專利名稱：蘆薈色苷d和有效組分，及其制法、藥物組合物與用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，確切地說蘆薈中有效成份蘆薈色苷D及其色原酮苷類衍生物和富含蘆薈色苷D有效組分，可期待制成對抗老年癡呆癥的有效藥物。
背景技術：
老年癡呆癥，又名阿爾茲海默氏癥(Alzheimer‘s disease，AD)的發病在人口老齡化的中國成為越來越嚴重的問題，病理機制研究認定β-淀粉樣蛋白(Aβ)的非正常堆積是老年癡呆癥最重要的成因。β-分泌酶是與老年癡呆癥的發病和進行密切相關的一個新靶點。它可將淀粉樣蛋白前體蛋白(APP)裂解成40肽或42肽的Aβ；在動物體內證明，β-分泌酶的抑制劑可以大大降低Aβ的水平，并改善與AD類似的發病癥狀。現已報道的β-分泌酶抑制劑絕大多數是多肽和擬肽類化合物，僅有少數是合成的小分子雜環化合物。從天然產物中發現的抑制劑僅在2003年11月才有第一次報道(兒茶酚類化合物，IC5010-6M水平)。在藥理篩選過程中，我們發現蘆薈屬植物蘆薈的提取物具有較好的抑制β-分泌酶的活性(10-5μg/mL水平)，雖然蘆薈的化學成分因品種而有很大差異，而且對蘆薈已有不少化學成分研究，但從中發現新結構的β-分泌酶抑制劑卻尚未見文獻報道。我們對其β-分泌酶抑制活性進行了考察，結果表明色原酮苷類化合物蘆薈色苷D為蘆薈中抑制β-分泌酶的主要有效成份，而蘆薈色苷D含量在80％的有效組分也具有顯著的β-分泌酶抑制活性和神經細胞保護活性，可用于治療老年癡呆癥。其特點是1)有效成份和有效組分明確；2)作用顯著，機制明確；3)結果穩定，各實驗結果均可重復。

發明內容
本發明的目的在于提供蘆薈中有效成份蘆薈色苷D及其色原酮苷類衍生物和有效組分的制備方法、藥理活性和醫藥用途，它包括1.蘆薈有效成份蘆薈色苷D，其特征為蘆薈有效成分——蘆薈色苷D，結構式如下 蘆薈色苷D2.上述蘆薈有效成份蘆薈色苷D及其色原酮苷類衍生物的化學結構，其特征在于蘆薈色苷D的三維空間化學結構，蘆薈色苷D的色原酮苷類衍生物的三維空間化學結構。
3.上述蘆薈有效成份及其衍生物和有效組分的藥理活性，其特征在于上述有效成分及其衍生物和有效組分不僅具有較好的β-分泌酶抑制活性，還具有抗氧化活性(蘆薈色苷D的活性水平在10-6μg/mL)，可對抗Aβ聚合過程中產生的游離基對神經細胞的損傷。因此，上述有效成分及其衍生物和有效組分有可能從減少Aβ生成和保護神經細胞兩個機理對抗老年癡呆癥4.上述蘆薈有效成份及其衍生物和有效組分的醫藥用途，其特征為上述有效成分及其衍生物和有效組分可作為制備治療和預防老年癡呆癥的有效藥物。
5.上述蘆薈有效成份及其衍生物和有效組分的制備方法、檢測方法和有效成份含量測定方法。其特征在于a.蘆薈有效組分AV(蘆薈色苷D含量為30％～50％)的制備方法，95％的乙醇水溶液熱回流提取三次，回收乙醇水溶液，提取液濃縮后用5％的乙醇水溶液溶解，用大孔吸附樹脂作為層析材料，經過不同濃度的乙醇水溶液進行梯度洗脫，定量收集洗脫液，濃縮，薄層層析檢查，收集40％～60％乙醇洗脫液，即含蘆薈色苷D的組分，回收溶劑即得。(其中所用醇可以是甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、乙二醇、碳鏈小于32烷醇、碳鏈小于32烯醇及苯酚等；其中所用大孔樹脂包括各種非極性、弱極性、中極性、極性的國產或進口大孔吸附樹脂。)b.蘆薈有效組分AV中有效成份蘆薈色苷D的薄層檢查方法薄層板為GF254正相硅膠薄層板，展開劑為氯仿∶甲醇∶水(80∶20∶2)三相溶劑系統，觀察方法是在波長為254nm的紫外燈下，蘆薈色苷D呈現藍色熒光。
c.蘆薈有效組分AV中有效成份蘆薈色苷D的HPLC含量測定方法分析柱為反相C18柱，流動相為甲醇∶水(40∶60)系統，流速1ml/min，檢測波長254nm，用外標法法確定有效成分蘆薈色苷D的含量。
6.上述蘆薈有效成份及其衍生物和有效組分，其特征為a.上述蘆薈有效成份蘆薈色苷D的及其衍生物和有效組分，包括加入各種輔料的各種片劑、顆粒劑、膠囊劑、緩釋劑等口服制劑和注射水針劑、粉針劑、凍干劑等注射制劑。
b.各種輔料包括葡萄糖、蔗糖、微晶纖維素、各種高分子輔料等。
c.其緩釋制劑包括緩釋包衣微丸劑、緩釋骨架片劑、緩釋脈沖釋放片劑、緩釋滲碳透泵片劑、緩釋包衣片劑等口服緩釋、控釋劑型。其中應用的緩釋包衣技術包括PH依賴型緩釋包衣技術、溶蝕延遲包衣技術、基于結腸酶降解緩釋包衣技術等。
d.在制備工藝和制劑中加入抗氧化劑，防止蘆薈有效組分的分解和變化，抗氧化劑包括各種水溶性抗氧化劑和脂溶性抗氧化劑，及其混合使用。水溶性的抗氧化劑包括Vc、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鹽、硫代硫酸鈉、甲醛合亞硫酸氫鈉、硫脲、半胱氨酸、蛋氨酸、硫代乙酸、硫代甘油等；脂溶性抗氧化劑包括叔丁基對羥基茴香醚(BHA)、二丁甲苯酚(BHT)、培酸丙酯(PG)、生育酚(Ve)、卵磷脂等，抗氧化劑的加入量為制劑總量的0.01％-95％。
本發明的優點將蘆薈醇提物精制提純得到有效成份蘆薈色苷D和制備為有效成份含量在30％-50％的有效組分，可以除去大量蛋白質、氨基酸、糖類、有機酸等雜質，藥效明確，副作用小，提供了可期待用于治療和預防老年癡呆癥的醫藥用途的有效部位，本實驗發明的制備方法，為進一步制成藥物劑型奠定了基礎。


圖1.有效組分AV對靜息狀態下PC12細胞內鈣離子濃度的影響在無Mg2+的Hanks液中，各種不同濃度有效組分AV對細胞內鈣離子濃度無影響；在有Mg2+的Hanks液中，10ug/ml的有效組分AV能降低Hanks液中PC12細胞內的鈣離子濃度。結果用平均值±SD表示，n＝4，*P＜0.05。(有效組分AV的3個濃度，AV10.1ug/ml，AV21ug/ml，AV310ug/ml)圖2.有效組分對于由KCl刺激引起的細胞內鈣離子濃度上升的影響將預先給AV或不給AV的細胞經Fura-2負載后用含100mmol/L KCl的培養液吻孵。結果用平均值±SD表示，**P＜0.01。(有效組分AV的3個濃度，AV10.1ug/ml，AV21ug/ml，AV310ug/ml)
圖3.SH-SY5Y細胞用64mmol NaN3孵育4小時后，再用10μmol/L JC-1負載。用Polarstar在激發波長490nm處檢測535nm和595nm發射波長的熒光強度。結果用紅色熒光/綠色熒光值的平均值±SD表示。n＝4，*P＜0.05。(有效組分AV的3個濃度，AV10.1ug/ml，AV21ug/ml，AV310ug/ml)圖4.在96孔板中加入線粒體，用不同濃度的有效組分溫孵，然后在孔中加入5μmol/L resazurin，經孵育30分鐘后檢測熒光強度(530nm激發光/590nm發射光)。結果用平均值±SD表示，n＝4，*P＜0.05。(有效組分AV的3個濃度，AV10.1ug/ml，AV21ug/ml，AV310ug/ml)圖5.有效組分AV對由半胱氨酸亞鐵誘導的大鼠腦組織中MDA生成量的影響的體外實驗。半胱氨酸亞鐵50μmoL/L硫酸亞鐵，200μmol/L半胱氨酸。結果用平均值±SD表示，n＝4，**P＜0.01。(有效組分AV的3個濃度，AV10.1ug/ml，AV21ug/ml，AV310ug/ml)。
圖6.在Morris水迷宮實驗中，有效組分對大鼠尋找平臺時間的影響。結果用平均值±SD表示，n＝8，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。(有效組分AV的3個濃度，AV10.1ug/ml，AV21ug/ml，AV310ug/ml)。
圖7.在Morris水迷宮實驗的最后一天，將平臺撤走后，觀察有效組分AV對大鼠停留在原來放置平臺象限的停留時間的影響。結果用平均值±SD表示，n＝8，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。(有效組分AV的3個濃度，AV10.1ug/ml，AV21ug/ml，AV310ug/ml)。
圖8.在Morris水迷宮實驗的最后一天，將平臺撤走后，觀察有效組分AV對大鼠尋找平臺總距離的影響。結果用平均值±SD表示，n＝8，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。(有效組分AV的3個濃度，AV10.1ug/ml，AV21ug/ml，AV310ug/ml)。
圖9.在穿梭箱實驗中，有效組分AV對大鼠被動反應次數的影響。結果用平均值±SD表示，n＝8，*P＜0.05，**P＜0.01。(有效組分AV的3個濃度，AV10.1ug/ml，AV21ug/ml，AV310ug/ml)。
圖10.在穿梭箱實驗中，有效組分AV對大鼠被動反應時間的影響。結果用平均值±SD表示，n＝8，*P＜0.05，**P＜0.01。(有效組分AV的3個濃度，AV10.1ug/ml，AV21ug/ml，AV310ug/ml)。
具體實施例方式
下述實施例具體顯示本發明的應用。但本實施例不限定本發明的使用范圍。
實施例實施例1.庫拉索蘆薈有效組分AV的制備庫拉索蘆薈(Aloe vera L.)粗提取物干粉20g粉碎后過60目篩。樣品先用130ml乙醇溶解，再用2600ml水稀釋，即將樣品溶解于5％乙醇水溶液中。按樣品∶層析材料(1∶30)的倍數，用SP825型大孔樹脂(三菱公司產品)600g裝柱。將溶解好的樣品加到柱上，先依次用水(5L)、10％乙醇(13L)、30％乙醇洗脫(45L)，然后用50％乙醇(1.8L)洗脫，每1000ml收集一份，每份用薄層層析檢查，展開劑為氯仿∶甲醇∶水(80∶20∶2)，在254nm紫外燈下觀察，收集含有aloeresinD呈現藍色熒光斑點的組分，為庫拉索蘆薈有效組分5g。
實施例2.有效組分中有效成份蘆薈色苷D的含量測定方法色譜條件分析柱為反相C18柱(kromasil，5μm)，流動相為甲醇∶水(40∶60)系統，流速1ml/min，檢測波長254nm，方法外標法操作用蘆薈色苷D標準品配制5個濃度的標準溶液，濃度范圍在0.1mg/ml～1.0mg/ml之間。以樣品濃度和峰面積的相關關系，作出標準曲線和線性方程。精密稱取有效部分樣品1.18mg，溶解于1ml甲醇，配制成1.18mg/mll待測樣品，根據線性方程，以峰面積計算有效部分中蘆薈色苷D的含量。
線性方程y＝8784x-668.26(R2＝0.9965)有效部分中蘆薈色苷D的峰面積為4188.78076有效部分中蘆薈色苷D的含量為46.86％。
實施例3.蘆薈色苷D的制備及光譜數據庫拉索蘆薈(Aloe vera L.)粗提取物，經硅膠柱層析(200目)，氯仿-甲醇-水(80∶20∶2)溶劑系統洗脫，分成I-V五個部分。第II部分進一步硅膠柱層析(200目)，氯仿-甲醇梯度洗脫得到化合物蘆薈色苷D。
化合物蘆薈色苷D，白色無定型粉末，m.p.154℃；[α]22D-156.3°(c 0.71，MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)＝213(4.52)，228(4.58)，242 sh(4.28)，252(4.34)，300(4.54)nm；IR(KBr)vmax＝3400，1700，1640，1600，1510，1380，1170cm-1；C29H32O11，FABMS m/z＝557[M+H]+，308，290，154，136；，713.2017)；1HNMR和13CNMR數據，見附表I。
附表I.蘆薈色苷D的核磁共振光譜數據(500兆赫茲，溶劑氘代甲醇)

藥理實驗實驗例1 β-分泌酶抑制實驗試劑a重組人BACE-1b熒光底物IVc0.1M醋酸緩沖液(PH 4.0)儀器384孔熒光測定微板Fluostar galaxy微板光學測定儀實驗步驟在384孔板中依次加入樣品5ul、緩沖液5ul、酶稀釋液20ul、底物稀釋液20ul。空白孔中不加樣品及酶稀釋液，用緩沖液代替。標準孔中不加樣品，用緩沖液代替。于384孔板中混勻，25℃條件下Ex＝320nm，Em＝405nm處測熒光，2分鐘一個循環，共測10個循環，計算熒光值變化斜率作為酶活性。與標準對照比較計算化合物對β-分泌酶的抑制率。
結果評價β-分泌酶抑制率＝〔(標準對照酶活性-空白酶活性)-(樣品酶活性-空白酶活性)〕/(標準對照酶活性-空白酶活性)*100％結果分析

實驗例有效部位和有效成分的神經保護藥理實驗目錄1.Glu誘導細胞損傷模型2.[Ca]2+i測定靜息狀態①Hanks solution[Ca]2+i降低②Hanks solution(Mg2+free)[Ca]2+I無明顯影響③D-Hanks solution[Ca]2+I無明顯影響KCl誘導鈣內流+Glu誘導鈣內流-3.對疊氮鈉誘導的細胞損傷的影響線粒體膜電位測定(MMP)+刃天青法測定AV對線粒體氧化還原能力的影響+4.對線粒體氧化應激損傷的保護作用MDA生成測定GSH含量測定H-ATP酶活性測定5.細胞凋亡抑制活性1)血清撤除誘導原代神經細胞凋亡-2)MPP+誘導細胞凋亡-3)H2O2誘導細胞損傷+6.抗衰老體內實驗1)Morris水迷宮2)穿梭箱實驗注+為有效，-為無效細胞內鈣測定靜息狀態于96孔板加入PC12細胞懸液90μl/孔，與5μmol.L-1Fura-2/AM在37℃恒溫震蕩35min。負載結束后，分別以含0.2％BSA Hanks、不含Mg2+的0.2％BSA Hanks液洗兩次，調細胞懸液為2×106個/ml。Fura-2的最大激發波長是380nm，與Ca2+結合后的最大激發波長是340nm，發射波長是500nm。用FLUO-STAR熒光計進行熒光檢測。加入Triton X-100破碎細胞膜，震蕩混勻后測定熒光，此時為Ca2+飽和時熒光強度。加入EGTA絡合細胞內鈣，震蕩混勻后測定熒光，此時為零Ca2+時熒光強度。
按下式計算Ca2+濃度[Ca2+]＝KDa*(R-Rmin)/(Rmax-R)*(Ff2/Fb2)R＝F340/F380其中KDa是Fura-2與Ca2+的解離常數，為224nmol.L-1。
Ff2、Fb2分別是零Ca2+和Ca2+飽和時380nm處熒光值。
藥物處理細胞負載結束后，預先加入AV(終濃度分別為0.1ug/ml，1ug/ml，10ug/ml)溫孵5分鐘后，分別加入刺激劑KCl，谷氨酸(Glu)，立即測定熒光變化。
結果見圖1表1圖1的原始數據


結果見圖2
表2圖2的原始數據

對疊氮鈉誘導的SH-SY5Y細胞損傷的影響線粒體膜電位測定(MMP)細胞培養SH-SY5Y細胞由中國醫學科學院基礎所提供。SH-SY5Y細胞以完全1640培養基(含10％胎牛血清，青霉素100U/ml，鏈霉素100μg/ml)，于37℃、5％CO2恒溫培養箱中培養，每2-3天換液一次。
線粒體膜電位(Δψ)的測定JC-1為一種特異性的陽離子熒光染料，可定位在線粒體膜上，其激發光為490nm，單體發射光為527nm，聚集體發射光為590nm，其聚集程度與膜電位成正比。當線粒體膜電位增高時，紅色熒光增強，紅色熒光和綠色熒光的比值可代表膜電位的高低。細胞處理如上所示，與64mmol·L-11疊氮鈉孵育4小時后，用Hank’s液漂洗細胞一次，然后與10μmol·L-1的JC-1 37℃負載15min，PBS洗二次后于熒光顯微鏡下觀察拍照。并在Polastar上測定其熒光值(Fluostar galaxy software)，以紅色熒光值與綠色熒光值的比值的大小來表示膜電位的高低。
刃天青法測定AV對線粒體氧化還原能力的影響腦線粒體提取取大腦皮層，稱重，轉入玻璃勻漿器中，加入MSETB緩沖液10ml/g組織，(MSETB緩沖液210mmol·L-1mannitol，70mmol·L-1sucrose，0.5m mol·L-1EDTA，10m mol·L-1Tris-HCl and 0.2％bovine serum albumin，pH 7.4)，手動勻漿10次。所得勻漿液以2000g離心3min，取上清離心12000g，8min。以MSETB緩沖液將所得沉淀洗滌一次(離心12000g×10)，所得沉淀即為線粒體。將沉淀按10∶1(v/w)懸于SET緩沖液中，SET緩沖液(280mmol·L-1sucrose，0.5mmol·L-1EDTA and 10mmol·L-1Tris-HCl，pH 7.4)，離心10min。最后將沉淀懸于SET緩沖液中，整個線粒體制備過程均在4℃進行。以Lowry法測定蛋白含量。
刃天青法檢測線粒體氧化還原能力在96孔板中加入線粒體5μg蛋白/孔，加入不同濃度的紅景天甙，resazurin 5μmol·L-1，立即在Polastar測定儀上測定熒光強度。(激發波長530nm，發射波長590nm)。96孔板于37℃繼續孵育30min后測定熒光強度的變化。以熒光強度的增長率表示線粒體功能的變化。另取線粒體蛋白5μg加入到96孔板中，加入不同濃度的紅景天甙及線粒體功能抑制劑(NaN3650μmol·L-1)，37℃作用30min，加入resazurin5μmol·L-1，Polastar微板測定儀測定熒光強度F0(激發波長530nm，發射波長590nm)。96孔板于37℃繼續孵育60min，檢測熒光F60。
熒光強度增長率＝(F60-F0)/F0×100％F0，F60分別為resazurin加入0min和60min時的熒光強度。
結果見圖3表3圖3的原始數據


結果見圖4表4圖4的原始數據

對大鼠腦線粒體氧化應激損傷的體外保護作用脂質過氧化產物MDA測定測定在96孔板中進行，以0.2mol/L組氨酸緩沖液為緩沖體系，反應總體積為100μl，含線粒體蛋白100μg，50μmol/L FeSO4，500μmol/L半胱胺酸和不同濃度的紅景天甙。混勻后置37℃溫育20min，然后加入100μl的TBA反應液，60℃加熱30min后在酶標儀上測定。
還原型谷胱甘肽(GSH)的測定反應體系以0.1mol/L磷酸鹽-0.5mmol/LEDTA為緩沖液，線粒體蛋白0.5mg/ml，加入不同濃度的紅景天甙37℃溫育10min，加入H2O2(100μmol/L)繼續溫育5min，加入Triton破膜后，加入20％的偏磷酸終止反應。取上清經OPT熒光顯示法測定GSH的含量。
H+-ATP酶活性測定用定磷法測定氧化應激損傷后的線粒體H+-ATP酶活性。反應體系為100μl，50mM Tris緩沖液，5mM MgCl2，5mM ATP，pH7.95，25℃溫育2min后加入線粒體蛋白，終濃度為0.2mg/ml，25℃溫育2min。加三氯醋酸中止反應。3000rpm離心2min，取上清。加入2.5％FeSO4和2％鉬酸胺，振蕩均勻后于690nm處測定吸光度。H+-ATP酶活性單位μmol.Pi/min.mg.pro結果見圖5表5圖5的原始數據

表6還原型谷胱甘肽(GSH)的測定的篩選結果

表7H+-ATP酶活性測定結果

H2O2誘導細胞損傷PC12細胞培養PC12細胞以完全1640培養基(含10％馬血清，5％胎牛血清，青霉素100U/ml，鏈霉素100ug/ml)，于37℃、5％CO2恒溫培養箱中培養，每2-3天換液一次。
細胞處理①正常對照組PC12細胞在含血清DMEM培養基中正常培養；②H2O2作用組PC12細胞鋪成單層后，吸除原培養基，加入含有終濃度為100μmol/l、200μmol/l、300μmol/l、500μmol/l的H2O2的無血清培養基于37℃、5％CO2恒溫培養箱中培養12小時③藥物處理組PC12細胞鋪成單層后，吸除原培養基，加入含有終濃度為的0.1ug/ml，1ug/ml，10ug/mlAV預處理4h后，加入終濃度為200μmol/l的H2O2無血清培養12小時。
細胞活力測定每孔加入100ul MTT液，終濃度為0.5mg/ml，于37℃5％CO2繼續培養4h，棄上清，每孔加入DMSO 100ul，振蕩后于540nm處測定吸光度OD值。
表8細胞活力測定結果

抗衰老體內實驗——有效組分AV對由疊氮化鈉和D-半乳糖誘發衰老的大鼠模型的作用在D-半乳糖致衰老模型的基礎上，加用線粒體復合酶IV抑制劑疊氮鈉來模擬老年癡呆。
實驗材料D-半乳糖；疊氮鈉或魚藤酮；鄰苯二甲醛(OPT)；偏磷酸HPO3；TBA；鄰苯三酚；鉬酸胺；ATP；Wistar雄性大鼠實驗方法動物模型的建立Wistar雄性大鼠隨機分成7組，每組10只Sham腹腔注射生理鹽水5周+腦室插管注射人工腦脊液一周Model-3腹腔注射D-galactose 5周+腦室插管注射NaN3一周
AV1Model 3+腹腔注射10mg/kg·day AV，第4周開始給藥，共給藥3周。
AV2Model 3+腹腔注射30mg/kg·day AV，第4周開始給藥，共給藥3周。
AV3Model 3+腹腔注射100mg/kg·day AV，第4周開始給藥，共給藥3周。
陽性對照Model 3+腹腔注射腦復康30mg/kg·day指標測定1、Morris水迷宮水迷宮裝置由直徑120cm的圓形水池和一可移動位置的直徑10cm的平臺組成。將水池均勻分成四個象限，平臺放置于某一象限的中間位置并使其沒于水下1.5cm，水溫保持22±2℃并加入奶粉使其不透明。實驗第一天動物自由游泳60s后放置于平臺上60s作為預訓練。從第二天開始認知訓練，每天訓練2次持續5天，每次訓練時間為60s，記錄潛伏期和游泳距離。在最后一次認知訓練結束后，將平臺撤去，測試動物60s內在原來放置平臺象限的停留時間作為空間記憶形成指標。
見圖6表9圖6的原始數據

見圖7表10圖7的原始數據

見圖8表11圖8的原始數據

2、穿梭箱實驗采用穿梭箱法測定其學習記憶能力。每只動物每日訓練20次，以蜂鳴音響后10秒內自動逃到另一側為一次主動回避反應，記錄連續5天內主動回避反應次數及被動回避反應時間，以此作為學習記憶成績。
見圖9表12圖9的原始數據

表13圖10的原始數據

附表II庫拉索蘆薈有效成分以及有效部位的藥理活性結果


權利要求
1.蘆薈中的有效成份蘆薈色苷D及其色原酮苷類衍生物的化學結構、藥理活性和醫藥用途，它包括蘆薈中的有效成份蘆薈色苷D，其特征為蘆薈有效成份——蘆薈色苷D，結構式如下 蘆薈色苷D
2.蘆薈中有效組分AV的制備方法、藥理活性和醫藥用途，其特征為它包括蘆薈中的有效成份蘆薈色苷D，其含量在30％～50％。
3.根據權利1要求所述的蘆薈中有效成份蘆薈色苷D及其色原酮苷類衍生物的化學結構，其特征在于蘆薈色苷D的三維空間化學結構，蘆薈色苷D的色原酮苷類衍生物的三維空間化學結構。
4.根據權利要求1所述的蘆薈中活性成分蘆薈色苷D及其色原酮苷類衍生物，和權利要求2所述的蘆薈中主要包括蘆薈色苷D的有效組分的藥理活性，其特征在于上述有效成分及其衍生物和有效組分不僅具有較好的β-分泌酶抑制活性，還具有抗氧化活性(蘆薈色苷D的活性水平在10-6μg/mL)，可對抗Aβ聚合過程中產生的游離基對神經細胞的損傷。因此，上述有效成分及其衍生物和有效組分能有效對抗老年癡呆癥
5.根據權利要求1所述的蘆薈中活性成分蘆薈色苷D及其色原酮苷類衍生物，和權利要求2所述的蘆薈中主要包括蘆薈色苷D的有效組分的醫藥用途，其特征在于上述有效成分及其衍生物和有效組分可作為制備治療和預防老年癡呆癥的藥物。
6.一種如權利要求2所述的蘆薈中的有效組分AV(蘆薈色苷D含量為30％～50％)的制備方法，檢測方法和有效成份含量測定方法，其特征在于包括a.蘆薈有效組分AV(蘆薈色苷D含量為30％～50％)的制備方法，95％的乙醇水溶液熱回流提取三次，回收乙醇水溶液，提取液濃縮后用5％的乙醇水溶液溶解，用大孔吸附樹脂作為層析材料，經過不同濃度的乙醇水溶液進行梯度洗脫，定量收集洗脫液，濃縮，薄層層析檢查，收集富含蘆薈色苷D的組分，回收溶劑即得。(其中所用醇可以是甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、乙二醇、碳鏈小于32烷醇、碳鏈小于32烯醇及苯酚等；其中所用大孔樹脂包括各種非極性、弱極性、中極性、極性的國產或進口大孔吸附樹脂。)b.蘆薈有效組分中有效成份蘆薈色苷D的薄層檢查方法薄層板為GF254正相硅膠薄層板，展開劑為氯仿∶甲醇∶水(80∶20∶2)三相溶劑系統，觀察方法是在波長為254nm的紫外燈下，蘆薈色苷D呈現藍色熒光。c.蘆薈有效組分中有效成份蘆薈色苷D的HPLC含量測定方法分析柱為反相C18柱，流動相為甲醇∶水(40∶60)系統，流速1ml/min，檢測波長254nm，用外標法確定有效成分蘆薈色苷D的含量。
7.根據權利要求1所述的蘆薈中蘆薈色苷D及其色原酮苷類衍生物，和權利要求2所述的蘆薈中主要包括蘆薈色苷D的有效組分，其特征在于a.上述蘆薈有效成份蘆薈色苷D的及其衍生物和有效組分，包括加入各種輔料的各種片劑、顆粒劑、膠囊劑、緩釋劑等口服制劑和注射水針劑、粉針劑、凍干劑等注射制劑。b.各種輔料包括葡萄糖、蔗糖、微晶纖維素、各種高分子輔料等。c.其緩釋制劑包括緩釋包衣微丸劑、緩釋骨架片劑、緩釋脈沖釋放片劑、緩釋滲碳透泵片劑、緩釋包衣片劑等口服緩釋、控釋劑型。其中應用的緩釋包衣技術包括PH依賴型緩釋包衣技術、溶蝕延遲包衣技術、基于結腸酶降解緩釋包衣技術等。d.在制備工藝和制劑中加入抗氧化劑，防止蘆薈有效組分的分解和變化，抗氧化劑包括各種水溶性抗氧化劑和脂溶性抗氧化劑，及其混合使用。水溶性的抗氧化劑包括Vc、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鹽、硫代硫酸鈉、甲醛合亞硫酸氫鈉、硫脲、半胱氨酸、蛋氨酸、硫代乙酸、硫代甘油等；脂溶性抗氧化劑包括叔丁基對羥基茴香醚(BHA)、二丁甲苯酚(BHT)、培酸丙酯(PG)、生育酚(Ve)、卵磷脂等，抗氧化劑的加入量為制劑總量的0.01％-95％。
全文摘要
本發明是蘆薈中有效成份蘆薈色苷D及其色原酮苷類衍生物和有效組分的制備方法、藥理活性和醫藥用途。蘆薈中的有效成份蘆薈色苷D及其色原酮苷類衍生物具有較好的β－分泌酶抑制活性和神經細胞保護活性，作用機理明確，是前景很好的對抗老年癡呆癥的有效藥物。蘆薈中的有效組分AV(蘆薈色苷D的含量為30％～50％)，可通過95％的乙醇提取，提取物用大孔吸附樹脂經不同濃度的乙醇水溶液梯度洗脫，回收溶劑制得，可期待用于治療老年癡呆癥。
文檔編號A61P25/28GK1965852SQ20061009203
公開日2007年5月23日 申請日期2006年6月7日 優先權日2005年6月7日
發明者方唯碩, 杜冠華, 楊慶云, 王月華, 曹莉莉 申請人:中國醫學科學院藥物研究所