，粉 碎至20目，加入9倍量的酶解液在50度的溫度下酶解3小時。酶解液制備方 法為將14克植物提取酶(酶活為15000單位)溶于500mlpH值為6. 6的緩沖 液。其中的植物提取酶組成為纖維素酶含量39%、果膠酶含量為37%、蛋白酶 含量16%、木聚糖酶8%。
2、 用ll倍于土茯苓重量的，濃度為72%的乙醇在超聲波輔助下進行回流 提取4.1小時，重復三次、合并提取液，濃縮成膏狀，石油醚脫脂后用氯仿萃 取2次后合并萃取液，濃縮并真空干燥得黃酮類提取物；再用乙酸乙酯萃取2 次并合并萃,取液，濃縮真空干燥得皂甙類提取物。 ，
經過上述處理得到的土茯苓黃酮類提取物，按提取物重量計含黃酮類化合 物60%;得到的土茯苳皂甙類提取物，按提取物重量計含皂甙類化合物54%。 實施例5
1、將土茯苓原料藥材真空干燥至水分含量為9.5%，干燥溫度75度，粉 碎至15目，加入12倍量的酶解液在55度的溫度下酶解6小時。酶解液制備方 法為將11克植物提取酶(酶活為19000單位)溶于500mlpH值為4. 5的緩沖液。其中的植物提取酶組成為纖維素酶含量33%、果膠酶含量為36%、蛋白酶 含量20%、木聚糖酶6%。
2、用12倍于土茯苳重量的，濃度為90%的乙醇在超聲波輔助下進行回流 提取6小時，重復三次、合并提取液，濃縮成膏狀，石油醚脫脂后用氯仿萃取 2次后合并萃取液，濃縮并真空干燥得黃酮類提取物；再用乙酸乙酯萃取2次 并合并萃取液，濃縮真空干燥得皂甙類提取物。
經過上述處理得到的土茯苓黃酮類提取物，按提取物重量計含黃酮類化合 物68%;得到的土茯苓皂甙類提取物，按提取物重量計含皂甙類化合物61%。
權利要求
1、一種制備土茯苓皂甙、黃酮類提取物的方法，其特征在于包括以下幾個步驟(1)原料藥材的處理，包括對原料藥材進行真空干燥、粉碎和酶解，將原料藥材真空干燥至水分含量為5％-10％，干燥溫度50-80度，粉碎至10-20目，然后加入3-12倍量的酶解液在35-55度的溫度下酶解3-10小時；(2)土茯苓皂甙和黃酮類化合物的提取用5-12倍于土茯苓重量的、濃度為60-95％的乙醇進行回流提取2.5-6小時，重復三次、合并提取液，濃縮成膏狀，石油醚脫脂后用氯仿萃取2次后合并萃取液，濃縮并真空干燥得黃酮類提取物；再用乙酸乙酯萃取2次并合并萃取液，濃縮真空干燥得皂甙類提取物。
2、 根據權利要求1所述的制備土茯苳皂甙、黃酮類提取物的制備方法， 其特征在于所用酶解液的制備方法為將1一15克酶活為10000 — 30000單 位的植物提取酶溶于500ml的緩沖液中。
3、 根據權利要求2所述的制備土茯苳皂甙、黃酮類提取物的制備方法， 其特征在于植物提取酶組成為纖維素酶含量30 — 50%、果膠酶含量為20— 40%、蛋白酶含量5—20%、木聚糖酶5—25%;緩沖液的pH值為4一7。
4、 根據權利要求1或2所述的制備土茯苓皂甙、黃酮類提取物的制備方 法，其特征在于所述土茯苓皂甙和黃酮類化合物的提取過程中，使用超聲波 輔助進行乙醇回流提取。
5、 根據權利要求1所述方法制得的土茯苓皂甙和黃酮類提取物，其特征在于按所得提取物重量計，土茯苓皂甙提取物中含皂甙類化合物20—70%; 土茯苓黃酮類提取物中含黃酮類化合物30—80%。
全文摘要
本發明公開了一種土茯苓皂甙、黃酮類提取物及其制備方法，該方法包括(1)土茯苓原料藥材的處理，包括對原料藥材進行真空干燥、粉碎和酶解。(2)土茯苓皂甙和黃酮類化合物的提取，在超聲波輔助下用乙醇回流提取后合并濃縮，用石油醚脫脂后分別用氯仿和乙酸乙酯萃取，回收溶劑后真空干燥得成品，得到的土茯苓黃酮類提取物，其中含黃酮類化合物30-80％；得到的土茯苓皂甙類提取物，其中含皂甙類化合物20-70％。本發明的特點是用復合植物提取酶進行預處理，并配以超聲波輔助萃取技術，原料藥材利用度高、產品收率高，能耗低、操作簡便。黃酮類和皂甙類提取物廣泛應用于原料藥、中間體和保健食品領域，市場前景廣闊。
文檔編號A61P29/00GK101524458SQ20091004323
公開日2009年9月9日 申請日期2009年4月28日 優先權日2009年4月28日
發明者朱曉妮, 王錫炳, 胡江宇, 勇 謝, 謝新平 申請人:湖南湘泉制藥有限公司