一種采用環糊精包埋技術去除紅景天苷提取液中鞣質的方法
【專利摘要】本發明公開了一種采用環糊精包埋技術去除紅景天苷提取液中鞣質的方法。該方法是取紅景天于干燥箱中干燥處理4h，粉碎過40目篩，取20g紅景天粉末，加入400mL蒸餾水，浸泡24h，用300W微波功率處理20s，于80℃水浴鍋中加熱提取1.5h，抽濾，取濾液定容至1000mL，制得紅景天提取液；取紅景天提取液100mL，加入0.5g～0.7g?α-環糊精與3.0g～3.8g?β-環糊精，在電磁加熱攪拌器中以500r/min速率攪拌，加熱溫度40～60℃，加熱2.5～3.5h后，過濾，定容至100mL。本發明的方法利用環糊精包埋紅景天中澀味物質-鞣質，取得了良好的除澀效果，為紅景天的開發及產業化奠定了基礎，同時為除去中藥材中鞣質提供了新的方法與理論支撐。
【專利說明】一種采用環糊精包埋技術去除紅景天苷提取液中鞣質的方 法

【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物醫藥【技術領域】，尤其涉及的是一種采用環糊精包埋技術去除紅景 天苷提取液中鞣質的方法。

【背景技術】
[0002] 紅景天（RhodiolaL.)為景天科紅景天屬植物，氣芳香，味微苦潘、后甜，具有抗氧 化、抗衰老、提高免疫力、抗腫瘤、抗輻射等作用。紅景天中含有多種化學成分，包括黃酮類、 有機酸類、多糖類、香豆素類、揮發性成分以及其他，其中紅景天苷含量的高低為評判紅景 天屬植物的藥用價值。由于紅景天中含有大量的鞣質，使紅景天飲料帶有明顯的澀味，并且 影響了其澄清度。因此，去除紅景天中的鞣質具有極其重要的理論價值與現實意義。
[0003] 目前，除鞣質的方法有很多種，包括石灰_H2S04沉淀法、明膠沉淀法、聚酰胺吸附 法、酸性醇沉法、堿性醇沉法等方法。但這些方法在去除鞣質的同時會去除很多的藥用部 分，同時引入相應的雜質。環糊精（cyclodextrin，⑶）是直鏈淀粉在酶的作用下生成的一 系列環狀低聚糖的總稱。近年來環糊精被廣泛的應用于食品、醫藥以及化工等領域。由于 環糊精其錐狀環狀結構可以將目標分子緊緊的包裹住，形成包埋復合物。因此可以選擇環 糊精作為鞣質的包埋劑來掩蔽紅景天中的澀味并增加其穩定性，最大限度的保留其有效成 分。


【發明內容】

[0004] 本發明所要解決的技術問題是針對現有技術存在的不足，提供了一種采用環糊精 包埋技術去除紅景天苷提取液中鞣質的方法。
[0005] 本發明的技術方案如下：
[0006] -種采用環糊精包埋技術去除紅景天苷提取液中鞣質的方法，是取紅景天于干燥 箱中干燥處理4h，粉碎過40目篩，取20g紅景天粉末，加入400mL蒸餾水，浸泡24h，用300W 微波功率處理20s，于80°C水浴鍋中加熱提取1. 5h，抽濾，取濾液定容至1000mL，制得紅景 天提取液；取紅景天提取液l〇〇mL，加入0. 5g?0. 7g α-環糊精與3. 0g?3. 8g β-環糊 精，在電磁加熱攪拌器中以500r/min速率攪拌，加熱溫度40?60°C，加熱2. 5?3. 5h后， 過濾，定容至l〇〇mL。
[0007] 優選地，α-環糊精為〇.6g，β-環糊精為3.4g，加熱溫度為50°C，加熱時間為 3. 0h〇
[0008] 本發明的方法利用環糊精包埋紅景天中澀味物質-鞣質，取得了良好的除澀效 果，為紅景天的開發及產業化奠定了基礎，同時為除去中藥材中鞣質提供了新的方法與理 論支撐。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0009] 圖1為紅景天苷標準品色譜圖。
[0010] 圖2為紅景天樣品色譜圖。
[0011] 圖3為不同用量的α-環糊精對鞣質的包埋影響。
[0012] 圖4為不同質量的環糊精對鞣質的包埋影響。
[0013] 圖5為時間對鞣質包埋的效果影響。
[0014] 圖6為溫度對鞣質包埋的效果影響。

【具體實施方式】
[0015] 以下結合具體實施例，對本發明進行詳細說明。
[0016] 實施例
[0017] 1、材料與儀器
[0018] ⑴實驗原料
[0019] 紅景天（大花紅景天，成都市中藥材批發市場購得）
[0020] (2)實驗試劑及儀器
[0021] 沒食子酸（中國藥品生物制品檢定所），紅景天苷（中國藥品生物制品檢定所）， Na2C03、干酪素、明膠均由成都市科龍化學試劑廠提供，UV-2600型紫外可見分光光度計（天 尼柯上海光譜儀器有限公司），磁力加熱攪拌器（85-2,蘇州學森儀器設備有限公司），高效 液相色譜儀（LC-20AB，日本島津）。
[0022] 磷鑰鎢酸試劑的制備：取鎢酸鈉10g與磷鑰酸2. 4g，加水70ml與磷酸5ml，回流煮 沸2小時，放冷，加水稀釋至100ml，搖勻，置棕色試劑瓶內，在暗處保存。
[0023] 2、測定方法
[0024] (1)鞣質含量的測定方法
[0025] 按《中華人民共和國藥典》2010年版（一部）附錄XB項下操作，測定紅景天提取 液中鞣質含量。其具體步驟如下：
[0026] ①對照品溶液的制備
[0027] 精密稱取沒食子酸對照品50mg，置100ml棕色量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度， 精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得（每lml中含沒食子酸 0. 05mg)對照品溶液。
[0028] ②標準曲線的制備
[0029] 精密量取對照品溶液 0. 5ml、l. 0ml、2. 0ml、3. 0ml、4. 0ml、5. 0ml，分別置 25ml 棕色 量瓶中，各加入磷鑰鎢酸試劑lml，分別加水11. 5ml、1 lml、10ml、9ml、8ml、7ml，用質量百分 數為29%的碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘，以蒸餾水為空白，用紫外可見分光 光度法，在760nm的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
[0030] ③供試品溶液的制備
[0031] 取紅景天粉末適量（按品種項目下的規定），精密稱定，置250ml棕色量瓶中，加水 150ml，放置過夜，超聲處理10分鐘，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，靜置（使固體物沉淀），濾 過，棄去初濾液50ml，精密量取續濾液20ml，置100mL棕色量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻， 即得。
[0032] ④測定法-總酚
[0033] 精密量取供試品溶液2ml，置25ml棕色量瓶中，照標準曲線的制備項下的方法，自 "加入磷鑰鎢酸試劑lml"起，加水10ml，依法測定吸光度，從標準曲線中讀出供試品溶液中 沒食子酸的量（mg)，計算，即得。
[0034] ⑤不被吸附的多酚
[0035] 精密量取供試品溶液25ml，加至已盛有干酪素0. 6g的100ml具塞錐形瓶中，密塞， 置30°C水浴中保溫1小時，時時振搖，取出，放冷，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液 2ml，置25ml棕色量瓶中，照標準曲線的制備項下的方法，自"加入磷鑰鎢酸試劑lml "，加水 l〇ml，依法測定吸光度，從標準曲線中讀出供試品溶液中沒食子酸的量（mg)，計算，即得。
[0036] 按下式計算鞣質的含量：
[0037] 鞣質含量=總酚量-不被吸附的多酚量
[0038] (2)紅景天苷含量的測定方法
[0039] 按《中華人民共和國藥典》2010年版（一部）紅景天"【含量測定】"測定紅景天提 取液中紅景天苷的含量。其具體步驟如下：
[0040] ①色譜條件與系統適用性試驗
[0041] 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇一水（體積比為：15 : 85)為流動相； 檢測波長為275nm。理論板數按紅景天苷峰計算應不低于2000。
[0042] ②對照品溶液的制備
[0043] 取紅景天苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含0. 5mg的溶液，即得對照 品溶液。
[0044] ③供試品溶液的制備
[0045] 取紅景天粉末（過三號篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 10ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻， 濾過，取續濾液，即得供試品溶液。
[0046] ④測定法
[0047] 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0048] 3、實驗方法
[0049] (1)紅景天提取液的制備
[0050] 取紅景天于干燥箱中干燥處理4h，粉碎過40目篩，取20g紅景天粉末，加入400mL 蒸餾水，浸泡24h，用300W微波功率處理20s，于80°C水浴鍋中加熱提取1. 5h，抽濾，取濾液 定容至1000mL。
[0051] (2)明膠沉淀法去除鞣質
[0052] 取20mL紅景天提取液，加入質量分數為5%的明膠溶液10mL(慢加快搖），靜置 lOmin后過濾除去沉淀，定容至50mL容量瓶中，測定紅景天苷與縣質含量。
[0053] (3)環糊精包埋法去除鞣質
[0054] ①不同α-環糊精用量對鞣質的包埋影響
[0055] 取100mL紅景天提取液21組，分別加入α -環糊精〇、〇· 2、(λ 4、0· 6……6、3· 8、 4. 0g，β -環糊精4、3· 8、3· 6、3· 4……0· 4、0· 2、0g，在電磁加熱攪拌器中70°C加熱，500r/ min攪拌包埋處理2h，過濾定容至100mL，測定鞣質的含量。每組實驗重復三次測定其平均 值。
[0056] ②不同環糊精用量對鞣質的包埋影響
[0057] 取100mL紅景天提取液11組，分別加入α-環糊精〇、〇. l、〇. 2、0. 3……0. 9、1.0g， β -環糊精〇、〇. 4、0. 8、1. 2……3. 6、4. Og，在電磁加熱攪拌器中70°C加熱，500r/min攪拌包 埋處理2h，過濾定容至100mL，測定鞣質的含量。每組實驗重復三次測定其平均值。
[0058] ③不同包埋時間對鞣質的包埋影響
[0059] 取100mL紅景天提取液6組，分別加入α -環糊精〇. 6g，β -環糊精3. 4g，在電磁 加熱攪拌器中70°C加熱，以500r/min攪拌速率分別包埋處理l、2、3、4、5、6h，過濾定容至 100mL，測定鞣質的含量。每組實驗重復三次測定其平均值。
[0060] ④不同加熱溫度對鞣質的包埋影響
[0061] 取100mL紅景天提取液7組，分別加入α -環糊精〇. 6g，β -環糊精3. 4g，在電磁 加熱攪拌器中分別以20、30、40……80、90°C加熱，500r/min攪拌速率包埋處理2h，過濾定 容至100mL，測定鞣質的含量。每組實驗重復三次測定其平均值。
[0062] ⑤環糊精對鞣質包埋條件的優化
[0063] 在單因素試驗的基礎上，選擇度對包埋效果進行優化，選出最佳包埋方案。分別選 擇α-環糊精用量、總環糊精用量、時間、溫度為四個因素，進行四因素三水平的正交試驗， 以鞣質含量為指標進行測量，經試驗選出環糊精包埋鞣質的最優工藝條件。
[0064] 4、實驗結果及分析
[0065] (1)紅景天提取液中鞣質和紅景天苷含量的測定
[0066] 紅景天苷標準品和紅景天樣品色譜圖見圖1、圖2。
[0067] 經試驗測得，以吸光度Υ為縱坐標，濃度X為橫坐標，繪制標準曲線，得線性回歸方 程為 Υ = 〇· 982Χ+0. 0615, r = 0· 9994,鞣質含量為 0· 880mg/mL。
[0068] 經試驗測得，以峰面積Y為縱坐標，濃度X為橫坐標繪制標準曲線，得線性回歸方 程為Y = 3056X+305. 6, r = 0. 9999。紅景天提取液中紅景天苷含量為0. 151mg/mL。
[0069] (2)明膠沉淀法去除鞣質結果與分析
[0070] 試驗測得經明膠沉淀處理后的紅景天提取液中鞣質的含量為0. 417mg/mL，下降了 52.6% ;紅景天苷的含量為0· 103mg/mL，下降了 31.8%。
[0071] (3)環糊精包埋法除鞣質結果與分析
[0072] ①不同α -環糊精用量對鞣質的包埋影響
[0073] 用不同用量α -環糊精對紅景天提取液中鞣質的包埋影響如圖3。
[0074] 由圖3可看出，隨著α-環糊精用量的增加，鞣質的含量先減小后增大，當α-環 糊精的用量達到〇. 8g時，縣質的含量達到最小值0. 148mg/mL,比沒有經過α -環糊精包埋 處理的0. 880mg/mL降低了 83. 2%，表明經α -環糊精與β -環糊精包埋處理后可降低紅景 天提取液中鞣質的含量，α -環糊精的最佳用量為0. 8g，β -環糊精的用量為3. 2g。
[0075] ②不同環糊精用量對鞣質的包埋影響
[0076] 不同環糊精用量對鞣質的包埋影響如圖4。
[0077] 由圖4可以看出，鞣質含量隨著環糊精用量的增加而增加，隨后減少。鞣質的含 量從環糊精用量為〇. 5g的0. 824mg/mL降低到環糊精用量為3. 5g的0. 129mg/mL，降低了 84. 3%。較原料中所含縣質0. 880mg/mL減少了 0. 751mg/mL。
[0078] ③不同包埋時間對鞣質的包埋影響
[0079] 不同包埋時間對鞣質的包埋影響如圖5。
[0080] 由圖5可以看出，時間對鞣質的包埋效果影響較大，當經過包埋時間為lh時，鞣質 的含量為〇. 561mg/mL，含量較高，當包埋時間達到2h時，鞣質的含量降低至0. 145mg/mL，鞣 質的含量達到最低值，隨著包埋時間的增加鞣質含量保持在這一水平。
[0081] ④不同加熱溫度對鞣質的包埋影響
[0082] 不同加熱溫度下環糊精對鞣質的包埋影響如圖6。
[0083] 由圖6可知，溫度對環糊精包埋鞣質的效果影響較大，包埋溫度在30?60°C時， 鞣質的含量隨溫度的增加而減小，隨后呈上升趨勢。鞣質的含量從〇.446mg/mL減小至 0. 127mg/mL，減小了 71.5%，隨著反應溫度的增加，鞣質的含量又有所增加，表明在601： 時，環糊精對鞣質的包埋效果最佳。
[0084] ⑤環糊精對鞣質包埋條件的優化
[0085] 包埋條件優化正交試驗
[0086] 在單因素試驗基礎上，選擇α-環糊精用量、環糊精用量、時間、溫度對鞣質的包 埋效果進行正交試驗優化，選出影響環糊精包埋紅景天提取液中鞣質的主要因素。環糊精 包埋正交試驗因素水平見表1，正交試驗結果見表2。
[0087] 表1環糊精包埋鞣質正交試驗表
[0088]

【權利要求】
1. 一種采用環糊精包埋技術去除紅景天苷提取液中鞣質的方法，其特征在于，取紅 景天于干燥箱中干燥處理4h，粉碎過40目篩，取20g紅景天粉末，加入400mL蒸餾水， 浸泡24h，用300W微波功率處理20s，于80°C水浴鍋中加熱提取1. 5h，抽濾，取濾液定容 至1000mL，制得紅景天提取液；取紅景天提取液100mL，加入0. 5g?0. 7g α -環糊精與 3. 0g?3. 8g β -環糊精，在電磁加熱攪拌器中以500r/min速率攪拌，加熱溫度40?60°C, 加熱2. 5?3. 5h后，過濾，定容至100mL。
2. 根據權利要求1所述的方法，其特征是，所述α -環糊精〇. 6g，β -環糊精3. 4g，力口 熱溫度50°C，加熱時間3.0h。
【文檔編號】A23L2/52GK104083426SQ201410357160
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2014年7月25日 優先權日:2014年7月25日
【發明者】李玉鋒, 紀明江, 汪靜心, 張良, 賴朋, 陳凌, 謝士娟 申請人:西華大學